microRNA-497在腎小球系膜細胞焦亡中的作用及機制

李 嶸 鄭昊林 田秀娟 馮世棟 李 莉 于 艷 趙麗娟 周美蘭 王漢民

microRNA-497在腎小球系膜細胞焦亡中的作用及機制

李 嶸1鄭昊林2田秀娟1馮世棟1李 莉1于 艷1趙麗娟1周美蘭1王漢民1

目的：探討microRNA-497(miR-497)對高糖和胰島素誘導的腎小球系膜細胞焦亡的調控作用。 方法：高糖和胰島素處理人腎小球系膜細胞(HRMC)，在不同時間運用流式細胞儀檢測細胞焦亡，實時定量PCR檢測HRMC細胞中miR-497表達水平；轉染不同濃度miR-497 mimic，檢測細胞焦亡通路關鍵基因mRNA表達水平，運用Western印記檢測NLRP1蛋白的表達水平；運用生物信息學和螢光素酶報告基因技術預測并驗證miR-497對炎性小體NLRP1基因的靶向結合作用；miR-497 mimic和pcDNA-NLRP1分別單獨轉染或共轉染后檢測細胞增殖。 結果：高糖和胰島素處理48 h以上HRMC細胞焦亡水平顯著增加(P<0.05)，miR-497表達水平顯著降低(P<0.05)；miR-497 mimic轉染顯著抑制HRMC細胞焦亡，和焦亡通路關鍵基因IL-1β、TNFα和caspase-1表達水平下降(P<0.05)；miR-497可直接靶向作用于NLRP1基因并抑制NLRP1蛋白的表達；NLRP1過表達可消除miR-497對細胞焦亡的抑制作用。 結論：miR-497 mimic抑制高糖和胰島素誘導的腎小球系膜細胞焦亡。

細胞焦亡 高糖和胰島素 microRNA-497 NLRP1炎性小體 半胱氨酸天冬蛋白酶1

腎小球系膜細胞(GMCs)具有收縮、支持、分泌和信息傳遞等作用[1]。在糖尿病腎病患者體內，高糖和胰島素環(huán)境刺激腎小球系膜細胞發(fā)生一些列病理反應包括氧化應激、炎癥反應、線粒體損傷及各種類型的細胞壞死和程序性死亡[2]。細胞焦亡是一種新發(fā)現(xiàn)的程序性細胞死亡方式，依賴炎性小體調節(jié)的半胱氨酸天冬蛋白酶1(caspase-1)裂解激活，并伴隨白細胞介素(IL)和腫瘤壞死因子α(TNF-α)等促炎癥因子的大量產生[3-4]。

最近研究表明，microRNA(miR)可調控多種糖尿病并發(fā)癥/合并癥組織細胞焦亡的過程[5-7]，對疾病進程有重要影響。最近研究表明miR-497表達水平的下調與早期腎癌的預后不良密切相關[8]，而且miR-497可靶定調節(jié)Toll樣受體4(TLR4)和核因子κB(NF-κB)等轉錄因子，抑制促炎因子TNF-α和IL-1β的表達，從而起到抗炎的作用細胞焦亡是有特定蛋白符合物(即炎癥小體)介導的細胞程序性死亡過程[9]，炎癥因子的大量釋放是其主要特征之一[10]。然而，miR-497對糖尿病腎病個體腎小球系膜細胞的影響并不清楚。本研究以高糖和胰島素培養(yǎng)基刺激人腎小球系膜細胞(HRMC)焦亡，探索miR-497在腎小球系膜細胞焦亡過程中的作用和可能的分子機制。研究結果將為糖尿病腎病發(fā)病機制的探索和糖尿病腎病的預防和治療提供實驗依據(jù)。

