氧化魚油飼料中添加維生素C對(duì)大口黑鱸幼魚生長及抗氧化能力的影響

袁瑞敏，劉永堅(jiān)，王貴平，姜瑞麗，佘澤杰，梁桂英，田麗霞

（1.廣東海大集團(tuán)股份有限公司，廣東 廣州 511400；2.中山大學(xué)生命科學(xué)學(xué)院，廣東 廣州 510275；3.廣東海大畜牧獸醫(yī)研究院有限公司，廣東 廣州 511400）

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氧化魚油飼料中添加維生素C對(duì)大口黑鱸幼魚生長及抗氧化能力的影響

袁瑞敏1，劉永堅(jiān)2，王貴平3，姜瑞麗1，佘澤杰1，梁桂英2，田麗霞2

（1.廣東海大集團(tuán)股份有限公司，廣東 廣州 511400；2.中山大學(xué)生命科學(xué)學(xué)院，廣東 廣州 510275；3.廣東海大畜牧獸醫(yī)研究院有限公司，廣東 廣州 511400）

摘 要：以魚粉作為主要蛋白源、脂肪源選用魚油、面粉為糖源，設(shè)計(jì)了等氮（45.2%）等能的6組試驗(yàn)飼料，分別為新鮮魚油加VC0 mg/kg（FF0）、新鮮魚油加VC700 mg/kg（FF700）、氧化魚油加VC0 mg/kg （OF0）、氧化魚油加VC350 mg/kg（OF350）、氧化魚油加VC700 mg/kg（OF700）及氧化魚油加VC1 400 mg/kg （OF1400）。新鮮魚油和氧化魚油的過氧化值分別為7.67 meq/kg和128.47 meq/kg。飼喂大口黑鱸75 d后，評(píng)價(jià)氧化魚油和VC對(duì)大口黑鱸幼魚抗氧化能力的影響。結(jié)果表明：各組間大口黑鱸存活率差異顯著；肝臟谷胱甘肽過氧化物酶（GSH-PX）活性隨著差異添加量的增加而升高。新鮮魚油的兩個(gè)飼料組中，肝臟GSH-PX活性在FF0和FF350組之間沒有顯著性差異，但其含量FF700組高于FF0組。在氧化魚油的4個(gè)飼料組中，肝臟GSH-PX活性O(shè)F0組顯著低于其他組，且隨著VC添加量的升高呈現(xiàn)上升趨勢?？傊?，飼料的氧化魚油會(huì)增加魚體內(nèi)的氧化壓力，但添加超過700 mg/kg的VC即可改善大口黑鱸幼魚的生長及健康狀況。

關(guān)鍵詞：大口黑鱸；維生素C；存活率；抗氧化能力；

大口黑鱸（Micropterus salmoides）是我國最重要的淡水經(jīng)濟(jì)魚類之一，但至今鮮有全程利用配合飼料飼養(yǎng)的成功案例。研究開發(fā)大口黑鱸配合飼料成為當(dāng)前行業(yè)關(guān)注的熱點(diǎn)。就廣東省大口黑鱸養(yǎng)殖情況而言，因地處亞熱帶臨海地區(qū)，全省全年天氣狀況基本以高溫潮濕為主，飼料很容易氧化變質(zhì)，而魚油是大口黑鱸人工養(yǎng)殖中提供多不飽和脂肪酸的最重要原料之一。魚油氧化一方面會(huì)影響飼料的適口性，降低飼料的營養(yǎng)價(jià)值以及消化率，另外因其氧化而生成的低分子醛和酮類本身具有毒性，會(huì)對(duì)魚蝦等產(chǎn)生直接的毒害作用［1］。由于飼料油脂氧化酸敗而引起的養(yǎng)殖魚類病害時(shí)有發(fā)生，給水產(chǎn)養(yǎng)殖業(yè)造成極大損失［2-4］。

