• <tr id="yyy80"></tr>
  • <sup id="yyy80"></sup>
  • <tfoot id="yyy80"><noscript id="yyy80"></noscript></tfoot>
  • 99热精品在线国产_美女午夜性视频免费_国产精品国产高清国产av_av欧美777_自拍偷自拍亚洲精品老妇_亚洲熟女精品中文字幕_www日本黄色视频网_国产精品野战在线观看 ?

    MTHFR基因多態(tài)性與非綜合征性唇腭裂的相關(guān)性研究

    2016-06-15 08:14:02焦曉輝郝嫣汝宋紅權(quán)
    中國(guó)免疫學(xué)雜志 2016年5期
    關(guān)鍵詞:相關(guān)性等位基因

    安 樂 焦曉輝 米 娜 郝嫣汝 宋紅權(quán)

    (哈爾濱醫(yī)科大學(xué),哈爾濱150000)

    ?

    MTHFR基因多態(tài)性與非綜合征性唇腭裂的相關(guān)性研究

    安樂①焦曉輝①米娜郝嫣汝宋紅權(quán)②

    (哈爾濱醫(yī)科大學(xué),哈爾濱150000)

    [摘要]目的:探討5,10-亞甲基四氫葉酸還原酶(MTHFR)基因C677T多態(tài)性與非綜合征性唇腭裂(NSCLP)遺傳易感性的相關(guān)性。方法:選取2014年6月至2015年5月在我院治療的NSCLP患者100例(病例組A),其中單純性腭裂(CPO組)23例,唇裂伴或不伴腭裂(CL/P組)77例;同時(shí)選取100名正常兒童(對(duì)照組A)、100名生育過(guò)NSCLP患兒母親(病例組B)和100名正常出生兒母親(對(duì)照組B),采用聚合酶聯(lián)式反應(yīng)-限制性片段長(zhǎng)度多態(tài)性基因分型技術(shù)檢測(cè)各組MTHFR基因C677T突變。結(jié)果:病例組A中,CL/P組C、T等位基因頻率為55.84%和44.16%,CPO組分別為54.35%和45.65%,對(duì)照組A分別為75.00%和25.00%,CL/P組和CPO組T等位基因頻率明顯高于對(duì)照組A,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05);CT基因型個(gè)體患CL/P的風(fēng)險(xiǎn)是CC基因型個(gè)體的2.39倍,患CPO的風(fēng)險(xiǎn)是CC基因型個(gè)體的2.98倍;TT基因型個(gè)體患CL/P的風(fēng)險(xiǎn)是CC基因型個(gè)體的6.70倍,患CPO的風(fēng)險(xiǎn)是CC基因型個(gè)體的7.33倍;病例組B和對(duì)照組B的等位基因頻率和基因型構(gòu)成情況比較差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)。結(jié)論:MTHFR基因C677T突變可能是NSCLP發(fā)生的遺傳危險(xiǎn)因素之一,但母親MTHFR基因C677T突變可能與子代發(fā)生NSCLP無(wú)關(guān)。

    [關(guān)鍵詞]MTHFR基因;NSCLP;相關(guān)性;等位基因

    唇腭裂是人類較為常見的先天性發(fā)育畸形之一,臨床上根據(jù)胚胎學(xué)發(fā)育時(shí)期的不同致畸機(jī)制,往往將非綜合征性唇腭裂分為單純性唇腭裂和唇裂伴或者不伴腭裂。相關(guān)臨床統(tǒng)計(jì)可見非綜合征性唇腭裂占到了唇腭裂發(fā)生的75%左右[1],但相關(guān)病因研究尚無(wú)明確進(jìn)展,迄今位置多數(shù)學(xué)者認(rèn)為,唇腭裂的發(fā)病主要為環(huán)境因素與遺傳因素相互作用的結(jié)果[2,3]。相關(guān)國(guó)外文獻(xiàn)報(bào)道認(rèn)為,孕婦在孕早期葉酸攝入不足會(huì)使得胎兒發(fā)生非綜合癥型唇腭裂的幾率增加,同時(shí)妊娠三個(gè)月內(nèi)服用葉酸拮抗劑如甲氨蝶呤或者苯妥英鈉均會(huì)不同程度的增加新生兒非綜合型唇腭裂的發(fā)生[4,5],提示了葉酸缺乏是導(dǎo)致非綜合型唇腭裂的重要原因,本次臨床研究重在分析5,10-亞甲基四氫葉酸還原酶(MTHFR)基因C677T多態(tài)性與非綜合征性唇腭裂(NSCLP)遺傳易感性的相關(guān)性,具體研究如下。

