接種尖鐮孢菌對(duì)枸杞苯丙烷代謝關(guān)鍵酶及產(chǎn)物的影響

李捷，馮麗丹，楊成德，王有科，何靜，張寶琳，陳秀蓉*（.甘肅農(nóng)業(yè)大學(xué)，甘肅 蘭州 730070；.甘肅省林業(yè)科學(xué)研究院，甘肅 蘭州 73000）

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接種尖鐮孢菌對(duì)枸杞苯丙烷代謝關(guān)鍵酶及產(chǎn)物的影響

李捷1，馮麗丹1，楊成德1，王有科1，何靜1，張寶琳2，陳秀蓉1*
（1.甘肅農(nóng)業(yè)大學(xué)，甘肅 蘭州 730070；2.甘肅省林業(yè)科學(xué)研究院，甘肅 蘭州 730020）

為了闡明抗感枸杞與根腐病病原菌互作過(guò)程中苯丙烷代謝途徑中關(guān)鍵酶和代謝產(chǎn)物的變化差異與抗病性的關(guān)系，以枸杞栽培品種寧杞一號(hào)（NingqiⅠ）、寧杞二號(hào)（NingqiⅡ），國(guó)內(nèi)野生種中國(guó)枸杞、寧夏枸杞，美洲引進(jìn)野生種L.brevipes、L.exsertum等6種材料為參試材料，采用切根法接種強(qiáng)致病菌尖鐮孢菌后統(tǒng)計(jì)死亡率，以此篩選出抗病和感病材料，并測(cè)定二者0～20 d內(nèi)苯丙氨酸解氨酶（P A L）、肉桂酸羥化酶（C4 H）、4-香豆酰-輔酶A連接酶（4 C L）等苯丙烷代謝途徑關(guān)鍵酶以及總酚和類黃酮等代謝產(chǎn)物的動(dòng)態(tài)變化。結(jié)果表明，6種參試材料接種枸杞根腐病強(qiáng)致病菌尖鐮孢菌后，野生材料較栽培材料抗病性強(qiáng)，寧杞一號(hào)為感病材料，L.exsertum抗根腐病能力最強(qiáng)；抗病材料L.exsertum苯丙烷代謝關(guān)鍵酶苯丙氨酸解氨酶、肉桂酸羥化酶、4-香豆酰-輔酶A連接酶活性顯著高于寧杞一號(hào)，初步確定苯丙烷代謝中的苯丙氨酸解氨酶、肉桂酸羥化酶、4-香豆酰-輔酶A連接酶的活性和類黃酮的含量與枸杞材料抗根腐病呈正相關(guān)。因此，苯丙氨酸解氨酶、肉桂酸羥化酶、4-香豆酰-輔酶A連接酶活性和類黃酮含量，初步可以作為篩選抗枸杞尖鐮孢菌根腐病的生化指標(biāo)。

枸杞；根腐??；尖鐮孢菌；苯丙烷代謝；抗病性

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李捷，馮麗丹，楊成德，王有科，何靜，張寶琳，陳秀蓉.接種尖鐮孢菌對(duì)枸杞苯丙烷代謝關(guān)鍵酶及產(chǎn)物的影響.草業(yè)學(xué)報(bào)，2016，25（5）：87-94.

LI Jie，F(xiàn) E N G Li-Dan，Y A N G Cheng-De，W A N G You-Ke，H E Jing，Z H A N G Bao-Lin，C H E N Xiu-Rong.Effects of key enzy m es and products in phenylpropanoid path way of Lycium infected by Fusarium oxysporum.Acta Prataculturae Sinica，2016，25（5）：87-94.