劉偉等［3］通過飼喂鯉魚種以含有氧化豆油的飼料來研究氧化油脂對(duì)鯉魚生長及相關(guān)指標(biāo)的影響，發(fā)現(xiàn)鯉魚魚種在攝入含有氧化酸敗大豆油脂的飼料后，會(huì)導(dǎo)致魚體內(nèi)的脂質(zhì)過氧化以及血清、肝過氧化脂質(zhì)在體內(nèi)積累。高淳仁等［4］研究指出，如果作為機(jī)體重要抗氧化防御系統(tǒng)的肝和紅細(xì)胞組織內(nèi)的脂質(zhì)過氧化加重，則機(jī)體對(duì)過氧化脂質(zhì)代謝和自由基的清除產(chǎn)生不良影響，真鯛幼魚攝取氧化油脂后，其肝組織中過氧化物累積增加，并且其積累的程度和飼料中脂質(zhì)氧化程度呈正相關(guān)。任澤林等［5］研究表明，氧化魚油能夠降低鯉魚肝胰臟的抗氧化機(jī)能，是因?yàn)檠趸~油會(huì)消耗魚體內(nèi)的維生素E。葉仕根［6］研究氧化魚油對(duì)鯉魚造成危害的病理，指出攝食含有氧化魚油的飼料，可以導(dǎo)致鯉魚出現(xiàn)瘦背病，影響鯉魚生長，造成生長不良，此外，還發(fā)現(xiàn)試驗(yàn)魚出現(xiàn)肌營養(yǎng)不良和滲出性素質(zhì)樣病變甚至死亡的現(xiàn)象。

維生素C（VC）是一種活性極強(qiáng)的還原劑，在生物體內(nèi)可以作為受氫體，也可以作為供氫體，此外還可以作為輔酶，因而廣泛參與機(jī)體生命活動(dòng)的各種氧化還原進(jìn)程。VC還參與血紅蛋白、硫基、鐵離子、谷胱甘肽、葉酸等許多物質(zhì)的還原作用，也參與氨基酸、膽固醇等代謝物的羥基化作用，從而對(duì)骨骼、皮膚發(fā)育起作用［7-8］。 VC在細(xì)胞氧化、膠原蛋白的形成、鐵離子由血漿到組織器官中的轉(zhuǎn)運(yùn)過程、機(jī)體免疫、抗體形成中均起著非常重要的作用［9］。

本試驗(yàn)以大口黑鱸為研究對(duì)象，主要蛋白源為魚粉，以魚油作為脂肪源、面粉作為糖源，設(shè)計(jì)等氮等能的6組試驗(yàn)飼料，分別采用新鮮魚油及氧化魚油兩種油源，搭配4個(gè)不同梯度VC含量，進(jìn)行為期75 d的養(yǎng)殖試驗(yàn)，目的在于研究含氧化魚油飼料中添加VC對(duì)大口黑鱸的生長、脂肪代謝以及抗氧化性能的影響，以期為水產(chǎn)養(yǎng)殖業(yè)的健康可持續(xù)發(fā)展提供理論依據(jù)。

1　材料與方法

1.1 試驗(yàn)飼料的制備

1.1.1 氧化魚油的制備 通過將新鮮魚油水浴加熱到50℃，并且24 h內(nèi)不間斷充氣而制得。

1.1.2 飼料配制 試驗(yàn)飼料配方如表1所示。本試驗(yàn)的蛋白源是新西蘭魚粉和國產(chǎn)豆粕，脂肪源選用的是福建高龍鯡魚油，糖源是面粉，VC來源于廣州市誠一水產(chǎn)有限公司（添加形式為維生素C磷酸酯，其有效活性為35%）。設(shè)計(jì)6組等氮（45.2%）等能的試驗(yàn)飼料，除了魚油的品質(zhì)（新鮮魚油和氧化魚油兩種不同品質(zhì)）和VC的添加水平不同外，6組試驗(yàn)飼料的其他成分完全一致。6組試驗(yàn)飼料分別為新鮮魚油不添加VC、新鮮魚油添加VC磷酸酯2 000 mg/kg、氧化魚油不添加VC、氧化魚油添加VC磷酸酯1 000、2 000、4 000 mg/kg，其對(duì)應(yīng)的VC實(shí)際含量為0、700、0、350、700、1 400 mg/kg，各試驗(yàn)組分別以FF0、FF700、OF0、OF350、OF700、OF1400表示。