    1材料與方法

    1.1材料

    1.1.1研究對(duì)象選取2014年6月至2015年5月在我院治療的非綜合征性唇腭裂(NSCLP)患者100例(病例組A),其中男性58例,女性42例;年齡4個(gè)月~18歲,平均(4.71±2.02)歲;其中單純性腭裂(CPO組)23例,唇裂伴或不伴腭裂(CL/P組)77例,其中雙側(cè)CL/P 17例,單側(cè)CL/P 60例。排除綜合性唇腭裂或其他系統(tǒng)畸形。病例組B:選取100名生育過(guò)NSCLP患兒母親,年齡23~38歲,平均年齡(28.13±4.58)歲,排除惡性腫瘤、心腦血管方面等疾病。對(duì)照組A:選取100名正常兒童,其中男性60例,女性40例,年齡2月~17歲,平均年齡(5.02±2.51)歲,排除其他先天性畸形。對(duì)照組B:選取100名正常出生兒母親,年齡22~38歲,平均年齡(28.01±5.21)歲,排除惡性腫瘤、心腦血管方面等疾病。此次實(shí)驗(yàn)通過(guò)院內(nèi)醫(yī)學(xué)倫理委員會(huì)的批準(zhǔn),血液標(biāo)本在研究對(duì)象或在其家長(zhǎng)的知情同意的前提下獲得。

    1.1.2儀器和試劑tapDNA聚合酶購(gòu)自立陶宛MBI公司,hinfⅠ、MboⅡ限制性內(nèi)切酶購(gòu)自立陶宛MBI公司,2700型PCR購(gòu)自美國(guó)ABI公司,APPLIGENE垂直電泳槽、H6-1微型電泳槽購(gòu)自上海福馬實(shí)驗(yàn)設(shè)備有限公司。

    1.2實(shí)驗(yàn)方法將收集到的5 ml全血,ACD抗凝,提取基因組DNA,應(yīng)用primer5.0引物設(shè)計(jì)軟件設(shè)計(jì)引物、內(nèi)切酶,對(duì)于兩個(gè)位點(diǎn)進(jìn)行內(nèi)切,分別應(yīng)用PCR擴(kuò)增引物進(jìn)行限制性內(nèi)切酶MAV1、DdeⅠ酶切,產(chǎn)物電泳后進(jìn)行基因分型。為了驗(yàn)證基因分型正確性,隨機(jī)挑選10%的樣本直接測(cè)序,同時(shí)設(shè)立陽(yáng)性對(duì)照炎癥內(nèi)切酶的正確性。

    1.3統(tǒng)計(jì)學(xué)處理數(shù)據(jù)分析采用SPSS19.0統(tǒng)計(jì)軟件,C677T基因型及等位基因頻率使用χ2檢驗(yàn),C677T基因型與NSCLP相關(guān)性采用優(yōu)勢(shì)比表示。以P<0.05表示差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

