歡天安神飲的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)研究

趙　穎，李　文，劉永年，隆紅艷，杜　秋

(1.南京市中醫(yī)院藥學(xué)部，江蘇 南京　210001； 2.南京市中醫(yī)院門診，江蘇 南京　210001； 3.南京市中醫(yī)院中心實(shí)驗(yàn)室，江蘇 南京　210001)

歡天安神飲的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)研究

趙穎1*，李文1#，劉永年2，隆紅艷3，杜秋1

(1.南京市中醫(yī)院藥學(xué)部，江蘇 南京210001； 2.南京市中醫(yī)院門診，江蘇 南京210001； 3.南京市中醫(yī)院中心實(shí)驗(yàn)室，江蘇 南京210001)

摘要目的：建立歡天安神飲的質(zhì)量控制標(biāo)準(zhǔn)。方法：采用薄層色譜法對(duì)歡天安神飲中的丹參、郁金、遠(yuǎn)志進(jìn)行薄層鑒別；采用高效液相色譜法對(duì)歡天安神飲中的丹參酸B進(jìn)行含量測(cè)定。結(jié)果：薄層色譜的斑點(diǎn)清晰；丹酚酸B在進(jìn)樣量為0.25～5 μg時(shí)，線性關(guān)系良好(r=0.999 9)，平均回收率為103.35%(RSD=1.01%，n=6)。結(jié)論：本鑒別方法的專屬性強(qiáng)，含量測(cè)定方法的準(zhǔn)確性可靠，可用于歡天安神飲的質(zhì)量控制。

關(guān)鍵詞歡天安神飲； 丹酚酸B； 薄層色譜法； 高效液相色譜法； 質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)

歡天安神飲已在南京市中醫(yī)院(以下簡(jiǎn)稱“我院”)使用多年，為我院名老中醫(yī)劉永年的常用經(jīng)驗(yàn)方，療效顯著、安全性高，目前正按照新醫(yī)院制劑的申報(bào)要求對(duì)其進(jìn)行研究。該方主要由丹參、合歡皮、郁金等9味中藥組成，其功效為疏肝達(dá)郁、和血安神，主治失眠肝郁神傷證，癥見入睡困難、或多夢(mèng)不實(shí)易驚、或早醒難以復(fù)寐，情志不舒，胸脅脹痛，煩躁易怒，苔薄白，脈細(xì)弦。本研究采用薄層色譜法對(duì)方中丹參、郁金、遠(yuǎn)志進(jìn)行定性鑒別，采用高效液相色譜法對(duì)丹酚酸B進(jìn)行含量測(cè)定，為建立歡天安神飲的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)提供理論依據(jù)。

1材料

1.1儀器

1290型超高壓液相色譜儀(安捷倫公司)；紫外檢測(cè)器(安捷倫公司)；色譜柱為Diamonsil C18(2)柱(250 mm×4.6 mm，5 μm)(迪馬公司)，柱號(hào)：225-1125。

1.2藥品與試劑

乙腈為色譜純，其余所用試劑均為分析純。水為純凈水。丹酚酸B對(duì)照品(批號(hào)：111562)；丹參對(duì)照藥材(批號(hào)：120923)；郁金對(duì)照藥材(批號(hào)：120949)；遠(yuǎn)志對(duì)照藥材(批號(hào)：120989)，以上對(duì)照品、對(duì)照藥材均由中國(guó)藥品生物制品檢定所提供。歡天安神飲：自制，批號(hào)分別為130727、130729、130731。

2方法與結(jié)果

2.1薄層鑒別

2.1.1丹參：取本制劑1.5 ml，加75%甲醇溶液25 ml，超聲處理30 min，濾過，濾液濃縮至1 ml，作為供試品溶液；取丹參對(duì)照藥材粉末0.2 g，加75%甲醇溶液25 ml，加熱回流1 h，濾過，濾液濃縮至1 ml，作為對(duì)照藥材溶液；另取缺丹參的陰性制劑，按上述處理方法，制得陰性制劑溶液。按照《中華人民共和國(guó)藥典》薄層色譜法(附錄Ⅵ B)試驗(yàn)，吸取上述2種溶液各5 μl，分別點(diǎn)于同一硅膠GF254薄層板上，以甲苯-三氯甲烷-乙酸乙酯-甲醇-甲酸(V∶V∶V∶V∶V=2.0 ∶3.0 ∶4.0 ∶0.5 ∶2.0)為展開劑，展開，取出，晾干，置紫外光燈(254 nm)下檢視[1-4]。供試品色譜中，在與對(duì)照品色譜相應(yīng)的位置上，顯相同顏色的斑點(diǎn)，陰性制劑無干擾，見圖1。