材料與方法

主要材料和試劑 HRMC人腎小球系膜細胞株購自上海生命科學研究院細胞資源中心；PBS、青-鏈霉素、明膠購自天津寶鑫生物；miR-497實時定量PCR引物、miR-497模擬物(miR-497 mimic，即人工合成的miR-497分子)序列(miR-497)和對照模擬物(對照mimic)由廣州瑞博公司合成并進行有效性驗證；PCR點突變試劑盒購自Takara公司；脂質體3 000轉染試劑、人胰島素、葡萄糖購自Sigma公司1 g/L胰酶溶液、DMEM培養(yǎng)基、胎牛血清等購自Invitrogen公司；總RNA提取試劑盒、總蛋白提取和定量試劑盒、反轉錄試劑盒、實時定量PCR試劑盒購自北京天根生化科技公司；用于細胞焦亡檢測的caspase-1活性檢測試劑盒和PI染色試劑盒分別購自Bloomington和Life Techology公司；PVDF膜、ECL蛋白檢測試劑盒等購自Millipore公司；兔抗小鼠NLRP1多克隆抗體、兔抗小鼠caspase-1多克隆抗體、兔抗小鼠IL-1β多克隆抗體、兔抗小鼠IL-18多克隆抗體和HRP標記的山羊抗兔IgG購自Abcam公司；細胞培養(yǎng)板、耗材購自Corning公司；實時定量PCR引物包括NLRP1基因、caspase-1基因(Pro-casp1)、IL-1β基因(Pro-IL-1β)和TNFα基因由南京金斯瑞公司設計并合成；pcDNA-NLRP1過表達載體由CellLab公司構建并進行有效性驗證；其他試劑均為進口或國產分析純化。

方法

細胞培養(yǎng)與高糖和胰島素處理 HRMC細胞培養(yǎng)于37℃、50 ml/L CO2培養(yǎng)箱中。對照組，培養(yǎng)于含4.5 mg/ml葡萄糖的DMEM培養(yǎng)基中；處理組，即高糖、高胰島素組，培養(yǎng)于含5.4 mg/ml葡萄糖和10 μg/ml胰島素的DMEM培養(yǎng)基中。細胞每2d換液一次。分別于0h、48h、72h和96h檢測對照組和處理組焦亡細胞數(shù)目和miR-497表達水平。

miR-497 mimic和載體轉染 HRMC細胞接種于高糖和胰島素培養(yǎng)液中，待細胞匯合至70%左右，運用脂質體3000轉染試劑向細胞中轉染不同濃度(0、20 nmol/L、40 nmol/L、60 nmol/L、80 nmol/L、100 nmol/L、120 nmol/L和150 nmol/L)的miR-497 mimic，加入對照mimic作為對照。分別于0、48和72 h檢測轉染組和對照組細胞焦亡水平。分別轉染對照mimic和80 nmol/L miR-497 mimic，分別于0、48和72 h檢測Pro-IL-1β、TNFα和Pro-casp-1基因的mRNA表達水平，以及NLRP1蛋白的表達水平。

HRMC細胞接種于高糖和胰島素培養(yǎng)液中，待細胞匯合至70%左右，運用脂質體3 000轉染試劑向細胞中分別轉染對照mimic、80 nmol/L miR-497 mimic、2 μg/mL pcDNA-NLRP1過表達載體以及80 nmol/L miR-497 mimic 2 μg/ml pcDNA-NLRP1 (miR-497+NLRP1)，16h后更換新鮮培養(yǎng)基，分別于0、48h和72h檢測各種細胞焦亡數(shù)目。

實時定量檢測miR-497和NLRP1等基因的mRNA表達水平 運用總RNA提取試劑盒提取細胞中RNA，運用反轉錄試劑盒進行反轉錄反應獲得cDNA，然后運用實時定量PCR(real-time qPCR)技術檢測miR-497、NLRP1、Pro-IL-1β、TNF-α和Pro-casp-1等的表達水平。反應在25 μl體系中進行，體系中包含1 μl的cDNA模板(約200 ng)、上下游引物各0.5 μl(終濃度為0.5 μmol/L)、12.5 μl實時定量PCR反應緩沖液(試劑盒中包含)和10.5 μl雙蒸水。反應過程為：95℃預變性2 min,以95℃變性15s、60℃退火延伸55s的條件循環(huán)擴增35次，羅氏LightCycler480熒光定量PCR儀采集信號并分析計算擴增循環(huán)數(shù)Ct值，以2-ΔΔCt法計算相對表達量。

Western blot法測caspase-1等蛋白水平 處理后收集各組細胞，提取細胞蛋白。蛋白含量測定后，蛋白上樣于SDS-PAGE膠中，130V恒壓電泳2h；濕轉法將蛋白轉移至PVDF膜上；室溫下以含50 mg/ml脫脂奶粉的Tris緩沖液封閉PVDF膜1h，裁剪后分別與兔抗小鼠NLRP1抗體(1∶ 300)、兔抗小鼠caspase-1抗體(1∶ 400)、兔抗小鼠IL-1β抗體(1∶ 500)、兔抗小鼠IL-18抗體(1∶ 500)孵育，4℃過夜；TBST清洗膜8 min×4次，加HRP標記的山羊抗兔IgG(1∶ 1 000)，室溫孵育2h；TBST清洗膜8 min×4次，ECL試劑盒檢測蛋白表達，于凝膠成像系統(tǒng)中采集圖像，重復3次以上，進行統(tǒng)計分析。

