膠孢鐮刀菌>尖孢鐮刀菌;采用100 mg/L濃度的龍眼擬莖點霉誘導子誘導15 d,龍眼胚性愈傷組織多糖含量最高,比對照提高了61.34%,且不同處理間存在顯著差異。但真菌誘導子處理下龍眼胚性愈傷組織"/>
  • <tr id="yyy80"></tr>
  • <sup id="yyy80"></sup>
  • <tfoot id="yyy80"><noscript id="yyy80"></noscript></tfoot>
  • 99热精品在线国产_美女午夜性视频免费_国产精品国产高清国产av_av欧美777_自拍偷自拍亚洲精品老妇_亚洲熟女精品中文字幕_www日本黄色视频网_国产精品野战在线观看 ?

    真菌誘導子對龍眼胚性愈傷組織生長和多糖積累的影響

    2016-07-09 18:39:14徐小萍賴瑞聯(lián)林玉玲賴鐘雄
    熱帶作物學報 2016年11期
    關(guān)鍵詞:增殖龍眼多糖

    徐小萍 賴瑞聯(lián) 林玉玲 賴鐘雄

    摘 要 為探討真菌誘導子對龍眼胚性愈傷組織生長及多糖含量的影響。以龍眼胚性愈傷組織為材料,采用單因素分析法探究了真菌誘導子種類、誘導時間和濃度對龍眼胚性愈傷組織生長和多糖積累的影響。結(jié)果表明,不同真菌誘導子處理下龍眼胚性愈傷組織中多糖含量由高到低排序分別為:龍眼擬莖點霉>膠孢鐮刀菌>尖孢鐮刀菌;采用100 mg/L濃度的龍眼擬莖點霉誘導子誘導15 d,龍眼胚性愈傷組織多糖含量最高,比對照提高了61.34%,且不同處理間存在顯著差異。但真菌誘導子處理下龍眼胚性愈傷組織生長狀態(tài)較差,且增殖率顯著下降。龍眼擬莖點霉作為龍眼病原內(nèi)生菌,其活性誘導物能促進龍眼胚性愈傷組織中多糖積累,從而一定程度上提高植物的免疫防御能力。研究結(jié)果為探究真菌誘導子對龍眼多糖合成和代謝機理的研究奠定基礎(chǔ)。

    關(guān)鍵詞 龍眼;真菌誘導子;多糖;胚性愈傷組織;增殖

    中圖分類號 S667.2 文獻標識碼 A

    龍眼(Dimocarpus longan Lour.)是中國南方熱帶亞熱帶名貴果樹。研究表明,龍眼果肉、果皮及枝葉等各組織器官中含有大量多糖[1-3],尤其是龍眼果肉多糖成分具有較高的生物藥理活性,其含量高達64.27%,極具開發(fā)前景。多糖是生物體中重要初生代謝物質(zhì),具有清除自由基、調(diào)節(jié)免疫系統(tǒng)、抗癌抗菌和抑制酪氨酸酶等生化功能[4-5]。作為一種重要活性成分,多糖還能增強神經(jīng)功能、治療神經(jīng)損傷、降血糖和抗腫瘤作用[6-8]。然而,以果肉等組織器官為原材料提取龍眼多糖易受季節(jié)、氣候等因素限制,開發(fā)一種高效多糖生產(chǎn)技術(shù)具有重要的現(xiàn)實意義。

    龍眼胚性愈傷組織具有較強的增殖和體細胞胚胎發(fā)生能力,為龍眼藥用活性成分的研究生產(chǎn)提供了有效平臺[9-10]。且大量研究表明,植物愈傷組織在多糖生產(chǎn)中具有很好的應用前景[11-13]。因此,筆者認為研究龍眼胚性愈傷組織中的多糖積累有重要意義。真菌誘導子是來自微生物的生物活性物質(zhì),能使植物產(chǎn)生過敏反應,并誘導植物積累特定的次生代謝產(chǎn)物[14],提高植物的防御抗病能力。植物多糖在特定條件下參與某些次生代謝物合成,多糖合成代謝可能受真菌誘導子影響[15-16],探究龍眼的致病內(nèi)生真菌與非龍眼內(nèi)生菌分別制備的誘導子對提高龍眼胚性愈傷組織多糖積累的影響有重要意義。研究表明龍眼果肉中可分離獲得龍眼擬莖點霉、鐮刀菌和炭疽菌,其中龍眼擬莖點霉分離率最高,達44%,其他2種分離率較低[17]。筆者推測真菌誘導子對龍眼胚性愈傷組織多糖誘導具有重要作用。因此,本試驗以龍眼胚性愈傷組織為材料,以3種真菌制備的誘導子為處理因子。采用單因素分析方法研究不同真菌誘導子種類、誘導時間和處理濃度對胚性愈傷組織生長和多糖積累的影響,并通過相關(guān)性和顯著性分析,為真菌誘導子對龍眼多糖合成代謝、信號識別和信號轉(zhuǎn)導等作用機理的研究提供科學依據(jù)。

    1 材料與方法

    1.1 材料

    龍眼‘紅核子(Dimocarpus longan Loμr. cv.Honghezi)胚性愈傷組織由福建農(nóng)林大學園藝植物生物工程研究所提供[18]。3種真菌分別是龍眼擬莖點霉(Phomopsis longanae Chi)、尖孢鐮刀菌(Fusarium oxysporum)、膠孢鐮刀菌(Fusarium subglutinans Wollenw. et Reinking),均由福建農(nóng)林大學植物保護學院贈送。

    1.2 方法

    1.2.1 不同種類誘導子處理龍眼胚性愈傷組織

    參考Wang等[19]、林艷君等[20]的方法,獲得3種真菌誘導子。往龍眼胚性愈傷組織增殖培養(yǎng)基L1分別添加100 mg/L的3種真菌誘導子處理龍眼胚性愈傷組織,暗培養(yǎng)20 d,通過多糖含量測定篩選最適宜的誘導子類型。