    2結(jié)果

    2.1C677T多態(tài)性電泳結(jié)果DNA片段擴(kuò)增后長(zhǎng)度為198 bp,若發(fā)生C→T突變,則產(chǎn)生HinfⅠ酶切位點(diǎn),產(chǎn)生175 bp和23 bp片段。純和突變型(TT)產(chǎn)生175 bp,23 bp兩個(gè)DNA片段,雜合子(CT)產(chǎn)生198、175、23 bp三個(gè)DNA片段,野生型(CC)只用198 bp一個(gè)DNA片段。以標(biāo)準(zhǔn)分子量Marker為參照,在電泳圖譜上可看到CC基因型、CT基因型和TT基因型,見圖1。

    2.2病例組A與對(duì)照組A C677T基因型和等位基因頻率比較病例組A中,CL/P組C、T等位基因頻率為55.84%和44.16%,CPO組分別為54.35%和45.65%,對(duì)照組A分別為75.00%和25.00%,CL/P組和CPO組T等位基因頻率明顯高于對(duì)照組A,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(χ2=14.367、7.769,P<0.05);CT基因型個(gè)體患CL/P的風(fēng)險(xiǎn)是CC基因型個(gè)體的2.39倍,患CPO的風(fēng)險(xiǎn)是CC基因型個(gè)體的2.98倍;TT基因型個(gè)體患CL/P的風(fēng)險(xiǎn)是CC基因型個(gè)體的6.70倍,患CPO的風(fēng)險(xiǎn)是CC基因型個(gè)體的7.33倍。見表1。

    圖1 MTHFR基因C677T多態(tài)性電泳結(jié)果Fig.1 MTHFR gene C677T polymorphic electrophor-esis resultsNote: 3-6.CC genotype;1,2,8.CT genotype;7.TT genotype;M.Standard molecular weight Marker.

    表1病例組A與對(duì)照組A C677T基因型和等位基因頻率比較[n(%)]

    Tab.1Case group A and control group A C677T genotype and allele frequency comparison[n(%)]

    GroupnGenotypefrequencyCCCTTTAllelefrequencyCTCasegroupA10032(32.00)54(54.00)14(14.00)118(59.00)82(41.00)CL/Pgroup7723(29.87)40(51.95)14(18.18)86(55.84)68(44.16)CPOgroup236(26.09)13(56.52)4(17.39)25(54.35)21(45.65)ControlgroupA10055(55.00)40(40.00)5(5.00)150(75.00)50(25.00)

    表2病例組B與對(duì)照組B C677T基因型和等位基因頻率比較[n(%)]

    Tab.2Case group B and control group B C677T genotype and allele frequency comparison[n(%)]

    GroupsnGenotypefrequencyCCCTTTAllelefrequencyCTCasegroupB10043(43.00)47(47.00)10(10.00)133(66.50)67(33.50)ControlgroupB10039(39.00)50(50.00)11(11.00)128(64.00)72(36.00)

    2.3病例組B與對(duì)照組B中C677T基因型和等位基因頻率比較病例組B的C、T等位基因頻率分別為66.50%和33.50%,對(duì)照組B的等位基因頻率分別為64.00%和36.00%,差異比較無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(χ2=0.276,P>0.05);兩組基因型構(gòu)成情況比較差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(χ2=0.336,P>0.05)。見表2。