表1　試驗(yàn)飼料基礎(chǔ)配方

準(zhǔn)確稱取飼料原料，在樣品袋中充分混合，再將其倒入攪拌機(jī)（A-200T Mixer Bench Model unit，Russel Food Equipment Ltd.，Ottawa，Ont.Canada）中混合5 min，接著加入魚油，充分混合5 min，最后加入約30%～40%的水，繼續(xù)混合，一直到原料充分均勻并且不出現(xiàn)塊狀物質(zhì)為止。使用雙螺桿擠條機(jī)把之前已經(jīng)混合均勻的飼料擠壓成條狀，接下來用制粒機(jī)成型，并制作成直徑分別2.5、5 mm的兩種不同規(guī)格飼料。將制作完成且已經(jīng)干燥好的飼料裝袋并置于-20℃冰柜中保存?zhèn)溆谩?/p>

1.2 試驗(yàn)魚管理與試驗(yàn)設(shè)計(jì)

本試驗(yàn)所用的大口黑鱸魚苗購于順德某家魚苗場。在正式試驗(yàn)開展之前，將大口黑鱸魚苗放在水泥池中逐級(jí)馴化，馴化期間采用的顆粒飼料為未添加VC的新鮮魚油組顆粒料。馴化期結(jié)束后即選取大小均一、健康活潑的大口黑鱸魚苗作為試驗(yàn)對(duì)象。

試驗(yàn)系統(tǒng)使用室內(nèi)循環(huán)水族箱（200 L玻璃纖維缸，共18個(gè)），水源為曝氣自來水。每組實(shí)驗(yàn)用飼料設(shè)3個(gè)平行，每個(gè)水族箱里面放30尾大口黑鱸，平均初始體重為8.5（±0.02）g。試驗(yàn)期間，每天9:00和16:00投喂2次，投喂方式為飽食投喂。隨著試驗(yàn)魚的生長投喂的飼料直徑逐漸增大。試驗(yàn)周期為75 d，試驗(yàn)期間每天記錄水溫及死亡魚情況，并清理1次水族箱底部的糞便。試驗(yàn)期間水溫為27.45（±1.32）℃，溶氧為7.65（±0.14）mg/L，氨氮為0.16（±0.02）mg/L，pH值為7.850 ±0.10。

1.3 樣品采集

試驗(yàn)結(jié)束后，逐箱清點(diǎn)并記錄大口黑鱸的尾數(shù)。在稱重并記錄前需要將試驗(yàn)魚饑餓空腹24 h，從每個(gè)箱內(nèi)隨機(jī)選取8尾魚，用MS-222（Sigma， St Louis，USA at 10mg/L）進(jìn)行麻醉，拿2尾作為全魚樣品，用來進(jìn)行常規(guī)營養(yǎng)組成（水分、蛋白、脂肪和灰分）分析，另外拿6尾大口黑鱸分別量體長，稱重并記錄，采用吸取有少量肝素鈉作為抗凝劑的針管從心臟靜脈竇抽血，將抽過血的魚體進(jìn)行解剖，分離出內(nèi)臟團(tuán)，稱重并記錄，再將內(nèi)臟團(tuán)的各個(gè)組分如肝臟、腸脂等分離出來并稱重記錄，用于各試驗(yàn)組臟體比、肝體比、脂體比和肥滿度的計(jì)算。解剖工作完成后，取背部兩側(cè)的白肌、離體的肝臟放入液氮，次日轉(zhuǎn)入-80℃冰箱，為后期酶活性、丙二醛（MDA）和VE及VC等指標(biāo)的測定作儲(chǔ)備，剩余的肝臟用解剖刀選取一小塊，用4%中性福爾馬林對(duì)肝組織進(jìn)行固定并進(jìn)行組織學(xué)切片觀察，剩下的肝臟和肌肉轉(zhuǎn)置于105℃烘箱中烘干，至重量恒定后稱量并記錄數(shù)據(jù)，以備后期的常規(guī)營養(yǎng)組成分析用。血液樣品部分用來測定全血免疫參數(shù)，剩余全血?jiǎng)t在4℃、8 000 r/min條件下用離心機(jī)離心10 min，并收集上清，置于-20℃保存，待測酶活性、MDA和VC和VE。

1.4 樣品分析

采用國際標(biāo)準(zhǔn)方法（ AOAC，1995） 測定并分析樣品的營養(yǎng)成分。測定樣品中的水分含量采用105℃常壓干燥法，測定樣品的蛋白含量采用索氏抽提法（Soxtec System HT6，Tecator，Sweden），樣品脂肪含量測定則采用凱氏定氮法（1030-Autoanalyzer，Tecator，H-gans ，Sweden），測定灰分使用馬福爐在550℃灼燒法來測定。測定肝臟、肌肉油脂氧化產(chǎn)物MDA含量，采用TBRAS（硫代巴比妥酸）比色法追蹤；肝臟中谷胱甘肽過氧化物酶（GSH-Px）活性、組織蛋白定量及VC含量則采用南京建成相關(guān)試劑盒來測定。

