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    食管胃結(jié)合部癌表皮生長因子-2基因擴增及蛋白表達與臨床病理的關(guān)系

    2016-06-29 09:41:29韓鴻彬王公平金燦輝
    中國老年學雜志 2016年11期
    關(guān)鍵詞:結(jié)合部腺癌食管

    韓鴻彬 王公平 陳 曄 金燦輝

    (河南科技大學第一附屬醫(yī)院胃腸腫瘤外科,河南 洛陽 471003)

    食管胃結(jié)合部癌表皮生長因子-2基因擴增及蛋白表達與臨床病理的關(guān)系

    韓鴻彬王公平陳曄金燦輝

    (河南科技大學第一附屬醫(yī)院胃腸腫瘤外科,河南洛陽471003)

    〔摘要〕目的探討表皮生長因子-2(Her-2)在胃食管結(jié)合部癌中的蛋白表達和基因擴增情況及其與胃食管結(jié)合部癌患者的臨床病理關(guān)系。方法采用免疫組織化學法(IHC)和熒光原位雜交技術(shù)(FISH)檢測80例手術(shù)切除的胃食管結(jié)合部癌組織中HER-2的蛋白表達和基因擴增情況,并分析與胃食管結(jié)合部癌的病理分化程度、浸潤深度、臨床分期和淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的關(guān)系。結(jié)果應(yīng)用FISH技術(shù)檢測顯示在胃食管結(jié)合部癌組織中Her-2的蛋白陽性表達率22.5%,應(yīng)用IHC技術(shù)檢測其在癌組織表達率為15%,Her-2基因擴增和蛋白陽性表達與胃食管結(jié)合部癌的分化程度和臨床TNM分期有關(guān)(P<0.05),而與年齡、性別和浸潤深度及淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移無相關(guān)性。結(jié)論Her-2蛋白過表達和基因擴增是胃食管結(jié)合部癌患者的一個預(yù)后指標,與其發(fā)生發(fā)展有關(guān),聯(lián)合檢測HER-2蛋白表達水平及基因擴增程度對于胃食管結(jié)合部癌的治療和預(yù)后評估有一定指導意義。

    〔關(guān)鍵詞〕胃食管結(jié)合部癌;表皮生長因子-2;免疫組織化學;熒光原位雜交

    胃食管結(jié)合部是指食管末段和近側(cè)胃相連接的部位。胃食管結(jié)合部癌是指腫瘤中心位于解剖學上賁門遠近5 cm這段范圍內(nèi)的腺癌〔1,2〕。近年來胃食管結(jié)合部癌發(fā)病率在我國逐年增高,關(guān)于其發(fā)病率及發(fā)病機制的研究尚少。本研究通過檢測胃食管結(jié)合部腺癌組織中的表皮生長因子-2(Her-2)蛋白表達和基因擴增情況探討其臨床意義。

    1資料與方法

    1.1一般資料收集2009年12月至2012年12月在鄭州大學附屬洛陽市中心醫(yī)院手術(shù)切除并經(jīng)病理組織學確診的胃食管結(jié)合部腺癌組織蠟塊標本80例。所有病例術(shù)前未行化療或放療等抗腫瘤治療。男51例,女29例;年齡41~82歲,中位年齡61歲;分化程度為低分化50例,中-高分化30例;有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移62例,無淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移18例;按AJCC(2010)病理學分期(pTNM):Ⅰ~Ⅱ期53例,Ⅲ~Ⅳ期27例。

    1.2實驗方法

    1.2.1免疫組化染色(IHC法)手術(shù)切除標本經(jīng)鄭州大學附屬洛陽中心醫(yī)院病理科用10%甲醛溶液固定。常規(guī)石蠟包埋、存檔。選取需要的蠟塊,使用切片機連續(xù)3~5 μm厚度切片,將組織切片置入56℃溫箱,烘片45 min,供免疫組化染色。運用二步法免疫組織化學檢測,按二步法免疫組化檢測試劑盒說明書進行操作。鼠抗人Her-2單克隆抗體用已知Her-2陽性的乳腺癌組織切片作為陽性對照,用PBS液代替一抗作為陰性對照。結(jié)果判定標準由兩位病理科醫(yī)師雙盲法進行。評分標準:-:無染色或<10%腫瘤細胞有膜染色;+:≥10%腫瘤細胞膜有微弱或勉強可見的膜,或細胞只有部分膜染色;:≥10%腫瘤細胞有弱到中度的完全或基底外側(cè)膜染色;:≥10%腫瘤細胞有中等到強的完全或基地外側(cè)膜染色,-、+為陰性,為可疑陽性、為陽性,IHC判定為Her-2陽性。

    1.2.2熒光原位雜交GLP Her-2/CEP17雙色熒光探針及雜交緩沖液,購自北京金菩嘉公司。切片65℃烘烤過夜,甲醛固定液固定10 min,梯度乙醇脫水。①切片置于78℃甲酰胺變性液中變性15 min,依次置于-20℃預(yù)冷的70%、85%、100%乙醇脫水;②用16 μl GLP Her-2/CEP17探針和4 μl雜交緩沖液混勻制成探針混合液,78℃變性5 min后,45℃水浴箱中備用。切片自然干燥,加探針,置濕盒42℃恒溫箱雜交過夜,0.3%NP40和0.1%NP40分別洗滌后,DAPI復染,熒光顯微鏡下觀察結(jié)果。Her-2評判標準:高倍油鏡下計數(shù)20個腫瘤細胞,紅色信號為Ratio>2.2判定為陽性。上述結(jié)果均由兩名病理醫(yī)師依據(jù)以上標準進行雙盲法判定。