    1.2.2 不同誘導時間和誘導子濃度處理龍眼胚性愈傷組織 試驗進一步采用單因素法分別探究處理15、20、25 d后龍眼胚性愈傷組織多糖積累情況,并設(shè)置對照試驗;其次在最適宜天數(shù)處理試驗的基礎(chǔ)上,結(jié)合前人研究報道[20],分別采用0、50、100、200 mg/L濃度的誘導子進行最佳濃度篩選。每個處理進行3個重復,分別采用苯酚硫酸法進行多糖含量測定[21]、愈傷組織狀態(tài)觀察和增殖系數(shù)統(tǒng)計。

    1.2.3 標準曲線制作及多糖測定 稱取0.1 g蔗糖干樣作為標準品,溶解定容至1 000 mL,依次稀釋成不同倍數(shù)的濃度,以紫外分光光度計在485 nm波長下測定的吸光值為縱坐標,以糖濃度為橫坐標,利用吸光值與總糖量成線性關(guān)系,制作多糖含量標準曲線如圖1,線性回歸方程為y=0.018 3x+0.004 6,相關(guān)系數(shù)R2=0.999 8。

    多糖提取測定,采用苯酚硫酸法。稱取龍眼胚性愈傷組織干樣0.03 g,加1 mL的雙蒸水,沸水浴30 min,7 800 r/min常溫離心10 min,取上清液后重復該步驟2次,雙蒸水漂洗殘渣,離心,定容至10 mL;加5 mL石油醚,臺式恒溫振蕩器常溫200 r/min,10 min;靜置分層,棄上層溶液,下層溶液加2 mL氯仿 ∶ 正丁醇(5 ∶ 1)溶液,混勻至乳濁狀,靜置分層;取50 μL上層溶液,雙蒸水定容至2 mL;加1 mL 9%苯酚溶液,搖勻,加5 mL濃硫酸,搖勻。室溫下冷卻靜置30 min,紫外分光光度計485 nm波長測定吸光值。多糖含量計算公式:多糖含量(%)=X/(M/V1)*V2/V3×100%。其中X:樣品中多糖濃度(mg/mL),M:樣品質(zhì)量g,V1:首次樣品定容的體積10 mL,V2:稀釋時吸取的樣品體積50 μL,V3:稀釋后定容的體積2 mL,見圖1。

    1.3 數(shù)據(jù)統(tǒng)計

    采用Excel 2003進行數(shù)據(jù)統(tǒng)計和圖表制作,并采SPSS20.0進行相關(guān)分析、方差分析和顯著性測驗。

    2 結(jié)果與分析

    2.1 真菌誘導子對多糖含量的影響

    2.1.1 真菌誘導子種類對多糖含量的影響 對所得數(shù)據(jù)進行方差齊性檢驗、單因素分析結(jié)合Duncan法進行兩兩比較,如表1,結(jié)果表明3種真菌誘導子中龍眼擬莖點霉誘導子對龍眼胚性愈傷組織中多糖含量的影響達到極顯著性水平(α=0.01),多糖含量高達15.29%,尖孢鐮刀菌誘導子不利于胚性愈傷組織多糖積累,膠孢鐮刀菌誘導子對多糖積累誘導效果不顯著。因此,選用龍眼擬莖點霉誘導子對龍眼胚性愈傷組織進行不同誘導天數(shù)和不同濃度的處理,進一步探究多糖含量的積累情況。

    2.1.2 誘導時間對龍眼胚性愈傷組織多糖含量的影響

    篩選出最適的誘導子種類后,試驗進一步對最適誘導時間進行篩選。結(jié)果表明,龍眼擬莖點霉誘導子處理15 d時,最能促進胚性愈傷組織多糖積累,處理25 d時對多糖積累也有促進作用,但積累量最少。經(jīng)方差齊性檢驗、單因素方差分析、F檢驗及LSD多重比較數(shù)據(jù)分析表明,與對照相比,α=0.05顯著性水平下,龍眼擬莖點霉誘導子誘導不同時間對愈傷組織多糖積累具有顯著性影響。結(jié)合圖2分析,龍眼胚性愈傷組織在相同濃度不同誘導天數(shù)的龍眼擬莖點霉誘導子處理下,多糖含量隨誘導天數(shù)增加而減少,其中15 d時的多糖含量達到最高為17.99%,其次是20 d(14.27%),25 d時最低,僅為7.22%;與對照相比,多糖含量分別提高了61.34%、42.56%、12.04%??梢?,龍眼胚性愈傷組織多糖積累與誘導時間密切相關(guān),而15 d為最佳處理時間。

    2.1.3 龍眼擬莖點霉誘導子濃度對多糖含量的影響

    繼不同誘導天數(shù)處理后,進一步探究誘導子濃度對龍眼胚性愈傷組織多糖含量影響。結(jié)果表明100 mg/L龍眼擬莖點霉誘導子最能促進龍眼胚性愈傷組織多糖積累,其次是200 mg/L,多糖含量分別達到20.40%和19.92%,二者無顯著差異;而添加濃度為50 mg/L時對多糖積累作用不明顯(圖3),其他處理間的差異顯著性較為明顯。

    2.2 龍眼擬莖點霉誘導子對龍眼胚性愈傷組織生長的影響

    2.2.1 誘導時間對龍眼胚性愈傷組織生長的影響

    用相同濃度100 mg/L龍眼擬莖點霉誘導子處理不同時間后,龍眼胚性愈傷組織生長情況如圖4、5所示。從形態(tài)上看,誘導20 d時胚性愈傷組織形態(tài)較松散淡黃,顆粒較小,15 d時愈傷組織形態(tài)松散淺黃,顆粒較小,可能是龍眼胚性愈傷組織正處于旺盛生長階段,25 d時形態(tài)較為緊實,出現(xiàn)顆?;F(xiàn)象;25 d增殖系數(shù)最高,15 d時增殖系數(shù)較小,20 d時增殖系數(shù)相對較高處于中間水平。SPSS20.0分析可知,不同誘導天數(shù)的誘導子對龍眼胚性愈傷組織增殖生長均具有顯著性影響,且經(jīng)誘導子處理后的龍眼胚性愈傷組織增殖系數(shù)整體較低,說明龍眼擬莖點霉誘導子明顯抑制龍眼胚性愈傷組織增殖生長。

