• <tr id="yyy80"></tr>
  • <sup id="yyy80"></sup>
  • <tfoot id="yyy80"><noscript id="yyy80"></noscript></tfoot>
  • 99热精品在线国产_美女午夜性视频免费_国产精品国产高清国产av_av欧美777_自拍偷自拍亚洲精品老妇_亚洲熟女精品中文字幕_www日本黄色视频网_国产精品野战在线观看 ?

    鐵皮石斛內(nèi)生真菌對(duì)宿主組培苗生長(zhǎng)與代謝成分的影響

    2016-07-09 13:23:30朱波劉京晶斯金平秦路平韓婷趙鸝吳令上
    中國(guó)中藥雜志 2016年9期
    關(guān)鍵詞:內(nèi)生真菌鐵皮石斛生長(zhǎng)發(fā)育

    朱波 劉京晶 斯金平 秦路平 韓婷 趙鸝 吳令上

    [摘要]為揭示初篩所得7株活樹附生鐵皮石斛內(nèi)生真菌對(duì)宿主生長(zhǎng)及代謝成分的影響,該研究觀察測(cè)量了接菌與未接菌鐵皮石斛組培苗形態(tài)特征與農(nóng)藝性狀,采用苯酚硫酸法與熱浸法測(cè)定組培苗莖總多糖含量與浸出物含量,柱前衍生HPLC分析莖多糖中單糖組成,HPLC分析莖醇溶性成分。研究表明,供試7個(gè)菌株可改變鐵皮石斛組培苗莖節(jié)變紫進(jìn)程,并影響莖糖類及醇溶性成分組成及含量積累,除DO34外均能促進(jìn)組培苗生長(zhǎng)與提高多糖含量,除DO12外均能促進(jìn)甘露糖含量積累,DO18,DO19,DO120可促進(jìn)醇溶性浸出物含量積累,綜合生長(zhǎng)及代謝成分多項(xiàng)指標(biāo)篩選出DO14,DO18,DO19與DO120 4個(gè)優(yōu)良菌株,為鐵皮石斛內(nèi)生真菌和宿主相互作用機(jī)制研究與微生物工程研究提供了菌種材料與研究基礎(chǔ)。

    [關(guān)鍵詞]鐵皮石斛; 內(nèi)生真菌; 生長(zhǎng)發(fā)育; 代謝成分

    [Abstract]The paper aims to study the effects of endophytic fungi from D officinale cultivated on living trees on growth and components metabolism of tissue culture seedlings Morphological characteristics and agronomic characters of tissue culture seedlings infected and uninfected by endophytic fungus were observed and measured Polysaccharides and alcoholsoluble extracts contents were determined by phenolsulfuric acid method and hotdipmethod, respectively Monosacchride composition of polysaccharides and alcoholsoluble extracts components were analyzed by precolumn derivatives HPLC and HPLC method, respectively It showed that effects of turning to purple of stem nodes could be changed by endophytic fungus Besides, the endophytic fungus could affect the contents and constitutions of polysaccharides and alcoholsoluble extracts The strains tested, expect DO34, could promote growth and polysaccharides content of tissue culture seedlings The strains tested, expect DO12, could promote the accumulation of mannose Furthermore, DO18, DO19 and DO120 could increase alcoholsoluble extracts On the basis, four superior strains were selected for mechanism research between endophytic fungus and their hosts and microbiology engineering

    [Key words]Dendrobium officinale; endophytic fungi; growth and development; components metabolism

    doi:10.4268/cjcmm20160906

    中藥材的品質(zhì)與其生長(zhǎng)環(huán)境密切相關(guān),生長(zhǎng)環(huán)境包括生物性因素與非生物性因素,植物內(nèi)生真菌作為一個(gè)重要的生物性因素已經(jīng)越來(lái)越受到國(guó)內(nèi)外學(xué)者的關(guān)注[14],現(xiàn)有研究表明植物內(nèi)生真菌能促進(jìn)宿主生長(zhǎng)、提高宿主對(duì)生物脅迫或非生物脅迫的抗性[5],能參與宿主次生代謝產(chǎn)物的合成和積累,影響藥用植物的品質(zhì)[67]。

    鐵皮石斛Dendrobium officinale Kimura et Migo是我國(guó)傳統(tǒng)名貴中藥材,具有益胃生津、滋陰清熱等功效,用于熱病津傷,口干煩渴,胃陰不足,食少干嘔等癥,收載于2015年版《中國(guó)藥典》[8]。近年來(lái),鐵皮石斛內(nèi)生真菌研究引起國(guó)內(nèi)外學(xué)者的關(guān)注,但主要集中在內(nèi)生真菌分離純化、菌根真菌對(duì)植物種子萌發(fā)與幼苗生長(zhǎng)的促進(jìn)作用等方面[917],從形態(tài)特征、農(nóng)藝性狀與代謝成分等方面系統(tǒng)評(píng)價(jià)鐵皮石斛內(nèi)生真菌與宿主間相互關(guān)系的研究鮮有報(bào)道。本試驗(yàn)在前期初篩所得內(nèi)生真菌的基礎(chǔ)上,評(píng)價(jià)內(nèi)生真菌對(duì)組培苗生長(zhǎng)發(fā)育與代謝成分的影響,篩選優(yōu)良菌株,為研究?jī)?nèi)生真菌與宿主相互作用機(jī)制,改良鐵皮石斛藥材品質(zhì)提供了一條新的途徑。

