亞甲基四氫葉酸還原酶基因A1298C多態(tài)性與帕金森病易感性的Meta分析

王璇，嚴(yán)光，孫夢(mèng)雯，劉曉敏

(安徽醫(yī)科大學(xué)附屬省立醫(yī)院、安徽省立醫(yī)院，a 老年醫(yī)學(xué)科，b 神經(jīng)內(nèi)科，合肥 230001)

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亞甲基四氫葉酸還原酶基因A1298C多態(tài)性與帕金森病易感性的Meta分析

王璇a，嚴(yán)光a，孫夢(mèng)雯a，劉曉敏b

(安徽醫(yī)科大學(xué)附屬省立醫(yī)院、安徽省立醫(yī)院，a 老年醫(yī)學(xué)科，b 神經(jīng)內(nèi)科，合肥 230001)

[摘要]目的探討亞甲基四氫葉酸還原酶(MTHFR)基因A1298C位點(diǎn)單核苷酸多態(tài)性(SNP)與帕金森病(PD)易感性的關(guān)聯(lián)情況。方法通過(guò)中國(guó)生物醫(yī)學(xué)文獻(xiàn)數(shù)據(jù)庫(kù)、中國(guó)期刊網(wǎng)全文數(shù)據(jù)庫(kù)、萬(wàn)方數(shù)據(jù)庫(kù)、維普信息資源系統(tǒng)，PubMed、Cochrane Library、OvidSP、Wiley Online Library、Springer Link、EBSCO、Elsevier Science Direct、Google scholar數(shù)據(jù)庫(kù)檢索MTHFR基因A1298C位點(diǎn)SNP與PD相關(guān)的病例對(duì)照研究，利用RevMan 5.3 和Stata 12.0軟件，根據(jù)異質(zhì)性大小選用隨機(jī)效應(yīng)或固定效應(yīng)模型對(duì)各研究數(shù)據(jù)進(jìn)行分析。結(jié)果共納入8篇文獻(xiàn)。Meta分析結(jié)果提示PD組和對(duì)照組AA基因型[OR=0.92,95%CI: 0.78～1.09,P=0.33]和CC基因型[OR=1.19,95%CI: 0.89～1.59,P=0.23]、A等位基因[OR=0.92，95%CI: 0.81～1.04,P=0.19]和C等位基因[OR=1.09，95%CI: 0.96～1.24,P=0.19]差異均無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。結(jié)論MTHFR基因A1298C位點(diǎn)SNP與PD易感性無(wú)關(guān)聯(lián)性。

[關(guān)鍵詞]帕金森病；亞甲基四氫葉酸還原酶(NADPH)；多態(tài)性，單核苷酸；Meta分析

帕金森病(PD)是常見(jiàn)的的神經(jīng)系統(tǒng)變性性疾病。目前病因不明確，可能是基因和環(huán)境因素共同作用而致病，病理上表現(xiàn)為中腦黒質(zhì)多巴胺能神經(jīng)元大量變性丟失[1]。控制同型半胱氨酸甲基化的限速酶5,10-亞甲基四氫葉酸還原酶(MTHFR)基因有不同的單核苷酸多態(tài)性(SNP)，其中研究最多的兩個(gè)位點(diǎn)為MTHFR基因C677T和A1298C。本文主要對(duì)MTHFR基因A1298C多態(tài)性與帕金森病易感性的關(guān)聯(lián)情況進(jìn)行Meta分析。

1資料與方法

1.1納入標(biāo)準(zhǔn)病例對(duì)照研究；PD組符合PD的診斷標(biāo)準(zhǔn)；對(duì)照組均為與患者無(wú)血緣關(guān)系的健康人群。

1.2排除標(biāo)準(zhǔn)原始文獻(xiàn)研究類型為非病例對(duì)照研究；原始文獻(xiàn)研究設(shè)計(jì)差(病例組和對(duì)照組的樣本含量不明確、基因型或等位基因頻率數(shù)據(jù)不明確以致不能提取)；同一作者或同一單位不同作者以雷同或類似內(nèi)容發(fā)表于不同期刊的文獻(xiàn)。

1.3檢索方法應(yīng)用計(jì)算機(jī)檢索中國(guó)生物醫(yī)學(xué)文獻(xiàn)數(shù)據(jù)庫(kù)(CBM)、中國(guó)期刊網(wǎng)全文數(shù)據(jù)庫(kù)(CNKI)、萬(wàn)方數(shù)據(jù)庫(kù)、維普信息資源系統(tǒng)，PubMed、Cochrane Library、OvidSP、Wiley Online Library、Springer Link、EBSCO、Elsevier Science Direct、Google scholar數(shù)據(jù)庫(kù)等，文獻(xiàn)檢索時(shí)間均從建庫(kù)至2015年5月。中文檢索詞為“帕金森病”、“亞甲基四氫葉酸還原酶”或“MTHFR”、“多態(tài)性”；英文檢索詞為“Parkinson's disease”、“methylenetetrahydrofolate reductase”或“MTHFR”、 “polymorphism”，采用主題詞與自由詞相結(jié)合的檢索策略，檢索條件不限。

