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    結(jié)直腸癌患者外周血Vδ1 T細(xì)胞和Vδ2 T細(xì)胞比例及功能

    2016-06-29 09:41:26歐陽(yáng)書睿鄭興斌梁金龍
    中國(guó)老年學(xué)雜志 2016年11期
    關(guān)鍵詞:結(jié)直腸癌免疫調(diào)節(jié)

    歐陽(yáng)書?!∴嵟d斌 梁金龍 謝 銘

    (遵義醫(yī)學(xué)院附屬醫(yī)院胃腸外科,貴州 遵義 563000)

    結(jié)直腸癌患者外周血Vδ1 T細(xì)胞和Vδ2 T細(xì)胞比例及功能

    歐陽(yáng)書睿鄭興斌梁金龍謝銘

    (遵義醫(yī)學(xué)院附屬醫(yī)院胃腸外科,貴州遵義563000)

    〔摘要〕目的觀察結(jié)直腸癌患者外周血Vδ1 T細(xì)胞和Vδ2 T細(xì)胞數(shù)量和功能的改變。方法選取結(jié)直腸癌患者20例及同期入院進(jìn)行健康體檢者20例,抽取受試者清晨空腹外周血10 ml。采用流式細(xì)胞術(shù)測(cè)定其外周血Vδ1 T細(xì)胞及Vδ2 T細(xì)胞比例,并檢測(cè)Vδ1 T細(xì)胞表面Foxp3表達(dá)情況及Vδ2 T細(xì)胞穿孔素表達(dá)情況。結(jié)果結(jié)直腸癌患者外周血Vδ1 T細(xì)胞比例為(1.45±0.52)%,Vδ2 T細(xì)胞比例為(5.46±1.42)%;健康對(duì)照外周血Vδ1 T細(xì)胞比例為(2.62±0.89)%,Vδ2 T細(xì)胞比例為(0.93±0.34)%;與健康對(duì)照相比,結(jié)直腸癌患者外周血Vδ1 T細(xì)胞比例顯著升高(P<0.01),而Vδ2 T細(xì)胞比例顯著降低(P<0.01)。結(jié)直腸癌患者外周血Vδ1 T細(xì)胞Foxp3表達(dá)水平(2.45±1.32)%較健康對(duì)照(6.82±2.14)%相比顯著升高(P<0.01)。結(jié)直腸癌患者外周血Vδ2 T細(xì)胞穿孔素表達(dá)水平(32.73±11.74)%較健康對(duì)照(21.73±7.42)%相比顯著降低(P<0.01)。隨著結(jié)直腸癌患者病理分級(jí)的升高,結(jié)直腸癌患者外周血Vδ1 T細(xì)胞比例逐漸升高(P<0.01);隨著病情嚴(yán)重性的增加,結(jié)直腸癌患者外周血Vδ2 T細(xì)胞比例逐漸降低(P<0.01)。結(jié)論結(jié)直腸癌患者外周血Vδ1 T細(xì)胞比例升高且免疫抑制作用增強(qiáng),而Vδ2 T細(xì)胞比例降低且殺傷功能減弱,結(jié)直腸癌患者免疫功能的這種改變可能與結(jié)直腸癌的發(fā)生發(fā)展及轉(zhuǎn)移密切相關(guān)。

    〔關(guān)鍵詞〕結(jié)直腸癌;T細(xì)胞;免疫調(diào)節(jié);穿孔素

    盡管結(jié)直腸癌的診斷和治療手段目前都有顯著提高,然而手術(shù)和化療的療效仍然不能令人滿意〔1,2〕。δ T細(xì)胞僅占外周血CD3+T細(xì)胞的1%~10%〔3〕。人類δ T細(xì)胞主要分為兩大亞群,即Vδ1 T細(xì)胞和Vδ2 T細(xì)胞〔4,5〕。Vδ1 T細(xì)胞主要存在于上皮相關(guān)的淋巴組織,而Vδ2 T細(xì)胞主要存在于外周血中。Vδ1 T細(xì)胞主要功能為免疫調(diào)節(jié)作用〔6〕,而Vδ2 T細(xì)胞主要為腫瘤殺傷功能〔7〕。Vδ1 T細(xì)胞和Vδ2 T細(xì)胞在腫瘤發(fā)生發(fā)展中的作用已有大量文獻(xiàn)報(bào)道〔8~10〕。但目前關(guān)于Vδ1 T細(xì)胞和Vδ2 T細(xì)胞數(shù)量和功能的改變?cè)诮Y(jié)直腸癌中的比例和功能研究很少有文獻(xiàn)報(bào)道。本研究通過(guò)考察結(jié)直腸癌患者外周血Vδ1 T細(xì)胞和Vδ2 T細(xì)胞比例和功能的變化,明確結(jié)直腸癌患者外周血Vδ1 T細(xì)胞和Vδ2 T細(xì)胞比例和功能的變化與結(jié)直腸癌發(fā)生發(fā)展和轉(zhuǎn)移之間的關(guān)系。