    1材料

    供試菌株來(lái)自本課題組前期從不同活樹附生鐵皮石斛中分離的內(nèi)生真菌菌株,菌株編號(hào)為DO12,DO14,DO18,DO19,DO34,DO38,DO120(表1)。供試鐵皮石斛組培苗為D6品系,由浙江農(nóng)林大學(xué)國(guó)家林業(yè)局鐵皮石斛工程技術(shù)研究中心選育。

    2方法

    21形態(tài)特征觀察

    將備選菌株用接種針從斜面保存試管中挑出,接入含有PDA培養(yǎng)基的平板上,放入霉菌培養(yǎng)箱中暗培養(yǎng)(25 ℃),待菌絲長(zhǎng)滿平板后,用5 mm打孔器打成均勻小塊,接種至鐵皮石斛組培苗中,每瓶苗接1個(gè)菌塊,每個(gè)菌株接種組培苗30瓶。接種后,統(tǒng)計(jì)組培苗莖段出現(xiàn)紫色瓶數(shù)(以單株莖節(jié)變紫為標(biāo)準(zhǔn)),計(jì)算紫色莖節(jié)比例=紫色莖節(jié)瓶數(shù)/總瓶數(shù)×100%,不接菌的組培苗作為對(duì)照。

    22農(nóng)藝性狀考察

    將培養(yǎng)到一定階段的組培苗取出,洗去培養(yǎng)基,用紙巾擦拭干凈進(jìn)行農(nóng)藝性狀考察。用直尺測(cè)量每株幼苗的苗高與根長(zhǎng),用游標(biāo)卡尺測(cè)量莖基部粗、莖中部粗、葉長(zhǎng)(葉片中脈長(zhǎng))與葉寬,計(jì)算葉長(zhǎng)寬比=葉長(zhǎng)/葉寬,統(tǒng)計(jì)每株苗根數(shù)、葉片數(shù)與萌條數(shù),用電子天平稱量接種組培苗莖鮮重與葉總鮮重,將莖與葉放置60 ℃烘箱烘干至恒重,分別稱量莖與葉干重。每個(gè)處理測(cè)200株苗,每株苗取頂端3片葉進(jìn)行考察,葉面積參考劉志高等[18]的方法估算。

    23組培苗代謝成分分析

    將烘至恒重的莖與葉樣品粉碎,過(guò)60目篩,待用。莖總多糖含量測(cè)定采用苯酚硫酸法[19],標(biāo)準(zhǔn)曲線方程為Y=0012X-002,R2=0999 5,X為濃度,Y為吸光度,3次重復(fù);參考俞巧仙等[20]的方法測(cè)定莖醇溶性浸出物,3次重復(fù);莖醇溶性高效液相色譜條件:采用XB C18色譜柱(46 mm×250 mm,05 μm),25 ℃柱溫,流動(dòng)相為純水(C)乙腈(D),采用梯度洗脫,檢測(cè)波長(zhǎng)為280 nm,進(jìn)樣量為10 μL;單糖衍生參照苑鶴等[21]的方法。用SPSS 170軟件處理數(shù)據(jù),采用單因素ANOVA分析,兩兩比較采用LSD法。

    3結(jié)果與分析

    31內(nèi)生真菌對(duì)組培苗形態(tài)特征的影響

    接種內(nèi)生真菌的組培苗生長(zhǎng)一段時(shí)間后,莖段會(huì)出現(xiàn)莖節(jié)變紫現(xiàn)象,出現(xiàn)的數(shù)量、時(shí)間與對(duì)照存在明顯差異(圖1)。接種DO38的組培苗莖節(jié)變紫最早,接種后第4天即有變紫現(xiàn)象出現(xiàn);接種DO14,DO18,DO19的組培苗,莖節(jié)在第5天開始變紫,接種上述4個(gè)菌株的組培苗莖節(jié)變紫時(shí)間均比CK提前,數(shù)量比CK增加;不論是否接種內(nèi)生真菌,多數(shù)組培苗第16~19天莖節(jié)變紫數(shù)量最多,隨后紫色逐漸褪去,但接種DO38與DO19的組培苗紫色莖節(jié)比例基本保持不變,見圖1。

    32內(nèi)生真菌對(duì)組培苗農(nóng)藝性狀與產(chǎn)量的影響

    供試組培苗接種內(nèi)生真菌后,農(nóng)藝性狀間存在極顯著差異(表2,P<001),其中接種DO12,DO19苗高,接種DO14,DO18,DO19,DO34,DO38,DO120苗粗,接種DO12,DO18,DO19,DO38,DO120葉面積均極顯著高于CK(表2,P<001);莖總鮮重與總干重最高為接種DO19組培苗,分別為1273,1040 g;鐵皮石斛產(chǎn)量指標(biāo)為莖段,除接種DO34組培苗莖總鮮重低于CK組外,其余6個(gè)菌株組培苗產(chǎn)量指標(biāo)均高于CK。根據(jù)主要農(nóng)藝性狀與產(chǎn)量指標(biāo),接種DO12,DO18,DO19與DO120組培苗表現(xiàn)較好,表現(xiàn)出苗高,莖粗,葉片大,莖分枝少,根系生長(zhǎng)適中等特點(diǎn)。