    2.2.2 誘導子濃度對龍眼胚性愈傷組織生長的影響

    對不同濃度誘導子處理15 d時的龍眼胚性愈傷組織生長狀態(tài)和增殖系數(shù)進行分析(圖6和圖7)。從總體上看,與對照相比,不同濃度誘導子對龍眼胚性愈傷組織生長均有抑制作用。而50 mg/L的誘導子有利于龍眼胚性愈傷組織正常形態(tài)維持,200 mg/L的誘導子不利于龍眼胚性愈傷組織正常生長,100 mg/L的誘導子處理下龍眼胚性愈傷組織雖顆粒稍大,但色澤較為正常。方差齊次性檢驗得p=0.11,大于0.05,單因素方差分析的F檢驗中p=0,小于0.05,說明不同濃度誘導子對龍眼胚性愈傷組織增殖生長具有顯著性影響,且添加100和200 mg/L的誘導子對龍眼胚性愈傷組織增殖生長均有極顯著性差異,但100 mg/L誘導子相對抑制作用最小,增殖系數(shù)為4.94,與對照相比減小40.48%??梢?,50~200 mg/L的誘導子對龍眼胚性愈傷組織增殖生長均有抑制作用,而均衡多糖含量與龍眼胚性愈傷組織生長情況,選擇添加100 mg/L龍眼擬莖點霉誘導子,暗培養(yǎng)誘導15 d作為本試驗龍眼胚性愈傷組織多糖積累的最佳條件。

    3 討論與結(jié)論

    3.1 龍眼擬莖點霉誘導子促進龍眼胚性愈傷組織多糖積累

    本試驗研究認為,龍眼擬莖點霉誘導子半活體營養(yǎng)型龍眼內(nèi)生真菌,其活性誘導物能促進龍眼胚性愈傷組織中多糖含量的積累。白樺懸浮細胞中三萜系化合物會受擬莖點霉誘導子的影響[22],進一步證實了真菌誘導子能有效促進植物次生代謝物合成。真菌誘導子能通過信號識別、信號轉(zhuǎn)導及信號轉(zhuǎn)錄介導的胞內(nèi)應答等途徑,調(diào)控相關(guān)基因的表達進而影響植物次生代謝物積累。龍眼擬莖點霉誘導子來源于龍眼果肉致病內(nèi)生菌-龍眼擬莖點霉[15],該霉能產(chǎn)生細胞壁降解酶,降解細胞壁多糖,誘發(fā)龍眼果腐病[23-24]。陳藝輝等[25]研究發(fā)現(xiàn)龍眼擬莖點霉可以促進酚類物質(zhì)積累使果皮褐變,病原菌侵染早期能引起果實細胞氧化迸發(fā)的應激反應,增強植物體免疫防御能力;多糖作為初生代謝產(chǎn)物,也是植物細胞壁主要成分,不僅能作為眾多植物次生代謝物合成前體,還具有免疫、防御及抗逆等相關(guān)功能[26]。龍眼擬莖點霉誘導子可能通過誘導調(diào)控龍眼胚性愈傷組織中某些病原抗性基因,在病原侵染初期通過合成多糖來提高植物自身的免疫防御能力,這與江曙等[27]研究的明黨參內(nèi)生真菌能顯著促進明黨參多糖積累一致。

    研究表明,生物誘導子具有高效、專一及濃度效應等特點[28-29]。本試驗認為龍眼擬莖點霉誘導子較其他2種非龍眼內(nèi)生真菌誘導子更能顯著提高龍眼胚性愈傷組織多糖含量。尖孢鐮刀菌誘導子對龍眼胚性愈傷組織多糖積累有一定抑制作用,與劉長軍等[30]的研究結(jié)論并不一致,可能由于同種誘導子響應植物中同種次生代謝物合成的細胞受體的結(jié)合位點存在差異。也可能通過鈣調(diào)素、磷酸肌醇、G蛋白等誘導信號,以IP3-DAG-Ca2+/PKC系統(tǒng)、腺苷酸環(huán)化酶調(diào)節(jié)的cAMP/PKA胞內(nèi)信號傳導的第二信使傳遞系統(tǒng),影響次生代謝物合成相關(guān)基因的表達,改變次生代謝通路,從而調(diào)節(jié)次生代謝物積累[31]。因此,研究龍眼本身致病內(nèi)生菌的生物活性物質(zhì)適當?shù)恼T導時間、濃度及添加時間對龍眼本身多糖和次生代謝物的積累具有重要意義。

    3.2 龍眼擬莖點霉誘導子抑制龍眼胚性愈傷組織生長

    試驗中,添加100 mg/L龍眼擬莖點霉誘導子時發(fā)現(xiàn),龍眼愈傷組織增殖生長抑制率達40.48%,這與陶金華等[32]研究的100 mg/L內(nèi)生真菌抑制茅蒼術(shù)細胞生長結(jié)果類似。誘導子對次生代謝物調(diào)節(jié)具有特異性,同時由于誘導產(chǎn)生的抗毒素對細胞自身大多具有毒性,濃度過高有可能抑制細胞生長。且粗誘導物中誘導子的活性成分和拮抗成分相互制約,加量少時拮抗作用小,誘導作用也小,反之亦然。

    在前人的研究中,劉長軍等[30]研究發(fā)現(xiàn)尖孢鐮刀菌誘導子在西洋參懸浮細胞培養(yǎng)前期能促進細胞生長,而Zhu等[33]發(fā)現(xiàn)蛋白類誘導子在促進靈芝酸合成的同時抑制了細胞生長??梢姡T導子促進細胞生長與次生代謝物合成還可能和誘導子本身的活性成分種類有關(guān),其可能和細胞間信號傳導、基因表達調(diào)控等機制有關(guān),這與添加非生物因子如激素、光質(zhì)、營養(yǎng)物質(zhì)等因素對次生代謝物的誘導有所不同[34]。試驗研究結(jié)果可為在龍眼細胞組織培養(yǎng)生產(chǎn)中提高多糖含量提供科學依據(jù)。

    參考文獻

    [1] Yang B, Jiang Y M, Zhao M M, et al. Structural characterisation of polysaccharides purified from longan(Dimocarpus longan Lour.)fruit pericarp[J]. Food Chemistry, 2009, 115(2): 609-614.

