膠孢鐮刀菌>尖孢鐮刀菌;采用100 mg/L濃度的龍眼擬莖點霉誘導子誘導15 d,龍眼胚性愈傷組織多糖含量最高,比對照提高了61.34%,且不同處理間存在顯著差異。但真菌誘導子處理下龍眼胚性愈傷組織"/>
  • <tr id="yyy80"></tr>
  • <sup id="yyy80"></sup>
  • <tfoot id="yyy80"><noscript id="yyy80"></noscript></tfoot>
  • 99热精品在线国产_美女午夜性视频免费_国产精品国产高清国产av_av欧美777_自拍偷自拍亚洲精品老妇_亚洲熟女精品中文字幕_www日本黄色视频网_国产精品野战在线观看 ?

    真菌誘導子對龍眼胚性愈傷組織生長和多糖積累的影響

    2016-07-09 18:39:14徐小萍賴瑞聯(lián)林玉玲賴鐘雄
    熱帶作物學報 2016年11期
    關(guān)鍵詞:增殖龍眼多糖

    徐小萍 賴瑞聯(lián) 林玉玲 賴鐘雄

    摘 要 為探討真菌誘導子對龍眼胚性愈傷組織生長及多糖含量的影響。以龍眼胚性愈傷組織為材料,采用單因素分析法探究了真菌誘導子種類、誘導時間和濃度對龍眼胚性愈傷組織生長和多糖積累的影響。結(jié)果表明,不同真菌誘導子處理下龍眼胚性愈傷組織中多糖含量由高到低排序分別為:龍眼擬莖點霉>膠孢鐮刀菌>尖孢鐮刀菌;采用100 mg/L濃度的龍眼擬莖點霉誘導子誘導15 d,龍眼胚性愈傷組織多糖含量最高,比對照提高了61.34%,且不同處理間存在顯著差異。但真菌誘導子處理下龍眼胚性愈傷組織生長狀態(tài)較差,且增殖率顯著下降。龍眼擬莖點霉作為龍眼病原內(nèi)生菌,其活性誘導物能促進龍眼胚性愈傷組織中多糖積累,從而一定程度上提高植物的免疫防御能力。研究結(jié)果為探究真菌誘導子對龍眼多糖合成和代謝機理的研究奠定基礎(chǔ)。

    關(guān)鍵詞 龍眼;真菌誘導子;多糖;胚性愈傷組織;增殖

    中圖分類號 S667.2 文獻標識碼 A

    龍眼(Dimocarpus longan Lour.)是中國南方熱帶亞熱帶名貴果樹。研究表明,龍眼果肉、果皮及枝葉等各組織器官中含有大量多糖[1-3],尤其是龍眼果肉多糖成分具有較高的生物藥理活性,其含量高達64.27%,極具開發(fā)前景。多糖是生物體中重要初生代謝物質(zhì),具有清除自由基、調(diào)節(jié)免疫系統(tǒng)、抗癌抗菌和抑制酪氨酸酶等生化功能[4-5]。作為一種重要活性成分,多糖還能增強神經(jīng)功能、治療神經(jīng)損傷、降血糖和抗腫瘤作用[6-8]。然而,以果肉等組織器官為原材料提取龍眼多糖易受季節(jié)、氣候等因素限制,開發(fā)一種高效多糖生產(chǎn)技術(shù)具有重要的現(xiàn)實意義。

    龍眼胚性愈傷組織具有較強的增殖和體細胞胚胎發(fā)生能力,為龍眼藥用活性成分的研究生產(chǎn)提供了有效平臺[9-10]。且大量研究表明,植物愈傷組織在多糖生產(chǎn)中具有很好的應用前景[11-13]。因此,筆者認為研究龍眼胚性愈傷組織中的多糖積累有重要意義。真菌誘導子是來自微生物的生物活性物質(zhì),能使植物產(chǎn)生過敏反應,并誘導植物積累特定的次生代謝產(chǎn)物[14],提高植物的防御抗病能力。植物多糖在特定條件下參與某些次生代謝物合成,多糖合成代謝可能受真菌誘導子影響[15-16],探究龍眼的致病內(nèi)生真菌與非龍眼內(nèi)生菌分別制備的誘導子對提高龍眼胚性愈傷組織多糖積累的影響有重要意義。研究表明龍眼果肉中可分離獲得龍眼擬莖點霉、鐮刀菌和炭疽菌,其中龍眼擬莖點霉分離率最高,達44%,其他2種分離率較低[17]。筆者推測真菌誘導子對龍眼胚性愈傷組織多糖誘導具有重要作用。因此,本試驗以龍眼胚性愈傷組織為材料,以3種真菌制備的誘導子為處理因子。采用單因素分析方法研究不同真菌誘導子種類、誘導時間和處理濃度對胚性愈傷組織生長和多糖積累的影響,并通過相關(guān)性和顯著性分析,為真菌誘導子對龍眼多糖合成代謝、信號識別和信號轉(zhuǎn)導等作用機理的研究提供科學依據(jù)。

    1 材料與方法

    1.1 材料

    龍眼‘紅核子(Dimocarpus longan Loμr. cv.Honghezi)胚性愈傷組織由福建農(nóng)林大學園藝植物生物工程研究所提供[18]。3種真菌分別是龍眼擬莖點霉(Phomopsis longanae Chi)、尖孢鐮刀菌(Fusarium oxysporum)、膠孢鐮刀菌(Fusarium subglutinans Wollenw. et Reinking),均由福建農(nóng)林大學植物保護學院贈送。

    1.2 方法

    1.2.1 不同種類誘導子處理龍眼胚性愈傷組織

    參考Wang等[19]、林艷君等[20]的方法,獲得3種真菌誘導子。往龍眼胚性愈傷組織增殖培養(yǎng)基L1分別添加100 mg/L的3種真菌誘導子處理龍眼胚性愈傷組織,暗培養(yǎng)20 d,通過多糖含量測定篩選最適宜的誘導子類型。