    33內(nèi)生真菌對(duì)組培苗代謝成分的影響

    331莖總多糖與醇溶性浸出物含量的差異接種不同菌株的組培苗莖總多糖與醇溶性浸出物含量存在極顯著差異(表3,P<001)。接種供試菌株的組培苗莖總多糖含量均極顯著高于CK(P<001),其中接種DO19組培苗莖總多糖質(zhì)量分?jǐn)?shù)最高(1486%),是CK的296倍;接種DO18,DO19,DO34組培苗莖醇溶性浸出物含量極顯著高于CK(P<001),其中DO19組培苗莖醇溶性浸出物質(zhì)量分?jǐn)?shù)最高(1041%),是CK組的119倍。

    332多糖中單糖組成的差異未接菌的CK組培苗莖多糖衍生后檢測(cè)出4種單糖成分,分別為甘露糖,葡萄糖,半乳糖與阿拉伯糖,接種內(nèi)生真菌后,組培苗單糖組成發(fā)生變化(表4,圖2)。接種DO12,DO18,DO19,DO34與DO38組培苗除4種單糖組分與CK相同外,還檢測(cè)出木糖成分;而接種DO14與DO120的組培苗單糖組成比CK少,接種DO14的組培苗只檢測(cè)出甘露糖與葡萄糖,接種DO120的組培苗只檢測(cè)出甘露糖,葡萄糖與阿拉伯糖。甘露糖是鐵皮石斛多糖的主要組分,除DO12外接種其他菌株的組培苗甘露糖峰面積均高于CK,其中接種DO19的組培苗峰面積最高,是CK的261倍。

    333莖醇溶性成分差異接種內(nèi)生真菌的鐵皮石斛組培苗莖醇溶性成分發(fā)生變化,HPLC差異特征峰(表5)可知,接菌后的組培苗中共有21個(gè)HPLC差異特征峰均比CK多,其中接種DO19的組培苗特征峰最多,達(dá)14個(gè),其次為接種DO18,DO120,DO14的組培苗,分別為11,11,9個(gè)。在這些特征峰中,3,13,15,18,19,20號(hào)峰表現(xiàn)為峰面積大,分離度較好或?yàn)閱我惶卣鞣?,可進(jìn)一步重點(diǎn)分析(圖3)。

    4結(jié)論與討論

    供試的7個(gè)備選菌株對(duì)鐵皮石斛組培苗形態(tài)特征、農(nóng)藝性狀、產(chǎn)量指標(biāo)及主要代謝成分等方面均有不同程度的影響,除DO12菌株外其余6個(gè)菌株均促進(jìn)了組培苗莖節(jié)變紫進(jìn)程,且接種該6個(gè)菌株組培苗莖總多糖含量均極顯著高于CK(P<001),可能莖段顏色與總多糖含量存在相關(guān)性,莖段紫紅色越明顯,多糖含量越高[2223]。綜合接種內(nèi)生真菌后組培苗農(nóng)藝性狀,莖總多糖,浸出物與甘露糖峰面積,莖醇溶性成分特征峰等指標(biāo),篩選出DO14,DO18,DO19與DO120 4株優(yōu)良菌株,均能明顯促進(jìn)組培苗生長(zhǎng)發(fā)育,莖鮮重分別提高56%,44%,649%,14%,莖中總多糖含量提高1137%,707%,1960%,1574%,甘露糖含量提高422%,1058%,1607%,1320%,其中接種DO18,DO19菌株還可分別提高莖中浸出物含量43%,63%。

    為了進(jìn)一步揭示內(nèi)生真菌對(duì)組培苗代謝成分的影響規(guī)律,從莖節(jié)顏色變化分析代謝成分動(dòng)態(tài)變異規(guī)律,擬選擇臨界時(shí)間點(diǎn)進(jìn)行轉(zhuǎn)錄組學(xué)分析,從而闡釋鐵皮石斛代謝成分變化的分子機(jī)制。目前鐵皮石斛水溶性與醇溶性成分鑒定相關(guān)報(bào)道較少,藥效成分不夠明確,本試驗(yàn)初步探索了接種內(nèi)生真菌后組培苗莖醇溶性成分變化,檢測(cè)出6個(gè)HPLC特征差異峰,可優(yōu)先選擇高分辨質(zhì)譜技術(shù)進(jìn)一步分析,通過(guò)相對(duì)分子質(zhì)量初步鑒定可能成分,為闡明內(nèi)生真菌影響鐵皮石斛醇溶性成分變化機(jī)制提供基礎(chǔ)。

    [參考文獻(xiàn)]

    [1]Petrini O, Fisher P. Occurrence of fungal endophytes in twigs of Salix fragilis and Quercus robur[J]. Mycol Res,1990,94 (8):1077.

    [2]萬(wàn)德光. 中藥品質(zhì)研究:理論、方法與實(shí)踐[M]. 上海:上??茖W(xué)技術(shù)出版社,2008:35.

    [3]蔡少青. 生藥學(xué)[M]. 上海:人民衛(wèi)生出版社,2007:93.

    [4]Petrini O. Fungal endophytes of tree leaves. Microbial ecology of leaves[M]. New York: SpringerVerlag,1991:197.

    [5]PorrasAlfaro A,Bayman P. Hidden fungi,emergent properties: endophytes and microbiomes [J]. Annu Rev Phytopathol, 2011,49:291.