    3討論

    近年來(lái)隨著先天性唇腭裂相關(guān)研究的進(jìn)展,多數(shù)學(xué)者認(rèn)為,先天性基因易感性以及環(huán)境因素獨(dú)立以及相互作用的方式,均可能較為顯著地參與到了先天性唇腭裂特別是非綜合型唇腭裂的發(fā)生中[6]。筆者通過(guò)回顧國(guó)內(nèi)外相關(guān)文獻(xiàn)發(fā)現(xiàn),基礎(chǔ)領(lǐng)域的研究著重探討了基因水平的變異或者易感基因的先天性獲得對(duì)于唇腭裂的發(fā)病影響[7],古麗等[8]研究者證實(shí),在孕婦懷孕早期(一般認(rèn)為懷孕3月),葉酸的攝入不足以及葉酸相關(guān)拮抗劑的攝入均在一定程度上增加了新生兒唇腭裂的發(fā)生率,但相關(guān)臨床薈萃分析較少,同時(shí)進(jìn)一步研究并未發(fā)現(xiàn)新生兒唇腭裂的發(fā)生與葉酸攝入水平存在明顯的劑量依賴性[9]。故此,近三年來(lái)部分學(xué)者通過(guò)研究提出葉酸對(duì)于唇腭裂的發(fā)生影響并不僅僅依靠葉酸攝入水平,更多依靠相關(guān)葉酸代謝途徑,進(jìn)而促進(jìn)部分致畸基因的異常激活,從而增加唇腭裂的發(fā)生率[10],而C677T多態(tài)性對(duì)于先天性唇腭裂的臨床易感性研究較少,本研究重在探討黑龍江省漢族人群中5,10-亞甲基四氫葉酸還原酶(MTHFR)基因C677T多態(tài)性與非綜合征性唇腭裂(NSCLP)遺傳易感性的相關(guān)性,進(jìn)而為相關(guān)流行病學(xué)統(tǒng)計(jì)以及公共衛(wèi)生領(lǐng)域分析提供依據(jù)。

    部分學(xué)者在探討A1298C多態(tài)性與先天性非綜合型唇腭裂的發(fā)生關(guān)系中發(fā)現(xiàn),C677正常核型均為677CC,當(dāng)非綜合型唇腭裂易感基因A1298部位核型由A1298AA突變?yōu)?298CC時(shí),部分C677核型突變?yōu)?77TT[11],提示了C677核型突變可能參與到了非綜合型唇腭裂的發(fā)生機(jī)制中。筆者通過(guò)本次研究發(fā)現(xiàn),野生型C677基因有CC突變?yōu)殡s合型(CT)或者純核型(TT),進(jìn)一步證實(shí)了相關(guān)學(xué)者的提出的假設(shè)[12],表明C677基因多態(tài)性可能參與到了非綜合型唇腭裂的發(fā)生機(jī)制中,而進(jìn)一步分析可見,單純性唇腭裂以及唇裂伴或者不伴腭裂組T等位基因頻率明顯高于正常對(duì)照人群,而相關(guān)基因型分析可見隨著C-T基因突變的發(fā)生,雜合型突變基因型導(dǎo)致新生兒患非綜合型唇腭裂的幾率增加了2~3倍,而當(dāng)C-T突變?yōu)榧兺蛔冃突蛐蜁r(shí),發(fā)生兩種唇腭裂的可能性顯著增加,風(fēng)險(xiǎn)可增加7倍左右,提示了C677基因多態(tài)性與非綜合型唇腭裂的發(fā)生關(guān)系, Desai等[13]綜合分析后認(rèn)為,MTHFR基因677C-T或1298A-C突變使控制葉酸代謝的MTHFR蛋白構(gòu)象發(fā)生變化,MTHFR酶活性顯著下降,而這一代謝途徑對(duì)于維持正常血漿5-甲基四氫葉酸和hcy的濃度至關(guān)重要,而hcy與頜面部和神經(jīng)管在胚胎發(fā)育上密切相關(guān),細(xì)胞內(nèi)MTHFR基因677C-T突變導(dǎo)致的MTHFR酶活性顯著下降,可進(jìn)一步通過(guò)促進(jìn)細(xì)胞內(nèi)Hey聚集,有可能干擾正常發(fā)育的頜面部組織,影響頜面部突起的正常融合,進(jìn)而導(dǎo)致唇腭裂的發(fā)生。但相關(guān)先天性唇腭裂畸形新生兒產(chǎn)婦的C677基因并無(wú)明顯多態(tài)性表現(xiàn),提示母體相關(guān)位點(diǎn)基因并未在唇腭裂的發(fā)生中發(fā)揮作用,同時(shí)提示相關(guān)唇腭裂新生兒C677位點(diǎn)多態(tài)性的獲得性發(fā)生機(jī)制較為少見,多數(shù)病例在胚胎發(fā)育過(guò)程中由于環(huán)境或者其他因素進(jìn)而造成相關(guān)位點(diǎn)突變,引起易感基因多態(tài)性表現(xiàn)[11]。