試驗(yàn)相關(guān)指標(biāo)的計(jì)算：

肥滿度 （%） = 100×體重（g）×體長 （cm）3

臟體比 （%） = 100×內(nèi)臟重（g）×體重（g）

肝體比 （%） = 100×肝臟重（g）×體重（g）

脂體比 （%） = 100×腸脂重（g）×體重（g）

試驗(yàn)數(shù)據(jù)經(jīng)單因子分析（ANOVA）后，用Duncan's 多重比較法分析各試驗(yàn)組之間的差異顯著性，采用的分析軟件為SPSS11.5。

表2　魚油氧化指標(biāo)分析

表3　氧化魚油和不同劑量VC對(duì)大口黑鱸成活率、增重率、飼料系數(shù)的影響

2　 結(jié)果與分析

2.1 試驗(yàn)飼料的魚油氧化指標(biāo)分析

過氧化值、酸價(jià)、P-茴香胺值（P-AV）及MDA含量，都是評(píng)價(jià)魚油氧化酸敗程度的重要指標(biāo)，其中酸價(jià)是脂肪中游離脂肪酸含量的標(biāo)志，P-茴香胺值表示食用油脂中的醛類化合物含量。從表2可以看出，本試驗(yàn)使用氧化魚油的過氧化值、酸價(jià)、P-茴香胺值及MDA含量都顯著高于新鮮魚油的各項(xiàng)指標(biāo)，說明氧化魚油氧化酸敗程度較高，且所含的油脂過氧化產(chǎn)物較多。

2.2 氧化魚油和不同劑量VC對(duì)大口黑鱸生長、飼料利用效率的影響

氧化魚油和不同劑量VC對(duì)大口黑鱸生長性能和飼料利用效率的影響見表3。經(jīng)過75 d的試驗(yàn)，大口黑鱸的成活率在各試驗(yàn)組間差異顯著。新鮮魚油不添加VC的存活率最低、為91.1%，從增重率數(shù)據(jù)來看，OF0組增重率最高、為1421.7%，與OF1400間無顯著差異，但是顯著高于FF0組，也顯著高于添加氧化魚油的其他3個(gè)飼料組。特定生長率在OF0組最高，顯著高于FF0、OF350、FF700、OF700組，但是和OF1400組比較特定生長率無顯著差異。就飼料系數(shù)而言，除OF0組顯著最低和OF1400顯著最高外，其他各試驗(yàn)組間并無顯著差異。

2.3 氧化魚油和不同劑量VC對(duì)大口黑鱸形態(tài)學(xué)指標(biāo)的影響

由表4可知，大口黑鱸的肥滿度在各組間沒有顯著差異。臟體比OF0組顯著高于其他各組，其他各組間無顯著差異。大口黑鱸的肝體比OF0組顯著高于其他各組，其他各組間無顯著差異。脂體比在各組間無顯著差異。

2.4 氧化魚油和不同劑量VC對(duì)大口黑鱸機(jī)體過氧化狀態(tài)的影響

投喂含氧化魚油和不同劑量VC飼料對(duì)大口黑鱸血清、肌肉以及肝臟中的MDA含量和肌肉與肝臟中VE、VC含量的影響見表5。從表5可以看出，血清、肌肉和肝臟中MDA含量呈現(xiàn)出隨VC添加量增加而降低，添加新鮮魚油的兩個(gè)飼料組中，F(xiàn)F700組的血清和肝臟中MDA含量都顯著性低于FF0組，而在添加氧化魚油的4個(gè)飼料組中，血清和肝臟中的MDA含量都隨著VC添加量的升高而顯著降低，并在OF1400組最低。新鮮魚油兩個(gè)飼料組，F(xiàn)F700組肌肉中的MDA含量顯著低于FF0組，氧化魚油組大口黑鱸肌肉中的MDA含量隨著外源VC添加水平的提高而呈現(xiàn)出下降趨勢，OF0組顯著高于OF700、OF1400組，但是與OF350組間并無顯著差異，OF350組肌肉MDA含量與OF700組間無顯著差異，而OF350組肌肉MDA含量則顯著高于OF1400組。添加肌肉和肝臟中的VC含量則呈現(xiàn)出隨VC添加量增加呈升高趨勢，在添加氧化魚油的4個(gè)組中，肌肉和肝臟中的VC含量都在OF0組顯著最低，而在OF1400最高，但OF0 和OF350兩組間并顯著差異，OF700、OF1400兩組間無顯著差異。

