氫化可的松致SD大鼠腎陽虛證卵巢早衰模型研究*

王　凱，劉帥帥，郭起岳，冷　平，蔣芳菲，孫曉生

1.廣州中醫(yī)藥大學(xué) 基礎(chǔ)醫(yī)學(xué)院(廣州　510006); 2.劉敏如女科醫(yī)系研究院(深圳　518000);3.廣東省醫(yī)學(xué)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心(佛山　528248); 4.成都中醫(yī)藥大學(xué)(成都 610075); 5.廣州中醫(yī)藥大學(xué)(廣州　510006)

氫化可的松致SD大鼠腎陽虛證卵巢早衰模型研究*

王凱1,2，劉帥帥1，郭起岳3，冷平4，蔣芳菲4，孫曉生5△

1.廣州中醫(yī)藥大學(xué) 基礎(chǔ)醫(yī)學(xué)院(廣州510006); 2.劉敏如女科醫(yī)系研究院(深圳518000);3.廣東省醫(yī)學(xué)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心(佛山528248); 4.成都中醫(yī)藥大學(xué)(成都 610075); 5.廣州中醫(yī)藥大學(xué)(廣州510006)

【摘要】目的探討氫化可的松致SD雌性大鼠腎陽虛證卵巢早衰(POF)模型的大體情況、卵巢指數(shù)、子宮指數(shù)、動(dòng)情周期紊亂情況、血清生殖激素水平的特征。方法以8～9周齡SPF級(jí)成年性成熟雌性SD大鼠(未孕未產(chǎn))為研究對(duì)象，模型組每日上午后下肢肌注氫化可的松32 mg·kg-1·d-1，1次/d，連續(xù)12 d，建立腎陽虛證大鼠POF模型，對(duì)照組為未注射氫化可的松的雌性SD大鼠。分兩個(gè)階段觀察比較在造模結(jié)束后第2天、第14天兩組在大鼠體質(zhì)量、卵巢指數(shù)、子宮指數(shù)、動(dòng)情周期、血清生殖激素水平的變化。結(jié)果1)模型組大鼠第一階段和第二階段注射氫化可的松后體質(zhì)量均低于對(duì)照組和注射前(P<0.05)，第一階段和第二階段體質(zhì)量差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)；2)模型組大鼠動(dòng)情周期紊亂，陰道涂片顯示動(dòng)情間期持續(xù)或延長(zhǎng)；3)模型組大鼠第一階段和第二階段注射氫化可的松后卵巢指數(shù)均低于對(duì)照組和注射前(P<0.05)，第二階段卵巢指數(shù)均數(shù)低于第一階段(P<0.05)，子宮指數(shù)無明顯差異(P>0.05)。4)與對(duì)照組和注射前相比，模型組大鼠第一階段和第二階段注射氫化可的松后血清E2下降，F(xiàn)SH、LH升高，F(xiàn)SH/LH升高，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)；5)與模型組第一階段相比，第二階段血清E2下降，F(xiàn)SH/LH下降，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)；模型組兩個(gè)階段的FSH、LH差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)。結(jié)論氫化可的松致大鼠腎陽虛卵巢早衰模型大鼠體質(zhì)量下降，呈明顯陽虛證型，動(dòng)情周期紊亂，動(dòng)情間期延長(zhǎng)或持續(xù)，卵巢指數(shù)降低，在給藥結(jié)束后生殖激素異常，且在給藥結(jié)束后14 d腎陽虛證持續(xù)。

