組織因子途徑抑制物—2在正常宮頸、宮頸上皮內(nèi)瘤變和宮頸

[摘 要] 目的：探討TFPI-2在正常宮頸、宮頸上皮內(nèi)瘤變和宮頸癌組織中表達。方法：選取2013年1月—2015年12月本院診治的宮頸癌患者45例、宮頸上皮內(nèi)瘤變（CIN）患者45例以及正常宮頸組織45例的病理標(biāo)本，采用免疫組化檢測方法，測定3組標(biāo)本中TFPI-2的表達情況，表達量與宮頸癌分期、分型、淋巴轉(zhuǎn)移的關(guān)系。結(jié)果：正常宮頸患者、宮頸上皮內(nèi)瘤變（CIN）患者、宮頸癌患者組織病理標(biāo)本中TFPI-2的表達逐漸下降，3組間比較差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P < 0.05）；宮頸癌中TFPI-2的表達與其FIGO分期和淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移有關(guān)，腫瘤越晚期，TFPI-2的表達越低（P < 0.05）；但是與其病理分類和分化程度無關(guān)（P>0.05）。結(jié)論：TFPI-2的表達在宮頸癌患者中顯著降低，其含量降低可能是導(dǎo)致宮頸癌發(fā)生的原因之一。

[關(guān)鍵詞] TFPI-2；宮頸癌；免疫組化

中圖分類號：R737.33 文獻標(biāo)識碼：B 文章編號：2095-5200（2016）03-079-03

DOI：10.11876/mimt201603029

宮頸癌是婦科常見的惡性腫瘤，發(fā)病可能與HPV感染、分娩次數(shù)、初產(chǎn)年齡小以及性生活紊亂等多種因素有關(guān)[1]。隨著對腫瘤分子水平發(fā)病機制的不斷研究，參與宮頸癌病理機制的其他因素也在不斷被揭示。TFPI-2（組織因子途徑抑制物-2）因其最早是從胎盤中分離提取故又稱為胎盤蛋白-5[2]，文獻報道，TFPI-2與腎癌[3]、肺癌[4]、肝癌[5]等惡性腫瘤的發(fā)生發(fā)展相關(guān)。本研究觀察宮頸癌、宮頸上皮內(nèi)瘤變（CIN）以及正常宮頸的組織病理標(biāo)本中TFPI-2的表達，探討TFPI-2是否參與宮頸癌的發(fā)生發(fā)展。

1 資料與方法

1.1 一般資料

選取2013年1月—2015年12月本院診治的宮頸癌患者45例、宮頸上皮內(nèi)瘤變（CIN）患者45例以及正常宮頸組織45例的病理標(biāo)本。宮頸癌患者取材前未行手術(shù)或放化療；健康對照組排除妊娠以及哺乳期婦女。3組患者的年齡、孕產(chǎn)等一般資料相比，差異無統(tǒng)計學(xué)意義（P>0.05），具有可比性。

1.2 檢測方法

取宮頸組織，甲醛固定、脫水、浸蠟、包埋，，連續(xù)切片厚度4μm。切片給予常規(guī)脫蠟、水化處理，即：二甲苯3次，20min/次；100%酒精3次，100min/次；之后98%酒精、80%酒精、70%酒精各10min。蒸餾水、PBS液沖洗3次，5min/次；將切片置入枸櫞酸緩沖液中進行加熱，沸騰后停止加熱，5min之后重復(fù)加熱，之后在室溫下進行冷卻；用PBS溶液沖洗3次，5min/次；在37℃的溫度下，使用3%的H2O2孵育20min，阻斷內(nèi)源性酶的活性；再次用PBS溶液沖洗3次，5min/次；滴加山羊血清封閉15mim，除去多余液體后加入濃度為1：160的TFPI-2抗體，在4℃的溫度下孵育過夜；復(fù)溫并在PBS沖洗后加入生物素標(biāo)記的二抗IgG工作液，在37℃下孵育15min；用PBS溶液沖洗3次，5min/次；加入辣根標(biāo)記的鏈霉卵白素工作液，在37℃下孵育15min；用PBS溶液沖洗3次，5min/次；DAB（聯(lián)苯胺）顯色，在室溫條件下顯色，顯微鏡下控制標(biāo)本的染色程度；在蘇木素進行復(fù)染約20～30s后使用清水進行沖洗、返藍；使用梯度酒精進行脫水，即：70%酒精、80%酒精、98%酒精、100%酒精脫水三次，每次5min；二甲苯進行透明，3次，5min/次。結(jié)束后使用中性樹膠進行封片處理，放于顯微鏡下進行觀察。