    1.2.2 不同誘導時間和誘導子濃度處理龍眼胚性愈傷組織 試驗進一步采用單因素法分別探究處理15、20、25 d后龍眼胚性愈傷組織多糖積累情況,并設(shè)置對照試驗;其次在最適宜天數(shù)處理試驗的基礎(chǔ)上,結(jié)合前人研究報道[20],分別采用0、50、100、200 mg/L濃度的誘導子進行最佳濃度篩選。每個處理進行3個重復,分別采用苯酚硫酸法進行多糖含量測定[21]、愈傷組織狀態(tài)觀察和增殖系數(shù)統(tǒng)計。

    1.2.3 標準曲線制作及多糖測定 稱取0.1 g蔗糖干樣作為標準品,溶解定容至1 000 mL,依次稀釋成不同倍數(shù)的濃度,以紫外分光光度計在485 nm波長下測定的吸光值為縱坐標,以糖濃度為橫坐標,利用吸光值與總糖量成線性關(guān)系,制作多糖含量標準曲線如圖1,線性回歸方程為y=0.018 3x+0.004 6,相關(guān)系數(shù)R2=0.999 8。

    多糖提取測定,采用苯酚硫酸法。稱取龍眼胚性愈傷組織干樣0.03 g,加1 mL的雙蒸水,沸水浴30 min,7 800 r/min常溫離心10 min,取上清液后重復該步驟2次,雙蒸水漂洗殘渣,離心,定容至10 mL;加5 mL石油醚,臺式恒溫振蕩器常溫200 r/min,10 min;靜置分層,棄上層溶液,下層溶液加2 mL氯仿 ∶ 正丁醇(5 ∶ 1)溶液,混勻至乳濁狀,靜置分層;取50 μL上層溶液,雙蒸水定容至2 mL;加1 mL 9%苯酚溶液,搖勻,加5 mL濃硫酸,搖勻。室溫下冷卻靜置30 min,紫外分光光度計485 nm波長測定吸光值。多糖含量計算公式:多糖含量(%)=X/(M/V1)*V2/V3×100%。其中X:樣品中多糖濃度(mg/mL),M:樣品質(zhì)量g,V1:首次樣品定容的體積10 mL,V2:稀釋時吸取的樣品體積50 μL,V3:稀釋后定容的體積2 mL,見圖1。

    1.3 數(shù)據(jù)統(tǒng)計

    采用Excel 2003進行數(shù)據(jù)統(tǒng)計和圖表制作,并采SPSS20.0進行相關(guān)分析、方差分析和顯著性測驗。

    2 結(jié)果與分析

    2.1 真菌誘導子對多糖含量的影響

    2.1.1 真菌誘導子種類對多糖含量的影響 對所得數(shù)據(jù)進行方差齊性檢驗、單因素分析結(jié)合Duncan法進行兩兩比較,如表1,結(jié)果表明3種真菌誘導子中龍眼擬莖點霉誘導子對龍眼胚性愈傷組織中多糖含量的影響達到極顯著性水平(α=0.01),多糖含量高達15.29%,尖孢鐮刀菌誘導子不利于胚性愈傷組織多糖積累,膠孢鐮刀菌誘導子對多糖積累誘導效果不顯著。因此,選用龍眼擬莖點霉誘導子對龍眼胚性愈傷組織進行不同誘導天數(shù)和不同濃度的處理,進一步探究多糖含量的積累情況。

    2.1.2 誘導時間對龍眼胚性愈傷組織多糖含量的影響

    篩選出最適的誘導子種類后,試驗進一步對最適誘導時間進行篩選。結(jié)果表明,龍眼擬莖點霉誘導子處理15 d時,最能促進胚性愈傷組織多糖積累,處理25 d時對多糖積累也有促進作用,但積累量最少。經(jīng)方差齊性檢驗、單因素方差分析、F檢驗及LSD多重比較數(shù)據(jù)分析表明,與對照相比,α=0.05顯著性水平下,龍眼擬莖點霉誘導子誘導不同時間對愈傷組織多糖積累具有顯著性影響。結(jié)合圖2分析,龍眼胚性愈傷組織在相同濃度不同誘導天數(shù)的龍眼擬莖點霉誘導子處理下,多糖含量隨誘導天數(shù)增加而減少,其中15 d時的多糖含量達到最高為17.99%,其次是20 d(14.27%),25 d時最低,僅為7.22%;與對照相比,多糖含量分別提高了61.34%、42.56%、12.04%??梢?,龍眼胚性愈傷組織多糖積累與誘導時間密切相關(guān),而15 d為最佳處理時間。

    2.1.3 龍眼擬莖點霉誘導子濃度對多糖含量的影響

    繼不同誘導天數(shù)處理后,進一步探究誘導子濃度對龍眼胚性愈傷組織多糖含量影響。結(jié)果表明100 mg/L龍眼擬莖點霉誘導子最能促進龍眼胚性愈傷組織多糖積累,其次是200 mg/L,多糖含量分別達到20.40%和19.92%,二者無顯著差異;而添加濃度為50 mg/L時對多糖積累作用不明顯(圖3),其他處理間的差異顯著性較為明顯。

    2.2 龍眼擬莖點霉誘導子對龍眼胚性愈傷組織生長的影響

    2.2.1 誘導時間對龍眼胚性愈傷組織生長的影響

    用相同濃度100 mg/L龍眼擬莖點霉誘導子處理不同時間后,龍眼胚性愈傷組織生長情況如圖4、5所示。從形態(tài)上看,誘導20 d時胚性愈傷組織形態(tài)較松散淡黃,顆粒較小,15 d時愈傷組織形態(tài)松散淺黃,顆粒較小,可能是龍眼胚性愈傷組織正處于旺盛生長階段,25 d時形態(tài)較為緊實,出現(xiàn)顆?;F(xiàn)象;25 d增殖系數(shù)最高,15 d時增殖系數(shù)較小,20 d時增殖系數(shù)相對較高處于中間水平。SPSS20.0分析可知,不同誘導天數(shù)的誘導子對龍眼胚性愈傷組織增殖生長均具有顯著性影響,且經(jīng)誘導子處理后的龍眼胚性愈傷組織增殖系數(shù)整體較低,說明龍眼擬莖點霉誘導子明顯抑制龍眼胚性愈傷組織增殖生長。