    1.3統(tǒng)計學方法應(yīng)用SPSS13.0統(tǒng)計軟件包進行χ2檢驗。

    2結(jié)果

    2.1IHC法檢測Her-2蛋白表達情況IHC法檢測80例胃食管結(jié)合部癌組織標本中,20例Her-2表達-,44例表達+,4例表達,12例表達,HER-2蛋白表達陽性率為15%。見圖1。

    圖1 胃食管結(jié)合部癌組織Her-2蛋白表達(IHC法,×400)

    2.2FISH法檢測Her-2的擴增情況FISH法檢測80例胃食管結(jié)合部癌標本,62例無基因擴增,18例呈點狀或簇狀擴增,與IHC對應(yīng)表達的12例相對應(yīng)的FISH檢測均Her-2基因擴增,陽性率為22.5%。

    圖2 胃食管結(jié)合部癌組織Her-2擴增檢測(FISH法,×1 000)

    2.4Her-2的表達與胃食管結(jié)合部癌的臨床病理體征的關(guān)系Her-2蛋白表達與患者的性別、年齡、浸潤深度、淋巴結(jié)有無轉(zhuǎn)移無明顯相關(guān)性(P<0.05),而與腫瘤分化程度及臨床分期明顯相關(guān)(P<0.05)。見表1。

    表1 Her-2的蛋白表達與胃食管結(jié)合部癌臨床

    3討論

    Her-2定位于人17號染色體,屬于表皮生長因子受體家族成員,毗鄰于拓撲異構(gòu)酶Ⅱa基因旁,Her-2調(diào)節(jié)基因?qū)Ω鞣N蛋白的表達來影響細胞分化、增殖和生存,從而可以促進腫瘤生長并誘導其惡性轉(zhuǎn)變〔3〕。在一些胃癌的研究中已顯示HER-2在胃腺癌中有過表達,并且與胃癌的發(fā)生發(fā)展密切相關(guān)〔4〕。其高表達與胃癌的預(yù)后和侵襲有關(guān)。在乳腺癌研究中已經(jīng)證實有15%~25%的病例發(fā)生Her-2基因的擴增和Her-2蛋白的過表達,這類患者往往是腫瘤惡性程度高、進展迅速的病例,且化療緩解期短,對標準化療和內(nèi)分泌治療易產(chǎn)生耐藥,患者的無病生存和總生存期縮短,針對Her-2的抗腫瘤靶向治療藥物,批準用于胃癌臨床的有Her-2抑制劑郝賽汀,主要針對胃癌組織Her-2高表達的患者,并在臨床治療應(yīng)用中取得了一定的療效〔5,6〕。

    目前世界許多國家和地區(qū)均出現(xiàn)胃遠端腫瘤發(fā)病率降低,而近端胃癌特別是胃食管結(jié)合部腺癌的發(fā)病率卻呈上升的趨勢,而且近年來的研究表明胃食管癌結(jié)合部腺癌的預(yù)后較單純食管癌和胃癌都差,示兩者生物學行為存在顯著差異〔7,8〕。Tanner等〔9〕認為在解剖學上賁門遠近5 cm這段范圍內(nèi)的胃癌發(fā)生率要遠高于胃部的胃癌,兩者Her-2的陽性表達率為24%vs12%,有顯著差異性。但在國內(nèi)也有研究表明:Her-2的陽性表達率和腫瘤的發(fā)生部位無關(guān)〔10〕。另有文獻報道Her-2蛋白在食管癌組織中的表達與分化程度相關(guān),而與性別、年齡、腫瘤大小、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、遠處轉(zhuǎn)移、浸潤深度和臨床分期等臨床指標之間,均未見明顯相關(guān)性〔11〕。

    本研究結(jié)果表明IHC法檢測Her-2在癌旁組織中無表達,而在胃食管結(jié)合部癌組織中過表達陽性率為15%,采用FISH檢驗的HER-2蛋白表達陽性率為22.5%,這與國內(nèi)和一些國外研究結(jié)果基本一致〔12〕。本文通過用FISH檢測法和IHC法檢測Her-2基因擴增情況結(jié)果顯示,胃食管結(jié)合部癌IHC檢測為的病例完全不需再行FISH檢測即可判定為陽性病例,IHC檢測-和+的病例無需再行FISH檢測可判定為陰性病例,IHC的病例歸為可疑類型,需再行FISH檢測。此外本結(jié)果研究還顯示:Her-2蛋白表達與食管胃結(jié)合部腺癌的發(fā)生有密切關(guān)系,說明Her-2參與了食管胃結(jié)合部腺癌的增殖、侵襲、轉(zhuǎn)移等行為〔13〕。

    綜上所述,Her-2蛋白過表達及基因擴增可能有助于胃食管結(jié)合部癌惡性程度的判斷和預(yù)后情況的初步評估,隨著對胃食管結(jié)合部癌疾病的發(fā)生、發(fā)展的深入研究,Her-2在胃食管結(jié)合部癌的作用機制、蛋白表達和基因擴增狀況會進一步明確,這將為胃食管結(jié)合部癌的個體化治療提供更多的理論基礎(chǔ)和臨床依據(jù)。

    4參考文獻

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    〔2015-01-10修回〕

    (編輯苑云杰/曹夢園)

    〔中圖分類號〕R735.2

    〔文獻標識碼〕A

    〔文章編號〕1005-9202(2016)11-2678-03;

    doi:10.3969/j.issn.1005-9202.2016.11.050

    第一作者:韓鴻彬(1970-),男,碩士,副主任醫(yī)師,主要從事胃腸道腫瘤的臨床及基礎(chǔ)研究。

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