    [2] Liu X X, Luo Y Y, Zha C J. Rheological properties of polysaccharides from longan(Dimocarpus longan Lour.)fruit[J]. International Journal of Polymer Science, 2015: 1-5

    [3] 蔡英卿, 賴鐘雄, 伍妙聰, 等. 龍眼不同品種各營養(yǎng)器官多糖含量分析[J]. 中國生態(tài)農(nóng)業(yè)學報, 2007, 15(4): 86-88.

    [4] Zhong K, Wang Q, He Y, et al. Evaluation of radicals scavenging, immunity-modulatory and antitumor activities of longan polysaccharides with ultrasonic extraction on in S180 tumor mice models[J]. International Journal of Biological Macromolecules, 2010, 47(33): 56-60.

    [5] Yi Y, Zhang M W, Liao S T , et al. Structural features and immunomodulatory activities of polysaccharides of longan pulp[J]. Carbohydrate Polymers, 2012, 87(87): 636-643.

    [6] Zhang M, Tang X L, Wang F, et al. Characterization of Lycium barbarum polysaccharide and its effect on human hepatoma cells[J]. International Journal of Biological Macromolecules, 2013, 61(10): 270-275.

    [7] 陳建國, 步文磊, 來偉旗, 等. 桑葉多糖降血糖作用及其機制研究[J]. 中草藥, 2011, 42(3): 515-520.

    [8] 向艷霞, 肖凌云, 張 菊, 等. 黃芪多糖治療神經(jīng)系統(tǒng)疾病的作用及其機制研究進展[J]. 中國醫(yī)院藥學雜志, 2016(8): 1-5.

    [9] 董慧雪, 周燕蓉, 田奇琳, 等. 不同光質(zhì)對龍眼胚性愈傷組織類黃酮含量的影響[J]. 熱帶作物學報, 2014, 35(12): 2 374-2 377.

    [10] Lai Z X, Lin Y L. Analysis of the global transcriptome of longan(Dimocarpus longan Lour.)embryogenic callus using Illumina paired-end sequencing[J]. BMC Genomics, 2013(14): 561

    [11] Liang W B, Deng B L, Xiao J, et al. Effects of basic media and culture conditions on callus growth and polysaccharide content in Schisandra sphenanthera[J]. Journal of Central South University of Forestry & Technology, 2011, 31(3): 130-133.

    [12] Tian Q Q, Lu C M, Li X, et al. Low temperature treatments of rice(Oryza sativa L.)anthers changes polysaccharide and protein composition of the anther walls and increases pollen fertility and callus induction[J]. Plant Cell Tissue & Organ Culture, 2015, 120(1): 89-98.

    [13] 金曉鋒, 楊永健, 朱蓮蓮, 等. 鐵皮石斛懸浮培養(yǎng)條件篩選及生產(chǎn)多糖[J]. 蘭州大學學報: 醫(yī)學版, 2012, 38(4): 27-30.

    [14] Sibylle K, Marilena L, Christne H, et al. Fungal elicitors combined with a sucrose feed significantly enhance triterpene production of a Salvia fruticosa cell suspension[J]. Applied Microbiology and Biotechnology, 2016, 100(16): 7 071-7 082.

    [15] 楊 慧, 陳曉梅, 郭順星. 真菌誘導子對鐵皮石斛原球莖多糖含量的影響[J]. 世界科學技術(shù): 中醫(yī)藥現(xiàn)代化, 2009, 11(5): 719-722.

    [16] 高興喜, 姚 強, 王 磊, 等. 真菌激發(fā)子對靈芝液體發(fā)酵生產(chǎn)多糖和三萜類物質(zhì)的影響[J]. 食品科學, 2009, 30(23): 309-313.

    [17] 張居念, 林河通, 謝聯(lián)輝, 等. 龍眼果實潛伏性病原真菌的初步研究[J]. 熱帶作物學報, 2006, 27(4): 78-82.

    [18] 賴鐘雄, 潘良鎮(zhèn). 龍眼胚性細胞系的建立與保持[J]. 福建農(nóng)業(yè)大學學報, 1997, 26(2): 160-167.

    [19] Wang C G, Wu J Y, Mei X G. Enhancement of taxol production andexcretion in Taxus chinensis cell culture by fungal elicitation andmedium renewal[J]. Applied microbiology and Biotechnology, 2001, 55(4): 404-410.

    [20] 林艷君, 賴鐘雄. 鐵皮石斛HDR基因克隆及真菌誘導子對其表達和生物堿含量的影響[J]. 熱帶作物學報, 2015, 36(4): 680-686.

    [21] 畢和平, 周 賢, 陳光英, 等. 苯酚-硫酸法測定破布葉葉的多糖[J]. 海南師范大學學報: 自然科學版, 2010, 23(4): 400-402.

    [22] Fan G Z, Zhai Q, Zhan Y. Gene expression of lupeol synthase and biosynthesis of Nitric Oxide in cell suspension cultures of Betula platyphylla, in response to a Phomopsis, elicitor[J].Plant Molecular Biology Reporter, 2012, 31(2): 296-302.

    [23] 張居念, 陳藝暉, 林藝芬, 等. 龍眼擬莖點霉(Phomopsis longanae Chi)的生物學特性研究[J]. 熱帶作物學報, 2013, 34(4): 695-699.

    [24] 張洪祥. 龍眼擬莖點霉細胞壁降解酶及其致病機理的研究[D].福州: 福建農(nóng)林大學, 2010.

    [25] 陳藝暉, 林河通, 林藝芬, 等. 擬莖點霉侵染對龍眼果實采后果皮褐變和活性氧代謝的影響[J]. 中國農(nóng)業(yè)科學, 2011, 44(23): 4 858-4 866.