1.丹參對(duì)照藥材；2—4.3批歡天安神飲；5.陰性制劑1.salvia miltiorrhiza standard medical material; 2—4.three bunches of Huantian Anshen drink; 5. negative preparation圖1　丹參的TLC圖Fig 1　TCL of salvia miltiorrhiza

2.1.2郁金：取本制劑10 ml，加無水乙醇25 ml，超聲處理15 min，濾過，濾液蒸干，將殘?jiān)訜o水乙醇1 ml使之溶解，作為供試品溶液；取郁金對(duì)照藥材2 g，加無水乙醇25 ml，超聲處理30 min，濾過，濾液蒸干，將殘?jiān)訜o水乙醇1 ml使之溶解，作為對(duì)照藥材溶液；另取缺郁金的陰性制劑，按照上述處理方法，制得陰性制劑溶液。按照《中華人民共和國(guó)藥典》薄層色譜法(附錄Ⅵ B)試驗(yàn)，吸取上述2種溶液各5 μl，分別點(diǎn)于同一硅膠G薄層板上，以正己烷-乙酸乙酯(V∶V=17 ∶3)為展開劑，預(yù)飽和30 min，展開，取出，晾干，置日光和紫外光燈(365 nm)下檢視[5-8]。供試品色譜中，在與對(duì)照藥材色譜相應(yīng)的位置上，顯相同顏色的主斑點(diǎn)或熒光斑點(diǎn)，陰性制劑無干擾，見圖2。

1.郁金對(duì)照藥材；2—4.3批歡天安神飲；5.陰性制劑1.radix curcumae standard medical material; 2—4.three bunches of Huantian Anshen drink; 5.negative preparation圖2　郁金的TLC圖Fig 2　TCL of radix curcumae

2.1.3遠(yuǎn)志：取本制劑6 ml，加70%甲醇溶液20 ml，超聲處理15 min，濾過，濾液蒸干，將殘?jiān)?0%甲醇溶液1 ml使之溶解，作為供試品溶液；取遠(yuǎn)志對(duì)照藥材粉末0.5 g，加70%甲醇溶液20 ml，超聲處理30 min，濾過，濾液蒸干，將殘?jiān)?0%甲醇溶液1 ml使之溶解，作為對(duì)照藥材溶液；另取缺遠(yuǎn)志的陰性制劑，按照上述制劑處理方法，制得陰性制劑溶液。按照《中華人民共和國(guó)藥典》薄層色譜法(附錄Ⅵ B)試驗(yàn)，吸取上述2種溶液各2 μl，分別點(diǎn)于同一硅膠G薄層板上，以三氯甲烷-甲醇-水(V∶V∶V=7 ∶3 ∶1)的下層溶液為展開劑，展開，取出，晾干，置紫外光燈(365 nm)下檢視[9-12]。供試品色譜中，在與對(duì)照品色譜相應(yīng)的位置上，顯相同顏色的熒光斑點(diǎn)，陰性制劑無干擾，見圖3。

1. 遠(yuǎn)志對(duì)照藥材；2—4.3批歡天安神飲；5.陰性制劑1.polygala tenuifolia standard medical material; 2—4.three bunches of Huantian Anshen drink; 5.negative preparation圖3　遠(yuǎn)志的TLC圖Fig 3　TCL of polygala tenuifolia

2.2丹酚酸B的含量測(cè)定

2.2.1色譜條件：色譜柱：Diamonsil C18(2)柱(250 mm×4.6 mm，5 μm)(迪馬公司)，柱號(hào)：225-1125；流動(dòng)相：乙腈-2%乙酸(V∶V=20 ∶80)；檢測(cè)波長(zhǎng)：284 nm；進(jìn)樣量：10 μl；流速：1.0 ml/min；柱溫：30 ℃；理論板數(shù)按丹酚酸B峰計(jì)算應(yīng)不低于3 000。