    [6]Mucciarelli M, Camusso W, Maffei M. Volatile terpenoids of endophytefree and infected peppermint (Menthapiperita L. ): chemical partitioning of a symbiosis [J]. Microb Ecol,2007,54(4):685.

    [7]史應(yīng)武,婁愷,李春. 內(nèi)生真菌對(duì)甜菜主要農(nóng)藝性狀及氮糖代謝關(guān)鍵酶活性的影響[J]. 作物學(xué)報(bào),2009,35(5):946.

    [8]中國(guó)藥典. 一部[S]. 2015.

    [9]陳曉梅,肖盛元,王春蘭,等. 真菌誘導(dǎo)子處理的鐵皮石斛原球莖HPLCMS指紋圖譜分析[J]. 中國(guó)藥學(xué)雜志,2008,43(24):1859.

    [10]胡克興,侯曉強(qiáng),郭順星. 鐵皮石斛內(nèi)生真菌分布[J]. 微生物學(xué)通報(bào),2010,37(1):37.

    [11]吳慧鳳,宋希強(qiáng),胡美姣. 鐵皮石斛促生內(nèi)生真菌的篩選與鑒定[J]. 西南林業(yè)大學(xué)學(xué)報(bào),2011,31(5):47.

    [12]高微微,郭順星. 內(nèi)生真菌菌絲及代謝物對(duì)鐵皮石斛及金線蓮生長(zhǎng)的影響[J]. 中國(guó)醫(yī)學(xué)科學(xué)院學(xué)報(bào),2001,23(6):556.

    [13]金輝,亢志華,陳暉,等. 菌根真菌對(duì)鐵皮石斛生長(zhǎng)和礦質(zhì)元素的影響[J]. 福建林學(xué)院學(xué)報(bào),2007,27(1):80.

    [14]金輝,許忠祥,陳金花,等. 鐵皮石斛組培苗與菌根真菌共培養(yǎng)過(guò)程中的相互作用[J]. 植物生態(tài)學(xué)報(bào),2009,33(3):433.

    [15]郭順星,曹文芩,高微微. 鐵皮石斛及金釵石斛菌根真菌的分離及其生物活性測(cè)定[J]. 中國(guó)中藥雜志,2000,25(6):338.

    [16]侯丕勇,郭順星. 真菌對(duì)鐵皮石斛原球莖酶活性和胞外pH的影響[J]. 微生物學(xué)通報(bào),2004,31(2):26.

    [17]舒瑩. 內(nèi)生真菌MF24對(duì)鐵皮石斛原球莖誘導(dǎo)作用及石斛的化學(xué)成分和活性研究[D]. 北京:中國(guó)協(xié)和醫(yī)科大學(xué),中國(guó)醫(yī)學(xué)科學(xué)院,2005.

    [18]劉志高,朱波,斯金平,等. 鐵皮石斛F1代苗期農(nóng)藝性狀研究[J]. 中國(guó)中藥雜志,2013,38(4):498.

    [19]諸燕,斯金平,郭寶林,等. 人工栽培鐵皮石斛多糖含量變異規(guī)律[J]. 中國(guó)中藥雜志,2010,35(4):427.

    [20]俞巧仙,郭英英,斯金平,等. 鐵皮石斛多糖和醇溶性浸出物動(dòng)態(tài)累積規(guī)律研究[J]. 中國(guó)中藥雜志,2014,39(24):4769.

    [21]苑鶴,白燕冰,斯金平,等. 柱前衍生HPLC分析鐵皮石斛多糖中單糖組成的變異規(guī)律[J]. 中國(guó)中藥雜志,2011,36(18):2465.

    [22]戚輝,陳健,易燕群,等. 不同產(chǎn)地鐵皮石斛形態(tài)及有效部位成分含量比較[J]. 廣州中醫(yī)藥大學(xué)學(xué)報(bào),2013,30(4):558.

    [23]張雅瓊,黃莉,申毓晗,等. 鐵皮石斛變異體的差異性分析[J]. 西南農(nóng)業(yè)學(xué)報(bào),2015,28(3):1236.

    [責(zé)任編輯呂冬梅]