    [26] Vorwerk S, Somerville S, Somerville C. The role of plant cell wall polysaccharide composition in disease resistance[J]. Trends in Plant Science, 2004, 9(4): 203-209.

    [27] 江 曙, 段金廒, 陶金華, 等. 明黨參內(nèi)生真菌種群的生態(tài)分布及其誘導子活性研究[J]. 中草藥, 2010, 41(1): 121-125.

    [28] 崔晉龍, 付少彬, 高 芬, 等. 真菌誘導植物次生代謝產(chǎn)物積累的信號機制及在藥用植物中的應用[J]. 中草藥, 2012, 43(8): 1 647-1 651.

    [29] Xiao J L, Lai Y C, Li W, et al. Research development of endophytic fungus and defence response mechanism of plant[J]. Botanical Research, 2013, 2(1): 13-17.

    [30] 劉長軍, 侯嵩生, 李新明, 等. 真菌誘導子對懸浮培養(yǎng)西洋參細胞的生理效應[J]. 植物科學學報, 1996(3): 240-246.

    [31] Andrea V, RICARDO B. Molecular aspects of the early stages of elicitation of secondary metabolites in plants[J]. Plant Science, 2007, 172(5): 861-875.

    [32] 陶金華, 濮雪蓮, 江 曙. 內(nèi)生真菌誘導子對茅蒼術(shù)細胞生長及蒼術(shù)素積累的影響[J]. 中國中藥雜志, 2011, 36(1): 27-31.

    [33] Zhu L W, Zhong J J, Tang Y J. Significance of fungal elicitors on the production of ganoderic acid and Ganoderma polysaccharides by the submerged culture of medicinal mushroom Ganoderma lucidum[J]. Process Biochemistry, 2008, 43(12): 1 359-1 370.

    [34] 徐小萍, 謝燕萍, 慕 堯, 等. HPLC法測定LED不同光質(zhì)下迷迭香愈傷組織中鼠尾草酸含量[J]. 廣東農(nóng)業(yè)科學, 2015, 42(15):77-81.