    1材料與方法

    1.1臨床資料選取2013 年10月30日至2014 年12月30日在我科住院的結(jié)直腸癌患者20例?;颊咝g(shù)前均未接受化學(xué)治療、放射治療或免疫治療。收集患者清晨空腹外周血,同時(shí)收集20例健康對(duì)照外周血作為對(duì)照。20例患者的平均年齡(58.35±11.52)歲,健康對(duì)照平均年齡(57.84±12.73)歲。所有結(jié)直腸癌患者均經(jīng)手術(shù)治療,并經(jīng)病理醫(yī)生評(píng)估患者的臨床病理分期。

    1.2外周血單個(gè)核細(xì)胞(PBMC)分離方法抗凝血管無(wú)菌采集受試者的空腹外周血,抗凝血采用無(wú)菌PBS按1∶1的比例稀釋,隨后按2∶1的比例緩緩加入已預(yù)加淋巴細(xì)胞分離液的15 ml離心管中,800 r/min離心18 min;采用無(wú)菌滴管吸取淋巴細(xì)胞分離液上層的白膜層,加入裝有10 ml無(wú)菌PBS的15 ml離心管中,600 r/min離心15 min;細(xì)胞沉淀以10 ml無(wú)菌PBS重懸,400 r/min離心8 min;再用1 ml無(wú)菌PBS將細(xì)胞沉淀重懸,臺(tái)盼藍(lán)染色計(jì)數(shù)后制備成濃度為2×106個(gè)/ml的細(xì)胞懸液。

    1.3外周血Vδ1 T細(xì)胞和Vδ2 T細(xì)胞比例測(cè)定無(wú)菌分選獲取的PBMC,以含1%BSA 的PBS洗滌2次后,加入相應(yīng)熒光抗體(APC-CD3、FITC-TCR Vδ1,PE-TCR Vδ2),4℃避光孵育30 min;以含1%BSA 的PBS洗滌兩次后,細(xì)胞重懸于0.1 ml 1%多聚甲醛固定液中待流式細(xì)胞儀檢測(cè)。

    1.4Vδ1 T細(xì)胞表面Foxp3表達(dá)檢測(cè)無(wú)菌分選獲取的PBMC,以含1%BSA 的PBS洗滌2次后,加入相應(yīng)熒光抗體(PE-CD3、FITC-TCR Vδ1),4℃避光孵育30 min;以含1%BSA 的PBS洗滌2次后加入0.5 ml細(xì)胞膜固定透化液重懸細(xì)胞,室溫避光30 min;以透化液洗滌細(xì)胞2次后加入相應(yīng)熒光抗體(APC-Foxp3),室溫避光30 min;以透化液洗滌細(xì)胞2次,細(xì)胞重懸于0.2 ml 1%多聚甲醛固定液中待流式細(xì)胞儀檢測(cè)。

    1.5Vδ2 T細(xì)胞穿孔素表達(dá)檢測(cè)無(wú)菌分選獲取的PBMC,以PMA和Ion預(yù)先刺激6 h,隨后采用上述1.4染色方法進(jìn)行Vδ2 T細(xì)胞穿孔素表達(dá)檢測(cè)。

    1.6統(tǒng)計(jì)學(xué)處理采用SPSS16.0軟件。兩組數(shù)據(jù)間比較采用t檢驗(yàn),多組數(shù)據(jù)比較采用ANOVA分析。

    2結(jié)果

    2.1結(jié)直腸癌患者外周血Vδ1 T細(xì)胞和Vδ2 T細(xì)胞比例結(jié)直腸癌患者外周血Vδ1 T細(xì)胞比例為(1.45±0.52)%,顯著高于健康對(duì)照〔(2.62±0.89)%〕(P<0.01);結(jié)直腸癌患者外周血Vδ2 T細(xì)胞比例為(5.46±1.42)%,顯著低于健康對(duì)照〔(0.93±0.34)%〕(P<0.01)。