【關(guān)鍵詞】氫化可的松；腎陽虛證；卵巢早衰；動(dòng)情周期；模型

卵巢早衰[1-3](premature ovarian failure,POF)是指女性40歲以前出現(xiàn)絕經(jīng)或下丘腦性閉經(jīng)，伴見圍絕期癥狀群，具有高促性腺激素和低雌激素特征的婦科疑難病，是婦科內(nèi)分泌領(lǐng)域的常見病，占婦女人群的1%～3%，卵巢早衰發(fā)病率有逐年上升和年輕化趨勢(shì)[4-7]。中醫(yī)婦產(chǎn)科中無卵巢早衰病名，但卵巢早衰癥狀與中醫(yī)婦產(chǎn)科中不孕癥、閉經(jīng)、月經(jīng)過少、血枯、未老經(jīng)水?dāng)?、絕經(jīng)前后諸癥等臨床表現(xiàn)特點(diǎn)類似，中醫(yī)腎陽虛證是上述中醫(yī)病、癥臨床常見的病理狀態(tài)之一，因此腎陽虛證也是卵巢早衰常見的證型之一。卵巢早衰動(dòng)物模型國(guó)內(nèi)外報(bào)道有很多種，比較常見的有化療藥物如環(huán)磷酰胺[8-10]、紫杉醇[11-12]、順鉑[12 ]等致卵巢早衰模型，中藥雷公藤[13-14]也可致卵巢早衰，基因敲除卵巢可致早衰模型[15-16]，其他方法[17-20]如放射線、半乳糖血癥、應(yīng)激模型、超促排卵模型、高血壓、自然衰老和藥物去勢(shì)等可致卵巢早衰模型。國(guó)內(nèi)腎陽虛證造模方法很多，主要分為3大類[21]：藥物干預(yù)，手術(shù)切除和模擬中醫(yī)病因病機(jī)。陳英華等[22]研究指出，腎陽虛模型應(yīng)從一般狀態(tài)觀察及試驗(yàn)檢測(cè)、客觀指標(biāo)、藥物反證,3個(gè)大的方面進(jìn)行診斷；旺建偉等[23]研究認(rèn)為，中醫(yī)證模型具有中醫(yī)理論特色，可以分為中醫(yī)一般狀態(tài)評(píng)價(jià)和借助現(xiàn)代醫(yī)學(xué)方法學(xué)進(jìn)行評(píng)價(jià)。在腎陽虛證藥物造模中，氫化可的松是最早使用[21，23]且公認(rèn)的造模藥物[24-25]。腎陽虛模型的建立是探討中醫(yī)證候?qū)嵸|(zhì)和中藥藥性實(shí)質(zhì)的基礎(chǔ)，也是現(xiàn)代中醫(yī)藥研究的重點(diǎn)，研究西醫(yī)的病與中醫(yī)證相結(jié)合的動(dòng)物模型，是中西醫(yī)結(jié)合研究的一種方法探討。目前腎陽虛證卵巢早衰的動(dòng)物模型報(bào)道并不多見，本研究試圖建立氫化可的松致SD雌性大鼠腎陽虛證卵巢早衰模型，觀察大鼠的大體情況、動(dòng)情周期、卵巢指數(shù)、子宮指數(shù)和血清生殖激素等，為臨床治療腎陽虛證卵巢早衰探索實(shí)驗(yàn)基礎(chǔ)。

1材料與方法

1.1材料

實(shí)驗(yàn)動(dòng)物：SPF級(jí)SD雌性大鼠32只，購(gòu)入體質(zhì)量200～240 g，年齡8～9周齡，由廣東省醫(yī)學(xué)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心提供，實(shí)驗(yàn)動(dòng)物使用許可證號(hào)SYXK(粵)2013-0002。主要實(shí)驗(yàn)儀器及試劑：氫化可的松注射液，批號(hào)1411403-A12，規(guī)格20 mL，100 mg，性狀：無色澄明液體，生產(chǎn)單位：國(guó)藥集團(tuán)容生制藥有限公司，購(gòu)自廣州中山醫(yī)藥有限公司；S-3000A電子天平：上海友聲衡器有限公司，感量0.1 g；BS224S電子天平：北京賽多利斯儀器有限公司，感量0.000 1g。自動(dòng)放免儀：中國(guó)科大中佳公司，E2試劑盒，批號(hào)20151220，F(xiàn)SH、LH試劑盒，批號(hào)20160102，均購(gòu)自北京北方生物技術(shù)研究所。

1.2實(shí)驗(yàn)方法

1.2.1檢疫對(duì)購(gòu)入SD大鼠檢疫3 d。期間每日檢查大鼠1次，如發(fā)現(xiàn)不健康大鼠立即剔除，選用健康大鼠進(jìn)行實(shí)驗(yàn)。

