甲狀腺轉(zhuǎn)錄因子及Napsin A在肺腺癌轉(zhuǎn)移至漿膜腔積液脫落細(xì)胞中的表達(dá)

曾 濤，翁永彬，楊宗梅

(四川省自貢市中醫(yī)醫(yī)院病理科，四川 自貢 643000)

甲狀腺轉(zhuǎn)錄因子及Napsin A在肺腺癌轉(zhuǎn)移至漿膜腔積液脫落細(xì)胞中的表達(dá)

曾 濤，翁永彬，楊宗梅

(四川省自貢市中醫(yī)醫(yī)院病理科，四川 自貢 643000)

目的 探討甲狀腺轉(zhuǎn)錄因子(thyroid transcription factor-1，TTF-1)及Napsin A在肺腺癌漿膜腔積液脫落細(xì)胞學(xué)中的診斷價(jià)值。方法 收集胸水及心包積液標(biāo)本67例，經(jīng)離心沉淀制作成細(xì)胞石蠟塊，經(jīng)HE切片篩檢出肺腺癌轉(zhuǎn)移42例、間皮細(xì)胞反應(yīng)性增生16例及乳腺癌轉(zhuǎn)移9例。采用免疫組織化學(xué)SP法標(biāo)記三組細(xì)胞中TTF-1、Napsin A的表達(dá)。結(jié)果 TTF-1在肺腺癌中表達(dá)38例(90.48%)，在增生間皮細(xì)胞及乳腺癌細(xì)胞中無表達(dá)；Napsin A在肺腺癌中表達(dá)35例(83.33%)，在增生間皮細(xì)胞中表達(dá)僅1例(6.25%)，肺腺癌中TTF及Napsin A的表達(dá)明顯高于其他兩組，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P< 0.001)。結(jié)論 TTF-1和Napsin A是兩項(xiàng)重要的肺腺癌標(biāo)記物，對(duì)鑒別漿膜腔積液脫落細(xì)胞學(xué)的組織來源具有重要價(jià)值。

肺腺癌；脫落細(xì)胞學(xué)；細(xì)胞塊；免疫組化

近年來，肺腺癌的發(fā)病呈明顯上升趨勢(shì)并年輕化，且早期多無特異癥狀，部分患者以胸腔或/和心包腔積液為首發(fā)癥狀，需行積液脫落細(xì)胞檢查以明確診斷，但在轉(zhuǎn)移的早期，積液中的惡性細(xì)胞成分較少，與脫落的增生漿膜腔間皮細(xì)胞混合在一起，以常規(guī)脫落細(xì)胞學(xué)及普通HE染色很難鑒別診斷。細(xì)胞塊是將收集的脫落細(xì)胞做成石蠟塊，具有組織學(xué)的諸多優(yōu)點(diǎn)[1]，但因缺乏腫瘤特有的間質(zhì)背景成分，又難以憑間質(zhì)血管、神經(jīng)間的關(guān)系協(xié)助診斷良、惡性。為此，本研究在制作細(xì)胞石蠟塊的基礎(chǔ)上，借助組織起源特異性因子—甲狀腺轉(zhuǎn)錄因子(thyroid transcription factor-1，TTF-1)及Napsin A對(duì)胸水細(xì)胞塊中的異型細(xì)胞成分進(jìn)行標(biāo)記，以提高診斷準(zhǔn)確率，現(xiàn)報(bào)道如下。

1 材料與方法

1.1 材料 收集2012年1月至2015年6月我院送檢的胸腔積液54例及心包積液13例，全部病例均有臨床、病理(手術(shù)病理診斷史、細(xì)胞異型性、免疫細(xì)胞化學(xué)表達(dá)模式結(jié)果)、輔助檢查(胸水生化酶指標(biāo)、CT影像資料)等完整的診斷資料。

1.2 方法

1.2.1 細(xì)胞塊制備方法 將胸水或心包積液標(biāo)本靜置4小時(shí)后，適量?jī)A去上部標(biāo)本、保留其底部胸水約20 ml，搖勻后取10 ml標(biāo)本于一次性軟塑料試管中，離心機(jī)2000 r/min離心5 min，棄去上清液(血性胸水需加入適量50%的乙醇溶解紅細(xì)胞)。若離心后沉淀標(biāo)本較少，可重復(fù)加樣離心一次。輕輕傾去上清液，沿沉淀物邊緣上2 mm處用剪刀剪去沉淀物外多余的試管，剩余試管底部及標(biāo)本直接用拭鏡紙包裹于塑料包埋盒，固定于中性福爾馬林中，然后放入脫水機(jī)中進(jìn)行固定、脫水、浸臘，包埋。并行常規(guī)HE染色。

1.2.2 免疫細(xì)胞化學(xué)方法 步驟同免疫組織化學(xué)SP法、DAB染色?？乖迯?fù)方法用pH為6.0的檸檬酸鹽緩沖液高溫高壓修復(fù)。每次均以已知陽性肺腺癌組織標(biāo)本做陽性對(duì)照、TBS代替一抗做陰性對(duì)照。所有一抗、試劑盒均由福州邁新生物技術(shù)開發(fā)有限公司提供。