枸杞（Lycium barbarum）為茄科多年生落葉灌木，是重要的“藥食同源”型植物資源之一，是干旱荒漠區(qū)的牧草資源［1］，具有抗衰老［2］、抗氧化［3］、免疫調(diào)節(jié)［4］及生殖系統(tǒng)［5］等重要功能，是中國(guó)西北地區(qū)的特色經(jīng)濟(jì)林，業(yè)已成為農(nóng)村重要的經(jīng)濟(jì)來(lái)源。但1980年枸杞根腐病在西寧市省軍區(qū)園藝場(chǎng)成片發(fā)生，在柴達(dá)木盆地的香日德農(nóng)場(chǎng)的發(fā)病率一度高達(dá)53.2%［6］；1989年枸杞根腐病在寧夏普遍發(fā)生，最重的病株37.6%，枯死株26.5%，平均病株15%，枯死株5%［7］；1998年新疆主要枸杞栽培區(qū)有些地塊栽植當(dāng)年就開始死亡，一般地塊栽植2～3年后死亡率為20%～30%，重者全田被毀［8］。根據(jù)本研究小組2012－2013年對(duì)甘肅枸杞主產(chǎn)區(qū)根腐病調(diào)查顯示：平均發(fā)病率為20.6%，最嚴(yán)重地塊高達(dá)72.4%，已經(jīng)嚴(yán)重影響到了該產(chǎn)業(yè)的可持續(xù)發(fā)展。因此尋找抗枸杞根腐病的種質(zhì)資源并研究它們的抗病生理機(jī)制顯得尤為重要。關(guān)于植物的抗病性與其苯丙烷代謝具有密切的相關(guān)性已有不少報(bào)道。高必達(dá)和陳捷［9］認(rèn)為，植物的防御反應(yīng)與苯丙烷代謝途徑的中間代謝產(chǎn)物及終產(chǎn)物有密切的關(guān)系；包改紅等［10］研究證明抗病品種“青薯168”接種硫色鐮孢菌（Fusarium sulphureum）后，苯丙氨酸解氨酶、肉桂酸羥化酶和4-香豆酰-輔酶A連接酶活性以及總酚、類黃酮和木質(zhì)素含量均顯著高于感病的“隴薯3號(hào)”，苯丙烷代謝在馬鈴薯（Solanum tuberosum）塊莖抗干腐病方面具有重要的作用；馬靜芳等［11］認(rèn)為苜蓿（Medicagosativa）接種尖鐮孢菌（Fusarium oxysporum）抗性品種的苯丙氨酸解氨酶活性顯著高于感病品種，其活性與苜?？共⌒杂兄匾年P(guān)系；宋修鵬等［12］證實(shí)了甘蔗（Saccharum officinarum）苯丙氨酸解氨酶基因（ScP AL）參與了抗黑穗病過(guò)程。而枸杞接種尖鐮孢菌（F.oxysporum）后對(duì)苯丙烷代謝中關(guān)鍵酶和產(chǎn)物的影響尚未見研究報(bào)道。本研究擬選用6個(gè)枸杞材料，接種強(qiáng)致病菌尖鐮孢菌確定其抗感材料，再進(jìn)一步選擇具有代表性的抗、感枸杞材料各1個(gè)，研究苯丙烷代謝中關(guān)鍵酶活性的變化趨勢(shì)和主要代謝產(chǎn)物的積累情況，以期為西北地區(qū)選育抗枸杞根腐病材料提供參考。

1 材料與方法

1.1 材料

枸杞：選育自野生種寧夏枸杞（L.barbarum）的主栽品種寧杞一號(hào)、寧杞二號(hào)，野生種中國(guó)枸杞（L.chinense）、野生種寧夏枸杞，引自美國(guó)的枸杞屬野生種L.brevipes、L.exsertum共6種材料（表1）。6種材料于2014年在甘肅農(nóng)業(yè)大學(xué)林學(xué)院森林培育實(shí)驗(yàn)室進(jìn)行組織培養(yǎng)煉苗，移栽至13 c m×12 c m營(yíng)養(yǎng)缽中，以泥炭∶蛭石（V∶V）＝1∶1滅菌后為培養(yǎng)基質(zhì)，每盆移栽3株，成活后僅保留1株生長(zhǎng)最好的繼續(xù)培養(yǎng)。每周澆灌一次滅菌M S營(yíng)養(yǎng)液，期間補(bǔ)充無(wú)菌水以保持土壤濕潤(rùn)，苗木生長(zhǎng)至20 cm 左右時(shí)，選生長(zhǎng)健壯均一苗木若干進(jìn)行試驗(yàn)。