    猜你喜歡
    增殖龍眼多糖
    買龍眼
    米胚多糖的組成及抗氧化性研究
    熟三七多糖提取工藝的優(yōu)化
    中成藥(2018年3期)2018-05-07 13:34:45
    ‘金凱特’杏的組織培養(yǎng)與快繁
    甜甜的龍眼
    嶺南音樂(2016年5期)2017-01-17 07:44:58
    普伐他汀對人胰腺癌細胞SW1990的影響及其協(xié)同吉西他濱的抑瘤作用
    細胞自噬與人卵巢癌細胞對順鉑耐藥的關(guān)系
    甜甜的龍眼,美美的景色
    雷帕霉素對K562細胞增殖和凋亡作用的影響
    科技視界(2016年5期)2016-02-22 19:03:28
    酶法降解白及粗多糖
    中成藥(2014年11期)2014-02-28 22:29:50
    999久久久国产精品视频| 美女午夜性视频免费| 妹子高潮喷水视频| 一级爰片在线观看| 欧美97在线视频| 久热这里只有精品99| 熟妇人妻不卡中文字幕| 五月天丁香电影| 9热在线视频观看99| 国产日韩欧美视频二区| 国产一级毛片在线| 飞空精品影院首页| 18禁动态无遮挡网站| 国产乱人偷精品视频| 久久久久久人妻| 中文字幕亚洲精品专区| 韩国精品一区二区三区| 婷婷成人精品国产| 国产日韩欧美亚洲二区| 久久久精品免费免费高清| 丝袜美腿诱惑在线| 欧美亚洲 丝袜 人妻 在线| 在线精品无人区一区二区三| av女优亚洲男人天堂| 中文乱码字字幕精品一区二区三区| 中文字幕精品免费在线观看视频| 亚洲欧美一区二区三区国产| 免费黄色在线免费观看| 国产精品久久久久久精品古装| 男女午夜视频在线观看| 久久精品熟女亚洲av麻豆精品| 宅男免费午夜| 国产一区二区激情短视频 | 熟女少妇亚洲综合色aaa.| 国产一区二区 视频在线| 亚洲色图综合在线观看| 亚洲综合精品二区| 水蜜桃什么品种好| 亚洲国产欧美日韩在线播放| 亚洲欧美日韩另类电影网站| 亚洲精品中文字幕在线视频| 国产乱人偷精品视频| 日韩欧美一区视频在线观看| 深夜精品福利| 最近中文字幕2019免费版| 母亲3免费完整高清在线观看| 亚洲色图 男人天堂 中文字幕| 中文欧美无线码| 欧美人与性动交α欧美精品济南到| 99精品久久久久人妻精品| 国产97色在线日韩免费| svipshipincom国产片| 啦啦啦中文免费视频观看日本| 国产免费视频播放在线视频| 欧美国产精品va在线观看不卡| 久久人人爽av亚洲精品天堂| 国产成人一区二区在线| 国产一区二区激情短视频 | 18禁观看日本| 欧美97在线视频| 亚洲国产日韩一区二区| 亚洲国产精品一区二区三区在线| 又大又爽又粗| 99久久精品国产亚洲精品| 伦理电影免费视频| 国产免费一区二区三区四区乱码| 一二三四在线观看免费中文在| 亚洲国产精品国产精品| 亚洲欧美色中文字幕在线| 蜜桃在线观看..| 欧美最新免费一区二区三区| 亚洲一区二区三区欧美精品| 国产一区二区在线观看av| √禁漫天堂资源中文www| 少妇猛男粗大的猛烈进出视频| 亚洲精品日本国产第一区| 飞空精品影院首页| 日韩精品免费视频一区二区三区| 看免费成人av毛片| 纵有疾风起免费观看全集完整版| 成人黄色视频免费在线看| 精品久久蜜臀av无| 最近中文字幕高清免费大全6| 一边摸一边抽搐一进一出视频| 亚洲成人一二三区av| 国产色婷婷99| 啦啦啦 在线观看视频| 欧美精品一区二区大全| 日韩一卡2卡3卡4卡2021年| 一级毛片电影观看| 大片免费播放器 马上看| 最近的中文字幕免费完整| 三上悠亚av全集在线观看| 男人添女人高潮全过程视频| 国产一区二区三区综合在线观看| 大话2 男鬼变身卡| 国产欧美日韩综合在线一区二区| 夫妻午夜视频| 午夜日韩欧美国产| 在线免费观看不下载黄p国产| 九九爱精品视频在线观看| 久久久欧美国产精品| 国产有黄有色有爽视频| 亚洲熟女精品中文字幕| www.精华液| 一级毛片我不卡| 建设人人有责人人尽责人人享有的| 国产成人系列免费观看| 捣出白浆h1v1| a级毛片在线看网站| 日韩一卡2卡3卡4卡2021年| 91老司机精品| 水蜜桃什么品种好| 波多野结衣av一区二区av| 女性生殖器流出的白浆| 日韩大码丰满熟妇| 狂野欧美激情性xxxx| 精品少妇内射三级| 国产精品久久久久成人av| 亚洲熟女毛片儿| 中文欧美无线码| 国产一区亚洲一区在线观看| 啦啦啦在线免费观看视频4| 国产精品一区二区精品视频观看| 97在线人人人人妻| 大香蕉久久网| 一区二区三区精品91| 一本—道久久a久久精品蜜桃钙片| 制服人妻中文乱码| 日韩欧美精品免费久久| 在线免费观看不下载黄p国产| 精品亚洲成a人片在线观看| 亚洲国产日韩一区二区| 老鸭窝网址在线观看| 国产 一区精品| 99久久精品国产亚洲精品| 观看美女的网站| 97人妻天天添夜夜摸| 国产乱人偷精品视频| 国产伦理片在线播放av一区| 国产免费福利视频在线观看| 日韩不卡一区二区三区视频在线| 9色porny在线观看| 一二三四在线观看免费中文在| av在线app专区| 亚洲国产日韩一区二区| 又大又爽又粗| 美女扒开内裤让男人捅视频| 久久韩国三级中文字幕| 一区二区三区激情视频| 久久婷婷青草| 中文字幕另类日韩欧美亚洲嫩草| 99香蕉大伊视频| 搡老乐熟女国产| 国产老妇伦熟女老妇高清| 97在线人人人人妻| av有码第一页| 亚洲熟女精品中文字幕| 亚洲av电影在线观看一区二区三区| 美女国产高潮福利片在线看| 免费女性裸体啪啪无遮挡网站| 18在线观看网站| 国产精品欧美亚洲77777| 超碰成人久久| 日本91视频免费播放| 精品酒店卫生间| 两性夫妻黄色片| 久久ye,这里只有精品| 国产老妇伦熟女老妇高清| av在线老鸭窝| 国产av码专区亚洲av| 极品人妻少妇av视频| 亚洲精品av麻豆狂野| 亚洲精品在线美女| 久久毛片免费看一区二区三区| 欧美在线一区亚洲| 亚洲国产欧美在线一区| 亚洲国产欧美网| 18禁观看日本| 性高湖久久久久久久久免费观看| 一区在线观看完整版| 亚洲情色 制服丝袜| 日韩中文字幕欧美一区二区 | 精品亚洲成a人片在线观看| videosex国产| 人人妻人人澡人人看| 日本爱情动作片www.