1.2.2飼養(yǎng)動(dòng)物飼養(yǎng)在廣東省醫(yī)學(xué)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心SPF級(jí)動(dòng)物房，識(shí)別方法：采用被毛染色法，使用飽和苦味酸對(duì)大鼠進(jìn)行編號(hào)，在大鼠體表不同部位的被毛涂染斑點(diǎn)，以示不同號(hào)碼。以大鼠皮膚染色和籠具雙重編號(hào)標(biāo)記識(shí)別。動(dòng)物飼養(yǎng)條件：5～6只/箱， 群養(yǎng)。飼養(yǎng)溫度與相對(duì)濕度：20～26 ℃，40%～70%，采用10 h∶14 h晝夜間斷照明；飼養(yǎng)室條件始終保持穩(wěn)定，以保證實(shí)驗(yàn)結(jié)果的可靠性。自由進(jìn)食飲水，飼料和飲用水均由廣東省醫(yī)學(xué)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心提供。

1.2.3分組對(duì)購(gòu)入SPF級(jí)成年性成熟雌性SD大鼠32只(未孕未產(chǎn))，適應(yīng)性飼養(yǎng)3 d后，將納入實(shí)驗(yàn)的大鼠隨機(jī)分為對(duì)照組16只、模型組16只。

1.2.4腎陽虛證POF造模模型組大鼠每日上午后下肢肌注氫化可的松32 mg·kg-1·d-1，1次/d，連續(xù)12 d。

1.2.5一般臨床情況觀察觀察記錄大鼠體形、被毛、皮膚、糞便、肌肉張力、步態(tài)、精神、呼吸和進(jìn)食等情況，同時(shí)觀察是否出現(xiàn)外生殖器潮濕、陰道口變大、觸之興奮等動(dòng)情期反應(yīng)， 1次/d。

1.2.6體質(zhì)量造模期及給藥期，每5 d稱量大鼠體質(zhì)量1次，每周測(cè)量大鼠攝食量1次。

1.2.7動(dòng)情周期檢查從氫化可的松注射造模第一天起，每天上午抓取大鼠進(jìn)行連續(xù)陰道涂片，性周期消失或動(dòng)情間期持續(xù)或延長(zhǎng)可確定造模成功。涂片在光鏡下觀察，根據(jù)陰道細(xì)胞形態(tài)判斷大鼠動(dòng)情周期。動(dòng)情前期：光鏡下以橢圓形有核上皮細(xì)胞占多數(shù)，白細(xì)胞和角質(zhì)化上皮細(xì)胞很少；動(dòng)情期：以片狀角化上皮細(xì)胞為主，白細(xì)胞和有核上皮細(xì)胞很少，動(dòng)情后期片狀角質(zhì)化上皮細(xì)胞、有核上皮細(xì)胞和白細(xì)胞均有，比例無明顯異常；動(dòng)情間期：白細(xì)胞占絕大多數(shù)，有核上皮和角質(zhì)化上皮細(xì)胞很少[26]。

1.2.8相關(guān)激素檢測(cè)于末次肌肉注射后第24 h(第一階段)和第14天(第二階段)，對(duì)照組和模型組各隨機(jī)抽取8只大鼠進(jìn)行取材檢測(cè)。腹主動(dòng)脈采血，離心取血清，放射免疫測(cè)定血清中E2、FSH和LH水平，計(jì)算FSH/LH值，激素檢測(cè)委托廣州中醫(yī)藥大學(xué)核醫(yī)學(xué)教研室檢測(cè)。

1.2.9大鼠子宮指數(shù)和卵巢指數(shù)測(cè)定采血后處死大鼠，取子宮及雙側(cè)卵巢，分別稱取濕重后，按以下公式計(jì)算：子宮指數(shù)=子宮濕重(mg)/體質(zhì)量(g)×100%；卵巢指數(shù)=卵巢濕重(mg)/體質(zhì)量(g)×100%。