病原菌：尖鐮孢菌，采自甘肅省靖遠(yuǎn)縣枸杞產(chǎn)區(qū)根腐病發(fā)病植株。在接種前7 d于馬鈴薯瓊脂培養(yǎng)基（P D A）上活化備用。

主要儀器與試劑：Shim adzu U V2450紫外可見分光光度計(jì)、T herm o F R ESC O17低溫高速離心機(jī)等。試驗(yàn)采用的所有試劑均為分析純。

1.2 方法

1.2.1 6種材料抗病性比較 接種方法：本試驗(yàn)于2014年在甘肅農(nóng)業(yè)大學(xué)森林培育實(shí)驗(yàn)中心進(jìn)行。取長(zhǎng)至滿皿的尖鐮孢菌加無(wú)菌水制成濃度為106個(gè)/m L菌懸液。采取傷根后灌根的方法接種。具體做法如下：先用鋒利的刀具在距離苗木2 c m處垂直向下切斷根系至盆底，苗木的4個(gè)方向各切一刀，確保切斷一定數(shù)量的根系，若未切斷根系可將斷根位置稍往苗木方向平移。然后將配制好備用的菌懸液每盆澆灌20 m L，每處理接種10盆，以切根澆灌無(wú)菌水20 m L為對(duì)照；每處理均重復(fù)3次。接種后覆膜、插上編號(hào)標(biāo)簽，黑暗培養(yǎng)24 h后正常光照培養(yǎng)，7 d后去膜，澆灌無(wú)菌水保持土壤濕潤(rùn)。

觀測(cè)及統(tǒng)計(jì)方法：接種后，觀察6種枸杞的發(fā)病情況，20 d時(shí)調(diào)查發(fā)病情況。以莖基部上出現(xiàn)褐色病斑，根系及維管束變黑，植株地上部落葉90%以上作為根腐病典型特征［13］，調(diào)查死亡率并比較各材料的抗病性。

死亡率（%）＝（發(fā)病死亡株數(shù)－對(duì)照死亡數(shù)）/（接種總株數(shù)－對(duì)照死亡數(shù)）×100

1.2.2 苯丙烷代謝途徑相關(guān)指標(biāo)樣品處理及采樣 選感、抗枸杞各1種，按照1.2.1的方法接種尖鐮孢菌。接種后立即采樣一次，然后每4 d的14：00定時(shí)采樣1次，采集植株中上部完全展開的葉片，每株采集2～3片，做成混合樣6份，每份0.2 g，用錫箔紙包好，液氮冷凍后放入－80℃低溫冰箱內(nèi)保存?zhèn)溆茫徊?～20 d的樣品，共6次。

1.2.3 苯丙氨酸解氨酶（P A L）活性測(cè)定 參照李合生等［14］和Liu等［15］的方法，提取液和測(cè)定體系隨樣品重量減量。

1.2.4 肉桂酸羥化酶（C4 H）活性測(cè)定 參照范存斐等［16］以及La m b和Rubery［17］的方法，提取液和測(cè)定體系隨樣品重量減量。

1.2.5 4-香豆酰-輔酶A連接酶（4 C L）活性測(cè)定 參照范存斐等［16］與朱明華等［18］的方法，提取液和測(cè)定體系隨樣品重量減量。

1.2.6 總酚、類黃酮含量測(cè)定 參照Pirie和M ullins［19］的方法，提取液和測(cè)定體系隨樣品重量減量。

1.3 數(shù)據(jù)統(tǒng)計(jì)

采用Microsoft Excel 2010和SPSS 19.0數(shù)據(jù)處理系統(tǒng)進(jìn)行數(shù)據(jù)統(tǒng)計(jì)處理。應(yīng)用SPSS 19.0對(duì)數(shù)據(jù)進(jìn)行單因素方差分析（O ne-way A N O V A），并利用Duncan’s多重比較對(duì)差異進(jìn)行顯著性分析。P＜0.05表示差異顯著，P＜0.01表示差異極顯著。

