HPLC法測定醫(yī)院制劑氣血雙補膠囊中阿魏酸的含量

梁　萍　彭建彪

紅河州食品藥品檢驗所，云南　蒙自　661100

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藥物研究

HPLC法測定醫(yī)院制劑氣血雙補膠囊中阿魏酸的含量

梁萍彭建彪

紅河州食品藥品檢驗所，云南蒙自661100

【摘要】目的：建立HPLC測定氣血雙補膠囊中阿魏酸含量的方法。方法：采用十八烷基硅烷鍵合硅膠色普柱(Durashell C18柱，250mm×4.6mm，5μm )；流動相：甲醇-0.085%磷酸溶液(36∶64)；檢測波長：316nm；流速:1.0ml/min;柱溫：30℃。結(jié)果：阿魏酸在0.0123～0.2458μg范圍內(nèi)呈現(xiàn)良好的線性關(guān)系(r=0.9999)，平均回收率為99.65%(RSD=0.86%，n=6)。結(jié)論：本方法的專屬性強，準(zhǔn)確度高，重現(xiàn)性良好，可用于氣血雙補膠囊的質(zhì)量控制。

【關(guān)鍵詞】氣血雙補膠囊；含量測定；阿魏酸；高效液相色譜法

氣血雙補膠囊為云南省個舊市中醫(yī)院院內(nèi)制劑，由當(dāng)歸、黃芪等八味中藥制備而成，具有補血養(yǎng)肝、益氣安神的功效。當(dāng)歸有活血補血，調(diào)經(jīng)止痛，潤腸通便的作用。研究表明當(dāng)歸的主要活性成分為阿魏酸，為含當(dāng)歸制劑質(zhì)量控制的主要指標(biāo)。但現(xiàn)行的醫(yī)院制劑氣血雙補膠囊執(zhí)行標(biāo)準(zhǔn)無阿魏酸的含量測定項目，為保證該制劑質(zhì)量的穩(wěn)定性，研究采用高效液相色譜法對處方中當(dāng)歸主要活性成分阿魏酸進(jìn)行研究，并對該方法進(jìn)行了驗證[1]。

1儀器與試藥

1.1儀器Agilent1260型高效液相色譜儀；Sartorius BP211D電子天平；奧豪斯AR224CN電子天平。

1.2試藥阿魏酸對照品(批號：110773-200611，中國藥品生物制品檢定所)；氣血雙補膠囊(批號：20140517、20140518、20140622、20140725，云南省個舊市中醫(yī)院)。甲醇為色譜純；磷酸為優(yōu)級純；水為超純水。

2方法與結(jié)果

2.1色譜條件[2]色譜柱：Durashell C18(250mm×4.6mm，5μm)；流動相：甲醇-0.085%磷酸溶液(36∶64)；流速：1.0ml/min；柱溫：30℃；檢測波長：316nm。理論板數(shù)按阿魏酸峰計算應(yīng)不低于3000。

2.2對照品溶液的制備取阿魏酸對照品適量，精密稱定，置棕色瓶中，加70%甲醇制成每1ml含阿魏酸12μg的溶液，即得。

2.3供試品溶液的制備[2]取裝量差異項下的本品內(nèi)容物，混勻，取約0.3g，精密稱定，置具塞錐形瓶中，精密加入70%甲醇20ml，密塞，搖勻，稱定重量，加熱回流30min，放冷，再稱定重量，用70%甲醇補足減失的重量，搖勻，濾過，取續(xù)濾液，即得。

2.4陰性樣品溶液的制備按照處方工藝制備不含當(dāng)歸的樣品溶液，然后按“2.3”項供試品溶液的制備方法進(jìn)行處理，即得陰性樣品溶液。

2.5專屬性試驗分別精密吸取對照品溶液、供試品溶液和陰性樣品溶液各10μl，注入液相色譜儀，測定，結(jié)果供試品色譜圖中呈現(xiàn)與對照品保留時間一致的色譜峰，陰性樣品在與阿魏酸對照品相同的保留時間處未顯色譜峰，可見其他原輔料對主成分無干擾。見圖1-3。

2.6線性關(guān)系考察分別精密吸取“2.2”中對照品溶液(每1ml含阿魏酸12.29μg)1、2、4、8、10、12、16、20μl注入高效液相色譜儀，按上述色譜條件測定，記錄峰面積，以峰面積為縱坐標(biāo)，對照品進(jìn)樣量(μg)為橫坐標(biāo)，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，并計算線性回歸及相關(guān)系數(shù)。結(jié)果表明：阿魏酸在0.0123～0.2458μg 范圍內(nèi)與峰面積線性關(guān)系良好，其回歸方程為：Y=39.5398X-0.0478(r=0.9999)。