    2.2.2 誘導子濃度對龍眼胚性愈傷組織生長的影響

    對不同濃度誘導子處理15 d時的龍眼胚性愈傷組織生長狀態(tài)和增殖系數(shù)進行分析(圖6和圖7)。從總體上看,與對照相比,不同濃度誘導子對龍眼胚性愈傷組織生長均有抑制作用。而50 mg/L的誘導子有利于龍眼胚性愈傷組織正常形態(tài)維持,200 mg/L的誘導子不利于龍眼胚性愈傷組織正常生長,100 mg/L的誘導子處理下龍眼胚性愈傷組織雖顆粒稍大,但色澤較為正常。方差齊次性檢驗得p=0.11,大于0.05,單因素方差分析的F檢驗中p=0,小于0.05,說明不同濃度誘導子對龍眼胚性愈傷組織增殖生長具有顯著性影響,且添加100和200 mg/L的誘導子對龍眼胚性愈傷組織增殖生長均有極顯著性差異,但100 mg/L誘導子相對抑制作用最小,增殖系數(shù)為4.94,與對照相比減小40.48%??梢?,50~200 mg/L的誘導子對龍眼胚性愈傷組織增殖生長均有抑制作用,而均衡多糖含量與龍眼胚性愈傷組織生長情況,選擇添加100 mg/L龍眼擬莖點霉誘導子,暗培養(yǎng)誘導15 d作為本試驗龍眼胚性愈傷組織多糖積累的最佳條件。

    3 討論與結(jié)論

    3.1 龍眼擬莖點霉誘導子促進龍眼胚性愈傷組織多糖積累

    本試驗研究認為,龍眼擬莖點霉誘導子半活體營養(yǎng)型龍眼內(nèi)生真菌,其活性誘導物能促進龍眼胚性愈傷組織中多糖含量的積累。白樺懸浮細胞中三萜系化合物會受擬莖點霉誘導子的影響[22],進一步證實了真菌誘導子能有效促進植物次生代謝物合成。真菌誘導子能通過信號識別、信號轉(zhuǎn)導及信號轉(zhuǎn)錄介導的胞內(nèi)應答等途徑,調(diào)控相關(guān)基因的表達進而影響植物次生代謝物積累。龍眼擬莖點霉誘導子來源于龍眼果肉致病內(nèi)生菌-龍眼擬莖點霉[15],該霉能產(chǎn)生細胞壁降解酶,降解細胞壁多糖,誘發(fā)龍眼果腐病[23-24]。陳藝輝等[25]研究發(fā)現(xiàn)龍眼擬莖點霉可以促進酚類物質(zhì)積累使果皮褐變,病原菌侵染早期能引起果實細胞氧化迸發(fā)的應激反應,增強植物體免疫防御能力;多糖作為初生代謝產(chǎn)物,也是植物細胞壁主要成分,不僅能作為眾多植物次生代謝物合成前體,還具有免疫、防御及抗逆等相關(guān)功能[26]。龍眼擬莖點霉誘導子可能通過誘導調(diào)控龍眼胚性愈傷組織中某些病原抗性基因,在病原侵染初期通過合成多糖來提高植物自身的免疫防御能力,這與江曙等[27]研究的明黨參內(nèi)生真菌能顯著促進明黨參多糖積累一致。

    研究表明,生物誘導子具有高效、專一及濃度效應等特點[28-29]。本試驗認為龍眼擬莖點霉誘導子較其他2種非龍眼內(nèi)生真菌誘導子更能顯著提高龍眼胚性愈傷組織多糖含量。尖孢鐮刀菌誘導子對龍眼胚性愈傷組織多糖積累有一定抑制作用,與劉長軍等[30]的研究結(jié)論并不一致,可能由于同種誘導子響應植物中同種次生代謝物合成的細胞受體的結(jié)合位點存在差異。也可能通過鈣調(diào)素、磷酸肌醇、G蛋白等誘導信號,以IP3-DAG-Ca2+/PKC系統(tǒng)、腺苷酸環(huán)化酶調(diào)節(jié)的cAMP/PKA胞內(nèi)信號傳導的第二信使傳遞系統(tǒng),影響次生代謝物合成相關(guān)基因的表達,改變次生代謝通路,從而調(diào)節(jié)次生代謝物積累[31]。因此,研究龍眼本身致病內(nèi)生菌的生物活性物質(zhì)適當?shù)恼T導時間、濃度及添加時間對龍眼本身多糖和次生代謝物的積累具有重要意義。

    3.2 龍眼擬莖點霉誘導子抑制龍眼胚性愈傷組織生長

    試驗中,添加100 mg/L龍眼擬莖點霉誘導子時發(fā)現(xiàn),龍眼愈傷組織增殖生長抑制率達40.48%,這與陶金華等[32]研究的100 mg/L內(nèi)生真菌抑制茅蒼術(shù)細胞生長結(jié)果類似。誘導子對次生代謝物調(diào)節(jié)具有特異性,同時由于誘導產(chǎn)生的抗毒素對細胞自身大多具有毒性,濃度過高有可能抑制細胞生長。且粗誘導物中誘導子的活性成分和拮抗成分相互制約,加量少時拮抗作用小,誘導作用也小,反之亦然。

    在前人的研究中,劉長軍等[30]研究發(fā)現(xiàn)尖孢鐮刀菌誘導子在西洋參懸浮細胞培養(yǎng)前期能促進細胞生長,而Zhu等[33]發(fā)現(xiàn)蛋白類誘導子在促進靈芝酸合成的同時抑制了細胞生長??梢姡T導子促進細胞生長與次生代謝物合成還可能和誘導子本身的活性成分種類有關(guān),其可能和細胞間信號傳導、基因表達調(diào)控等機制有關(guān),這與添加非生物因子如激素、光質(zhì)、營養(yǎng)物質(zhì)等因素對次生代謝物的誘導有所不同[34]。試驗研究結(jié)果可為在龍眼細胞組織培養(yǎng)生產(chǎn)中提高多糖含量提供科學依據(jù)。

    參考文獻

    [1] Yang B, Jiang Y M, Zhao M M, et al. Structural characterisation of polysaccharides purified from longan(Dimocarpus longan Lour.)fruit pericarp[J]. Food Chemistry, 2009, 115(2): 609-614.