1.4文獻(xiàn)篩選由兩名研究者分別對(duì)文獻(xiàn)進(jìn)行獨(dú)立檢索，閱讀標(biāo)題及摘要，對(duì)符合納入標(biāo)準(zhǔn)的文獻(xiàn)進(jìn)行全文閱讀，意見(jiàn)不統(tǒng)一時(shí)討論決定。

1.5資料提取提取的信息包括納入文獻(xiàn)的第一作者，所在的國(guó)家及種族，PD組和對(duì)照組的樣本含量，兩組的基因型或等位頻率，所采用的基因研究方法。

1.6方法學(xué)質(zhì)量評(píng)價(jià)采用RevMan 5.3軟件進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)分析。當(dāng)提取對(duì)照組等位基因頻率后，計(jì)算對(duì)照組次要等位基因頻率(MAF)。評(píng)估對(duì)照組基因型頻率是否符合HWE采用χ2檢驗(yàn)計(jì)算。計(jì)數(shù)資料采用比值比(OR)和95%置信區(qū)間(CI)表示。根據(jù)I2值判斷異質(zhì)性的大小，若P≥0.1,I2<50%時(shí)，則提示各研究間異質(zhì)性不明顯，采用固定效應(yīng)模型分析；若P<0.1,I2>50%時(shí)，則提示各研究間異質(zhì)性明顯，采用隨機(jī)效應(yīng)模型分析，并分析異質(zhì)性可能來(lái)源[2]。應(yīng)用Stata 12.0軟件進(jìn)行Begg′s檢驗(yàn)和Egger′s檢驗(yàn)定量分析發(fā)表偏倚。檢驗(yàn)水準(zhǔn)設(shè)定為α=0.05。

2結(jié)果

2.1文獻(xiàn)基本情況按檢索策略初步檢索出文獻(xiàn)255篇，通過(guò)閱讀文題、摘要排除未涉及MTHFR基因A1298C SNP與PD相關(guān)性的文獻(xiàn)244篇，通過(guò)閱讀全文再排除非病例對(duì)照研究文獻(xiàn)3篇，最終納入8篇原始文獻(xiàn)進(jìn)行Meta分析，涉及1249例PD患者和1162例對(duì)照。PD組和對(duì)照組人群基本情況，見(jiàn)表1。

2.2Meta分析結(jié)果對(duì)納入的研究進(jìn)行異質(zhì)性檢驗(yàn)，AA基因型的各研究間無(wú)異質(zhì)性(P=0.57,I2=0%)，采用固定效應(yīng)模型，PD組與對(duì)照組相比差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(OR=0.92,95%CI: 0.78～1.09,P=0.33)。CC基因型的各研究間無(wú)異質(zhì)性(P=0.59,I2=0%)，采用固定效應(yīng)模型，PD組與對(duì)照組相比差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(OR=1.19,95%CI: 0.89～1.59,P=0.23)。A等位基因的各研究間無(wú)明顯異質(zhì)性(P=0.39,I2=6%)，采用固定效應(yīng)模型，PD組與對(duì)照組相比差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(OR=0.92，95%CI: 0.81～1.04,P=0.19)。C等位基因的各研究間無(wú)明顯異質(zhì)性(P=0.39,I2=6%)，采用固定效應(yīng)模型，PD組與對(duì)照組相比,差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(OR=1.09，95%CI: 0.96～1.24,P=0.19)，見(jiàn)圖1～4。

2.3敏感性分析在AA和CC基因型、A和C等位基因中，均無(wú)明顯異質(zhì)性，逐一剔除納入的文獻(xiàn)，各研究中的異質(zhì)性均無(wú)明顯變化，仍無(wú)明顯異質(zhì)性。在A等位基因研究中，當(dāng)剔除Biatecka等[10]時(shí)，異質(zhì)性降低至I2=0%，Meta分析的結(jié)果變?yōu)橛薪y(tǒng)計(jì)學(xué)意義(OR=0.85，95%CI: 0.73～0.98,P=0.03)。在C等位基因研究中，當(dāng)剔除Biatecka等[10]時(shí)，異質(zhì)性也降低至I2=0%，Meta分析的結(jié)果也變?yōu)橛薪y(tǒng)計(jì)學(xué)意義(OR=1.18，95%CI: 1.02～1.37,P=0.03)。