2結(jié)果

2.1大鼠的一般情況

模型組大鼠在首日注射氫化可的松1 h后，大部分動(dòng)物隨即出現(xiàn)精神萎靡、蜷縮、活動(dòng)減少、嗜睡癥狀，持續(xù)注射氫化可的松后，大鼠精神萎靡，蜷縮怕冷癥狀逐漸加重，外觀豎毛、毛無光澤、拱背少動(dòng)、飲食減少、體質(zhì)量降低、反應(yīng)遲鈍、呼吸深遲、肉眼未見外生殖器潮濕、陰道口變大、觸之興奮等動(dòng)情期反應(yīng)等。模型組大鼠體質(zhì)量在造模前與對(duì)照組比較，差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P=0.28)。模型組大鼠在造模期和停止造模后體質(zhì)量(P<0.001，<0.001，<0.001，<0.001，0.01，0.01)、攝食量(P<0.001，<0.001，0.01，<0.001)均低于對(duì)照組，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)(表1、表2)。

表1　各組大鼠體質(zhì)量的變化±s)

注：與對(duì)照組比較，*P<0.05；造模前～停止造模第1天：n=16；停止造模第6天～停止造模第15天：n=8

表2　各組大鼠攝食量的變化±s)

注：與對(duì)照組比較，*P<0.05；造模第1周～造模第2周：n=16；停止造模第1周～停止造模第2周：n=8

2.2大鼠動(dòng)情周期

造模期與停止造模期，模型組大鼠動(dòng)情周期紊亂數(shù)量與對(duì)照組比較，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.001，<0.001)(表3)。且模型組大鼠陰道涂片顯示動(dòng)情間期持續(xù)或延長(zhǎng)。

表3　各組大鼠動(dòng)情周期紊亂數(shù)比較[n(%)]

注：與對(duì)照組比較，*P<0.05；造模期：n=16；停止造模期：n=8

2.3卵巢、子宮系數(shù)

停止造模第1天和第15天，模型組大鼠卵巢指數(shù)均低于對(duì)照組(P=0.01,P<0.001)，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)；子宮指數(shù)(P=0.86,0.69)差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)。停止造模第15天模型組大鼠卵巢指數(shù)低于停止造模第1天(P<0.001)，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)(表4)。

表4　各組大鼠卵巢、子宮指數(shù)的變化

注：與對(duì)照組比較，*P<0.05；與停止造模第1天模型組比較，#P<0.05

2.4血清激素水平

停止造模第1天和第15天，與對(duì)照組比較，模型組大鼠血清E2下降(P<0.001,<0.001)，F(xiàn)SH(P<0.001，0.01)、LH(P=0.02，<0.001)升高，F(xiàn)SH/LH(P=0.01,0.03)升高，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。與停止造模第1天模型組比較，停止造模第15天模型組大鼠E2(P=0.03)下降，F(xiàn)SH/LH(P<0.001)下降，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)；FSH(P=0.17)、LH(P=0.39)差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)(表5)。

表5　各組大鼠血清激素水平的變化±s)