    綜上所述,本研究證明了MTHFR基因C677T突變與NSCLP風(fēng)險(xiǎn)增高顯著相關(guān),為葉酸攝入低或葉酸代謝障礙在NSCLP發(fā)生中起重要作用的假說(shuō)提供了遺傳學(xué)基礎(chǔ)。后續(xù)相關(guān)研究應(yīng)更加注重MTHFR基因C677T多態(tài)性與葉酸攝入量之間的交互作用,并對(duì)MTHFR酶活性、血漿hcy水平進(jìn)行綜合分析。

    參考文獻(xiàn):

    [1]朱博,王達(dá),楊博逸,等.中國(guó)人群5,10-亞甲基四氫葉酸還原酶基因C677T多態(tài)性與非綜合征性唇腭裂關(guān)系的Meta分析[J].中國(guó)全科醫(yī)學(xué),2013,43(38):3825-3827.

    [2]喻瓊瓊,石冰.孕婦補(bǔ)充葉酸與唇腭裂畸形發(fā)生的關(guān)系[J].國(guó)際口腔醫(yī)學(xué)雜志,2014,23(3):368-370.

    [3]王蘋,王紅,吳雅慧,等.中國(guó)人群葉酸/同型半胱氨酸代謝基因多態(tài)性與非綜合征型唇腭裂關(guān)聯(lián)研究[J].北京大學(xué)學(xué)報(bào)(醫(yī)學(xué)版),2013,16(03):352-358.

    [4]Pan X,Wang P,Yin X,etal.Association between maternal MTHFR polymorphisms and nonsyndromic cleft lip with or without cleft palate in offspring,A meta-analysis based on 15 case-control studies[J].Int J Fertil Steril,2015,8(4):463-480.

    [5]南欣榮,任一雄,李瑞芳,等.葉酸代謝相關(guān)基因多態(tài)性與山西地區(qū)非綜合征性唇腭裂的相關(guān)性研究[J].實(shí)用口腔醫(yī)學(xué)雜志,2015,23(1):96-100.

    [6]馬麗娟,杜雪飛,董文,等.MAFB 基因多態(tài)性在寧夏回漢人群中與非綜合征型唇腭裂的相關(guān)性研究[J].實(shí)用口腔醫(yī)學(xué)雜志,2015,21(1):57-62.

    [7]劉奕杉,凌彬,劉濤,等.探討MTHFR基因多態(tài)性與新疆地區(qū)人群唇腭裂發(fā)病的關(guān)系[J].中華臨床醫(yī)師雜志(電子版),2013,34(11):4795-4798.

    [8]古麗,王玲,阿地力·莫明.非綜合征性唇腭裂基因突變檢測(cè)方法研究[J].中華實(shí)用診斷與治療雜志,2014,23(4):313-314.

    [9]陳小梅,韓淑芬.葉酸代謝相關(guān)基因多態(tài)性在母胎醫(yī)學(xué)領(lǐng)域的應(yīng)用及相關(guān)性研究[J].中國(guó)婦幼健康研究,2015,26(1):125-128.

    [10]陳丁莉,李守霞,要跟東.非綜合征性唇腭裂候選基因和位點(diǎn)研究進(jìn)展[J].中華口腔醫(yī)學(xué)研究雜志(電子版),2014,22(4):341-345.

    [11]de Aguiar PK,Coletta RD,de Oliveira AM,etal.rs1801133C>T polymorphism in MTHFR is a risk factor for nonsyndromic cleft lip with or without cleft palate in the Brazilian population[J].Birth Defects Res A Clin Mol Teratol,2015,103(4):292-298.