細胞焦亡水平檢測 分別以caspase-1活性檢測試劑盒和PI染色試劑盒標記caspase-1陽性(casp-1+)和PI陽性(PI+)細胞。運用流式細胞術對5×104個標記過的細胞進行篩選，統(tǒng)計雙陽性(casp-1+PI+)細胞數(shù)目。重復4次以上，并進行統(tǒng)計分析。

螢光素酶報告基因技術驗證miR-497對NLRP1的靶向關系 擴增野生型NLRP1 mRNA的3′非翻譯區(qū)(3′UTR)序列全長，運用PCR點突變試劑盒獲得NLRP1 mRNA3′UTR突變體。雙酶切膠回收后分別連接于pGL3雙螢光素酶報告基因載體上，獲得野生型NLRP1-3′UTR報告基因載體(NLRP1-3′UTR-WT)和突變型NLRP1-3′UTR報告基因載體(NLRP1-3′UTR-MUT)；構建好的WT或MUT載體單獨或與mimics共同轉染于細胞中，72 h后收集細胞，按熒光素酶報告基因試劑盒中所述步驟進行處理，然后在多功能酶標儀中檢測螢光素酶活性。

統(tǒng)計學分析 采用SPSS 19.0統(tǒng)計軟件分析處理。測量結果以均數(shù)±標準差表示，所有數(shù)據(jù)兩組間比較采用雙尾t檢驗，多組間對比采用ONE-WAY ANOVA方差分析，P<0.05為差異有統(tǒng)計學意義。

結 果

高糖和胰島素誘導人腎小球系膜細胞焦亡并抑制miR-497表達 正常培養(yǎng)基和添加高糖-胰島素的培養(yǎng)基分別培養(yǎng)HRMC人腎小球系膜細胞株，不同時間點檢測細胞增殖水平變化和miR-497的表達水平。如圖1A所示，高糖-胰島素處理48h焦亡細胞數(shù)目較對照組無顯著變化(P>0.05)，處理72h和96h焦亡細胞數(shù)目分別約是對照組的2.5倍和3倍(P<0.05)；如圖1B所示，高糖-胰島素處理48h、72h和96h，miR-497的表達水平均較對照組有顯著下降(P<0.05)。

圖1 高糖和胰島素對HRMC焦亡和miR-497表達的影響miR-497:microRNA-497;HRMC:人腎小球系膜細胞；A:高糖和胰島素處理細胞后不同時間點細胞焦亡數(shù)目變化；B:實時定量PCR法檢測不同時間點的miR-497表達水平；a：與對照組相比，P<0.05

miR-497轉染抑制人腎小球系膜細胞細胞焦亡和促炎癥因子基因的表達 高糖-胰島素處理的HRMC細胞中轉染對照mimic和不同濃度的miR-497mimic，不同時間點分別檢測細胞焦亡、caspase-1和促炎癥因子基因IL-1β和TNF-α的mRNA表達水平。如圖2所示，不同濃度的miR-497mimic處理48 h和72 h，焦亡細胞數(shù)目均較對照組顯著減少(P<0.05)；隨著miR-497mimic濃度增加，抑制細胞焦亡的效果逐漸增強，濃度為80 nmol/L時達到峰值，60、80和100 nmol/L處理組之間無顯著差異(P>0.05)。以80 nmol/L miR-497mimic處理48 h和72 h，細胞焦亡關鍵調控基因caspase-1 mRNA表達水平顯著下降(P<0.05，圖3A)，IL-1β和TNF-α的mRNA表達水平也顯著下降(P<0.05，圖3B和C)，caspase-1、IL-1β和IL-18蛋白的水平也明顯下調(圖3D)。

圖2 不同濃度的miR-497 mimic對HRMC細胞焦亡的影響miR-497:microRNA-497;mimic:模擬物；HRMC：人腎小球系膜細胞；a:與對照組相比，P<0.05;b:與20 nmol/L處理組相比，P<0.05;c:與40 nmol/L處理組相比，P<0.05