2 結(jié)果與分析

2.1 6種材料對(duì)根腐病病原菌抗性比較

表1結(jié)果顯示，6種材料接種尖鐮孢菌后，第20天寧杞一號(hào)、寧杞二號(hào)、中國(guó)枸杞、寧夏枸杞、L.brevipes和L.exsertum死亡率分別為89.3%，78.6%，75.9%，71.4%，51.7%和13.8%。O ne-way A N O V A結(jié)果表明，寧杞一號(hào)死亡率顯著高于其余枸杞（P＜0.05），而L.exsertum接種后死亡率顯著低于其余枸杞（P＜0.05）；野生種枸杞死亡率略低于栽培種枸杞；引進(jìn)野生種枸杞死亡率均較低。結(jié)果顯示寧杞一號(hào)為感病品種；而L.exsertum對(duì)尖鐮孢菌引起的枸杞根腐病具有良好的抗性。因此選擇寧杞一號(hào)和L.exsertum為感病、抗病材料進(jìn)行苯丙烷代謝相關(guān)指標(biāo)的研究。

表1 6種枸杞接種尖鐮孢菌死亡率Table 1 The death rate of 6 Lyciums by inoculation F.oxysporum

2.2 尖鐮孢菌對(duì)抗感材料苯丙氨酸解氨酶（P A L）、肉桂酸羥化酶（C4 H）及4-香豆酰-輔酶A連接酶（4 C L）活性的影響

圖1表明，寧杞一號(hào)對(duì)照、寧杞一號(hào)接種、L.exsertum對(duì)照和L.exsertum接種在0～20 d內(nèi)P A L活性均呈現(xiàn)出降－升－降的變化趨勢(shì)，L.exsertum起始活性更高。寧杞一號(hào)對(duì)照和L.exsertum對(duì)照在0～20 d內(nèi)波動(dòng)微小，組內(nèi)差異不顯著（P＝0.059和0.361）；而寧杞一號(hào)接種和L.exsertum接種組變化比較劇烈。寧杞一號(hào)接種組P A L活性先大幅下降后大幅上升并在第8天超過(guò)L.exsertum接種組，最后迅速下降至最低水平，表明在第8天時(shí)雖然P A L活性被激發(fā)了，但其酶活持續(xù)時(shí)間很短。L.exsertum接種組P A L活性小幅下降后迅速上升，在第20天達(dá)到所有組別最高值81.49 U/（g F W·min）。試驗(yàn)表明，L.exsertum在0～20 d內(nèi)P A L活性顯著高于寧杞一號(hào)（P＜0.05），且接種尖鐮孢菌后可顯著提高其體內(nèi)P A L的活性（P＜0.05）。

在圖2中4組試驗(yàn)材料在0～20 d內(nèi)C4 H活性均呈現(xiàn)出先升后降的變化趨勢(shì)。寧杞一號(hào)對(duì)照、寧杞一號(hào)接種和L.exsertum對(duì)照組在整個(gè)過(guò)程中組間差異不顯著，但是L.exsertum接種組下降幅度顯著小于其余3個(gè)組別，其達(dá)到了均值4.376 U/（g F W·min），顯著高于起始值（1.415 U/g F W·min）。試驗(yàn)表明，L.exsertum在接種尖鐮孢菌后0～20 d內(nèi)可顯著激發(fā)其體內(nèi)C4 H的活性（P＜0.05）。

圖1 接種尖鐮孢菌枸杞P A L活性的變化Fig.1 The changes of phenylalanine am monialyase activity after inoculation F.oxysporum

圖2 接種尖鐮孢菌枸杞C4 H活性的變化Fig.2 The changes of trans-cinnamic acid-4-hydroxylase activity after inoculation F.oxysporum

在圖3中，4組試驗(yàn)材料均出現(xiàn)了4 C L活性先升后降的變化趨勢(shì)。寧杞一號(hào)對(duì)照、寧杞一號(hào)接種和L.exsertum對(duì)照組在0～20 d中差異不顯著，但是L.exsertum接種組的4 C L在第8天后保持了較高的活性。L.exsertum接種組第0天活性為0.354 U/（g F W·min），而20 d內(nèi)均值為6.937 U/（g F W·min），上升了19.6倍。試驗(yàn)表明，L.exsertum在接種尖鐮孢菌后0～20 d內(nèi)可顯著激發(fā)其體內(nèi)4 C L的活性（P＜0.05）。