表1　PD組和對(duì)照組與MTHFR基因A1298C SNP關(guān)聯(lián)的基本情況

注：PCR: 聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)；PCR-RFLP: PCR限制性片段長(zhǎng)度多態(tài)性

圖1　AA基因型與PD易感性的森林圖

圖2　CC基因型與PD易感性的森林圖

圖3　A等位基因與PD易感性的森林圖

圖4　C等位基因與PD易感性的森林圖

2.4發(fā)表偏倚分析AA基因型的Begg檢驗(yàn)(z=1.11,P=0.27)和Egger檢驗(yàn)(t=0.56,P=0.60)結(jié)果表明尚無(wú)明顯發(fā)表偏倚；CC基因型的Begg檢驗(yàn)(z=0.37,P=0.71)和Egger檢驗(yàn)(t=0.51,P=0.63)結(jié)果表明尚無(wú)明顯發(fā)表偏倚；A等位基因的Begg檢驗(yàn)(z=0.62,P=0.54)和Egger檢驗(yàn)(t=0.09,P=0.93)結(jié)果表明尚無(wú)明顯發(fā)表偏倚；C等位基因的Begg檢驗(yàn)(z=0.62,P=0.54)和Egger檢驗(yàn)(t=-0.09,P=0.93)結(jié)果表明尚無(wú)明顯發(fā)表偏倚。

3討論

MTHFR是體內(nèi)催化5,10-亞甲基四氫葉酸成5-甲基四氫葉酸的重要限速酶，位于染色體1p36.3的MTHFR基因突變可能引起同型半胱氨酸的變化以致高同型半胱氨酸血癥或降低葉酸代謝水平、DNA堿基合成。MTHFR活性降低可影響DNA堿基的合成與修復(fù)以致DNA低甲基化、染色體的不穩(wěn)定，引起細(xì)胞的惡變[11]。位于FAD結(jié)合位點(diǎn)的MTHFR基因677C→T突變致第222 位密碼子的丙氨酸由纈氨酸代替、位于第7外顯子編碼S-腺苷甲硫氨酸調(diào)控區(qū)域的1298A→C致第429 位密碼子的谷氨酸由丙氨酸代替，使絲氨酸和半胱氨酸的磷酸化減少以致影響MTHFR的表達(dá)[12]。MTHFR的輔酶成分核黃素或黃素腺嘌呤二核苷酸的減少可使MTHFR的活性和DNA的甲基化作用降低，同型半胱氨酸代謝異?？芍翫NA的低甲基化、促使腫瘤的形成[13]。

對(duì)納入的各病例對(duì)照研究文獻(xiàn)采用MAF和HWE進(jìn)行質(zhì)量評(píng)估，各文獻(xiàn)的MAF和HWE的P值均大于0.05，說(shuō)明病例組和對(duì)照組均具有代表性，原研究均為高質(zhì)量文獻(xiàn)。一般情況下，關(guān)于SNP的Meta分析在合并時(shí)均有一定的異質(zhì)性；但AA和CC基因型、A和C等位基因的比較中，異質(zhì)性均較低(I2<50%)，提示各研究間同質(zhì)性較高，Meta分析的結(jié)果較可靠。逐一剔除納入的文獻(xiàn)，AA和CC基因型、A和C等位基因的異質(zhì)性均無(wú)明顯變化。在A和C等位基因研究中，當(dāng)剔除文獻(xiàn)Biatecka等[10]時(shí)，Meta分析的結(jié)果均變?yōu)橛薪y(tǒng)計(jì)學(xué)意義，可能是Biatecka等[10]在A等位基因比較中所占的權(quán)重較高(23.4%)、在C等位基因比較中所占的權(quán)重較高(29.3%)的緣故。

本文設(shè)置了嚴(yán)格的文獻(xiàn)納入及排除標(biāo)準(zhǔn)，減少了選擇偏倚對(duì)結(jié)果的影響；發(fā)表偏倚是影響Meta結(jié)果的另一重要因素，利用Begg′s檢驗(yàn)和Egger′s檢驗(yàn)定量評(píng)估是減少偏倚的重要途徑。在AA和CC基因型、A和C等位基因的評(píng)估結(jié)果均無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，提示均無(wú)明顯的發(fā)表偏倚。納入的8篇原始研究采用的檢測(cè)技術(shù)雖均為PCR，但具體技術(shù)均不相同，可能存在研究?jī)?nèi)偏倚；經(jīng)敏感性分析，Meta結(jié)果均無(wú)變化?？偠灾?，經(jīng)敏感性、發(fā)表偏倚分析綜合評(píng)估后，本Meta分析的結(jié)果較為可靠；按人群分亞洲人群和非亞洲人群兩個(gè)亞組，亞洲人群AA基因型(OR=0.94,95%CI:0.68～1.29,P=0.70)、CC基因型(OR=1.14,95%CI: 0.55～2.36,P=0.73)、A等位基因(OR=0.94,95%CI:0.72～1.23,P=0.65)、C等位基因(OR=1.06,95%CI: 0.81～1.39,P=0.65)，非亞洲人群AA基因型(OR=0.91,95%CI: 0.75～1.11,P=0.36)、CC基因型(OR=1.20,95%CI: 0.88～1.65,P=0.25)、A等位基因(OR=0.91,95%CI: 0.79～1.06,P=0.22)、C等位基因(OR=1.10,95%CI: 0.95～1.27,P=0.22]的結(jié)果均無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，提示MTHFR基因 A1298C SNP與PD易感性無(wú)關(guān)聯(lián)性。