圖3 miR-497對腎小球系膜細胞焦亡通路關鍵基因表達的影響miR-497:microRNA-497;mimic:模擬物；A:80 nmol/L miR-497mimic轉染后不同時間點caspase-1 mRNA水平的變化；B:miR-497 mimic轉染后不同時間點IL-1β mRNA水平的變化；C:miR-497 mimic轉染后不同時間點IL-1β mRNA水平的變化；D:miR-497 mimic轉染后不同時間點caspase-1、IL-1β和IL-18蛋白水平的變化水平的變化;C:對照mimic組;T:miR-497 mimic處理組;*:與對照mimic組相比，P<0.05

miR-497直接靶定結合炎性小體NLRP1基因 NLRP1炎性小體在焦亡通路中承擔著激活caspase-1的作用[11]。TargetScan預測結果顯示miR-497與NLRP1基因的3′UTR(圖4A)；螢光素酶報告基因分析結果顯示miR-497 mimic可顯著降低野生型NLRP1-3′UTR報告基因的螢光素酶活性(P<0.05，圖4B)，但對突變型NLRP1-3′UTR報告基因的螢光素酶活性無顯著影響(P>0.05，圖4B)。Western印記分析結果顯示，miR-497可顯著抑制NLRP1蛋白的表達(P<0.05，圖4C)。

為驗證miR-497抑制細胞焦亡是通過靶定炎性小體NLRP1實現(xiàn)，在HRMC人腎小球系膜細胞中分別單獨轉染miR-497、pcDNA-NLRP1或共轉染miR-497和pcDNA-NLRP1，細胞焦亡檢測結果顯示，pcDNA-NLRP1轉染可消除miR-497對細胞焦亡的抑制作用(圖5)。

圖4 miR-497直接靶定結合炎性小體NLRP1基因并抑制NLRP1蛋白的表達miR-497:microRNA-497;mimic:模擬物；A:TargetScan預測miR-497與NLRP1基因的靶定結合關系；B:螢光素酶報告基因分析驗miR-497與NLRP1基因的靶定結合關系；C:轉染miR-497 mimic對NLRP1蛋白表達水平的影響;*:miR-497mimic組與mimic對照組熒光素酶活性相比,P<0.05;a:與mimic對照組相比，P<0.05

圖5 pcDNA-NLRP1轉染可消除miR-497對細胞焦亡的抑制作用miR-497:microRNA-497;mimic:模擬物；a：與mimic對照組相比，P<0.05

討 論

高糖和胰島素對腎小球系膜細胞肥大、氧化應激和炎癥反應等過程都有一定的作用。最近研究表明，高糖和炎癥誘導劑脂多糖共處理導致腎小球系膜細胞內炎性小體水平上升，氧化應激和炎癥反應增加[12-13]，是細胞焦亡在分子和亞細胞水平的典型表現(xiàn)，提示高糖和炎癥誘導劑共處理可能促進細胞焦亡。本研究中，高糖和胰島素處理腎小球系膜細胞導致焦亡細胞數(shù)目增加，證實高糖和炎癥誘導劑胰島素長時間處理可促進系膜細胞凋亡。

焦亡細胞的典型表現(xiàn)為細胞內炎性小體NLRP1或NLRP3等表達上升，活性caspase-1水平增加及IL-1和TNFα等促炎癥因子的大量表達，其鑒定標準為caspase-1表達和PI染色的雙陽性[3,14-16]。最近一項研究報道證實，糖尿病腎病個體中caspase-1主導了腎臟組織細胞的損傷[2]，提示細胞焦亡可能是促進腎病糖尿病進程的關鍵機制。本研究中，高糖和胰島素處理的腎小球系膜細胞中轉染不同濃度的miR-497 mimic后，caspase-1和PI雙陽性細胞數(shù)目均顯著下降。以篩選的最適濃度(80 nmol/L)的miR-497 mimic處理細胞后，細胞中caspase-1、IL-1β和TNFα等標志基因的表達水平顯著受到抑制，表明miR-497具有抗細胞焦亡的作用。