注：與對(duì)照組比較,*P<0.05；與停止造模第1天模型組比較,#P<0.05

3討論

卵巢早衰的病因目前尚不明確，據(jù)報(bào)道[3,27-28]，可能與自身免疫功能異常、遺傳因素、酶缺乏、促性腺激素及其受體異常、代謝異常、感染因素和損傷因素等有關(guān)。POF患者因低雌激素水平、卵巢儲(chǔ)備功能下降導(dǎo)致不孕、月經(jīng)稀發(fā)、停經(jīng)、多汗、煩躁、失眠、抑郁等圍絕期癥狀，嚴(yán)重影響婦女生殖能力和生活質(zhì)量。早衰在《黃帝內(nèi)經(jīng)》中早有記載，《素問·陰陽應(yīng)象大論》：“帝曰：調(diào)此二者奈何？岐伯曰：能知七損八益，則二者可調(diào)，不知用此，則早衰之節(jié)也。年四十陰氣自半也，起居衰也?！薄秲?nèi)經(jīng)》明確提出早衰，并以四十為界，出現(xiàn)升陽之氣與降陰之氣各半。早衰即未老先衰，《內(nèi)經(jīng)》提出的早衰，與現(xiàn)代醫(yī)學(xué)提出的婦女35～40歲出現(xiàn)的停經(jīng)、卵巢早衰可以相互參照研究，中醫(yī)學(xué)中的婦女早衰就相當(dāng)于西醫(yī)的卵巢早衰?！端貑枴ど瞎盘煺嬲摗分赋?“女子七歲，腎氣盛，齒更發(fā)長(zhǎng)；二七而天癸至……五七，陽明脈衰于上，面皆焦，發(fā)始白……七七任脈虛，太沖脈衰少，天癸竭，地道不通，故形壞而無子也”，闡明了月經(jīng)的產(chǎn)生與調(diào)節(jié)以腎為主導(dǎo)，并界定“七”(年)為女性生長(zhǎng)變化的周期，“八”(年)為男性生長(zhǎng)變化的周期，因此，出現(xiàn)早衰的時(shí)間對(duì)男性而言，應(yīng)為五八即40歲左右，對(duì)女性而言，應(yīng)為五七即35歲左右，與現(xiàn)代醫(yī)學(xué)卵巢早衰的主要發(fā)病年齡一致。中醫(yī)“腎主生殖”，《素問·寶命全形論》說：“人身有形，不離陰陽”。腎的功能核心，在于腎陰腎陽之相對(duì)平衡協(xié)調(diào)，病態(tài)主要以偏虛為主。腎的陽陽盛衰關(guān)系到?jīng)_任二脈的通盛與協(xié)調(diào)，沖任之本在于腎，天癸的至與竭均與腎氣的盛衰密切相關(guān)。

劉敏如[3]主編的中醫(yī)婦產(chǎn)科學(xué)中新增了卵巢早衰病名，并將脾腎陽虛血瘀證列為第2個(gè)證型；在不孕癥中，腎陽虧虛證列為首個(gè)證型 ；在絕經(jīng)前后諸癥中，腎陽虛證為次于腎氣虛、腎陰虛之后的的第3大證型。藤秀香[29]對(duì)122名卵巢早衰患者進(jìn)行證候分析，其中脾腎陽虛證占15.57%。中醫(yī)古籍中有諸多關(guān)于脾腎陽虛、宮寒不孕的記載，如明代薛已《校注婦人良方·求嗣門》比較全面論述了不孕的病因病機(jī)，有子宮虛冷的記載：“竊謂婦人之不孕，亦有因六淫七情之邪，有傷沖任，或宿疾淹留，傳遺臟腑，或子宮虛冷……”，清代陳士鐸在《石室秘錄·卷之五·論子嗣》中認(rèn)為，“女子不能生子有十病?！『螢?？一胞胎冷也，一脾胃寒也……”?！陡登嘀髋菩陆狻しN子·下部冰冷不孕》[30]記載，“夫寒冰之地，不生草木，重陰之淵，不長(zhǎng)魚龍，今胞胎既寒，何能受孕”，指出真火不足，心腎陽虛，胞失溫煦，以致宮寒不能攝精而不孕。羅頌平[31]認(rèn)為，男女生殖方面的疾患，與臟腑、氣血、精神、環(huán)境、飲食等都有關(guān)系，但腎虛是主因，并區(qū)別其腎陰虛、腎陽虛、腎陰陽兩虛，確診后對(duì)證下藥，才可以收到預(yù)期效果。由于先天腎氣不足，命門火衰，腎陽虛損不能溫養(yǎng)子宮，令子宮發(fā)育不良；陽虛氣血失于溫煦，血行滯澀瘀結(jié)，導(dǎo)致先后天不足致精血匱乏，沖任虧虛，陰寒內(nèi)盛于沖任胞宮，則天癸早竭，宮冷不孕，胞宮失養(yǎng)經(jīng)水早斷，引起腎-天癸-沖任-子宮生殖軸失調(diào)，發(fā)生閉經(jīng)導(dǎo)致不孕。卵巢早衰與肝、脾、腎虛密切相關(guān)，可能通過影響下丘腦-垂體-卵巢軸引起卵巢早衰。隨著國(guó)家全面實(shí)施二孩政策，越來越多35～40歲育齡期婦女有著較強(qiáng)的生育愿意，而不孕癥呈高發(fā)趨勢(shì)，其中卵巢早衰是其中一個(gè)重要因素，因此研究卵巢早衰對(duì)防治不孕癥和改善婦女提早出現(xiàn)的圍絕期癥狀、改善生活質(zhì)量有重要意義。