2.7穩(wěn)定性試驗取同一氣血雙補膠囊供試品溶液，按上述色譜條件分別在0、1、2、4、8、16、24h時進(jìn)樣測定，測得阿魏酸峰面積積分值分別為237.03133、235.70355、230.98601、231.42957、233.51109、234.60004、233.93927，RSD為0.93%，表明供試品溶液在24h內(nèi)穩(wěn)定。

2.8精密度試驗精密吸取對照品溶液，按上述色譜條件，連續(xù)測定6次，測得阿魏酸峰面積積分值分別為：395.38632、394.72717、394.55893、394.55948、395.34073、395.39258，RSD為0.11%，結(jié)果表明儀器精密度良好。

2.9重復(fù)性試驗取同一批號(批號20140725)樣品，按供試品溶液制備項下操作，平行制備6份，按上述色譜條件測定，阿魏酸的平均含量為0.4755mg/g，RSD為0.61%，結(jié)果表明重復(fù)性良好。

2.10回收率試驗精密稱取6份供試品(批號：20140725，阿魏酸含量為0.4755mg/g)，每份約0.15g，按1∶1比例加入阿魏酸對照品，即加入阿魏酸對照品溶液(阿魏酸濃度0.1229mg/ml)0.59ml，揮去溶劑。然后按供試品溶液處理方法同法處理，將處理好的供試品溶液按含量測定方法同法測定，計算回收率，阿魏酸的平均回收率為99.70%，RSD為0.79%。結(jié)果見表2。

2.11樣品含量測定取4批氣血雙補膠囊樣品，按供試品溶液的制備方法操作，按“2.1”項下色譜條件測定阿魏酸的含量，結(jié)果見表3。

表2　阿魏酸加樣回收率試驗結(jié)果　(n=6)

表3　阿魏酸含量測定結(jié)果　(n=2)

3討論

阿魏酸是一種廣泛存在于植物中的酚酸，藥理研究發(fā)現(xiàn)阿魏酸具有抗血小板聚集，抑制血小板5-羥色胺釋放，

抑制血小板血栓素A2(TXA2)的生成，增強前列腺素活性，鎮(zhèn)痛，緩解血管痙攣等藥理活性，且毒性較低[3]。阿魏酸在阿魏、當(dāng)歸、川芎、升麻、酸棗仁等中藥材中的含量較高 ，是這些中藥的有效成分之一，已經(jīng)作為中成藥的質(zhì)量控制指標(biāo)之一。研究結(jié)果表明，采用HPLC法測定氣血雙補膠囊中阿魏酸的含量，專屬性強，峰形好，且與雜質(zhì)峰基線分離，效果較為理想。此外，實驗參照2015年版《中國藥典》一部中當(dāng)歸含量測定項下的提取方法，用70%甲醇加熱回流30min提取，當(dāng)歸中阿魏酸較為完全。綜上所述，本法專屬性強，操作方便，準(zhǔn)確度高，重現(xiàn)性良好，可以用于醫(yī)院制劑氣血雙補膠囊的質(zhì)量控制。

參考文獻(xiàn)

[1] 國家藥典委員會.中華人民共和國藥典(四部)[S].北京：中國醫(yī)藥科技出版社，2015：374-377.

[2] 國家藥典委員會. 中華人民共和國藥典(一部)[S].北京：中國醫(yī)藥科技出版社，2015：133-134.

[3] 胡益勇，徐曉玉.阿魏酸的化學(xué)和藥理研究進(jìn)展[J].中成藥，2006，28(2)：253-255.

Determination of the Content of Ferulic Acid in the Capsule of Qi and Blood

LIING PingPENG Jianbiao

HongHe Prefeture Institute for Food and Drug Control, Mengzi 661100, China

Abstract:Objective To establish a HPLC method for the determination of ferulic acid in Qi and blood capsule. Methods Eighteen using C18 column chromatography (Durashell C18 column:250mm×4.6mm，5μm)；Mobile phase: methanol -0.085% phosphoric acid solution (36: 64)；Detection wavelength: 316nm；Flow rate: :1.0ml/min；Column temperature：30℃. Results Ferulic acid showed a good linear relationship in the range of 0.0123 μg to 0.2458μg(r=0.9999)，The average recovery was 99.65% (RSD=0.86%, n=6). Conclusion The method has strong specificity and high accuracy,good reproducibility, can be used for the quality control of Qi and blood capsule.

Key words:Qi and Blood Double Fill Capsule；Determination；Ferulic Acid；HPLC

【中圖分類號】R284.1

【文獻(xiàn)標(biāo)志碼】A

【文章編號】1007-8517(2016)09-0009-03

(收稿日期：2016.03.19)