    [2] Liu X X, Luo Y Y, Zha C J. Rheological properties of polysaccharides from longan(Dimocarpus longan Lour.)fruit[J]. International Journal of Polymer Science, 2015: 1-5

    [3] 蔡英卿, 賴鐘雄, 伍妙聰, 等. 龍眼不同品種各營養(yǎng)器官多糖含量分析[J]. 中國生態(tài)農(nóng)業(yè)學報, 2007, 15(4): 86-88.

    [4] Zhong K, Wang Q, He Y, et al. Evaluation of radicals scavenging, immunity-modulatory and antitumor activities of longan polysaccharides with ultrasonic extraction on in S180 tumor mice models[J]. International Journal of Biological Macromolecules, 2010, 47(33): 56-60.

    [5] Yi Y, Zhang M W, Liao S T , et al. Structural features and immunomodulatory activities of polysaccharides of longan pulp[J]. Carbohydrate Polymers, 2012, 87(87): 636-643.

    [6] Zhang M, Tang X L, Wang F, et al. Characterization of Lycium barbarum polysaccharide and its effect on human hepatoma cells[J]. International Journal of Biological Macromolecules, 2013, 61(10): 270-275.

    [7] 陳建國, 步文磊, 來偉旗, 等. 桑葉多糖降血糖作用及其機制研究[J]. 中草藥, 2011, 42(3): 515-520.

    [8] 向艷霞, 肖凌云, 張 菊, 等. 黃芪多糖治療神經(jīng)系統(tǒng)疾病的作用及其機制研究進展[J]. 中國醫(yī)院藥學雜志, 2016(8): 1-5.

    [9] 董慧雪, 周燕蓉, 田奇琳, 等. 不同光質(zhì)對龍眼胚性愈傷組織類黃酮含量的影響[J]. 熱帶作物學報, 2014, 35(12): 2 374-2 377.

    [10] Lai Z X, Lin Y L. Analysis of the global transcriptome of longan(Dimocarpus longan Lour.)embryogenic callus using Illumina paired-end sequencing[J]. BMC Genomics, 2013(14): 561

    [11] Liang W B, Deng B L, Xiao J, et al. Effects of basic media and culture conditions on callus growth and polysaccharide content in Schisandra sphenanthera[J]. Journal of Central South University of Forestry & Technology, 2011, 31(3): 130-133.

    [12] Tian Q Q, Lu C M, Li X, et al. Low temperature treatments of rice(Oryza sativa L.)anthers changes polysaccharide and protein composition of the anther walls and increases pollen fertility and callus induction[J]. Plant Cell Tissue & Organ Culture, 2015, 120(1): 89-98.

    [13] 金曉鋒, 楊永健, 朱蓮蓮, 等. 鐵皮石斛懸浮培養(yǎng)條件篩選及生產(chǎn)多糖[J]. 蘭州大學學報: 醫(yī)學版, 2012, 38(4): 27-30.

    [14] Sibylle K, Marilena L, Christne H, et al. Fungal elicitors combined with a sucrose feed significantly enhance triterpene production of a Salvia fruticosa cell suspension[J]. Applied Microbiology and Biotechnology, 2016, 100(16): 7 071-7 082.

    [15] 楊 慧, 陳曉梅, 郭順星. 真菌誘導子對鐵皮石斛原球莖多糖含量的影響[J]. 世界科學技術(shù): 中醫(yī)藥現(xiàn)代化, 2009, 11(5): 719-722.

    [16] 高興喜, 姚 強, 王 磊, 等. 真菌激發(fā)子對靈芝液體發(fā)酵生產(chǎn)多糖和三萜類物質(zhì)的影響[J]. 食品科學, 2009, 30(23): 309-313.

    [17] 張居念, 林河通, 謝聯(lián)輝, 等. 龍眼果實潛伏性病原真菌的初步研究[J]. 熱帶作物學報, 2006, 27(4): 78-82.

    [18] 賴鐘雄, 潘良鎮(zhèn). 龍眼胚性細胞系的建立與保持[J]. 福建農(nóng)業(yè)大學學報, 1997, 26(2): 160-167.

    [19] Wang C G, Wu J Y, Mei X G. Enhancement of taxol production andexcretion in Taxus chinensis cell culture by fungal elicitation andmedium renewal[J]. Applied microbiology and Biotechnology, 2001, 55(4): 404-410.

    [20] 林艷君, 賴鐘雄. 鐵皮石斛HDR基因克隆及真菌誘導子對其表達和生物堿含量的影響[J]. 熱帶作物學報, 2015, 36(4): 680-686.

    [21] 畢和平, 周 賢, 陳光英, 等. 苯酚-硫酸法測定破布葉葉的多糖[J]. 海南師范大學學報: 自然科學版, 2010, 23(4): 400-402.

    [22] Fan G Z, Zhai Q, Zhan Y. Gene expression of lupeol synthase and biosynthesis of Nitric Oxide in cell suspension cultures of Betula platyphylla, in response to a Phomopsis, elicitor[J].Plant Molecular Biology Reporter, 2012, 31(2): 296-302.

    [23] 張居念, 陳藝暉, 林藝芬, 等. 龍眼擬莖點霉(Phomopsis longanae Chi)的生物學特性研究[J]. 熱帶作物學報, 2013, 34(4): 695-699.

    [24] 張洪祥. 龍眼擬莖點霉細胞壁降解酶及其致病機理的研究[D].福州: 福建農(nóng)林大學, 2010.

    [25] 陳藝暉, 林河通, 林藝芬, 等. 擬莖點霉侵染對龍眼果實采后果皮褐變和活性氧代謝的影響[J]. 中國農(nóng)業(yè)科學, 2011, 44(23): 4 858-4 866.

    [26] Vorwerk S, Somerville S, Somerville C. The role of plant cell wall polysaccharide composition in disease resistance[J]. Trends in Plant Science, 2004, 9(4): 203-209.