    [12]Abdollahi-Fakhim S,Asghari EM,Varghaei P,etal.Common mutations of the methylenetetrahydrofolate reductase (MTHFR) gene in non-syndromic cleft lips and palates children in north-west of iran[J].Iran J Otorhinolaryngol,2015,27(78):7-14.

    [13]Desai AL,Dinesh MR,Amarnath BC,etal.Association of transforming growth factor alpha and methylenetetrahydrofolate reductase gene variants with nonsyndromic cleft lip and palate in the indian population[J].Contemp Clin Dent,2014,5(3):329-333.

    [收稿2015-09-20修回2015-10-20]

    (編輯許四平)

    MTHFR gene polymorphism and non syndrome cleft lip and palate correlation study

    ANLe,JIAOXiao-Hui,MINa,HAOYan-Ru,SONGHong-Quan.

    TheSchoolofDentistryofHarbinMedicalUniversity,Haerbin150000,China

    [Abstract]Objective:To investigate 5,10 methylenetetrahydrofolate reductase (MTHFR) gene C677T polymorphism and non syndrome cleft lip and cleft palate (NSCLP) genetic susceptibility correlation.Methods: From June 2014 to May 2015,100 NSCLP patients (case group A) were treated in our hospital,where in cleft palate (CPO group) 23 cases,77 cases of cleft lip with or without cleft palate (CL/P group);at the same time,selected 100 normal children (control group A),100 mothers of NSCLP children (case group B) and 100 normal birth mother (control group B),C677T mutation of MTHFR gene was detected by polymerase chain reaction restriction fragment length polymorphism genotyping technique.Results: in case group A,CL/P group C,T allele frequency were 55.84% and 44.16%,CPO group were 54.35% and 45.65%,control group A was 75.00% and 25.00%,CL/P and CPO group T allele frequency was significantly higher group A,the difference was statistically significant (P<0.05);CT genotypes suffering CL/P′s risk was 2.39 times the CC genotype,suffering CPO′s risk was 2.98 times the CC genotype;TT genotypes suffering CL/P′s risk was 6.70 times the CC genotype,suffering CPO′s risk was 7.33 times the CC genotype;there was no significant difference in the allele frequencies and genotype between the case group B and the control group B (P>0.05).Conclusion: C677T mutation of MTHFR gene may be one of the genetic risk factors of NSCLP,but mother MTHFR C677T mutation may unrelated with the offspring NSCLP.