卵巢分泌的最重要的雌激素是E2，雌激素對(duì)卵巢本身的發(fā)育是必需的，卵巢生發(fā)上皮的功能及卵巢皮質(zhì)各期卵泡的生長(zhǎng)和發(fā)育均需要雌激素的存在，顆粒細(xì)胞和卵泡膜細(xì)胞既是分泌雌激素的部位，其本身也有雌激素受體，并接受雌激素的影響，雌激素可通過下丘腦-垂體前葉，發(fā)生正反饋和負(fù)反饋?zhàn)饔?，間接影響卵巢的形態(tài)和功能[32]。卵巢指數(shù)也能直接反應(yīng)卵巢大體功能，卵巢的質(zhì)量與體積相關(guān)，Erdem等[33]研究認(rèn)為，不孕癥卵巢體積、基礎(chǔ)竇卵泡數(shù)與年齡成反比，卵巢早衰患者的卵巢體積和重量，隨著年齡增長(zhǎng)而減少，本模型中卵巢重量減少導(dǎo)致卵巢指數(shù)降低，說明腎陽虛證大鼠的卵巢重量和形態(tài)均發(fā)生改變。FSH和LH是垂體分泌的促性腺激素，F(xiàn)SH和LH升高是POF早期指標(biāo)，基礎(chǔ)FSH/LH值能更敏感反映卵巢儲(chǔ)備，F(xiàn)SH/LH值升高說明卵巢功能下降[1，34]。POF患者卵巢內(nèi)分泌的雌激素下降，對(duì)垂體的負(fù)反饋減弱甚至消失，導(dǎo)致FSH和LH升高。卵巢顆粒細(xì)胞還分泌兩種抑制素inhibin(抑制素A和抑制素B)，inhibin是卵巢儲(chǔ)備功能的主要標(biāo)志物[35]，對(duì)垂體的FSH合成和分泌有反饋抑制作用，Wu等[36]研究表明，inhibin B與FSH、LH以及FSH/LH呈負(fù)相關(guān)。在POF患者，由于卵巢功能下降，inhibin分泌減少，從而對(duì)FSH分泌的抑制減少，導(dǎo)致FSH的升高比LH升高快，是導(dǎo)致FSH/LH值升高的因素。本實(shí)驗(yàn)中停止造模第1天和第15天，與對(duì)照組比較，模型組大鼠血清E2下降，F(xiàn)SH、LH升高，F(xiàn)SH/LH比值升高，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。模型組停止造模第15天與停止造模第1天相比，大鼠E2下降，F(xiàn)SH/LH比值下降，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義；FSH、LH差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)。說明第一階段腎陽虛證卵巢早衰模型造模成功。第二階段模型持續(xù)，可能由于大鼠自我修復(fù)能力強(qiáng)，導(dǎo)致FSH/LH比值相對(duì)第一階段下降，但FSH、LH均較模型組及對(duì)照組升高，也能說明氫化可的松致SD雌性大鼠腎陽虛證卵巢早衰模型成功。