    [27] 江 曙, 段金廒, 陶金華, 等. 明黨參內(nèi)生真菌種群的生態(tài)分布及其誘導子活性研究[J]. 中草藥, 2010, 41(1): 121-125.

    [28] 崔晉龍, 付少彬, 高 芬, 等. 真菌誘導植物次生代謝產(chǎn)物積累的信號機制及在藥用植物中的應用[J]. 中草藥, 2012, 43(8): 1 647-1 651.

    [29] Xiao J L, Lai Y C, Li W, et al. Research development of endophytic fungus and defence response mechanism of plant[J]. Botanical Research, 2013, 2(1): 13-17.

    [30] 劉長軍, 侯嵩生, 李新明, 等. 真菌誘導子對懸浮培養(yǎng)西洋參細胞的生理效應[J]. 植物科學學報, 1996(3): 240-246.

    [31] Andrea V, RICARDO B. Molecular aspects of the early stages of elicitation of secondary metabolites in plants[J]. Plant Science, 2007, 172(5): 861-875.

    [32] 陶金華, 濮雪蓮, 江 曙. 內(nèi)生真菌誘導子對茅蒼術(shù)細胞生長及蒼術(shù)素積累的影響[J]. 中國中藥雜志, 2011, 36(1): 27-31.

    [33] Zhu L W, Zhong J J, Tang Y J. Significance of fungal elicitors on the production of ganoderic acid and Ganoderma polysaccharides by the submerged culture of medicinal mushroom Ganoderma lucidum[J]. Process Biochemistry, 2008, 43(12): 1 359-1 370.

    [34] 徐小萍, 謝燕萍, 慕 堯, 等. HPLC法測定LED不同光質(zhì)下迷迭香愈傷組織中鼠尾草酸含量[J]. 廣東農(nóng)業(yè)科學, 2015, 42(15):77-81.

