不同干燥方法對(duì)虎杖主要有效成分含量的影響

余志芳，歐泉，文靜，羅婷婷，馬云桐

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不同干燥方法對(duì)虎杖主要有效成分含量的影響

余志芳，歐泉，文靜，羅婷婷，馬云桐

［摘要］目的：比較不同干燥方法對(duì)虎杖有效成分含量的影響，為虎杖的產(chǎn)地初加工提供科學(xué)依據(jù)。方法：將采挖的鮮虎杖隨機(jī)分組，分別采用曬干、陰干、50℃低溫干燥、高溫殺青干燥、真空冷凍干燥方法進(jìn)行干燥，以HPLC法測定虎杖中虎杖苷、白藜蘆醇、大黃素-8-O-β-D-葡萄糖苷、大黃素、大黃素甲醚的含量為評(píng)價(jià)指標(biāo)，比較5種方法處理的虎杖藥材質(zhì)量優(yōu)劣。結(jié)果：不同干燥處理方法后有效成分含量差異較大，其中曬干處理使有效成分損失最多，低溫干燥、冷凍干燥、自然陰干有利于虎杖有效成分的保留。結(jié)論：從經(jīng)濟(jì)成本和成分保留及實(shí)用性綜合分析，陰干更宜于虎杖的干燥處理。

［關(guān)鍵詞］虎杖；干燥方法；有效成分；HPLC法

［作者單位］成 都中醫(yī)藥大學(xué)藥學(xué)院 中藥材標(biāo)準(zhǔn)化教育部重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室四川省中藥資源系統(tǒng)研究與開發(fā)利用重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室省部共建國家重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室培育基地，四川 成都 611137

Tel:18380191389 Email:zhengnlyzf@163.com

中藥材虎杖是蓼科植物虎杖Polygonum cuspidatum Sieb. et Zucc.的干燥根及根莖，其作為傳統(tǒng)大宗藥材具有利濕退黃、清熱解毒、散瘀止痛、止咳化痰之功效［1］。臨床用于濕熱黃疸、風(fēng)濕痹痛、經(jīng)閉、水火燙傷、跌撲損傷、癰腫瘡毒，咳嗽痰多［1］?，F(xiàn)代研究表明其所含活性成分較多，主要分為二苯乙烯類和蒽醌類化合物，二苯乙烯類為虎杖苷和白藜蘆醇，蒽醌類化合物主要以大黃素、大黃素-8-O-β-D-葡萄糖苷，大黃素甲醚、大黃酚等為代表［2-4］。藥理研究表明虎杖苷具有擴(kuò)張血管、降血脂、保肝作用［5，6］，虎杖苷注射液是中國第一個(gè)受美國FDA臨床審批的天然藥物，其苷元白藜蘆醇具有抗炎、抗腫瘤、保肝作用［7，9］，尤其白藜蘆醇在抗艾滋病方面具有顯著活性［11］，使得白藜蘆醇受國際醫(yī)藥行業(yè)的關(guān)注。而以大黃素、大黃素甲醚、大黃苷為代表的蒽醌類化合物等在抗菌、抗炎、抗腫瘤及其調(diào)節(jié)免疫力等方面具有顯著活性［12，13］。

中藥材干燥效果直接影響產(chǎn)品的使用、質(zhì)量和外觀［14］。朱俊霖等［15］采用6種干燥方法處理黃芩，發(fā)現(xiàn)不同干燥方法對(duì)黃芩中黃芩苷和黃芩素的含量具有較大影響。檀偉靜等［16］采用4種干燥方法對(duì)梔子進(jìn)行處理，結(jié)果不同處理組梔子苷等3種有效成分含量變化較大。但目前還未見干燥處理對(duì)虎杖成分含量變化的影響，本文對(duì)比了冷凍干燥、高溫殺青干燥、低溫（50℃）干燥、自然曬干、自然陰干5種方法，以虎杖5種有效成分含量的變化為指標(biāo)，系統(tǒng)評(píng)價(jià)干燥方法對(duì)虎杖藥材品質(zhì)的影響，為虎杖的產(chǎn)地初加工標(biāo)準(zhǔn)提供數(shù)據(jù)參考，以期避免藥材在加工過程中品質(zhì)降低。