本實(shí)驗(yàn)通過外源性糖皮質(zhì)激素，使垂體促腎上腺皮質(zhì)激素釋放抑制，使腎上腺皮質(zhì)分泌類固醇激素減少，使動(dòng)物出現(xiàn)一系列耗竭現(xiàn)象，造成腎陽虛證動(dòng)物模型。給藥后大鼠出現(xiàn)腎陽虛證表現(xiàn)，外觀豎毛、毛無光澤、拱背少動(dòng)、精神萎靡、嗜睡、蜷縮怕冷、飲食減少、體質(zhì)量降低、反應(yīng)遲鈍、呼吸深遲，由于腎陽虛影響正常動(dòng)情周期，動(dòng)情間期顯著延長(zhǎng)或動(dòng)情周期消失，故肉眼未見外生殖器潮濕、陰道口變大、觸之興奮等動(dòng)情期反應(yīng)。在停藥后第二階段，大鼠攝食量略增多，體質(zhì)量緩慢增長(zhǎng)。

綜上所述，氫化可的松致大鼠腎陽虛卵巢早衰模型大鼠體質(zhì)量下降，呈明顯陽虛證型，動(dòng)情周期紊亂，動(dòng)情間期延長(zhǎng)或持續(xù)，卵巢指數(shù)降低，在給藥結(jié)束后生殖激素異常，且在給藥結(jié)束后14 d腎陽虛證持續(xù)。

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Study on Premature Ovarian Failure Model Induced by Hydrocortisone in SD Rats with Kidney Yang Deficiency Pattern

WangKai1,2,LiuShuaishuai1,GuoQiyue3,LengPing4,JiangFangfei4,SunXiaosheng5△.

1.CollegeofBasicMedicalSciences,GuangzhouUniversityofChineseMedicine,Guangzhou510006,China; 2.InstituteofLiuMinru′GynecologicalofTraditionalChineseMedicine,Shenzhen518000,China;3.GuangdongMedicalLaboratoryAnimalCenter,Guangzhou528248,China; 4.ChengduUniversityofTraditionalChineseMedicine,Chengdu610075,China; 5.GuangzhouUniversityofChineseMedicine,Guangzhou510006,China

【Abstract】ObjectivesTo explore the general situation, ovary index, uterus index, estrous cycle disturbance, and serum reproductive hormone in premature ovarian failure (POF) model induced by hydrocortisone in SD rats with kidney yang deficiency pattern. MethodsSPF sexually matured adult SD rats (8-9 weeks old, not pregnant) were recruited and divided into model and control groups. Hydrocortisone (32 mg/kg per day, for twelve days) was injected in SD rats in model group to construct POF model and SD rats in control group received nothing. After injection, the body weight, ovary index, uterus index, estrous cycle and serum reproductive hormone were compared in two phases (the second and fourteenth days respectively) after the finishing of model construction. Results1) After two phases of injection, the body weight in the model group was lower than that of the control group as well as before injection (P<0.05), there was no significant difference in body weight between the two phases (P>0.05); 2) There was disturbance in estrous cycle in the model group and vaginal smear showed the estrus was maintained or prolonged; 3) The ovary index in the model group was lower than that of the control group as well as before injection (P<0.05), the ovary index in the first phase was lower than that of the second phase (P<0.05). There was no significant difference in uterus index (P>0.05); 4) Compared with the control group and before injection, the concentration of serum E2 decreased, FSH and LH increased, FSH/LH increased, the differences were statistically significant (P<0.05). 5) Compared with the first phase in the model group, the concentration of serum E2 and FSH/LH decreased in the second phase (P<0.05), there was no significant difference in FSH and LH between the two phases in the model group(P>0.05). ConclusionHydrocortisone could cause estrous cycle disturbance, estrus extension, ovary index reduction, reproductive hormone abnormality, and the kidney yang deficiency pattern remained after fourteen days of injection.

【Key words】Hydrocortisone; Kidney yang deficiency pattern; Premature ovarian vailure; Estrous cycle；Model

doi:10.3969/j.issn.1674-2257.2016.01.003

*基金項(xiàng)目：廣東省教育部產(chǎn)學(xué)研結(jié)合基金項(xiàng)目(No:2012B091100485)

通信作者：△孫曉生，E-mail：sunxiaosheng@gzucm.edu.cn

【中圖分類號(hào)】R-332

【文獻(xiàn)標(biāo)志碼】A

網(wǎng)絡(luò)出版地址:http://www.cnki.net/kcms/detail/51.1705.R.20160221.2008.012.html

·論著·