    猜你喜歡
    增殖龍眼多糖
    買龍眼
    米胚多糖的組成及抗氧化性研究
    熟三七多糖提取工藝的優(yōu)化
    中成藥(2018年3期)2018-05-07 13:34:45
    ‘金凱特’杏的組織培養(yǎng)與快繁
    甜甜的龍眼
    嶺南音樂(2016年5期)2017-01-17 07:44:58
    普伐他汀對人胰腺癌細胞SW1990的影響及其協(xié)同吉西他濱的抑瘤作用
    細胞自噬與人卵巢癌細胞對順鉑耐藥的關(guān)系
    甜甜的龍眼,美美的景色
    雷帕霉素對K562細胞增殖和凋亡作用的影響
    科技視界(2016年5期)2016-02-22 19:03:28
    酶法降解白及粗多糖
    中成藥(2014年11期)2014-02-28 22:29:50
    久久伊人香网站| 国产又黄又爽又无遮挡在线| 国产亚洲精品综合一区在线观看 | 久久精品国产清高在天天线| 一级片免费观看大全| 在线观看日韩欧美| 正在播放国产对白刺激| 欧美 亚洲 国产 日韩一| 12—13女人毛片做爰片一| 一级a爱片免费观看的视频| 久久久久久国产a免费观看| 在线观看午夜福利视频| 日本在线视频免费播放| 国产精品一区二区三区四区免费观看 | 日本一二三区视频观看| xxx96com| 亚洲一区中文字幕在线| 97人妻精品一区二区三区麻豆| 国产私拍福利视频在线观看| 亚洲成人中文字幕在线播放| av在线播放免费不卡| 日本 av在线| 麻豆国产97在线/欧美 | 一本综合久久免费| 搞女人的毛片| 国产aⅴ精品一区二区三区波| 久久天躁狠狠躁夜夜2o2o| 一级毛片高清免费大全| 50天的宝宝边吃奶边哭怎么回事| xxx96com| 淫妇啪啪啪对白视频| 91麻豆av在线| 国产激情久久老熟女| 久久国产精品人妻蜜桃| 久久久久久久久中文| 亚洲va日本ⅴa欧美va伊人久久| 亚洲色图av天堂| 精品国产超薄肉色丝袜足j| 亚洲专区中文字幕在线| 欧美日本亚洲视频在线播放| 国产精品香港三级国产av潘金莲| 亚洲,欧美精品.| 亚洲狠狠婷婷综合久久图片| 99久久无色码亚洲精品果冻| 一本久久中文字幕| 成人18禁高潮啪啪吃奶动态图| 国产精品98久久久久久宅男小说| 免费电影在线观看免费观看| av福利片在线| 国产亚洲精品综合一区在线观看 | 男人的好看免费观看在线视频 | 九色成人免费人妻av| 最近在线观看免费完整版| 九色国产91popny在线| 成人国产综合亚洲| 成人av一区二区三区在线看| 欧美性猛交黑人性爽| 99久久国产精品久久久| 亚洲va日本ⅴa欧美va伊人久久| 午夜福利18| 丝袜美腿诱惑在线| 99久久综合精品五月天人人| 欧美精品亚洲一区二区| 久久午夜综合久久蜜桃| 免费在线观看成人毛片| 国产激情欧美一区二区| 国产精品久久久久久久电影 | 国产亚洲精品久久久久久毛片| 国产av一区二区精品久久| 国产精品 国内视频| 国产成人啪精品午夜网站| 亚洲av五月六月丁香网| 国产蜜桃级精品一区二区三区| 日本 欧美在线| 亚洲男人的天堂狠狠| 老熟妇乱子伦视频在线观看| 欧美黑人精品巨大| 一本一本综合久久| 亚洲成av人片在线播放无| 亚洲精品一区av在线观看| 99国产综合亚洲精品| 首页视频小说图片口味搜索| 国产精品99久久99久久久不卡| 久久精品夜夜夜夜夜久久蜜豆 | 成人永久免费在线观看视频| 久久久久亚洲av毛片大全| 亚洲 国产 在线| 国产精品一区二区三区四区免费观看 | 久久久精品国产亚洲av高清涩受| x7x7x7水蜜桃| 日韩欧美在线二视频| 一级毛片精品| 在线观看66精品国产| 亚洲真实伦在线观看| 亚洲,欧美精品.| 午夜亚洲福利在线播放| 国产熟女午夜一区二区三区| 日韩欧美在线二视频| 国产亚洲精品一区二区www| 久久香蕉精品热| 老汉色∧v一级毛片| 国产精品亚洲av一区麻豆| 国产久久久一区二区三区| 国产激情偷乱视频一区二区| 777久久人妻少妇嫩草av网站| 好男人电影高清在线观看| 欧美黑人精品巨大| 久久久国产精品麻豆| 亚洲精华国产精华精| 亚洲一区高清亚洲精品| 国产精品永久免费网站| 亚洲国产欧美网| 熟女电影av网| 亚洲成人精品中文字幕电影| 亚洲熟妇熟女久久| av超薄肉色丝袜交足视频| 老司机午夜十八禁免费视频| 亚洲天堂国产精品一区在线| 真人做人爱边吃奶动态| 免费在线观看视频国产中文字幕亚洲| 国产亚洲精品久久久久久毛片| 亚洲国产欧美网| 免费一级毛片在线播放高清视频| 亚洲色图av天堂| 国产一区二区三区视频了| 亚洲美女视频黄频| 久久人妻福利社区极品人妻图片| 亚洲精品久久成人aⅴ小说| 亚洲男人天堂网一区| 两个人视频免费观看高清| 久久香蕉激情| 色综合欧美亚洲国产小说| 国产精品一区二区免费欧美| 757午夜福利合集在线观看| 亚洲熟女毛片儿| 在线观看一区二区三区| 久久精品国产清高在天天线| 亚洲18禁久久av| а√天堂www在线а√下载| 国产精品久久久久久人妻精品电影| 国产成人精品无人区| 亚洲一卡2卡3卡4卡5卡精品中文| 狂野欧美激情性xxxx| 欧美一级a爱片免费观看看 | 麻豆成人av在线观看| 日韩国内少妇激情av| 国产成人影院久久av| 1024视频免费在线观看| 国产精品美女特级片免费视频播放器 | 一级毛片女人18水好多| 在线观看免费日韩欧美大片| 非洲黑人性xxxx精品又粗又长| 午夜成年电影在线免费观看| 国产高清videossex| 国产亚洲精品综合一区在线观看 | 久久婷婷人人爽人人干人人爱| 男女下面进入的视频免费午夜| 变态另类成人亚洲欧美熟女| 听说在线观看完整版免费高清| 俄罗斯特黄特色一大片| 日韩欧美免费精品| 色精品久久人妻99蜜桃| 两人在一起打扑克的视频| xxxwww97欧美| 国产久久久一区二区三区| 久久久久久久久中文| 婷婷精品国产亚洲av| 99久久久亚洲精品蜜臀av| 国产不卡一卡二| 美女高潮喷水抽搐中文字幕| 免费搜索国产男女视频| 欧美色视频一区免费| 成年免费大片在线观看| 午夜激情福利司机影院| 久久国产精品人妻蜜桃| 亚洲专区字幕在线| 久热爱精品视频在线9| 精品久久久久久,| 国产欧美日韩一区二区三| 日韩av在线大香蕉| 19禁男女啪啪无遮挡网站| 