2.5 氧化魚油和不同劑量VC對(duì)大口黑鱸肝臟抗氧化防御的影響

投喂含氧化魚油和不同劑量VC飼料對(duì)大口黑鱸肝臟抗氧化相關(guān)酶活性的影響見表6。從表6可以看出，肝臟的GSH-PX活性都隨著VC添加劑量的增加而升高。新鮮魚油的兩個(gè)飼料組中，肝臟GSH-PX活性在FF0、FF350組之間無顯著差異，但其含量在FF700組高于FF0組。在氧化魚油的4個(gè)飼料組中，肝臟GSH-PX活性在OF0組顯著低于其他組，且隨著VC添加量的升高呈現(xiàn)上升趨勢。

表4　氧化魚油和不同劑量VC對(duì)大口黑鱸形態(tài)學(xué)參數(shù)的影響

表5　氧化魚油和不同劑量VC對(duì)大口黑鱸血清和組織中MDA和VC含量的影響

表6　氧化魚油和不同劑量VC對(duì)大口黑鱸肝臟GSH-PX活性的影響

2.6 氧化魚油和不同劑量VC對(duì)大口黑鱸機(jī)體組成的影響

氧化魚油和不同劑量VC對(duì)大口黑鱸全魚、肌肉和肝臟組成成分的影響見表7。從表7可以看出，大口黑鱸全魚脂肪含量隨VC添加量的增加有一定的降低趨勢，但在各組間并無顯著差異。全魚蛋白含量隨VC添加量的增加有一定的增加趨勢，但各組差異不顯著。全魚灰分含量在各試驗(yàn)組間無顯著差異，但水分隨著VC添加量的增加有上升趨勢且存在顯著差異。大口黑鱸肌肉和肝臟水分含量各組間無顯著差異。大口黑鱸肌肉和肝臟中的脂肪含量隨著VC添加量的增加有上升趨勢。

表7　氧化魚油和不同劑量VC對(duì)大口黑鱸全魚、肌肉和肝臟組成的影響

2.7 氧化魚油和不同劑量VC對(duì)大口黑鱸血液參數(shù)的影響

投喂含氧化魚油和不同劑量VC飼料對(duì)大口黑鱸血液參數(shù)的影響見表8。從表8可以看出，大口黑鱸血上清中低密度脂蛋白（LDL）含量在FF700組中最低，并顯著低于FF0組但與其他組間并無顯著差異；FF0、OF0、OF250、OF700、OF1400組間的LDL無顯著差異。血清中膽固醇（CHO）和甘油三酯（TG）含量在各組間無顯著差異。在氧化魚油的4個(gè)試驗(yàn)組中，血清堿性磷酸酶（ALP）水平隨飼料中外源VC添加量的增加有上升趨勢，但并無顯著差異；在新鮮魚油FF700組高密度脂蛋白（HDL）水平顯著低于FF0組，但FF700組ALP水平則顯著高于FF0組。4個(gè)氧化魚油組中HDL水平無顯著差異；谷丙轉(zhuǎn)氨酶（ALT）隨著飼料中VC添加水平的提高而降低，且OF0組顯著高于OF1400組，新鮮魚油FF700組和FF0組間的ALT無顯著差異，但FF700組略低于FF0組。