1.3 結(jié)果判讀 TTF-1位于胞核呈棕黃色顆粒狀為陽性(胞質(zhì)非特異著染者視為污染，重新做一遍后仍無改善者，判為陰性)，Napsin A位于胞質(zhì)呈棕黃色顆粒狀為陽性。

1.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法 用SPSS 17.0統(tǒng)計(jì)軟件進(jìn)行數(shù)據(jù)分析。組間比較采用χ2檢驗(yàn)。P< 0.05為差異有統(tǒng)計(jì)意義。

2 結(jié)果

2.1 HE染色結(jié)果 可見大量異型細(xì)胞，表現(xiàn)為胞核著濃染、核形不規(guī)整，排列呈巢團(tuán)或彌漫成片者共67例，依據(jù)病史資料、影像資料、輔助檢查資料提示，其中肺腺癌42例，乳腺癌9例，反應(yīng)性間皮增生16例。

圖1 肺腺癌患者心包積液細(xì)胞塊中TTF-1、Napsin A的表達(dá) a：異型細(xì)胞核表達(dá)TTF-1；b：異型細(xì)胞質(zhì)表達(dá)Napsin A (IHC DAB染色 ×100)

2.2 免疫細(xì)胞化學(xué)染色 免疫細(xì)胞化學(xué)檢測(cè)發(fā)現(xiàn)，肺腺癌的TTF-1陽性表達(dá)率高達(dá)90.48%，特異性達(dá)100%；Napsin A的陽性表達(dá)率達(dá)83.33%，特異性達(dá)97.6%，見表1、表2。

表1 肺腺癌及反應(yīng)性增生間皮細(xì)胞、乳腺癌中免疫細(xì)胞化學(xué)表達(dá)結(jié)果

表2 肺腺癌及反應(yīng)性增生間皮細(xì)胞表達(dá)模式 (n)

3 討論

由于肺腺癌多起源于肺泡，常發(fā)生在周圍肺組織，故早期臨床多無癥狀，往往因出現(xiàn)轉(zhuǎn)移特別是胸腔轉(zhuǎn)移引起積液時(shí)方就診，且一旦肺腺癌出現(xiàn)漿膜腔惡性積液時(shí)，常因肺壓迫性萎縮、肺實(shí)變，普通X射線甚至CT也常難以發(fā)現(xiàn)病灶，即使在CT引導(dǎo)或超聲引導(dǎo)下也難以穿刺到準(zhǔn)確病灶并獲取到有價(jià)值的標(biāo)本；而此時(shí)，胸腔及心包腔的積液穿刺卻相對(duì)容易得多，可不借助任何影像引導(dǎo)即可獲得標(biāo)本進(jìn)行脫落細(xì)胞學(xué)檢查。雖然脫落細(xì)胞學(xué)檢查方法因?yàn)樵O(shè)備簡(jiǎn)單，操作簡(jiǎn)便，患者痛苦少而易于接受；然而由于癌轉(zhuǎn)移的初期患者積液中的惡性細(xì)胞成分較少，與脫落的漿膜腔間皮細(xì)胞混合在一起，從常規(guī)脫落細(xì)胞學(xué)及普通HE染色很難鑒別診斷。

TTF-1是一種分子量為38～40 KDa的核蛋白，在胎兒肺組織和成人Ⅱ型肺泡上皮、甲狀腺濾泡上皮中存在，而在Ⅰ型肺泡上皮中不表達(dá)。由于甲狀腺來源的癌超過95%的類型為乳頭狀癌，其預(yù)后良好，幾乎不發(fā)生胸腔及心包腔轉(zhuǎn)移，故在鑒別是否為肺源性腺癌中TTF-1具有理論上的特異性。由于TTF-1陽性定位在胞核，故在免疫細(xì)胞化學(xué)的定位分析上具有技術(shù)上的特異性。事實(shí)上，我們的實(shí)驗(yàn)結(jié)論顯示陽性均為胞核，即使有極少量的異型細(xì)胞，也能很好的表達(dá)TTF-1(如圖1)。