亚洲精品美女久久av网站| 视频区欧美日本亚洲| 99久久无色码亚洲精品果冻| 久久午夜亚洲精品久久| 亚洲男人的天堂狠狠| 一区二区三区国产精品乱码| 日本三级黄在线观看| 国产免费男女视频| 国产精品免费视频内射| 亚洲一区二区三区色噜噜| 在线视频色国产色| 99热只有精品国产| 男女视频在线观看网站免费 | 国产区一区二久久| 热99re8久久精品国产| 99热这里只有是精品50| 丁香六月欧美| 成人一区二区视频在线观看| 看免费av毛片| 久热爱精品视频在线9| 中文字幕高清在线视频| 黄色成人免费大全| 国产单亲对白刺激| 久久久国产成人精品二区| 在线国产一区二区在线| 不卡一级毛片| 欧美黑人精品巨大| 国产成人精品久久二区二区91| 国产av又大| 国产麻豆成人av免费视频| 国产成人欧美在线观看| 精品国产乱子伦一区二区三区| 老熟妇乱子伦视频在线观看| 国产精品久久久久久亚洲av鲁大| 国产免费av片在线观看野外av| 在线观看美女被高潮喷水网站 | 在线观看www视频免费| 亚洲美女黄片视频| 最近视频中文字幕2019在线8| 久久九九热精品免费| 很黄的视频免费| 久久人妻av系列| 特级一级黄色大片| 成人av一区二区三区在线看| 亚洲精品美女久久av网站| 日日干狠狠操夜夜爽| av片东京热男人的天堂| 欧美大码av| 欧美乱码精品一区二区三区| 亚洲精品中文字幕在线视频| 色综合亚洲欧美另类图片| 欧美性猛交╳xxx乱大交人| 亚洲av熟女| 老司机午夜福利在线观看视频| 最近最新中文字幕大全电影3| 一本综合久久免费| 久久久久久免费高清国产稀缺| www日本黄色视频网| 床上黄色一级片| 啪啪无遮挡十八禁网站| 无人区码免费观看不卡| 日韩欧美在线乱码| 精品国产亚洲在线| 欧美成人午夜精品| 亚洲激情在线av| 在线观看美女被高潮喷水网站 | 久久性视频一级片| www.精华液| 一本大道久久a久久精品| 亚洲全国av大片| 国产91精品成人一区二区三区| 日日干狠狠操夜夜爽| 午夜免费激情av| 蜜桃久久精品国产亚洲av| 亚洲av片天天在线观看| 亚洲精品中文字幕在线视频| 免费av毛片视频| 欧美成人性av电影在线观看| 久久久国产成人免费| 中文字幕久久专区| 欧美最黄视频在线播放免费| 国产午夜精品论理片| 亚洲中文字幕日韩| 亚洲 国产 在线| АⅤ资源中文在线天堂| 精品免费久久久久久久清纯| 99riav亚洲国产免费| 亚洲成人久久爱视频| 高清在线国产一区| 岛国在线观看网站| 久久久久久免费高清国产稀缺| 午夜免费成人在线视频| 99精品欧美一区二区三区四区| 久久天躁狠狠躁夜夜2o2o| 毛片女人毛片| av福利片在线| 国产探花在线观看一区二区| 无限看片的www在线观看| 亚洲色图av天堂| 男人舔奶头视频| 欧美黑人欧美精品刺激| 制服丝袜大香蕉在线| 亚洲一码二码三码区别大吗| 99久久无色码亚洲精品果冻| 亚洲第一欧美日韩一区二区三区| 精品第一国产精品| 女同久久另类99精品国产91| 亚洲国产看品久久| 亚洲一码二码三码区别大吗| 在线观看午夜福利视频| 在线观看免费午夜福利视频| 一本精品99久久精品77| 日日爽夜夜爽网站| 亚洲欧美精品综合一区二区三区| 欧美午夜高清在线| 午夜亚洲福利在线播放| 男插女下体视频免费在线播放| 国产激情欧美一区二区| 亚洲人成网站在线播放欧美日韩| 国产av在哪里看| 久久久久久久午夜电影| 男人的好看免费观看在线视频 | 一级毛片高清免费大全| 男人舔奶头视频| 麻豆国产97在线/欧美 | 男女那种视频在线观看| 老司机在亚洲福利影院| 精品一区二区三区视频在线观看免费| 久久国产乱子伦精品免费另类| 国产精品精品国产色婷婷| 首页视频小说图片口味搜索| 亚洲中文日韩欧美视频| 99久久久亚洲精品蜜臀av| 国产高清视频在线观看网站| 9191精品国产免费久久| 国产精品久久久久久久电影 | 视频区欧美日本亚洲| 国产高清有码在线观看视频 | 一卡2卡三卡四卡精品乱码亚洲| 人人妻人人看人人澡| 在线观看www视频免费| 1024香蕉在线观看| 色综合站精品国产| 亚洲成a人片在线一区二区| 亚洲国产日韩欧美精品在线观看 | 亚洲av日韩精品久久久久久密| 精品久久久久久久末码| 欧美大码av| 亚洲国产精品合色在线| 亚洲精品一区av在线观看| 国产精品自产拍在线观看55亚洲| 特大巨黑吊av在线直播| 亚洲一区二区三区不卡视频| 巨乳人妻的诱惑在线观看| 亚洲性夜色夜夜综合| 精品免费久久久久久久清纯| 免费看日本二区| 成人精品一区二区免费| 两个人的视频大全免费| a级毛片a级免费在线| 精品无人区乱码1区二区| 久久 成人 亚洲| 精品久久久久久,| 久久久久久久午夜电影| 国产精品美女特级片免费视频播放器 | 一级黄色大片毛片| 美女免费视频网站| 中国美女看黄片| 国产激情久久老熟女| 亚洲国产精品合色在线| 日本精品一区二区三区蜜桃| 午夜精品久久久久久毛片777| 一级毛片女人18水好多| 999久久久精品免费观看国产| 久久天堂一区二区三区四区| x7x7x7水蜜桃| 特级一级黄色大片| 日韩精品青青久久久久久| 日本a在线网址| 少妇的丰满在线观看| 一边摸一边做爽爽视频免费| 色噜噜av男人的天堂激情| 岛国在线免费视频观看| 久久国产精品人妻蜜桃| 亚洲电影在线观看av| 亚洲,欧美精品.