1　材料與試劑

1.1 試驗(yàn)材料

實(shí)驗(yàn)材料取自四川省巴中市虎杖種植基地，經(jīng)成都中醫(yī)藥大學(xué)馬云桐教授鑒定為蓼科虎杖屬植物虎杖（Reynoutria japonica Houtt.），采集鮮品后切片備用。

1.2 主要儀器與試藥

Labconco型凍干機(jī)（美國）；電熱鼓風(fēng)干燥機(jī)（上海將任試驗(yàn)設(shè)備有限公司）；KQ5200E型醫(yī)用超聲波清洗器（昆山市超聲儀器有限公司）；高效液相分析系統(tǒng)配雙波長檢測器和在線脫氣系統(tǒng)（日本島津公司）； 色譜柱Agilent Zorbax XDB-C18（4.6×250mm，5μm）（安捷倫公司）；BT-457型電子天平（深圳市博途電子科技公司）；QUINTIX224-1CN型電子分析天平（北京sartorius天平有限公司）。

大黃素（批號(hào)：131009）、大黃素-8-O-β-D-葡萄糖苷（以下稱大黃苷，批號(hào)：141209）、大黃素甲醚（批號(hào)：140820）、白藜蘆醇（批號(hào)：150122）、虎杖苷（140828）對(duì)照品（以上均購自成都克洛瑪生物科技有限公司，純度均≥98%）；無水乙醇（成都科龍化學(xué)試劑廠）；甲醇、乙腈（美國賽默飛世爾有限公司）

2　方法與結(jié)果

2.1 干燥處理方法

將藥材鮮品切片后隨機(jī)分為5份，每份約1.0 Kg，攤開于托盤中，分別冷凍干燥、高溫殺青干燥（105 ℃殺青2 h后50 ℃鼓風(fēng)直至干燥）、低溫干燥（50 ℃鼓風(fēng)干燥）、自然曬干、自然陰干；樣品干燥期間每隔12 h稱重，分析其失水狀況；藥材干燥至兩次稱重 ＜3.0 g，粉碎過40目篩備用。

2.2 含水量分析

取虎杖樣品按“2.1”項(xiàng)下方法處理不同處理組樣品干燥過程重量變化見圖1，各處理組干燥所需時(shí)間及各組性狀差異見表1。樣品粉粹后對(duì)其進(jìn)行水分測定，水分測定參照2010版《中國藥典》采用烘干法：稱2 .0 g藥材粉末平攤于恒重過的扁形稱量瓶中，105 ℃干燥 8 h，移至干燥器中冷卻后精密稱定，根據(jù)減失重量計(jì)算其含水量，測量結(jié)果見表1。

圖1 干燥過程樣品重量變化

由圖1可知冷凍干燥組、高溫殺青干燥組、低溫干燥組在12 h內(nèi)迅速失水，失水量分別為42.7%、44.2%、41.8%，12 h后失水量變化不明顯。由于0 ～12 h是夜間干燥，陰干組及曬干組失水量均不大，分別僅為5.3%和5.5%，12-24h白天期間該兩組失水量迅速增加分別為38.1%、24.3%，由結(jié)果可知冷凍干燥、高溫殺青、低溫干燥處理虎杖失水最快，而曬干和陰干失水較慢。

表1 不同干燥處理藥材干燥時(shí)間和含水量

由表1可知，冷凍干燥處理虎杖只需36 h即可達(dá)到干燥狀態(tài)，而自然陰干時(shí)間最長為96h。各組藥材水分均符合藥典規(guī)定不得高于12%標(biāo)準(zhǔn)，其中陰干組水分含量最高。藥材斷面色澤顯示冷凍干燥藥材顏色最淺，其次是50℃低溫干燥組，高溫殺青干燥組和陰干組藥材顏色棕黃色，曬干組藥材顏色最深，接近棕褐色。

2.3 對(duì)照品制備

分別稱取虎杖苷4.87 mg 、白藜蘆醇0.08 mg、大黃苷0.75 mg 、大黃素0.23 mg 、大黃素甲醚0.38 mg 至10 mL容量瓶，以甲醇為溶劑定容，稀釋2倍后配成混合對(duì)照品溶液備用。