表8　氧化魚油和不同劑量VC對(duì)大口黑鱸血清血液參數(shù)的影響

3　 結(jié)論與討論

本試驗(yàn)結(jié)果表明，在添加新鮮魚油的兩個(gè)試驗(yàn)組中，不添加VC的試驗(yàn)組（FF0）在試驗(yàn)第6周起即出現(xiàn)了典型的VC缺乏癥。該試驗(yàn)組魚體出現(xiàn)體色變暗甚至變黑，行動(dòng)遲緩，出現(xiàn)厭食、攝食率下降并逐漸出現(xiàn)死亡的現(xiàn)象。FF0試驗(yàn)組除了其存活率顯著低于另一添加VC的新鮮魚油組（FF700）外，該組的增重率、飼料系數(shù)、特定生長率、臟體系數(shù)較FF700組更差一些。從對(duì)魚油提供的油脂利用及代謝和魚體生理機(jī)能來看，添加了新鮮魚油的兩個(gè)試驗(yàn)飼料組中，F(xiàn)F0組的大口黑鱸肝體比、肝臟中的脂肪含量、組織器官中的MDA含量、VC含量等相關(guān)指標(biāo)均劣于VC添加組（FF700），說明在大口黑鱸飼料中適量添加VC，能夠提高魚體的脂肪代謝功能和各項(xiàng)生理機(jī)能。

氧化魚油對(duì)魚體會(huì)造成嚴(yán)重?fù)p害，主要表現(xiàn)在生長不良、死亡率上升、瘦背癥、貧血及肝臟病變等，并且氧化脂肪對(duì)魚的毒害程度根據(jù)魚體種類及魚齡的不同而不同［1］。在生物體的代謝過程中會(huì)產(chǎn)生具有毒害作用的自由基如氧自由基，機(jī)體內(nèi)有自由基的防御機(jī)制來消除此類自由基，該消除機(jī)制包括酶促反應(yīng)（谷胱甘肽還原酶、超氧化物歧化酶等）在內(nèi)以及非酶促抗氧化因子，如VA、VE和VC［10］。因此，添加外源VC能夠在一定程度上緩解因魚油氧化酸敗給魚體生長性能所帶來的不利影響。葉仕根等［11］通過對(duì)鯉魚攝食含有氧化魚油的飼料后所產(chǎn)生的病理學(xué)變化的研究，發(fā)現(xiàn)試驗(yàn)鯉魚在攝食了添加有氧化魚油的飼料后，出現(xiàn)肝臟腫大、顏色減褪、肝小葉結(jié)構(gòu)遭到破壞、細(xì)胞變性、壞死并形成溶解性壞死灶或者凝固性壞死灶，他們認(rèn)為肝臟是各種營養(yǎng)物質(zhì)的代謝中心及解毒中心，對(duì)氧化油脂所具毒性非常敏感，氧化油脂的毒性會(huì)造成肝臟的嚴(yán)重?fù)p傷，而肝臟的嚴(yán)重?fù)p傷必然會(huì)降低肝臟的解毒能力。在本試驗(yàn)中，氧化魚油不添加VC試驗(yàn)組（OF0）經(jīng)解剖發(fā)現(xiàn)該組的肝臟損傷是最為嚴(yán)重的，雖然在試驗(yàn)期間并沒有表現(xiàn)出死亡率升高，增重率、飼料系數(shù)等指標(biāo)甚至更好，這有可能是因?yàn)樵囼?yàn)周期較短，其體內(nèi)累積的毒素尚未達(dá)到爆發(fā)界點(diǎn)的原因。

另外，氧化魚油0VC添加組（OF0）并沒有表現(xiàn)出類似新鮮魚油0VC添加組（FF0）一系列VC缺乏癥現(xiàn)象?？赡苁且?yàn)轸~油在氧化過程中產(chǎn)生的復(fù)雜氧化產(chǎn)物存在某些物質(zhì)可作為魚體自行合成VC的中間體，因此魚體能夠合成一部分VC來滿足機(jī)體的正常生長需求，有待以后深入探討，找出其內(nèi)在的分子機(jī)理。對(duì)水生動(dòng)物而言，并沒有發(fā)現(xiàn)體內(nèi)過高的VC含量會(huì)具有細(xì)胞毒性。但是，VC缺乏則會(huì)出現(xiàn)骨骼及軟骨組織畸變、毛細(xì)血管脆弱、創(chuàng)傷修復(fù)遲緩、免疫能力下降、生長速率降低和死亡率增加的一系列現(xiàn)象［12］。Chavzde 等［13］研究發(fā)現(xiàn)，鱺魚魚苗在餌料VC缺乏情況下會(huì)出現(xiàn)生長減緩、鰓蓋變短、體色變黑、眼球突出、脊柱側(cè)凸等一系列癥狀。而在VC缺乏條件下會(huì)引發(fā)水生動(dòng)物體色發(fā)黑的原因可能是VC能夠影響動(dòng)物體內(nèi)的黑色素的形成以及沉淀，若體內(nèi)VC水平下降，則會(huì)使得皮膚內(nèi)的黑色素沉積增多，從而引發(fā)體色發(fā)黑的現(xiàn)象［14］。膳食VC缺乏會(huì)導(dǎo)致溝鯰的增重率、餌料效率及存活率降低、脊柱側(cè)彎、脊柱前凸和褪色等現(xiàn)象［15］。在患有壞血病的其他魚種［16-19］中也發(fā)現(xiàn)有脊柱側(cè)凸、鰓絲扭曲/變態(tài)、鰓蓋和口鼻部畸形的現(xiàn)象。McLaren等［20］觀察到當(dāng)飼料中VC水平低于10 mg/kg時(shí)鱒魚會(huì)有出血現(xiàn)象。VC缺乏會(huì)導(dǎo)致鱸魚脊柱畸形發(fā)育和鰓組織某些異常，尤其是會(huì)導(dǎo)致呼吸道上皮細(xì)胞出現(xiàn)增生等一系列現(xiàn)象［17］。