MTHFR基因 A1298C SNP與下列疾病易感性無(wú)關(guān)聯(lián)性，卻與C677T SNP有關(guān)聯(lián)性：神經(jīng)管缺陷[14]、先天性心臟病[15]、唐氏綜合征[16]、唇裂合并或不合并腭裂[17]、胃癌[18]、肺癌[19]、乳腺癌[20]、卵巢癌[21]、彌漫性大B細(xì)胞淋巴瘤[22]、急性淋巴細(xì)胞白血病復(fù)發(fā)[23]等。另一Meta分析發(fā)現(xiàn)MTHFR基因 C677T SNP與PD易感性也無(wú)關(guān)聯(lián)性，但經(jīng)種族亞組分析后發(fā)現(xiàn)C677T SNP與歐洲人群而非亞洲人群PD易感性有關(guān)聯(lián)性；PD組與對(duì)照組相比，攜有T等位基因的人群同型半胱氨酸血癥水平較高，提示T等位基因可能是PD合并高同型半胱氨酸血癥的一個(gè)獨(dú)立危險(xiǎn)因素[24]。

Meta分析顯示MTHFR基因A1298C SNP與PD易感性無(wú)關(guān)聯(lián)性，不能明確攜有AA基因型和CC基因型、A等位基因和C等位基因的人群罹患PD的風(fēng)險(xiǎn)是否增加。因此類研究仍較少，后期仍可進(jìn)行設(shè)計(jì)良好的大樣本的病例對(duì)照研究或全基因組關(guān)聯(lián)研究進(jìn)一步證實(shí)MTHFR基因 A1298C或其他位點(diǎn)SNP與PD易感性的關(guān)聯(lián)情況。

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Meta-analysis on methlenetetrahydrofolate reductase gene polymorphisms and Parkinson's disease susceptibility

WangXuan*,YanGuang,SunMengqwen,LiuXiamin

(*DepartmentofGeriatrics,theAffiliatedProvincialHospitalofAnhuiMedicalUniversity,Hefei230001,China)Correspondingauthor:YanGuang,Email:ktom38@sohu.com

[Abstract]ObjectiveTo explore the association between A1298C polymorphism of methlenetetrahydrofolate reductase (MTHFR) gene and Parkinson's disease (PD) susceptibility.MethodsThe case-control studies of MTHFR gene and PD were selected from Chinese Biomedical Database,Chinese National Knowledge Infrastructure,Wanfang,Weipu,PubMed,Cochrane Library,OvidSP,Wiley Online Library,EBSCO,Elsevier Science Direct,Springer Link and Google scholar databases.The study data were analysed by random-effects or fixed-effects models depending on heterogeneity use RevMan 5.3 and Stata 12.0 software.ResultsEight articles were included.The meta-analysis results suggested that there were no significant differences in genotype AA[OR=0.92,95%CI: 0.78-1.09,P=0.33],genotype CC[OR=1.19,95%CI: 0.89-1.59,P=0.23],allele A[OR=0.92，95%CI: 0.81-1.04,P=0.19] and allele C[OR=1.09，95%CI: 0.96-1.24,P=0.19] between PD group and control group.ConclusionNo relationship is found between the A1298C polymorphism of MTHFR gene and PD susceptibility.

[Key words]Parkinson's disease;Methylenetetrahydrofolate reductase (NADPH2);Polymorphism,single nucleotide;Meta analysis

基金項(xiàng)目：安徽省國(guó)際科技合作計(jì)劃(11030603025)

作者簡(jiǎn)介：王璇，碩士在讀，主治醫(yī)師，Email:slyywangxuan @163.com通信作者：嚴(yán)光，主任醫(yī)師，碩士生導(dǎo)師，Email:ktom38 @sohu.com

中圖分類號(hào):R742.5

文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼:A

DOI:10.3969/J.issn.1672-6790.2016.02.027

(收稿日期：2016-01-12)