Napsin 是一種胃酶樣天冬氨酸蛋白酶，有兩種密切相關(guān)的Napsin A和Napsin B，其中Napsin A是一種分子量接近38 KDa的單鏈蛋白，在人類的肺和腎內(nèi)高表達(dá)。因此在肺的轉(zhuǎn)移性腺癌的組織起源上有重要的應(yīng)用價(jià)值，有報(bào)道Napsin A和TTF-1在轉(zhuǎn)移性肺腺癌中表達(dá)率分別達(dá)87.0%和81.5%[2]，雖然二者間差異沒有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，但Napsin A的評(píng)分高于TTF-1(P< 0.001)，且在肺原發(fā)性腺癌中表達(dá)亦如此。而我們的資料分別達(dá)83.33%和90.48%，且特異性均較高：Napsin A的表達(dá)特異性達(dá)97.6%，TTF-1的特異性達(dá)100%。當(dāng)然也有的通過組織芯片方法研究了1674例含鱗癌及小細(xì)胞癌在內(nèi)的大宗病例，而發(fā)現(xiàn)Napsin A比TTF-1在鑒別原發(fā)性肺癌中更敏感且特異[3]，說明與癌的類型有關(guān)。但該報(bào)道表達(dá)率也均較高，研究表明在肺腺癌與肺鱗癌的鑒別中也有重要價(jià)值，說明該兩項(xiàng)標(biāo)記在肺源性癌的脫落細(xì)胞學(xué)中也有重要的病理診斷價(jià)值。同時(shí)研究中發(fā)現(xiàn)，有2個(gè)病例TTF-1陰性表達(dá)，而Napsin A陽性，由此可見聯(lián)合應(yīng)用二者可提高陽性檢出率。有報(bào)道[4]用雙染法同時(shí)標(biāo)記胸水中肺腺癌細(xì)胞，發(fā)現(xiàn)TTF-1和Napsin A在83%的肺腺癌病例中同時(shí)表達(dá)TTF-1及Napsin A，4%的病例單表達(dá)TTF-1，9%的病例單表達(dá)Napsin A。也支持我們的實(shí)驗(yàn)。

但需注意的是，TTF-1和Napsin A在肺外組織起源性腫瘤中亦有報(bào)道，比如結(jié)腸、子宮內(nèi)膜、宮頸和卵巢等[3，5，6]，因此診斷上最好聯(lián)合應(yīng)用二者并且必須結(jié)合臨床病史、尤其是繼往手術(shù)病理診斷史、影像學(xué)(超聲及CT、MRI、X射線)甚至是重要的生化指標(biāo)(腫瘤酶譜)，這樣的診斷才更可靠。同時(shí)，我們?cè)诮窈蟮难芯恐幸e累非肺源性腫瘤的免疫組化表型以提高對(duì)該標(biāo)記的全面應(yīng)用性認(rèn)識(shí)。

[1] 劉福川，王小兵，陳守菊，等.胸腹水細(xì)胞塊的免疫細(xì)胞化學(xué)研究[J].中國(guó)腫瘤，2004，13(1)：42-44.

[2] Kim WH，Chung DH，Kim MY，et al.Napsin A is a useful marker for metastatic adenocarcinoma of pulmonary origin[J].Histopathology，2014，65(2)：195-206.

[3] Turner BM，Cagle PT，Sainz IM，et al.NapsinA，a new marker for lung adenocarcinoma，is complementary and more sensitive and specific than thyroid transcription factor 1 in the differential diagnosis of primary pulmonary carcinoma：Evaluation of 1674 cases by tissue micorarray[J].Archives of pathology﹠laboratory medicine，2012，136(2)：163-171.

[4] Liu L，Cohen C，Siddiqui MT.Thyroid transcription factor 1 and napsin A double staining in lung adenocarcinoma in plerual fluid[J].Acta Cytologica：The Journal of clinical cytology and cytopathology，2012，56(4)：425-430.

[5] Fan L，Li F，Memahon L，et al.Diagnostic utility of PAX8，TTF-1 and NapsinA for discriminating metastatic carcinoma from primary adenocrcinoma of the lung[J].Biotechnic and Histochemistry，2012：87(8)：30-34.

[6] Jennifer J，F(xiàn)indeis Hosey，Qi yang，et al.Compbination of NapsinA and TTF-1 immunohistochemistry helps in differential primary lung adenocarcinoma from metastatic carcinoma in the lung[J].Applied immunohistochemistry and molecular morphology：AIMM，2011，9(4)：313-317.

The expression of TTF-1 and Napsin A in metastased tumor cells in pleural effusions of pulmonary adenocarcinoma

ZENG Tao，WENG Yong-bin，YANG Zong-mei

(Department of Pathology，Zigong City Hospital of Traditional Chinese Medical，Zigong 643000，China)

Objective To investigate the diagnostic value of thyroid transcription factor-1(TTF-1) and Napsin A for identification of pulmonary adenocarcinoma cells in pleural effusions.Methods The samples of pleural effusions and pericardial effusions were collected from 67 patients and made to be paraffin cytoblocks after precipitation by centrifugation.From these samples，42 cases were identified as lung adenocarcinoma，16 cases as mesothelial cell reactive hyperplasia and 9 cases as breast adenocarcinoma by using HE staining.Then，expressions of TTF-1 and Napsin A in the three types of diseases were examined with immunohistochemical SP method.Results TTF-1 expression was positive in 38 cases with pulmonary adenocarcinoma but negative in cases with hyperplasia mesothelial cells and breast adenocarcinomas.Napsin A expression was positive in 35 cases with pulmonary adenocarcinoma and one case with hyperplasia of mesothelial cells.The differences were all significant (P< 0.001).Conclusion These data suggest that TTF-1 and Napsin A are two important markers for the pulmonary adenocarcinoma.They are very usefully to identify the cells in pleural effusions.

Pulmonary adenocarcinoma； Exfoliative cytology； Paraffin cytoblock； Immunohistochemistry

R446.8； R734.2

A

1672-6170(2016)03-0062-03

2015-09-15；

2016-02-26)