在本試驗(yàn)中，添加氧化魚油的各試驗(yàn)組之間，大口黑鱸的存活率至實(shí)驗(yàn)結(jié)束并沒有出現(xiàn)顯著差異。Huang等［21］研究了不同梯度外源VE對(duì)飼料中添加氧化魚油的尼羅羅非幼魚生長等方面的影響，結(jié)果發(fā)現(xiàn)，各試驗(yàn)組的存活率并無顯著差異，該現(xiàn)象和本試驗(yàn)結(jié)果一致。本試驗(yàn)中氧化魚油0VC添加組（OF0）的增重率及飼料轉(zhuǎn)化效率均顯著高于其他試驗(yàn)組，且其飼料系數(shù)也顯著低于其他試驗(yàn)組，該結(jié)果與之前相關(guān)報(bào)道不一致［22-24］。然而，Chen等［25］通過研究氧化魚油對(duì)大口黑鱸生長、體分組成、抗氧化機(jī)制的影響，發(fā)現(xiàn)添加氧化魚油飼料組的大口黑鱸較新鮮魚油組取得更好的增重率及特定生長率，這一結(jié)果和本試驗(yàn)結(jié)果一致，而這些差異可能和魚種的不同及實(shí)驗(yàn)條件的不同有關(guān)。黃凱等［23］研究表明，在奧尼羅非魚飼料中添加氧化油脂會(huì)導(dǎo)致羅非魚的增重率和飼料轉(zhuǎn)化率顯著下降。本試驗(yàn)中氧化魚油0VC添加組（OF0）的肝體比及臟體比顯著高于其他各試驗(yàn)組，這和之前的相關(guān)報(bào)道一致。隨著VC添加水平的提高，其余氧化魚油試驗(yàn)組的肝體比和臟體比呈下降趨勢，說明通過添加VC可以改善氧化油脂為魚體造成的損害。

油脂氧化酸敗的終產(chǎn)物之一丙二醛作為一種重要的檢測指標(biāo)，在目前可直接用來評(píng)價(jià)機(jī)體氧化損傷程度。此外，還可以通過檢測生物體組織中的抗氧化劑沉積量（如VC含量）來間接反映機(jī)體氧化受傷程度。VC本身即為一種有效的抗氧化劑，可直接參與水產(chǎn)動(dòng)物新陳代謝的氧化還原反應(yīng)，并且VC和VE、 Se等養(yǎng)分協(xié)調(diào)作用，增強(qiáng)水產(chǎn)動(dòng)物的抵抗體脂過氧化作用［26］。本試驗(yàn)中氧化魚油組肝臟及血液中丙二醛的含量隨VC添加水平的提高呈下降趨勢；肝臟、肌肉和血清中的VC含量則隨VC添加水平的升高而升高，并且試驗(yàn)組間存在顯著差異，說明通過添加外源VC可以中和或抵消部分丙二醛，從而減輕因油脂氧化給機(jī)體帶來的損害。Yeh等［27］報(bào)道了給老鼠飼喂氧化魚油能增加小鼠肝臟和血清中的丙二醛含量。動(dòng)物體內(nèi)參與清除有害自由基的防御系統(tǒng)有酶系統(tǒng)和非酶系統(tǒng)兩類，VE、VC等均屬于非酶系統(tǒng)，而體內(nèi)清除自由基的抗氧化酶系統(tǒng)主要包括超氧化物歧化酶、谷胱甘肽還原酶、谷胱甘肽過氧化物酶等［28］。而谷胱甘肽過氧化物酶則是可清除脂質(zhì)過氧化物的，從本試驗(yàn)結(jié)果來看，氧化魚油0VC添加組（OF0）的谷胱甘肽過氧化物酶活性顯著低于其他各試驗(yàn)組，而其他添加VC的氧化魚油組谷胱甘肽過氧化物酶活性間沒有顯著差異，但是隨著VC添加水平的升高呈上升趨勢，且與新鮮魚油組沒有顯著性差異。本試驗(yàn)說明通過添加外源VC可以提升魚體身體機(jī)能；改善魚體因攝食氧化魚油對(duì)機(jī)體抗氧化能力的損害、降低體內(nèi)丙二醛含量、提高組織內(nèi)VC的沉積量，并可顯著提高谷胱甘肽過氧化物酶（GSH-PX）的活性，從而可以提升肝臟的抗氧化能力。Gao等［29］研究發(fā)現(xiàn)，飼料中的氧化魚油能加重真鯛幼魚體內(nèi)的氧化壓力狀態(tài)，但是補(bǔ)充超過400 mg/kg的餌料VC水平即可改善真鯛幼魚的生長和健康狀況。