2.3 尖鐮孢菌對(duì)抗感材料總酚和類黃酮含量的影響

如圖4所示，4組試驗(yàn)材料在0～20 d內(nèi)總酚含量均出現(xiàn)了先升后降的變化趨勢(shì)。寧杞一號(hào)對(duì)照、寧杞一號(hào)接種組間和L.exsertum對(duì)照與L.exsertum接種組間總酚含量差異不顯著，寧杞一號(hào)接種與L.exsertum接種組間差異也不顯著。寧杞一號(hào)總酚含量整體高于L.exsertum。試驗(yàn)結(jié)果表明，在接種尖鐮孢菌后各參試材料中總酚含量0～20 d內(nèi)沒有顯著地積累，各材料中總酚含量與其抗病性的相關(guān)性不大。

圖3 接種尖鐮孢菌枸杞4CL活性的變化Fig.3 The changes of 4-cou marate：coenzyme A ligase activity after inoculation F.oxysporum

圖4 接種尖鐮孢菌枸杞總酚含量的變化Fig.4 The changes of total phenolics contents after inoculation F.oxysporum

如圖5所示，寧杞一號(hào)對(duì)照、寧杞一號(hào)接種與L.exsertum對(duì)照在0～20 d內(nèi)類黃酮含量均出現(xiàn)了先升后降的變化趨勢(shì)，而L.exsertum接種組則是先上升而后穩(wěn)定在較高水平。寧杞一號(hào)對(duì)照和寧杞一號(hào)接種組在0～20 d內(nèi)出現(xiàn)了較大幅度的波動(dòng)，峰值均在第4天，分別為825.44和666.17 O D325/g F W，但是到第20天時(shí)均未出現(xiàn)類黃酮的積累，反而略低于第0天。L.exsertum對(duì)照組一直在第0天含量水平波動(dòng)，整個(gè)過(guò)程無(wú)顯著差異（P＞0.05）。L.exsertum接種組第8天之后顯著高于其余組別（P＜0.05）。試驗(yàn)表明，L.exsertum的抗病性可能與類黃酮的積累呈正相關(guān)。

圖5 接種尖鐮孢菌枸杞類黃酮含量的變化Fig.5 The changes of flavonoids contents after inoculation F.oxysporum

3 討論

3.1 6種材料對(duì)根腐病病原菌抗性表現(xiàn)

6種材料接種尖鐮孢菌后對(duì)照株中有個(gè)別植株死亡，其原因可能是切根時(shí)對(duì)根系具有一定的損傷造成；當(dāng)接種尖鐮孢菌后L.exsertum死亡率僅為13.8%，為參試材料中死亡率最低，顯著低于寧杞一號(hào)的89.3%（表1）。研究表明L.exsertum在6種參試材料中抗根腐病能力最強(qiáng)，且野生種材料的抗病性略高于栽培品種枸杞，在分子育種的過(guò)程中可以加以利用。

3.2 苯丙氨酸解氨酶（P A L）、肉桂酸羥化酶（C4 H）及4-香豆酰-輔酶A連接酶（4 C L）等苯丙烷代謝關(guān)鍵酶在抗枸杞根腐病中的作用

苯丙氨酸解氨酶（P A L）是苯丙烷代謝途徑的關(guān)鍵酶，參與了多種激發(fā)子誘導(dǎo)的抗性［20］，增強(qiáng)了植物對(duì)病原侵染的抵抗能力［21］。徐凌飛等［22］認(rèn)為P A L的活性變化與梨品種抗病性呈正相關(guān)，李曉敏等［23］的研究顯示大蒜（Allium sativum）抗病品種P A L活性的最大峰值高于感病品種，薛軍等［24］通過(guò)苦蕎（Fagopyrum tataricum）苯丙氨酸解氨酶基因（FtP AL）的研究認(rèn)為P A L在苦蕎抗病過(guò)程中有重要作用，劉瑞峰等［25］對(duì)早期差異表達(dá)基因分析發(fā)現(xiàn)苯丙烷代謝途徑在月季（Rosa chinensis）抵抗黑斑病菌過(guò)程中發(fā)揮重要作用。在本研究中接種尖鐮孢菌后抗病材料L.exsertum P A L活性顯著高于感病的寧杞一號(hào)，且接種尖鐮孢菌后可顯著提高其體內(nèi)P A L的活性，這與前人在黃瓜（Cucumissativus）［26］和甘薯（Dioscoreaesculenta）［27］上的研究結(jié)果類似。