1.3 結(jié)果判讀

病理科醫(yī)生在200倍鏡下，隨機選擇5個視野觀察，陽性結(jié)果為胞質(zhì)被染為棕黃色。其中不表達是陰性，弱陽性為小于10%、陽性為10%～50%、次強陽性為50%～70%、強陽性為75%～100%。

1.4 統(tǒng)計學(xué)分析

使用SPSS 17.0，計量資料以均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差（x±s）表示，采用t檢驗，計數(shù)資料采用率表示，采用χ2檢驗，等級資料采用秩和檢驗，以P<0.05為差異有統(tǒng)計學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 3組患者宮頸組織中TFPI-2的表達情況

免疫組化結(jié)果顯示：正常宮頸患者、宮頸上皮內(nèi)瘤變（CIN）患者、宮頸癌患者組織病理標(biāo)本中TFPI-2的表達逐漸下降，3組間比較差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P<0.05）。具體結(jié)果見表1。

2.2 宮頸癌樣本TFPI-2的表達與病理類型、分化程度、分期以及淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的關(guān)系

宮頸癌中TFPI-2的表達與其FIGO分期和淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移有關(guān)，腫瘤越晚期，TFPI-2的表達越低，差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P<0.05）；但是與其病理分類和分化程度無關(guān)，差異無統(tǒng)計學(xué)意義（P>0.05）。具體結(jié)果見表2。

3 討論

3.1 TFPI-2概述

TFPI-2是一種絲氨酸蛋白酶家族抑制劑，基因位于染色體7q22，全長7Kb，其編碼產(chǎn)物的相對分子質(zhì)量為32000，廣泛分布于人體細(xì)胞內(nèi)[6]。TFPI-2可在內(nèi)皮細(xì)胞、表皮細(xì)胞中分泌合成，在胎盤組織、骨骼肌、肝臟、血管內(nèi)皮細(xì)胞中高度表達[7]。研究發(fā)現(xiàn)，惡性腫瘤患者發(fā)生了蛋白質(zhì)的水解失調(diào)。Chand 等[8]進行體外實驗發(fā)現(xiàn)TFPI-2可抑制纖溶酶、基質(zhì)金屬蛋白酶等多種蛋白酶。TFPI-2可以顯著的抑制胰蛋白酶、糜蛋白酶、纖溶酶的作用，從而參與到機體的組織發(fā)生、纖溶、胚胎發(fā)育及腫瘤侵襲等過程中[9]。在許多腫瘤中都能夠發(fā)現(xiàn)TFPI-2基因的缺失。

3.2 TFPI-2的作用機制及與宮頸癌的關(guān)系

宮頸癌導(dǎo)致患者死亡的一個主要原因就是癌細(xì)胞的侵襲以及遠處轉(zhuǎn)移，在宮頸癌發(fā)生侵襲或者遠處轉(zhuǎn)移時，需要將基底膜、ECM進行降解[10]。在整個過程中，腫瘤細(xì)胞分泌的絲氨酸蛋白酶起著重要的作用。作為絲氨酸蛋白酶抑制劑，TFPI-2可以通過以下方面抑制宮頸癌的侵襲和轉(zhuǎn)移：1）抑制、降解MMP（基質(zhì)金屬蛋白酶），腫瘤細(xì)胞可以分泌MMP并與ECM中的生長因子結(jié)合，改變基質(zhì)的微環(huán)境，不僅促進腫瘤的增生，還會使MMP的表達、分泌上調(diào)。而TFPI-2可以與MMP及其前體結(jié)合，競爭性的抑制MMP和ECM的結(jié)合，從而保證ECM結(jié)構(gòu)的完整性，發(fā)揮抑制腫瘤的侵襲、轉(zhuǎn)移作用[11-12]。2）抑制腫瘤新生血管的形成，一方面可以抑制MMP的表達和纖溶物質(zhì)，增加其抑制物的功能活性起作用；另一方面可以使IL-8的表達水平和血管生成因子的表達下調(diào)，發(fā)揮抑制血管生成的作用[13]。3）促進癌細(xì)胞的凋亡，TFPI-2可以通過降解絲氨酸蛋白產(chǎn)物，與凋亡受體結(jié)合，導(dǎo)致腫瘤細(xì)胞的死亡[14]。

本研究結(jié)果表明，宮頸癌中TFPI-2的表達與其FIGO分期和淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移有關(guān)，但是與其病理分類和分化程度無關(guān)（P>0.05），推測宮頸癌中TFPI-2表達可能作為判斷患者的病情進展以及預(yù)后的指標(biāo)?？稍诤罄m(xù)實驗中進行進一步研究。

參 考 文 獻

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