    猜你喜歡
    內(nèi)生真菌鐵皮石斛生長(zhǎng)發(fā)育
    黃草烏根部?jī)?nèi)生真菌的分離與鑒定
    冬油菜栽培技術(shù)探析
    果樹生長(zhǎng)發(fā)育的外界環(huán)境條件探討
    基于物聯(lián)網(wǎng)的鐵皮石斛仿野生高品質(zhì)栽培關(guān)鍵技術(shù)
    果利大植物營(yíng)養(yǎng)液對(duì)花生災(zāi)后復(fù)壯生長(zhǎng)發(fā)育的影響
    內(nèi)生真菌在中藥現(xiàn)代化中的作用
    環(huán)境監(jiān)測(cè)用青鳉魚的人工繁殖研究
    昆明地區(qū)鐵皮石斛人工栽培模式的發(fā)展和思考
    鐵皮石斛人工栽培模式
    茶樹內(nèi)生真菌研究進(jìn)展
    国产成人免费观看mmmm| 女性被躁到高潮视频| 最近的中文字幕免费完整| 国产色爽女视频免费观看| 伦精品一区二区三区| 大话2 男鬼变身卡| xxx大片免费视频| 亚洲婷婷狠狠爱综合网| 久久精品国产a三级三级三级| a级片在线免费高清观看视频| 国产高清不卡午夜福利| 成人国产av品久久久| 国产真实伦视频高清在线观看| xxx大片免费视频| 亚洲精品国产av成人精品| 九九爱精品视频在线观看| 日本黄色日本黄色录像| 国产欧美日韩综合在线一区二区 | 日本欧美视频一区| 亚洲国产精品一区二区三区在线| 国产精品人妻久久久影院| 六月丁香七月| 免费黄频网站在线观看国产| 欧美日韩一区二区视频在线观看视频在线| av又黄又爽大尺度在线免费看| 亚洲婷婷狠狠爱综合网| 国产精品麻豆人妻色哟哟久久| 国产男女超爽视频在线观看| 97超视频在线观看视频| 国产精品久久久久成人av| 亚洲美女搞黄在线观看| 高清午夜精品一区二区三区| 国产男人的电影天堂91| 亚洲欧美一区二区三区国产| 日韩精品免费视频一区二区三区 | 日本欧美视频一区| 久久久亚洲精品成人影院| 2018国产大陆天天弄谢| 亚洲av免费高清在线观看| 中文字幕人妻熟人妻熟丝袜美| 波野结衣二区三区在线| 国产精品国产三级国产av玫瑰| 精品卡一卡二卡四卡免费| 免费黄网站久久成人精品| 黄色一级大片看看| 99久久精品热视频| 久久国内精品自在自线图片| 国产乱人偷精品视频| 成人免费观看视频高清| 99久久中文字幕三级久久日本| av卡一久久| 中文字幕免费在线视频6| 亚洲国产日韩一区二区| 亚洲怡红院男人天堂| 卡戴珊不雅视频在线播放| 亚洲国产成人一精品久久久| 国产又色又爽无遮挡免| av福利片在线观看| 亚洲自偷自拍三级| 2021少妇久久久久久久久久久| 乱码一卡2卡4卡精品| 99视频精品全部免费 在线| 精品久久久久久电影网| 日本欧美国产在线视频| 午夜视频国产福利| 国产永久视频网站| 校园人妻丝袜中文字幕| 乱人伦中国视频| 亚洲成色77777| 搡女人真爽免费视频火全软件| 国产成人a∨麻豆精品| 中文字幕免费在线视频6| 久久久久久久久久久免费av| 黑人高潮一二区| 美女cb高潮喷水在线观看| 久久久a久久爽久久v久久| 99精国产麻豆久久婷婷| 一本色道久久久久久精品综合| 美女cb高潮喷水在线观看| 国产成人精品一,二区| 亚洲av日韩在线播放| 亚洲精品乱久久久久久| 狂野欧美白嫩少妇大欣赏| 亚洲人成网站在线观看播放| 亚洲熟女精品中文字幕| 一区二区三区免费毛片| h视频一区二区三区| 在线观看av片永久免费下载| 久久人人爽av亚洲精品天堂| 蜜桃久久精品国产亚洲av| 成人亚洲精品一区在线观看| 中国三级夫妇交换| 久久久久国产精品人妻一区二区| 日本黄色日本黄色录像| 18禁裸乳无遮挡动漫免费视频| 高清欧美精品videossex| 成人综合一区亚洲| 免费人妻精品一区二区三区视频| 午夜免费鲁丝| 亚洲精品一区蜜桃| 久久久久久久久久久久大奶| 少妇裸体淫交视频免费看高清| 国产精品一二三区在线看| 在线观看人妻少妇| 午夜免费男女啪啪视频观看| 精品酒店卫生间| 亚洲av欧美aⅴ国产| 色哟哟·www| 少妇熟女欧美另类| 日韩熟女老妇一区二区性免费视频| 一区二区av电影网| 国产淫片久久久久久久久| 久久毛片免费看一区二区三区| 久久99精品国语久久久| 午夜免费鲁丝| 欧美精品高潮呻吟av久久| 交换朋友夫妻互换小说| 天美传媒精品一区二区| 伊人久久国产一区二区| 天天躁夜夜躁狠狠久久av| 亚洲国产精品一区三区| 精品亚洲成国产av| 亚洲精品亚洲一区二区| 日日爽夜夜爽网站| 精品久久久噜噜| 久久热精品热| 中文字幕av电影在线播放| 亚洲国产精品国产精品| 两个人的视频大全免费| 免费观看无遮挡的男女| 