2.2.2對(duì)照品溶液的制備：精密稱取經(jīng)五氧化二磷減壓干燥器干燥24 h的丹酚酸B對(duì)照品適量，加流動(dòng)相制成每1 ml含0.5 mg的溶液，作為對(duì)照品儲(chǔ)備溶液。

2.2.3供試品溶液的制備：取裝量差異項(xiàng)下的歡天安神飲2 ml，精密加入甲醇10 ml、水8 ml，使甲醇濃度為50%，稱定質(zhì)量，超聲處理30 min(微波功率400 W)，冷卻，再稱定質(zhì)量，用50%甲醇溶液補(bǔ)足減失的質(zhì)量，搖勻，濾過，取續(xù)濾液，即得。

2.2.4陰性溶液的制備：取缺丹參的樣品，按照“2.2.3”項(xiàng)下方法制備陰性溶液。

2.2.5專屬性試驗(yàn)：取上述對(duì)照品溶液、供試品溶液、陰性溶液，按照上述色譜條件，進(jìn)樣10 μl，測(cè)定，結(jié)果表明，在丹酚酸B色譜峰處無干擾，見圖4。

2.2.6標(biāo)準(zhǔn)曲線及線性范圍：精密稱取0.5 mg/ml的對(duì)照品儲(chǔ)備溶液，分別吸取0.5 mg/ml對(duì)照品溶液0.5、1.0、2.0、4.0、6.0、10.0 μl，進(jìn)樣，按上述色譜條件測(cè)定峰面積，以峰面積均值(Y)為縱坐標(biāo)，進(jìn)樣量(X)為橫坐標(biāo)，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線。得回歸方程Y=1 123.43X-13.55，r=0.999 9(n=6)。結(jié)果顯示，丹酚酸B進(jìn)樣量在0.25～5 μg范圍內(nèi)呈良好的線性關(guān)系。

2.2.7精密度試驗(yàn)：取質(zhì)量濃度為0.1 mg/ml的丹酚酸B對(duì)照品溶液，按照上述色譜條件，連續(xù)進(jìn)樣6次，進(jìn)樣量為10 μl，測(cè)定其峰面積，計(jì)算RSD(%)。結(jié)果顯示，RSD為0.74%，表明精密度良好。

2.2.8穩(wěn)定性試驗(yàn)：取供試品溶液，每隔2 h進(jìn)樣1次，每次10 μl，測(cè)定丹酚酸B在10 h內(nèi)的峰面積，計(jì)算RSD(%)。結(jié)果顯示，RSD為0.77%，表明供試品溶液在10 h內(nèi)穩(wěn)定性符合要求。

2.2.9重復(fù)性試驗(yàn)：精密量取5份歡天安神飲各2 ml，置于具塞錐形瓶中，精密加入甲醇10 ml、水8 ml，使甲醇的含量為50%，稱定質(zhì)量，超聲處理30 min(微波功率400 W)，冷卻，再稱定質(zhì)量，用50%甲醇溶液補(bǔ)足減失的質(zhì)量，搖勻，濾過，取續(xù)濾液，即得。平行試驗(yàn)5份，進(jìn)樣量10 μl，按上述色譜條件測(cè)定其丹酚酸B的含量，計(jì)算RSD(%)。結(jié)果顯示，RSD為0.17%，表明本方法重復(fù)性良好。

2.2.10加樣回收率試驗(yàn)：精密稱取丹酚酸B含量為0.6 mg的歡天安神飲0.5 ml，置于具塞錐形瓶中，平行6份，每2份為1組，分別精密加入質(zhì)量濃度為0.631 2 mg/ml丹酚酸B對(duì)照品溶液1.0、1.2、1.4 ml，按照上述供試品溶液最佳制備方法制備，即精密加入50%甲醇溶液5 ml，密塞，稱定質(zhì)量，超聲處理30 min(微波功率400 W)，冷卻，再稱定質(zhì)量，用50%甲醇溶液補(bǔ)足減失的質(zhì)量，搖勻，濾過，取續(xù)濾液，即得。色譜條件同前，進(jìn)樣量10 μl，以外標(biāo)兩點(diǎn)法測(cè)定其丹酚酸B的含量。結(jié)果顯示，平均回收率為103.35%，RSD為1.01%，表明本品回收率符合要求，見表1。