| 久久性视频一级片| 亚洲 欧美一区二区三区| ponron亚洲| 深夜精品福利| 国产亚洲欧美98| 国产免费男女视频| 美女大奶头视频| 欧美成人一区二区免费高清观看 | 悠悠久久av| 午夜免费观看网址| 黄色片一级片一级黄色片| 久久精品国产综合久久久| 18禁国产床啪视频网站| 亚洲色图 男人天堂 中文字幕| 在线观看舔阴道视频| 美女大奶头视频| 一夜夜www| 最新美女视频免费是黄的| 中文亚洲av片在线观看爽| a级毛片a级免费在线| 国产区一区二久久| 老司机深夜福利视频在线观看| 国内揄拍国产精品人妻在线| 国产一区二区激情短视频| 这个男人来自地球电影免费观看| 欧美丝袜亚洲另类 | 欧美黄色淫秽网站| 亚洲国产日韩欧美精品在线观看 | 日本在线视频免费播放| 中文字幕久久专区| 成人高潮视频无遮挡免费网站| 此物有八面人人有两片| 99国产综合亚洲精品| 国产一区二区三区在线臀色熟女| 久久精品成人免费网站| 性色av乱码一区二区三区2| 两人在一起打扑克的视频| 成人亚洲精品av一区二区| 可以在线观看毛片的网站| 国产熟女xx| 此物有八面人人有两片| 五月玫瑰六月丁香| 久久国产精品人妻蜜桃| 深夜精品福利| 日韩高清综合在线| 91麻豆av在线| 岛国在线观看网站| 一进一出抽搐gif免费好疼| 婷婷六月久久综合丁香| 中国美女看黄片| 首页视频小说图片口味搜索| 午夜精品一区二区三区免费看| 女人爽到高潮嗷嗷叫在线视频| 老汉色∧v一级毛片| 一区二区三区高清视频在线| 亚洲精品久久成人aⅴ小说| 色精品久久人妻99蜜桃| 久久亚洲真实| 日本一本二区三区精品| 国产片内射在线| 波多野结衣巨乳人妻| 悠悠久久av| 国产黄a三级三级三级人| 18美女黄网站色大片免费观看| 可以免费在线观看a视频的电影网站| 高清在线国产一区| 国产一级毛片七仙女欲春2| 一进一出好大好爽视频| 99国产综合亚洲精品| 老司机福利观看| 黄色毛片三级朝国网站| 午夜激情av网站| 国产精品久久久人人做人人爽| 久久久国产精品麻豆| 欧美日韩福利视频一区二区| 国产亚洲精品综合一区在线观看 | 久久国产精品影院| www.自偷自拍.com| 亚洲男人天堂网一区| 精品欧美国产一区二区三| 日韩av在线大香蕉| 中文字幕高清在线视频| 欧美不卡视频在线免费观看 | 亚洲全国av大片| 久久人妻福利社区极品人妻图片| 精品欧美国产一区二区三| 国产v大片淫在线免费观看| 中文字幕av在线有码专区| 欧美三级亚洲精品| 嫩草影院精品99| 久久午夜亚洲精品久久| www.精华液| 岛国在线观看网站| 免费在线观看完整版高清| 日本 欧美在线| 色av中文字幕| 久久精品91蜜桃| 欧美午夜高清在线| 久久人妻福利社区极品人妻图片| 国产真实乱freesex| 午夜成年电影在线免费观看| 12—13女人毛片做爰片一| 国产av一区二区精品久久| 成人午夜高清在线视频| 在线看三级毛片| 脱女人内裤的视频| av中文乱码字幕在线| 亚洲av美国av| 午夜免费激情av| 欧洲精品卡2卡3卡4卡5卡区| 亚洲一区二区三区色噜噜| 国产在线精品亚洲第一网站| 亚洲专区字幕在线| 人人妻人人澡欧美一区二区| 久久久水蜜桃国产精品网| 亚洲五月婷婷丁香| 免费看日本二区| 又紧又爽又黄一区二区| 国产av在哪里看| 久久中文字幕人妻熟女| 最近在线观看免费完整版| 国产精品乱码一区二三区的特点| 亚洲美女黄片视频| 国产黄色小视频在线观看| 久久午夜综合久久蜜桃| 国产精品免费视频内射| 国产精品av视频在线免费观看| 999久久久国产精品视频| 亚洲 国产 在线| 欧美黑人欧美精品刺激| 日本 欧美在线| 亚洲国产精品久久男人天堂| 精品国内亚洲2022精品成人| 97人妻精品一区二区三区麻豆| 中文字幕熟女人妻在线| 欧美日韩一级在线毛片| 午夜精品一区二区三区免费看| 男女午夜视频在线观看| 一个人免费在线观看电影 | 亚洲成人免费电影在线观看| 国产精品av久久久久免费| 成人av在线播放网站| 九色国产91popny在线| 两个人的视频大全免费| 久久中文字幕一级| 久久草成人影院| 免费在线观看视频国产中文字幕亚洲| 午夜福利18| 日韩三级视频一区二区三区| 亚洲欧美精品综合久久99| 日本熟妇午夜| 国产在线观看jvid| 亚洲一码二码三码区别大吗| 久久 成人 亚洲| 女人高潮潮喷娇喘18禁视频| 最近视频中文字幕2019在线8| 国产精品 国内视频| 高潮久久久久久久久久久不卡| 777久久人妻少妇嫩草av网站| 男人舔女人下体高潮全视频| 国产欧美日韩精品亚洲av| 国产精品 欧美亚洲| 日本黄色视频三级网站网址| 制服丝袜大香蕉在线| 国产69精品久久久久777片 | 午夜免费成人在线视频| 国产麻豆成人av免费视频| 亚洲va日本ⅴa欧美va伊人久久| 久久久久亚洲av毛片大全| 国产亚洲欧美在线一区二区| 精品国内亚洲2022精品成人| 五月伊人婷婷丁香| 国产亚洲欧美98| 欧美日韩黄片免| 舔av片在线| 人人妻人人看人人澡| 他把我摸到了高潮在线观看| 欧美国产日韩亚洲一区| 国产一级毛片七仙女欲春2| 19禁男女啪啪无遮挡网站| 日韩大尺度精品在线看网址| 18禁黄网站禁片免费观看直播| 午夜免费激情av| 夜夜看夜夜爽夜夜摸| 亚洲精品国产精品久久久不卡| 欧美成人免费av一区二区三区| 丁香欧美五月| 欧美成狂野欧美在线观看| 久久久久久免费高清国产稀缺| 亚洲av电影在线进入| 男插女下体视频免费在线播放| av福利片在线观看| 国产一区二区在线av高清观看| 女人被狂操c到高潮| 日韩成人在线观看一区二区三区| 好男人在线观看高清免费视频| 欧美日韩黄片免| 欧美性猛交╳xxx乱大交人| 一本精品99久久精品77| 婷婷精品国产亚洲av在线| 51午夜福利影视在线观看| 国产熟女午夜一区二区三区| 亚洲中文字幕一区二区三区有码在线看 | 久久精品影院6| 亚洲欧美日韩高清在线视频| 天天躁狠狠躁夜夜躁狠狠躁| 国产亚洲欧美在线一区二区| 国产av麻豆久久久久久久| 美女黄网站色视频| 黑人欧美特级aaaaaa片| 国产在线观看jvid| 中亚洲国语对白在线视频| 久热爱精品视频在线9| 久久人妻福利社区极品人妻图片| 特级一级黄色大片| 十八禁网站免费在线| 成人三级做爰电影| av国产免费在线观看| 亚洲一卡2卡3卡4卡5卡精品中文| 啦啦啦韩国在线观看视频| 琪琪午夜伦伦电影理论片6080| 欧美日韩亚洲国产一区二区在线观看| 欧美一区二区精品小视频在线| 国产成人av教育| 黄色成人免费大全| 欧美性猛交╳xxx乱大交人| 欧美日韩国产亚洲二区| 国产免费av片在线观看野外av| 在线观看免费午夜福利视频| 久久久久久九九精品二区国产 | 一级毛片精品| 精华霜和精华液先用哪个| 后天国语完整版免费观看| 18禁观看日本| 高清毛片免费观看视频网站| 亚洲国产日韩欧美精品在线观看 | 国产爱豆传媒在线观看 | 精品免费久久久久久久清纯| 婷婷亚洲欧美| 国产精品自产拍在线观看55亚洲| 日韩国内少妇激情av| 五月玫瑰六月丁香| 国产av一区在线观看免费| 中文字幕人妻丝袜一区二区| 性欧美人与动物交配| 欧美一区二区精品小视频在线| 中亚洲国语对白在线视频| 久久 成人 亚洲|