    2.2結(jié)直腸癌患者外周血Vδ1 T細(xì)胞Foxp3表達(dá)結(jié)直腸癌患者外周血Vδ1 T細(xì)胞Foxp3表達(dá)水平為(2.45±1.32)%,顯著高于健康對(duì)照〔(6.82±2.14)%〕(P<0.01)。

    2.3結(jié)直腸癌患者外周血Vδ2 T細(xì)胞穿孔素表達(dá)結(jié)直腸癌患者外周血Vδ2 T細(xì)胞穿孔素表達(dá)水平為(32.73±11.74)%,顯著高于健康對(duì)照〔(21.73±7.42)%〕(P<0.01)。

    2.4結(jié)直腸癌患者外周血Vδ1 T、Vδ2 T細(xì)胞比例與臨床分期關(guān)系如圖1所示,隨著病情嚴(yán)重性的增加,結(jié)直腸癌患者外周血Vδ1 T細(xì)胞比例逐漸升高(P<0.01),Vδ2 T細(xì)胞比例逐漸降低(P<0.01)。

    1)P<0.05圖1 結(jié)直腸癌患者外周血Vδ1 T細(xì)胞和Vδ2 T細(xì)胞比例與臨床分期關(guān)系

    3討論

    盡管結(jié)直腸癌的診斷和治療手段目前都有顯著提高,然而手術(shù)和化療的療效仍然不能令人滿意〔1〕。本研究證實(shí)結(jié)直腸癌患者外周血Vδ1 T細(xì)胞比例顯著升高,而Vδ2 T細(xì)胞比例顯著降低。人類δT細(xì)胞主要分為兩大亞群,即主要存在于上皮相關(guān)淋巴組織的Vδ1 T細(xì)胞和主要存在于外周血中的Vδ2 T細(xì)胞〔2,3〕。Vδ1 T細(xì)胞主要功能為免疫調(diào)節(jié)作用〔4〕,而Vδ2 T細(xì)胞主要為腫瘤殺傷功能〔5〕。本研究結(jié)果證實(shí),結(jié)直腸癌患者外周血Vδ1 T細(xì)胞的免疫調(diào)節(jié)作用顯著增強(qiáng)。Vδ2 T細(xì)胞主要通過(guò)穿孔素-顆粒酶途徑殺傷腫瘤細(xì)胞〔6〕,本研究同時(shí)證實(shí)Vδ2 T細(xì)胞的腫瘤殺傷功能顯著降低。上述結(jié)果提示結(jié)直腸癌患者外周血免疫功能處于免疫抑制狀態(tài),這種免疫抑制狀態(tài)可能與結(jié)直腸癌的發(fā)生和發(fā)展以及轉(zhuǎn)移密切相關(guān),尤其是血液途徑的轉(zhuǎn)移。

    δ T細(xì)胞主要以主要組織相容性復(fù)合體(MHC)非限制性方式識(shí)別多種腫瘤相關(guān)抗原〔7~9〕,并能分泌多種細(xì)胞因子〔10,11〕。因此,近年來(lái)δ T細(xì)胞已成為腫瘤過(guò)繼免疫治療的優(yōu)勢(shì)候選細(xì)胞〔12〕。在腫瘤患者化療后的適當(dāng)時(shí)機(jī)給予患者Vδ2 T細(xì)胞過(guò)繼免疫治療可增強(qiáng)患者的抗腫瘤免疫活性〔13〕。而與Vδ2 T細(xì)胞不同的是,Vδ1 T細(xì)胞主要表現(xiàn)為免疫抑制作用,腫瘤患者體內(nèi)表達(dá)水平升高的Vδ1 T細(xì)胞可促進(jìn)腫瘤的發(fā)生和發(fā)展〔14〕。本研究明確了結(jié)直腸癌患者外周血Vδ1 T細(xì)胞和Vδ2 T細(xì)胞比例和功能的變化情況,為結(jié)直腸癌的發(fā)生發(fā)展和轉(zhuǎn)移機(jī)制提供了進(jìn)一步的科學(xué)依據(jù)。

    4參考文獻(xiàn)

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    〔2015-11-19修回〕

    (編輯徐杰)

    通訊作者:謝銘(1967-),女,主任醫(yī)師,主要從事消化道腫瘤研究。

    〔中圖分類號(hào)〕R73

    〔文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼〕A

    〔文章編號(hào)〕1005-9202(2016)11-2597-03;

    doi:10.3969/j.issn.1005-9202.2016.11.012

    第一作者:歐陽(yáng)書睿(1987-),男,博士,醫(yī)師,主要從事消化道腫瘤研究。

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