眾所周知，miRNA的生物學功能決定于其靶基因的具體作用。炎性小體是由細胞內模式識別受體參與組裝的多蛋白復合物，是天然免疫系統(tǒng)的重要組成部分。炎癥小體能夠識別病原相關分子模式或者宿主來源的危險信號分子，招募和激活促炎癥蛋白酶caspase-1，在細胞焦亡的激活過程中起主導作用[17-18]。目前已發(fā)現(xiàn)的炎性小體有NLRP1、NLRP3、IPAF和AIM2[18]。近年來研究表明miRNAs多通過直接或間接調節(jié)炎性小體或caspase-1水平調控細胞焦亡。如miR-7和miR-20a等均可通過靶定NLRP3炎性小體抑制神經細胞或心肌細胞的焦亡[19-20]；miR-30d可促進活性caspase-1的表達，促進糖尿病心肌病大鼠心肌細胞的焦亡[21]；miR-9和miR-223則通過間接調節(jié)NLRP3炎性小體抑制神經細胞和心肌細胞焦亡[22-23]。然而，調節(jié)NLRP1的miRNA的報道并不多見，本研究預測并證實miR-497可直接靶定NLRP1基因并抑制NLRP1蛋白的表達，從而引起抑制高糖和胰島素誘導的腎小球系膜細胞的焦亡。

綜上所述，本研究發(fā)現(xiàn)高糖和胰島素引起腎小球系膜細胞焦亡水平增加并伴隨miR-497水平的下調。miR-497可直接靶向結合并抑制NLRP1炎性小體的表達水平，降低細胞中caspase-1表達和促炎癥因子的分泌，減少高糖和胰島素誘導的細胞焦亡和炎癥反應。本研究有望為糖尿病腎病的防治研究尋找新的途徑。

1 Abboud HE.Mesangial cell biology.Exp Cell Res,2012,318(9):979-985.

2 Yao XM,Ye SD,Xiao CC,et al.Metformin alleviates high glucose mediated oxidative stress in rat glomerular mesangial cells by modulation of p38 mitogen-activated protein kinase expression in vitro.Mol Med Rep,2015,12(1):520-526.

3 Broz P.Immunology:Caspase target drives pyroptosis.Nature,2015,526(7575):642-643.

4 Croker BA,Silke J,Gerlic M.Fight or flight:Regulation of emergency hematopoiesis by pyroptosis and necroptosis.Curr Opin Hematol,2015,22 (4):293-301.

5 Simpson K,Wonnacott A,Fraser DJ,et al.Micrornas in diabetic nephropathy:From biomarkers to therapy.Curr Diab Rep,2016,16(3):35.

6 Kato M,Natarajan R.Micrornas in diabetic nephropathy:Functions,biomarkers,and therapeutic targets.Ann N Y Acad Sci,2015,1353:72-88.

7 Nassirpour R,Raj D,Townsend R,et al.Microrna biomarkers in clinical renal disease:From diabetic nephropathy renal transplantation and beyond.Food Chem Toxicol,2016,98(Pt A):73-88.

8 Zhao X,Zhao Z,Xu W,et al.Down-regulation of miR-497 is associated with poor prognosis in renal cancer.Int J Clin Exp Pathol,2015,8(1):758-764.

9 Xu M,Wang HF,Zhang YY,et al.Protection of rats spinal cord ischemia-reperfusion injury by inhibition of miR-497 on inflammation and apoptosis:Possible role in pediatrics.Biomedical P￣h￣a￣r￣m￣a￣c￣o￣t￣h￣e￣r￣a￣p￣y,2016,81:337-344.

10 Vande Walle L,Lamkanfi M.Pyroptosis.Curr Biol,2016,26(13):R568-572.

11 Masters SL,Gerlic M,Metcalf D,et al.Nlrp1 inflammasome activation induces pyroptosis of hematopoietic progenitor cells.Immunity,2012,37(6):1009-1023.

12 Sakai N,Wada T.Revisiting inflammation in diabetic nephropathy:The role of the nlrp3 inflammasome in glomerular resident cells.Kidney Int.,2015,87(1):12-14.

13 Wada J,Makino H.Innate immunity in diabetes and diabetic nephropathy.Nat Rev Nephrol,2016,12(1):13-26.

14 Abe J,Morrell C.Pyroptosis as a Regulated from of Necrosis:PI+/Annexin V-/High Caspase 1/Low Caspase 9 Activity in Cells=Pyroptosis?Circ Res,2016,118(10):1457-1460.

15 Van Hauwermeiren F,Lamkanfi M.The nek-sus of the nlrp3 i￣n￣f￣l￣a￣m￣m￣a￣s￣o￣m￣e.Nat Immunol,2016,17(3):223-224.

16 Brickler T,Gresham K,Meza A,et al.Nonessential role for the nlrp1 inflammasome complex in a murine model of traumatic brain injury.Mediators Inflamm,2016,2016:6373506.