C4 H作為苯丙烷代謝途徑上P A L之后的又一關(guān)鍵酶［28］，以肉桂酸為前體催化合成ρ-香豆酸，這是咖啡酸和阿魏酸等物質(zhì)的前體。C4 H活性的增強(qiáng)可以增加苯丙烷代謝酚酸類物質(zhì)的合成，從而抑制病原物的生長(zhǎng)繁殖［29］。真菌感染、機(jī)械損傷及化學(xué)誘導(dǎo)子等刺激下均能引起C4 H基因的過(guò)表達(dá)［30］。在本研究中L.exsertum在接種尖鐮孢菌后0～20 d內(nèi)可顯著激發(fā)其體內(nèi)C4 H的活性，印證了前人的研究。

4 C L是木質(zhì)素生物合成途徑中的關(guān)鍵合成酶，可以以肉桂酸、ρ-香豆酸、咖啡酸和阿魏酸等物質(zhì)作為前體，合成苯丙烷酸的Co A酯，在抵御植物病害襲擊、抗擊外來(lái)侵襲、維持植物正常生長(zhǎng)等方面發(fā)揮著巨大的作用［31］。在本研究中L.exsertum在接種尖鐮孢菌后0～20 d內(nèi)可顯著激發(fā)其體內(nèi)4 C L的活性，也與前人的研究結(jié)果類似。

對(duì)苯丙烷途徑關(guān)鍵酶以及相關(guān)產(chǎn)物積累的研究表明，接種尖鐮孢菌后L.exsertum體內(nèi)的P A L、C4 H、4 C L活性增加幅度均顯著大于寧杞一號(hào)，并且L.exsertum的死亡率也最低。表明L.exsertum在其抗病過(guò)程中P A L、C4 H、4 C L等起到了重要作用，對(duì)尖鐮孢菌的侵染具有較強(qiáng)的抵抗能力。因此通過(guò)本研究，初步可以確定苯丙烷代謝關(guān)鍵酶以及相關(guān)產(chǎn)物在枸杞抗根腐病過(guò)程中具有重要的作用，但在基因水平上是如何控制其酶活的表達(dá)還有待進(jìn)一步研究。

3.3 總酚和類黃酮等苯丙烷代謝關(guān)鍵產(chǎn)物在抗枸杞根腐病中的作用

由4 C L催化和合成的苯丙烷酸的Co A酯進(jìn)一步合成木質(zhì)素、總酚以及類黃酮等對(duì)病原菌有殺滅作用的各種次生代謝物質(zhì)［32］。酚類物質(zhì)可氧化成有直接毒性的醌類物質(zhì)，能有效抑制病原菌的擴(kuò)展［33］，以提高植物的抗病能力。劉美艷等［34］認(rèn)為甘薯塊根中類黃酮、總酚含量的提高，有利于提高抗黑斑病的能力；劉普等［35］認(rèn)為梨樹腐爛病發(fā)病程度與枝條韌皮部總酚含量呈顯著正相關(guān)關(guān)系；但丁謙等［36］對(duì)甜瓜（Cucumis melo）的類黃酮和總酚的含量表明抗感病品種間難以找出規(guī)律性。在本研究中L.exsertum在接種尖鐮孢菌后0～20 d內(nèi)可顯著提高類黃酮的含量，但是總酚含量無(wú)相關(guān)規(guī)律，其原因有待于進(jìn)一步研究。