2.4 樣品溶液制備

稱取0.2 g藥材粉末，加入60%乙醇25 mL，超聲提取30 min，過濾后定容至50 mL容量瓶備用，進(jìn)樣前過0.45 μm濾膜。

2.5 色譜條件

Agilent Zorbax XDB-C18柱（4.6×250 mm，5μm）；流動(dòng)相乙腈-0.5%乙酸水；洗脫梯度（以乙腈濃度表示）：0-10 min，15%；10～18 min，15% ～ 25%；18～35 min，25%～35%；35～48 min，35%～70%；48～65 min，70%～78%，流速1.0 mL/min；柱溫30 ℃；檢測波長290 nm；進(jìn)樣體積10μL按照此色譜條件分析得到的樣品和對(duì)照品色譜圖見圖2。

圖2 虎杖樣品中5種有效成分的HPLC圖譜

2.6 方法學(xué)考察

2.6.1 標(biāo)準(zhǔn)曲線繪制 取混合對(duì)照品溶液分別進(jìn)樣2μL，4μL，6 μL，8μL，12μL，15μL，分別計(jì)算各化合物濃度與色譜峰面積之間的回歸方程，線性關(guān)系良好，結(jié)果見表2。

表2 虎杖中5種成分的回歸方程

2.6.2 精密度試驗(yàn) 取同一虎杖樣品，按照“2.2.2”項(xiàng)下制備供試品，按照“2.5”項(xiàng)下色譜方法連續(xù)進(jìn)樣5次，測定虎杖苷、白藜蘆醇、大黃苷、大黃素、大黃素甲醚的峰面積，各化合物峰面積的RSD（n=6）分別為0.1%，0.3%，0.2%，0.4%，2.0%。

2.6.3 重復(fù)性考察 稱取5份虎杖樣品，按照“2.2.2”項(xiàng)下制備樣品，按“2.2.3”項(xiàng)下色譜方法分析得到樣品中虎杖苷、白藜蘆醇、大黃苷、大黃素、大黃素甲醚的含量分別為23.763、0.441、7.941、0.596 、0.507mg/g，RSD（n=5）分別為2.0 %、1.3%、1.3%、1.7%、2.0%。

2.6.4 穩(wěn)定性考察 取同一虎杖樣品，按照“2.2.2”項(xiàng)下制備供試品，按“2.2.3”項(xiàng)下色譜方法每隔6 h進(jìn)樣，計(jì)算上述5種化合物色譜峰面積RSD，各化合物RSD（n=6）分別為0.1%、1.1%、1.1 %、1.8%、2.1%，表明各化合物在36 h內(nèi)穩(wěn)定性良好。

2.6.5 加樣回收試驗(yàn) 分別稱取虎杖苷10.010mg、白藜蘆醇0.312mg、大黃苷3.280mg、大黃素0.360mg、大黃素甲醚0.250mg至100ml容量瓶中，60%乙醇定容，得到混合對(duì)照液。根據(jù)“2.6.3”重復(fù)性實(shí)驗(yàn)得到樣品中5種有效成分的含量，取樣品6份，分別為0.10865、0.10216、0.12279、0.10645、0.10195、0.12265 mg，各份樣品分別加上述混合對(duì)照品10mL，再加60%乙醇15mL，按“2.4”項(xiàng)下方法制備供試品，經(jīng)“2.2.3”色譜分析方法得到各樣品色譜峰，根據(jù)峰面積與回歸方程計(jì)算回收率得到虎杖苷、白藜蘆醇、大黃苷、大黃素、大黃素甲醚回收率分別為96.7 %、95.2%、98.1%、98.2%、101.0%。

2.7 樣品測定

將虎杖鮮品不同處理得到的干燥品按照“2.2.2”項(xiàng)下制備樣品，按“2.2.3”項(xiàng)下色譜條件下測定，以干燥品計(jì)，鮮品和干燥品中5種化學(xué)成分的含量見表3。