表1　加樣回收率試驗(yàn)結(jié)果

2.2.113批樣品丹酚酸B含量測(cè)定結(jié)果：取裝量差異項(xiàng)下的合劑2 ml，按供試品溶液制備方法制備，得供試品溶液。色譜條件同前，進(jìn)樣量10 μl，以外標(biāo)兩點(diǎn)法測(cè)定其丹酚酸B的含量，3批樣品(130727、130729、130731)丹酚酸B含量測(cè)定結(jié)果分別為262.5、250.0、260.0 mg/ml。

3討論

本試驗(yàn)曾考慮選用合歡皮中(-)-丁香樹脂酚-4-O-β-D-呋喃芹糖基-(1→2)-β-D-吡喃葡萄糖苷含量作為質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)的檢測(cè)指標(biāo)，但其指標(biāo)性成分峰型不好，有干擾，故最終選用丹參中的丹酚酸B含量為最終的檢測(cè)指標(biāo)。

丹酚酸B含量測(cè)定在流動(dòng)相的選擇上也曾摸索了多個(gè)方法，其中《中華人民共和國(guó)藥典》(2010版)中的丹酚酸B的流動(dòng)相為甲醇-乙腈-甲酸-水(V∶V∶V∶V=30 ∶10 ∶1 ∶59)，由于本試驗(yàn)所用儀器安捷倫1290型高效液相色譜儀為二元泵，故《中華人民共和國(guó)藥典》(2010版)中的流動(dòng)相在每次使用之前需人工配置，容易造成人為誤差，且流動(dòng)相的誤差會(huì)造成色譜峰的保留時(shí)間出現(xiàn)略微的差異。故本試驗(yàn)經(jīng)過反復(fù)摸索，并查閱了相應(yīng)的文獻(xiàn)[13-15]，最終確定丹酚酸B含量測(cè)定中的流動(dòng)相為乙腈-2%乙酸(V∶V=20 ∶80)。

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Study on Quality Standard for Huantian Anshen Drink

ZHAO Ying1, LI Wen1, LIU Yongnian2, LONG Hongyan3, DU Qiu1

(1.Dept.of Pharmacy, Nanjing Hospital of Traditional Chinese Medicine,Jiangsu Nanjing 210001, China; 2.Dept.of Outpatient, Nanjing Hospital of Traditional Chinese Medicine,Jiangsu Nanjing 210001, China; 3.Dept.of Central Lab, Nanjing Hospital of Traditional Chinese Medicine, Jiangsu Nanjing 210001, China)

ABSTRACTOBJECTIVE：To establish the quality standard for Huantian Anshen drink. METHODS: Qualitative identification of Salvia miltiorrhiza, Radix curcumae and Polygala tenuifolia was conducted by thin layer chromatography(TLC). The content of Salviaacid B was determined by HPLC. RESULRS: TLC spots were clear without interference from negative sample. The linear range of loganin was 0.25-5 μg(r=0.999 9)with the average recovery of 103.35%(RSD=1.01%, n=6). CONCLUSIONS: The established quality standard is highly specific, the content determination method is correct and reliable, which can be used in the quality control of Huantian Anshen drink．

KEYWORDSHuantian Anshen drink; Salviaacid B; HPLC; TLC; Quality standard

#通信作者：主任中藥師。研究方向：中藥鑒定及藥劑相關(guān)研究。E-mail：njzyyliwen@sohu.com

中圖分類號(hào)R927.11；R932

文獻(xiàn)標(biāo)志碼A

文章編號(hào)1672-2124(2016)05-0633-03

DOI10.14009/j.issn.1672-2124.2016.05.023

(收稿日期：2015-08-27)

*主管中藥師。研究方向：醫(yī)院制劑的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)研究。E-mail：86371797@qq.com