17 Ali SR,Karin M,Nizet V.Signaling cascades and inflammasome activation in microbial infections.Inflammasome,2015,2(1):7-12.

18 Vanaja SK,Rathinam VA,Fitzgerald KA.Mechanisms of i￣n￣f￣l￣a￣m￣m￣a￣s￣o￣m￣e activation:Recent advances and novel insights.Trends Cell Biol,2015,25(5):308-315.

19 Li XF,Shen WW,Sun YY,et al.Microrna-20a negatively regulates expression of NLRP3-inflammasome by targeting txnip in adjuvant-induced arthritis fibroblast-like synoviocytes.Joint Bone Spine,2016,83(6):695-700.

20 Zhou Y,Lu M,Du RH,et al.MicroRNA-7 targets Nod-like receptor protein 3 inflammasome to modulate neuroinflammation in the pathogenesis of Parkinson’s disease.Mol Neurodegener,2016,11:28.

21 Li X,Du N,Zhang Q,Li J,et al.Microrna-30d regulates cardiomyocyte pyroptosis by directly targeting foxo3a in diabetic cardiomyopathy.Cell Death Dis，2014：5:e1479.

22 Yang Z,Zhong L,Xian R,et al.Microrna-223 regulates inflammation and brain injury via feedback to nlrp3 inflammasome after intracerebral hemorrhage.Mol Immunol,2015,65(2):267-276.

23 Jeyabal P,Thandavarayan RA,Joladarashi D,et al.Microrna-9 inhibits hyperglycemia -induced pyroptosis in human ventricular cardiomyocytes by targeting elavl1.Biochem Biophys Res Commun,2016,471(4):423-429.

(本文編輯 青 松)

Potential role and mechanism of microRNA-497 in the glomerular mesangial cell pyroptosis

LI Rong1,ZHENG Haolin2,TIAN Xiujuan1,FENG Shidong1,LI Li1,YU Yan1,ZHAO Lijuan1,ZHOU Meilan1,WANG Hanmin1

1Department of Nephrology,First Affiliated Hospital,Fourth Military Medical University,Xi′an 710032,China23rd battalion the nine,grade 2011,Fourth Military Medical University,Xi’an 710032,China

Wang Hanmin(E-mail：whm@medmail.com.cn)

Objective：To explore the potential role and mechanism of microRNA-497 in the glomerular mesangial cell pyroptosis induced by high glucose and insulin. Methodology：High glucose and insulin was used to treat human renal mesangial cells (HRMC). At various time points, cell pyroptosis was detected with flow cytometry, and real-time qPCR was used to detect miR-497 levels in HRMC. Then, various concentrations of miR-497 mimic were transfected to HRMC. The mRNA levels of key genes in pyroptotic pathway, including IL-1β, TNF-α and caspase-1 were detected. Bioinformatics and Luciferase Reporter Gene assay were used to predict and verify the target of miR-497 to nucleotide-binding oligomerization domain receptor P1 (NLRP1) inflammasome. The miR-497 mimic and pcDNA-NLRP1 expression vector were transfected individually or co-transfected to HRMC. Western blotting was used to detect the levels of NLRP1 protein, and cell pyroptosis were detected. Results：HRMC treated with high glucose and insulin for more than 48h, HRMC pyroptosis was significantly increased, and the expression level of miR-497 was decreased (P<0.05). After transfected with miR-497 mimic, the pyroptosis of HRMC was significantly ameliorated, and the mRNA expression of IL-1β, TNFα and caspase-1 were downregulated (P<0.05). miR-497 directly targeted at NLRP1 gene and suppressed NLRP1 protein expression. NLRP1 overexpression completely rescued the inhibition of cell pyroptosis caused by miR-497. Conclusion：The HRMC pyroptosis was suppressed miR-497, and inflammation response was induced by high glucose and insulin.

pyroptosis high glucose and insulin microRNA-497 NLRP1 inflammasome caspase-1

10.3969/cndt.j.issn.1006-298X.2016.06.006

國家自然科學基金(81400699)，陜西省自然科學基金重點項目(2014JZ007)

1第四軍醫(yī)大學西京醫(yī)院腎內科(西安，710032)；2第四軍醫(yī)大學2011級學員旅三營九連

王漢民(E-mail：whm@medmail.com.cn)

2016-05-18

? 2016年版權歸《腎臟病與透析腎移植雜志》編輯部所有