一级毛片aaaaaa免费看小| 亚洲精品视频女| 青青草视频在线视频观看| 亚洲精品国产av蜜桃| 老司机影院毛片| 国产亚洲91精品色在线| 国产精品久久久久久精品古装| 色94色欧美一区二区| av又黄又爽大尺度在线免费看| 少妇 在线观看| 欧美人与善性xxx| 日韩制服骚丝袜av| 国产乱来视频区| 成年人免费黄色播放视频 | 香蕉精品网在线| 黑丝袜美女国产一区| 亚州av有码| 亚洲精品第二区| 十八禁网站网址无遮挡 | 少妇被粗大的猛进出69影院 | 国产欧美亚洲国产| 色哟哟·www| 亚洲精品456在线播放app| h日本视频在线播放| 日韩三级伦理在线观看| 免费在线观看成人毛片| 国产精品久久久久久久电影| 欧美日韩视频高清一区二区三区二| 内地一区二区视频在线| 亚洲精品乱码久久久久久按摩| 日本爱情动作片www.在线观看| 久久精品国产鲁丝片午夜精品| 亚洲av日韩在线播放| 99九九线精品视频在线观看视频| 精品人妻一区二区三区麻豆| 国产极品天堂在线| 国产在视频线精品| 欧美人与善性xxx| 国产成人免费观看mmmm| 99热全是精品| 亚洲久久久国产精品| 欧美日韩在线观看h| 日韩成人av中文字幕在线观看| 中文字幕亚洲精品专区| 老司机影院毛片| 国产伦精品一区二区三区视频9| 啦啦啦视频在线资源免费观看| 国产色爽女视频免费观看| 亚洲精品自拍成人| 性色avwww在线观看| 午夜视频国产福利| 精品久久久久久电影网| 狂野欧美激情性bbbbbb| 成人亚洲欧美一区二区av| 国产国拍精品亚洲av在线观看| 久久精品久久久久久久性| 精品国产露脸久久av麻豆| 国国产精品蜜臀av免费| 欧美日韩亚洲高清精品| 亚洲av日韩在线播放| 黄色怎么调成土黄色| 涩涩av久久男人的天堂| 免费高清在线观看视频在线观看| 中文字幕精品免费在线观看视频 | 又黄又爽又刺激的免费视频.| 亚洲一区二区三区欧美精品| 国语对白做爰xxxⅹ性视频网站| 午夜免费男女啪啪视频观看| 只有这里有精品99| 91精品伊人久久大香线蕉| 亚洲av成人精品一区久久| 在线观看免费日韩欧美大片 | 久久久久久久久久久丰满| 国内少妇人妻偷人精品xxx网站| 亚洲精品久久午夜乱码| 精品视频人人做人人爽| 日韩制服骚丝袜av| 亚洲精品第二区| 黑丝袜美女国产一区| 亚洲欧洲精品一区二区精品久久久 | 噜噜噜噜噜久久久久久91| 亚洲不卡免费看| 亚洲精品亚洲一区二区| 男人和女人高潮做爰伦理| 国产精品99久久久久久久久| √禁漫天堂资源中文www| 国产欧美日韩一区二区三区在线 | 精品久久久久久久久av| 中文字幕免费在线视频6| 久久久久久久久久久久大奶| 王馨瑶露胸无遮挡在线观看| 久久精品国产亚洲av涩爱| 18禁裸乳无遮挡动漫免费视频| 在线观看www视频免费| 国产av码专区亚洲av| 国产日韩一区二区三区精品不卡 | 国产精品人妻久久久久久| 亚洲av男天堂| 免费黄网站久久成人精品| 亚洲精品亚洲一区二区| 中文乱码字字幕精品一区二区三区| 欧美日本中文国产一区发布| 成人18禁高潮啪啪吃奶动态图 | 日日摸夜夜添夜夜添av毛片| 又粗又硬又长又爽又黄的视频| 91精品国产九色| 永久免费av网站大全| 91在线精品国自产拍蜜月| 久久精品熟女亚洲av麻豆精品| 亚洲欧美一区二区三区黑人 | 久久国产亚洲av麻豆专区| 久久精品国产亚洲网站| 国产高清三级在线| 久久99蜜桃精品久久| 2021少妇久久久久久久久久久| 日韩,欧美,国产一区二区三区| 精品久久国产蜜桃| 国产日韩欧美在线精品| 久久久久久久久大av| 性色av一级| 国产精品久久久久久久电影| 18禁在线无遮挡免费观看视频| 亚洲无线观看免费| √禁漫天堂资源中文www| av黄色大香蕉| 婷婷色综合大香蕉| 国产精品一二三区在线看| 制服丝袜香蕉在线| 啦啦啦视频在线资源免费观看| 人人妻人人看人人澡| 女人精品久久久久毛片| 在线亚洲精品国产二区图片欧美 | av一本久久久久| 久久久国产欧美日韩av| 精品国产一区二区久久| 国产精品一二三区在线看| 男女免费视频国产| 一区二区三区乱码不卡18| 国产探花极品一区二区| 中国国产av一级| 中文字幕久久专区| 丰满人妻一区二区三区视频av| 国产一级毛片在线| 免费人妻精品一区二区三区视频| 午夜激情福利司机影院| 久久久亚洲精品成人影院| 国模一区二区三区四区视频| 五月开心婷婷网| 搡老乐熟女国产| 日韩视频在线欧美| 一本色道久久久久久精品综合| 中文字幕制服av| 2022亚洲国产成人精品| 午夜激情福利司机影院| 91午夜精品亚洲一区二区三区| 高清欧美精品videossex| 日韩熟女老妇一区二区性免费视频| 在线观看国产h片| 久久精品熟女亚洲av麻豆精品| 国产成人免费观看mmmm| 99热这里只有精品一区| 精品久久久久久久久亚洲| 少妇人妻精品综合一区二区| 免费观看av网站的网址| 国产精品久久久久久av不卡| 性高湖久久久久久久久免费观看| 日本爱情动作片www.