在线观看| 麻豆乱淫一区二区| 青春草视频在线免费观看| 在线看a的网站| 777米奇影视久久| av不卡在线播放| 97在线人人人人妻| 精品酒店卫生间| 亚洲精品,欧美精品| 美女扒开内裤让男人捅视频| 老司机影院成人| 国产色婷婷99| 最近最新中文字幕大全免费视频 | 国产亚洲午夜精品一区二区久久| 老司机深夜福利视频在线观看 | 精品第一国产精品| 秋霞在线观看毛片| 免费看不卡的av| 欧美日韩成人在线一区二区| 老司机亚洲免费影院| 欧美黑人欧美精品刺激| 亚洲综合色网址| 国产成人欧美| 亚洲av中文av极速乱| 毛片一级片免费看久久久久| 少妇被粗大的猛进出69影院| 日韩制服骚丝袜av| 建设人人有责人人尽责人人享有的| 人体艺术视频欧美日本| 国精品久久久久久国模美| 国产精品香港三级国产av潘金莲 | 在线观看免费高清a一片| 国产精品香港三级国产av潘金莲 | 午夜日韩欧美国产| 久久亚洲国产成人精品v| e午夜精品久久久久久久| 一区二区三区激情视频| 电影成人av| 亚洲国产欧美网| 亚洲精华国产精华液的使用体验| 最近最新中文字幕免费大全7| 久久精品久久久久久久性| 精品国产露脸久久av麻豆| 9色porny在线观看| avwww免费| 亚洲av成人精品一二三区| 一二三四在线观看免费中文在| 夫妻性生交免费视频一级片| 精品久久蜜臀av无| 午夜91福利影院| av线在线观看网站| 黑丝袜美女国产一区| 久久这里只有精品19| 精品少妇久久久久久888优播| 999精品在线视频| 亚洲中文av在线| 日本wwww免费看| 欧美乱码精品一区二区三区| 久久久国产欧美日韩av| 亚洲欧美一区二区三区黑人| 国产男人的电影天堂91| 国产片特级美女逼逼视频| 久久婷婷青草| 国产精品国产三级专区第一集| 亚洲国产精品一区三区| 啦啦啦啦在线视频资源| 国产一区二区三区综合在线观看| 在线观看免费午夜福利视频| 毛片一级片免费看久久久久| 97在线人人人人妻| 天堂中文最新版在线下载| 免费久久久久久久精品成人欧美视频| 亚洲欧美精品综合一区二区三区| 午夜免费观看性视频| 久久久久久久久久久久大奶| 国产视频首页在线观看| 天堂俺去俺来也www色官网| kizo精华| 黄片无遮挡物在线观看| av国产精品久久久久影院| 乱人伦中国视频| 香蕉丝袜av| 各种免费的搞黄视频| 一区二区三区乱码不卡18| 国产xxxxx性猛交| 欧美xxⅹ黑人| 欧美国产精品一级二级三级| 亚洲熟女毛片儿| 看免费成人av毛片| 日日撸夜夜添| 老司机深夜福利视频在线观看 | 精品一区在线观看国产| 国产乱来视频区| 午夜福利,免费看| 久久精品久久久久久噜噜老黄| 亚洲精品av麻豆狂野| 欧美日韩亚洲高清精品| 欧美人与善性xxx| 99香蕉大伊视频| 女人爽到高潮嗷嗷叫在线视频| 亚洲国产精品国产精品| 国产av码专区亚洲av| 大片电影免费在线观看免费| 一级黄片播放器| 捣出白浆h1v1| 色网站视频免费| 久久久国产一区二区| 国产乱来视频区| 伦理电影大哥的女人| 十分钟在线观看高清视频www| 超碰成人久久| 国产精品久久久人人做人人爽| 日韩大码丰满熟妇| 亚洲色图综合在线观看| 97在线人人人人妻| 中文天堂在线官网| 久久人人爽av亚洲精品天堂| 在线亚洲精品国产二区图片欧美| 中文字幕另类日韩欧美亚洲嫩草| 欧美日韩亚洲国产一区二区在线观看 | 国产精品久久久久成人av| 午夜免费观看性视频| 日本午夜av视频| 99久久99久久久精品蜜桃| 国产淫语在线视频| 国产精品偷伦视频观看了| 少妇猛男粗大的猛烈进出视频| 亚洲欧美色中文字幕在线| 国产极品天堂在线| 国产成人免费无遮挡视频| 亚洲欧美色中文字幕在线| 超色免费av| 久久 成人 亚洲| 国产色婷婷99| 成人手机av| 精品卡一卡二卡四卡免费| 男人添女人高潮全过程视频| 亚洲美女黄色视频免费看| 丰满少妇做爰视频| 在线观看免费视频网站a站| 69精品国产乱码久久久| 一区二区三区乱码不卡18| av视频免费观看在线观看| 波多野结衣一区麻豆| 亚洲综合精品二区| 熟女av电影| 少妇人妻久久综合中文| 日韩 亚洲 欧美在线| 看免费成人av毛片| 777米奇影视久久| 国产无遮挡羞羞视频在线观看| 色网站视频免费| 国产视频首页在线观看| 久久精品国产a三级三级三级| 欧美在线一区亚洲| 日本爱情动作片www.在线观看| 免费黄频网站在线观看国产| 一区二区三区精品91| 女人爽到高潮嗷嗷叫在线视频| 蜜桃在线观看..| 精品一区二区三区四区五区乱码 | 亚洲成人手机| 久久婷婷青草| 免费在线观看黄色视频的| 五月天丁香电影| 在线天堂中文资源库| 色综合欧美亚洲国产小说| 丝袜在线中文字幕| 亚洲精品aⅴ在线观看| 国精品久久久久久国模美| 国产一区有黄有色的免费视频| 国产黄频视频在线观看| 一本久久精品| 午夜福利,免费看| 18禁裸乳无遮挡动漫免费视频| 建设人人有责人人尽责人人享有的| 大陆偷拍与自拍| 久久久久精品国产欧美久久久 | 欧美日韩视频精品一区| 亚洲欧美清纯卡通| 亚洲成av片中文字幕在线观看| 国产成人免费观看mmmm| 久久人人爽人人片av| 久久久久久久久久久免费av| 欧美中文综合在线视频| 成年av动漫网址| 亚洲精品自拍成人| 午夜91福利影院| 在线精品无人区一区二区三| 亚洲国产欧美在线一区| 欧美成人精品欧美一级黄| 午夜福利网站1000一区二区三区| 国产99久久九九免费精品| 久久婷婷青草| 桃花免费在线播放| 免费看av在线观看网站| 满18在线观看网站| 毛片一级片免费看久久久久| 黄片小视频在线播放| 啦啦啦在线观看免费高清www| 91成人精品电影| 少妇被粗大猛烈的视频| 亚洲欧美精品综合一区二区三区| 免费人妻精品一区二区三区视频| 欧美亚洲日本最大视频资源| 亚洲av成人精品一二三区| 亚洲精品一区蜜桃| 国产精品人妻久久久影院| 亚洲欧美色中文字幕在线| 国产国语露脸激情在线看| 韩国av在线不卡| 一级毛片黄色毛片免费观看视频| 成人18禁高潮啪啪吃奶动态图| 亚洲国产毛片av蜜桃av| 波多野结衣一区麻豆| 