表3 不同干燥處理后虎杖5種活性成分含量

如表3，與鮮品對(duì)比，經(jīng)高溫殺青干燥、低溫干燥、陰干、曬干組處理后虎杖苷的含量依次下降了2.2%、5.3%、11.2%、18.5%，而白藜蘆醇比鮮品升高了33.9%、218.8%、238.4%、150.9%，而冷凍干燥和高溫殺青干燥對(duì)虎杖苷和白藜蘆醇的含量變化不大。 大黃苷數(shù)據(jù)顯示經(jīng)5組干燥方法處理，除低溫干燥組和陰干組含量分別降低了15.6%和11.0%外，其他各組變化不大。相應(yīng)的低溫干燥組和陰干組大黃素的含量分別升高了47.8%和55.1%，而高溫殺青組大黃素下降了22.2%。同樣，高溫殺青組中大黃素甲醚含量降低量也最大，達(dá)到58.3%，其他組對(duì)大黃素甲醚含量影響卻存在不規(guī)則變化。

3　討論

本研究中，經(jīng)高溫殺青干燥、低溫干燥、陰干、曬干處理后虎杖苷含量較鮮品依次下降，相應(yīng)的白藜蘆醇含量卻顯著增高，這可能是這幾種干燥方法使虎杖苷降解為其苷元白藜蘆醇，而曬干組虎杖苷的降低量最大，白藜蘆醇卻只是適當(dāng)上升，這可能是與曬干環(huán)境下光照引起已轉(zhuǎn)化的白藜蘆醇又降解有關(guān)，這與周麗［17］研究表明0.5 h日光光照即可引起白藜蘆醇的降解相吻合，因此曬干不可作為虎杖的干燥方法。同樣的，低溫干燥組與陰干組中大黃苷含量較鮮品降低，相應(yīng)的大黃素含量較鮮品上升，可能是大黃苷降解為其苷元大黃素的原因。高溫殺青干燥組大黃素和大黃素甲醚含量較鮮品均降低，可能是蒽醌類化合物酚羥基較多，高溫下更易氧化［18］。從有效成分保留方面評(píng)價(jià)5種干燥方法的優(yōu)劣為：低溫干燥最佳，冷凍干燥和自然陰干次之，其次是高溫殺青干燥，曬干最不利于其有效成分的保留。從實(shí)際考慮冷凍干燥和低溫干燥需要高成本投入不符合實(shí)際，綜合考慮虎杖有效成分及經(jīng)濟(jì)成本，自然陰干可作為虎杖的干燥方法。

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（責(zé)任編輯：胡慧玲）

Effect of different drying methods on active components contents of Huzhang

YU Zhi-fang， OU Quan， WEN Jing，LUO Ting-ting， MA Yun-tong//（School of Pharmacy， Chengdu University of Traditional Chinese Medicine； Key Laboratory of Standardization for Chinese Herbal Medicine， Ministry of Education； National Key Laboratory Breeding Base of Systematic Research， Development and Utilization of Chinese Medicine Resources， Chengdu 611137，Sichuan）

［Abstract］Objective: To provide a scientific basis for the original processing of Huzhang by comparing effect of different drying methods on active components content. Method: The fresh medicinal material was divided into 5 groups randomly and treated using the methods of drying methods including natural drying in the sun， natural drying in the shade， oven 50℃ lowtemperature drying， high-temperature drying under 105℃， and vacuum freeze-drying. The contents of polydatin， resveratrol，emodin-8-O-glucoside， emodin and physcion were used as examine indicators to compared the effect of different methods. Result: Significant differences were found among components contents after treated with different drying methods. The drying in the sun caused the most loss of active ingredients. However， low-temperature drying， freeze-drying and drying in the shade were beneficial for the active components reservation. Conclusion: Comprehensively considering cost， remained active components and practicability， the method of drying in the shade is suggested to be adopted for Huzhang processing.

［Key words］Huzhang； drying method； active component； HPLC

［中圖分類號(hào)］R282.4

［文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼］A

［文章編號(hào)］1674-926X（2016）02-004-04

［基金項(xiàng)目］巴 州區(qū)道地中藥材虎杖種植技術(shù)集成及產(chǎn)業(yè)化示范項(xiàng)目（編號(hào)：313-672）

［作者簡介］余志芳（1989-），女，碩士生，從事中藥品種、質(zhì)量及資源研究

［通訊作者］馬 云桐（1963-），男，教授，從事中藥種質(zhì)及資源研究工作 Email:mayuntong06@163.com

［收稿日期］2016-03-04