在线观看| 国产成人午夜福利电影在线观看| √禁漫天堂资源中文www| 一个人免费看片子| 最近最新中文字幕免费大全7| 18禁动态无遮挡网站| 国产精品偷伦视频观看了| 国产 精品1| 永久网站在线| 在现免费观看毛片| 久久99一区二区三区| videossex国产| 岛国毛片在线播放| 久久97久久精品| 国产成人一区二区在线| 一级毛片久久久久久久久女| 亚洲国产精品999| 黑人猛操日本美女一级片| 久久国产精品男人的天堂亚洲 | 美女主播在线视频| 国产精品伦人一区二区| 国产午夜精品久久久久久一区二区三区| 亚洲欧美中文字幕日韩二区| 你懂的网址亚洲精品在线观看| 在线观看免费高清a一片| 人人妻人人爽人人添夜夜欢视频 | 日韩视频在线欧美| 久久人人爽人人爽人人片va| 免费人成在线观看视频色| 国产成人免费观看mmmm| 丝袜喷水一区| av又黄又爽大尺度在线免费看| av在线app专区| 国产伦精品一区二区三区视频9| 特大巨黑吊av在线直播| 少妇丰满av| 嘟嘟电影网在线观看| 国产精品国产三级专区第一集| 欧美日韩av久久| 高清黄色对白视频在线免费看 | 日日啪夜夜撸| 久久人人爽人人片av| 久久久亚洲精品成人影院| 国产淫片久久久久久久久| 亚洲av日韩在线播放| 国产精品久久久久成人av| 国产有黄有色有爽视频| 亚洲四区av| 精品国产露脸久久av麻豆| videossex国产| 老司机影院毛片| 99久久综合免费| 伦理电影大哥的女人| 高清不卡的av网站| av有码第一页| 91精品伊人久久大香线蕉| 欧美激情极品国产一区二区三区 | 成人漫画全彩无遮挡| 久久久精品免费免费高清| 国产亚洲欧美精品永久| 午夜影院在线不卡| 高清av免费在线| 国产淫语在线视频| 精品久久国产蜜桃| 国产又色又爽无遮挡免| 美女xxoo啪啪120秒动态图| 国产精品人妻久久久久久| 2018国产大陆天天弄谢| 80岁老熟妇乱子伦牲交| 亚洲欧洲精品一区二区精品久久久 | tube8黄色片| 亚洲国产精品专区欧美| 亚洲国产毛片av蜜桃av| av又黄又爽大尺度在线免费看| 亚洲av成人精品一区久久| 国产欧美另类精品又又久久亚洲欧美| 男女无遮挡免费网站观看| 午夜激情久久久久久久| 国产成人精品一,二区| xxx大片免费视频| 国产免费又黄又爽又色| 欧美国产精品一级二级三级 | av在线播放精品| www.av在线官网国产| 日日摸夜夜添夜夜爱| 国产在线免费精品| videossex国产| 国产av码专区亚洲av| 国产在视频线精品| 边亲边吃奶的免费视频| 一级黄片播放器| 久久久午夜欧美精品| 韩国av在线不卡| 久久99蜜桃精品久久| 婷婷色av中文字幕| 又大又黄又爽视频免费| 国产亚洲av片在线观看秒播厂| 久久久久久伊人网av| 丝袜喷水一区| 有码 亚洲区| 人人妻人人看人人澡| 国产日韩一区二区三区精品不卡 | 高清午夜精品一区二区三区| 国产片特级美女逼逼视频| 高清黄色对白视频在线免费看 | 3wmmmm亚洲av在线观看| 久久久久久久久久久丰满| av免费在线看不卡| 欧美一级a爱片免费观看看| 亚洲av福利一区| 久久婷婷青草| 国产精品一区二区在线不卡| 免费看光身美女| 日日爽夜夜爽网站| 九九在线视频观看精品| 亚洲欧美中文字幕日韩二区| 久久99精品国语久久久| 国产91av在线免费观看| 各种免费的搞黄视频| 日韩精品免费视频一区二区三区 | 久久99热6这里只有精品| 免费观看在线日韩| 一级毛片久久久久久久久女| 国产免费又黄又爽又色| 九九久久精品国产亚洲av麻豆| 婷婷色av中文字幕| 伊人亚洲综合成人网| 午夜老司机福利剧场| 伊人久久精品亚洲午夜| 男女国产视频网站| 99热这里只有是精品50| 亚洲怡红院男人天堂| 免费看日本二区| 国产极品天堂在线| 亚洲欧美中文字幕日韩二区| 国产av精品麻豆| 日日摸夜夜添夜夜爱| 午夜福利,免费看| 97在线视频观看| 久久久a久久爽久久v久久| 国内揄拍国产精品人妻在线| 国产乱人偷精品视频| 亚洲国产欧美在线一区| 国产精品国产三级专区第一集| 熟女人妻精品中文字幕| 如日韩欧美国产精品一区二区三区 | 麻豆成人午夜福利视频| 日日啪夜夜撸| 99热这里只有精品一区| 黑人高潮一二区| 少妇被粗大的猛进出69影院 | 免费播放大片免费观看视频在线观看| 精品亚洲成a人片在线观看| 一级片'在线观看视频| 