午夜激情av网站| 99国产综合亚洲精品| 青青草视频在线视频观看| 午夜福利乱码中文字幕| 少妇人妻久久综合中文| 亚洲精品国产区一区二| 母亲3免费完整高清在线观看| 欧美日韩国产mv在线观看视频| 高清视频免费观看一区二区| 国产精品亚洲av一区麻豆 | 亚洲色图 男人天堂 中文字幕| 免费黄色在线免费观看| 亚洲色图 男人天堂 中文字幕| 18禁动态无遮挡网站| 亚洲国产av影院在线观看| 亚洲成人免费av在线播放| 又粗又硬又长又爽又黄的视频| 午夜福利乱码中文字幕| 亚洲情色 制服丝袜| 九草在线视频观看| 国语对白做爰xxxⅹ性视频网站| 欧美xxⅹ黑人| 狂野欧美激情性bbbbbb| 成人黄色视频免费在线看| 熟妇人妻不卡中文字幕| 精品久久蜜臀av无| 亚洲视频免费观看视频| 日日摸夜夜添夜夜爱| 色网站视频免费| 老司机影院成人| 亚洲精品视频女| 丰满饥渴人妻一区二区三| 国产熟女午夜一区二区三区| 亚洲国产精品国产精品| 国产男女内射视频| 人人妻人人爽人人添夜夜欢视频| 在线观看免费高清a一片| 国产av码专区亚洲av| 美女国产高潮福利片在线看| 国产精品偷伦视频观看了| 亚洲国产成人一精品久久久| 国产精品亚洲av一区麻豆 | 亚洲色图综合在线观看| 香蕉丝袜av| 黄色视频在线播放观看不卡| 亚洲熟女精品中文字幕| 国产日韩欧美亚洲二区| 欧美少妇被猛烈插入视频| 男女床上黄色一级片免费看| 天堂俺去俺来也www色官网| 黄色一级大片看看| 我的亚洲天堂| 国产不卡av网站在线观看| 精品久久蜜臀av无| 女人高潮潮喷娇喘18禁视频| 观看av在线不卡| 日韩中文字幕欧美一区二区 | 久久精品亚洲av国产电影网| 九色亚洲精品在线播放| 国产伦人伦偷精品视频| 精品卡一卡二卡四卡免费| www.av在线官网国产| 久久ye,这里只有精品| 男女无遮挡免费网站观看| e午夜精品久久久久久久| 天天躁夜夜躁狠狠躁躁| av免费观看日本| 妹子高潮喷水视频| 丝袜人妻中文字幕| 久久人人爽人人片av| 午夜日本视频在线| a 毛片基地| 天天操日日干夜夜撸| 免费在线观看视频国产中文字幕亚洲 | √禁漫天堂资源中文www| 巨乳人妻的诱惑在线观看| 一本色道久久久久久精品综合| 97在线人人人人妻| 日本vs欧美在线观看视频| 老熟女久久久| 日韩不卡一区二区三区视频在线| 欧美 日韩 精品 国产| 如日韩欧美国产精品一区二区三区| 97人妻天天添夜夜摸| 男女免费视频国产| 亚洲四区av| 亚洲第一区二区三区不卡| av卡一久久| 久久精品人人爽人人爽视色| www.熟女人妻精品国产| 日韩视频在线欧美| 日韩中文字幕视频在线看片| av在线app专区| 极品人妻少妇av视频| 乱人伦中国视频| 少妇人妻 视频| 男人舔女人的私密视频| 婷婷色综合大香蕉| 999精品在线视频| 如日韩欧美国产精品一区二区三区| 日韩中文字幕欧美一区二区 | 日韩精品有码人妻一区| 18禁观看日本| 亚洲欧洲国产日韩| 九九爱精品视频在线观看| 在线观看免费午夜福利视频| 久久久久久久大尺度免费视频| 69精品国产乱码久久久| 亚洲国产欧美日韩在线播放| 婷婷色综合大香蕉| 在线亚洲精品国产二区图片欧美| 中文字幕人妻熟女乱码| 如何舔出高潮| 操出白浆在线播放| 老熟女久久久| 桃花免费在线播放| 午夜福利视频在线观看免费| 亚洲av男天堂| 国产精品麻豆人妻色哟哟久久| 爱豆传媒免费全集在线观看| 免费少妇av软件| 精品午夜福利在线看| 美女午夜性视频免费| 高清av免费在线| 一区福利在线观看| 午夜久久久在线观看| 欧美变态另类bdsm刘玥| 精品一区在线观看国产| kizo精华| 欧美日韩视频高清一区二区三区二| 男女床上黄色一级片免费看| 欧美 日韩 精品 国产| 少妇被粗大猛烈的视频| 伊人久久大香线蕉亚洲五| 日韩一卡2卡3卡4卡2021年| 国产亚洲精品第一综合不卡| xxx大片免费视频| 国产精品香港三级国产av潘金莲 | 国产av国产精品国产| 亚洲av日韩精品久久久久久密 | 久久久久精品国产欧美久久久 | 男女国产视频网站| 亚洲,欧美精品.| 久久青草综合色| 黑丝袜美女国产一区| 一本大道久久a久久精品| 永久免费av网站大全| 少妇 在线观看| 黄片无遮挡物在线观看| 女人被躁到高潮嗷嗷叫费观| av福利片在线| 亚洲av在线观看美女高潮| 国产成人欧美在线观看 | 女的被弄到高潮叫床怎么办| 亚洲av成人精品一二三区| 国产野战对白在线观看| 777米奇影视久久| 久久久精品免费免费高清| 国产日韩一区二区三区精品不卡| 一本一本久久a久久精品综合妖精| 精品少妇久久久久久888优播| 五月开心婷婷网| av电影中文网址| 男女下面插进去视频免费观看| 免费黄色在线免费观看| 街头女战士在线观看网站| 九九爱精品视频在线观看| 日本vs欧美在线观看视频| 亚洲第一av免费看| 国产精品 欧美亚洲| a级片在线免费高清观看视频| 一个人免费看片子| 成人国产av品久久久| 人妻一区二区av| 中文字幕av电影在线播放| 人体艺术视频欧美日本| 国产精品熟女久久久久浪| 日韩av在线免费看完整版不卡| 亚洲久久久国产精品| 少妇猛男粗大的猛烈进出视频| 叶爱在线成人免费视频播放| 免费日韩欧美在线观看| 亚洲激情五月婷婷啪啪| 亚洲精品国产区一区二| 极品人妻少妇av视频| 精品视频人人做人人爽| 两个人看的免费小视频| 国产成人精品福利久久| 亚洲综合精品二区| 亚洲国产欧美一区二区综合| 亚洲成人一二三区av| 国产精品秋霞免费鲁丝片| 国产免费又黄又爽又色| 成人18禁高潮啪啪吃奶动态图| 美女高潮到喷水免费观看| 精品久久久精品久久久| 美女大奶头黄色视频| 婷婷成人精品国产| 男女之事视频高清在线观看 | 中文字幕av电影在线播放| 中文字幕另类日韩欧美亚洲嫩草| 日韩 亚洲 欧美在线| 免费观看a级毛片全部| 国产日韩欧美亚洲二区| svipshipincom国产片| 在线天堂中文资源库| 无限看片的www在线观看| 亚洲精品自拍成人| 久久久久久久国产电影| 精品午夜福利在线看| 欧美老熟妇乱子伦牲交| 精品少妇内射三级| 精品福利永久在线观看| 国产无遮挡羞羞视频在线观看|