本研究結(jié)果表明，在飼料中添加VC磷酸酯能夠促進(jìn)大口黑鱸對(duì)脂肪的吸收并提高其代謝機(jī)能。在飼喂大口黑鱸含氧化魚油飼料的情況下，飼料中添加適量的VC可在一定程度上緩解大口黑鱸體內(nèi)由于氧化魚油導(dǎo)致的脂質(zhì)過氧化程度，緩解由于體內(nèi)脂質(zhì)過氧化作用對(duì)機(jī)體造成的損害。飼料中添加超過700 mg/kg 的VC可顯著改善魚體的增重和血液免疫能力，并會(huì)降低魚體內(nèi)油脂過氧化產(chǎn)物丙二醛的含量。

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（責(zé)任編輯崔建勛）

Effects of dietary oxidized fish oil and Vitamin C on grow th and antioxidant ability of largemouth bass （Micropterus salmoide）

YUAN Rui-min1，LIU Yong-jian2，WANG Gui-ping3，JIANG Rui-li1，SHE Ze-jie1，LIANG Gui-ying2，TIAN Li-xia2
（1.Guangdong Haid Group Co.，Guangzhou 511400， China；2.School of Life Sciences， Sun Yat-sen University，Guangzhou 510275， China；3.Guangdong Haid Institute of Animal Husbandry & Veterinary，Guangzhou 511400， China）

Abstract：A 75 -day feeding experiment was carried out to investigate the effects of oxidized fish oil and different levels of vitamin C on growth and antioxidant ability of juvenile largemouth bass （Micropterus salmoide） fed six isonitrogenous （45.7%） and isoenergetic diets.Test diets were formulated with two different quality of fish oil，fresh oil and oxidized fish oil.Fresh fish oil was with 2 levels of vitamin C （0 and 700 mg/kg）， the oxidized fish oil was with 4 levels of vitamin C （0，350，700 and 1400 mg/kg）.The peroxide values （POV） of fresh and oxidized fish oil were 7.67 and 128.47 meq/kg oil， respectively.These test diets were abbreviated to FF0， FF700，OF0，OF350，OF700 and OF1400.Results showed that the survival rate of largemouth bass was significantly different among groups.GSHPX activity in liver of group OF0 was the lowest among test groups with oxidized fish oil.These results suggested that dietary oxidized fish oil increased the oxidative stress condition of largemouth bass， but more than 700 mg/kg vitamin C supplement would improve the growth and health of juvenile largemouth bass.

Key words:largemouth bass； vitamin C； survival rate； antioxidant ability；

中圖分類號(hào)：S963.73+1

文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼：A

文章編號(hào)：1004-874X（2016）-0136-09

收稿日期：2015-09-14

基金項(xiàng)目：國家自然科學(xué)基金（30972264）

作者簡介：袁瑞敏（1987-），女，碩士，研究實(shí)習(xí)員，E-mail：yuanrm@haid.com.cn

通訊作者：田麗霞（1964-）女，博士，教授，E-mail：edls@mail.sysu.edu.cn