国产精品人妻久久久久久| 最近中文字幕高清免费大全6| 免费av不卡在线播放| 午夜老司机福利剧场| 午夜福利网站1000一区二区三区| 久久精品久久久久久久性| 免费高清在线观看视频在线观看| 国产美女午夜福利| 日产精品乱码卡一卡2卡三| 女的被弄到高潮叫床怎么办| 一区在线观看完整版| 麻豆精品久久久久久蜜桃| 国产黄频视频在线观看| 乱人伦中国视频| 一级片'在线观看视频| 久久亚洲国产成人精品v| 亚洲色图综合在线观看| 亚洲第一区二区三区不卡| 精品人妻熟女av久视频| 免费观看a级毛片全部| 国产乱人偷精品视频| 精品久久久久久久久av| 免费看光身美女| 插阴视频在线观看视频| a级毛片在线看网站| 一级av片app| 极品人妻少妇av视频| 久久婷婷青草| 亚洲色图综合在线观看| 亚洲欧美精品自产自拍| 国产亚洲一区二区精品| 亚洲美女视频黄频| 久久这里有精品视频免费| 嫩草影院新地址| 国产av精品麻豆| 狂野欧美白嫩少妇大欣赏| av福利片在线| 国产成人精品一,二区| 青春草亚洲视频在线观看| 少妇高潮的动态图| 麻豆成人午夜福利视频| 精华霜和精华液先用哪个| 少妇精品久久久久久久| 亚洲情色 制服丝袜| av天堂中文字幕网| 少妇人妻精品综合一区二区| 一区二区av电影网| 久久久精品免费免费高清| 国精品久久久久久国模美| 午夜福利在线观看免费完整高清在| 国产乱来视频区| 日韩制服骚丝袜av| 国产精品国产av在线观看| 少妇猛男粗大的猛烈进出视频| 国产免费一级a男人的天堂| 国产精品久久久久久精品古装| 色吧在线观看| 日韩在线高清观看一区二区三区| videossex国产| 日韩av不卡免费在线播放| 亚洲人成网站在线播| 国产成人精品婷婷| 99re6热这里在线精品视频| 插阴视频在线观看视频| 亚洲精品,欧美精品| 国产深夜福利视频在线观看| 国产男人的电影天堂91| 国产在线视频一区二区| 女性被躁到高潮视频| 亚洲精品日韩av片在线观看| 久久国产精品男人的天堂亚洲 | 激情五月婷婷亚洲| 波野结衣二区三区在线| 少妇 在线观看| 国产精品秋霞免费鲁丝片| 日韩欧美一区视频在线观看 | 国产免费一级a男人的天堂| 国产一级毛片在线| 国产一区二区三区综合在线观看 | videossex国产| 男人舔奶头视频| 亚洲国产精品国产精品| 搡老乐熟女国产| 最近中文字幕2019免费版| 韩国av在线不卡| 美女国产视频在线观看| 久久婷婷青草| 亚洲成人手机| 2022亚洲国产成人精品| 91成人精品电影| 久久综合国产亚洲精品| 最近中文字幕2019免费版| 青春草国产在线视频| 女人精品久久久久毛片| 欧美+日韩+精品| 99久国产av精品国产电影| 91aial.com中文字幕在线观看| 亚洲av成人精品一区久久| 日本av手机在线免费观看| 亚洲国产精品一区二区三区在线| 中文字幕亚洲精品专区| 国国产精品蜜臀av免费| 欧美最新免费一区二区三区| 黄色视频在线播放观看不卡| 亚洲欧洲国产日韩| 亚洲精华国产精华液的使用体验| 精品久久久精品久久久| 如日韩欧美国产精品一区二区三区 | 99热这里只有精品一区| 精品一区在线观看国产| 插逼视频在线观看| 一级av片app| 亚洲内射少妇av| 国产精品一区二区在线观看99| 麻豆乱淫一区二区| 十分钟在线观看高清视频www | 亚洲欧洲日产国产| 国产男女超爽视频在线观看| 久久精品久久久久久久性| 777米奇影视久久| 国产欧美亚洲国产| 久久精品夜色国产| 最近最新中文字幕免费大全7| 内射极品少妇av片p| av女优亚洲男人天堂| 精品国产一区二区久久| 中文资源天堂在线| 色婷婷久久久亚洲欧美| 亚洲欧美成人综合另类久久久| 亚洲人成网站在线观看播放| 午夜福利影视在线免费观看| 91aial.com中文字幕在线观看| 日韩视频在线欧美| 六月丁香七月| 在线观看免费日韩欧美大片 | 国产永久视频网站| 97在线人人人人妻| 亚洲情色 制服丝袜| 国产成人精品无人区| 老熟女久久久| 欧美日韩视频高清一区二区三区二| 成人毛片60女人毛片免费| 久久久久久人妻| 亚洲国产精品一区三区| 我的老师免费观看完整版| 久久久久久久国产电影| 中国国产av一级| 在线看a的网站| 乱人伦中国视频| 综合色丁香网| 美女大奶头黄色视频| 精品亚洲成a人片在线观看| 日本爱情动作片www.在线观看| a级毛片在线看网站| 一个人免费看片子| 久久国产亚洲av麻豆专区| 免费人妻精品一区二区三区视频| 亚洲三级黄色毛片| 成人无遮挡网站| 国产真实伦视频高清在线观看| 久热这里只有精品99| 中文字幕精品免费在线观看视频 | 久久国产精品男人的天堂亚洲 | 国产成人freesex在线| 99九九在线精品视频 |