另外，在本研究中不論接種尖鐮孢菌與否，第4天均出現(xiàn)了酶活及物質(zhì)含量變化急劇，可能與切根接種有關(guān)，這種接種方式對(duì)植株造成的機(jī)械損傷可能引起了苯丙烷途徑相關(guān)物質(zhì)的變化。

4 結(jié)論

6種參試材料接種根腐病強(qiáng)致病菌尖鐮孢菌后，野生種材料較栽培材料抗病性較強(qiáng)，寧杞一號(hào)為感病材料，L.exsertum抗根腐病能力最強(qiáng)。

抗病材料L.exsertum苯丙烷代謝關(guān)鍵酶P A L、C4 H、4 C L活性顯著高于寧杞一號(hào)，初步確定苯丙烷代謝中的P A L、C4 H、4 C L的活性和類黃酮的含量與枸杞材料抗根腐病呈正相關(guān)。因此，P A L、C4 H、4 C L酶活性和類黃酮含量，初步可以作為篩選抗枸杞鐮孢菌根腐病的生化指標(biāo)。

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Effects of key enzymes and products in phenylpropanoid pathway of Lycium infected by Fusarium oxysporum

LI Jie1，F(xiàn)E N G Li-Dan1，Y A N G Cheng-De1，WA N G You-Ke1，H E Jing1，Z H A N G Bao-Lin2，C H E N Xiu-Rong1*
1.Gansu Agricultural University，Lanzhou 730070，China；2.Gansu Academy of Forestry Science，Lanzhou 730020，China

In this study，the phenylpropanoid path way of the interaction of w olfberry and root rot pathogens will be discussed.T he relationship between w olfberry phenylpropanoid path way and disease resistance will be clarified.In this study，the experim ental m aterials are cultivated varieties NingqiⅠ，NingqiⅡ；do m estic wild species Lycium chinense，L.barbarum；wild species of A m erica L.brevipes，L.exsertum.T he strong pathogenic Fusarium oxysporum isolated fro m the onset of w olfberry will be inoculation by root cutting m ethod.A nd the anti-sense w olfbeey will be choose.T his 2 kinds of w olfberry as m aterials to study the change of phenylalanine a m m onia lyase，cinna mic acid hydroxylase，4-hydroxylase p-cou m aric acyl-coenzy m e A ligase，phenolics and flavonoids in 20 days.T he results show that the disease resistance of wild m aterials are strong than the cultivated m aterialin 6 kinds of test m aterials w hich were inoculated with w olfberry root rot strong pathogen F.oxysporum.NingqiⅠis susceptible m aterials.T he resistance to root rot disease of L.exsertum are strongest.T he key enzy m es of phenylpropanoid path way like phenylalnine a m m onialyase，trans-cinna mic acid-4-hydroxylase，4-cou m arate：coenzy m e A ligase activity are significantly higher than NingqiⅠ.Initially identified the phenylalnine a m m onialyase，trans-cinna mic acid-4-hydroxylase，4-cou m arate：coenzy m e A ligase activity and flavonoid content of phenylpropanoid path way of test m aterial resistance to root rot disease was positively correlated.T herefore，the phenylalnine a m m onialyase，trans-cinna mic acid-4-hydroxylase，4-cou m arate：coenzy m e A ligase enzy m e activity and flavonoid content can be a screening of anti-Chinese w olfberry Fusarium root rot of bioche micalindexes preliminary.

Lycium spp.；root rot；Fusarium oxysporum；phenylpropanoid path way；disease resistance

.E-m ail：chenxiurong＠gsau.edu.cn

10.11686/cyxb2016024

2016-01-19；改回日期：2016-03-08

國(guó)家林業(yè)局“948”項(xiàng)目（2011-4-39），甘肅中草藥科技攻關(guān)項(xiàng)目（G Y C11-01），甘肅省科技支撐項(xiàng)目（1304 F K C A054）和甘肅農(nóng)業(yè)大學(xué)盛彤笙科技創(chuàng)新基金（G S A U-S T S-1338）資助。

李捷（1981-），男，四川仁壽人，講師，在讀博士。E-m ail：lj81658＠gsau.edu.cn