    [Key words]MTHFR gene;NSCLP;Relativity;Allele

    doi:10.3969/j.issn.1000-484X.2016.05.027

    作者簡(jiǎn)介:安樂(1988年-),男,主要從事唇腭裂發(fā)生機(jī)制研究。

    中圖分類號(hào)R782.2

    文獻(xiàn)標(biāo)志碼A

    文章編號(hào)1000-484X(2016)05-0722-04

    ①哈爾濱醫(yī)科大學(xué)第一附屬口腔醫(yī)院,哈爾濱150000。

    ②黑龍江省醫(yī)院,哈爾濱150000。

    通訊作者及指導(dǎo)教師:焦曉輝(1958年-),男,主任醫(yī)師,教授,博士生導(dǎo)師,主要從事唇腭裂發(fā)生機(jī)制研究。

    猜你喜歡
    相關(guān)性等位基因
    親子鑒定中男性個(gè)體Amelogenin基因座異常1例
    智慧健康(2021年17期)2021-07-30 14:38:32
    廣東漢族人群D18S51基因座等位基因分型現(xiàn)象分析
    基于Kronecker信道的MIMO系統(tǒng)通信性能分析
    科技視界(2016年21期)2016-10-17 17:37:34
    小兒支氣管哮喘與小兒肺炎支原體感染相關(guān)性分析
    腦梗死與高同型半胱氨酸的相關(guān)性研究(2)
    腦梗死與高同型半胱氨酸的相關(guān)性研究
    會(huì)計(jì)信息質(zhì)量可靠性與相關(guān)性的矛盾與協(xié)調(diào)
    WHOHLA命名委員會(huì)命名的新等位基因HLA-A*24∶327序列分析及確認(rèn)
    決策有用觀下財(cái)務(wù)會(huì)計(jì)信息質(zhì)量研究
    DXS101基因座稀有等位基因的確認(rèn)1例
    一个人免费在线观看电影 | 看免费av毛片| 欧美3d第一页| 色综合欧美亚洲国产小说| 国产亚洲av嫩草精品影院| 亚洲七黄色美女视频| 男女视频在线观看网站免费 | 国产一级毛片七仙女欲春2| 91字幕亚洲| 麻豆成人av在线观看| 国产精品一区二区三区四区久久| 青草久久国产| 免费在线观看完整版高清| 亚洲av片天天在线观看| 国产视频内射| 黄色片一级片一级黄色片| 高清毛片免费观看视频网站| 这个男人来自地球电影免费观看| 中文字幕熟女人妻在线| 国产一级毛片七仙女欲春2| 又粗又爽又猛毛片免费看| 国内少妇人妻偷人精品xxx网站 | 中文字幕高清在线视频| 99国产精品99久久久久| 亚洲午夜精品一区,二区,三区| 久久人人精品亚洲av| 亚洲av美国av| 久久亚洲真实| 性欧美人与动物交配| www国产在线视频色| 国内精品久久久久精免费| 亚洲中文日韩欧美视频| 亚洲美女黄片视频| 国产91精品成人一区二区三区| 午夜福利免费观看在线| 香蕉国产在线看| 亚洲欧美精品综合久久99| 最近最新中文字幕大全电影3| 亚洲欧美精品综合一区二区三区| 国产精品久久久久久亚洲av鲁大| 亚洲精品美女久久久久99蜜臀| 性色av乱码一区二区三区2| 禁无遮挡网站| 免费在线观看成人毛片| 少妇的丰满在线观看| 国产成人av激情在线播放| 欧美高清成人免费视频www| 国产精品免费视频内射| 两个人的视频大全免费| 无遮挡黄片免费观看| 男人舔女人下体高潮全视频| www.www免费av| 欧美丝袜亚洲另类 | 婷婷丁香在线五月| 精品高清国产在线一区| 麻豆久久精品国产亚洲av| 色在线成人网| or卡值多少钱| 精品熟女少妇八av免费久了| 成人国语在线视频| 99riav亚洲国产免费| 国产人伦9x9x在线观看| 国产激情欧美一区二区| 国内精品久久久久精免费| 色尼玛亚洲综合影院| 日韩欧美在线二视频| 日韩欧美国产在线观看| 成人三级做爰电影| 又大又爽又粗| 国产欧美日韩精品亚洲av| 五月伊人婷婷丁香| 亚洲精品一区av在线观看| 久热爱精品视频在线9| 手机成人av网站| 岛国在线观看网站| 亚洲午夜精品一区,二区,三区| 亚洲自偷自拍图片 自拍| 亚洲天堂国产精品一区在线| 日本一本二区三区精品| www.熟女人妻精品国产| 狂野欧美激情性xxxx| 亚洲aⅴ乱码一区二区在线播放 | 好看av亚洲va欧美ⅴa在| 国产精品一区二区三区四区免费观看 | 国产熟女xx| 黄色毛片三级朝国网站| 国产1区2区3区精品| 精品国产乱子伦一区二区三区| 性欧美人与动物交配| 黄色片一级片一级黄色片| 18禁黄网站禁片午夜丰满| 五月玫瑰六月丁香| 精品乱码久久久久久99久播| 久久精品aⅴ一区二区三区四区| 99久久精品热视频| 88av欧美| 精品免费久久久久久久清纯| 欧美成人性av电影在线观看| 欧美黄色淫秽网站| 国产熟女xx| 精品久久蜜臀av无| 性欧美人与动物交配| 又黄又爽又免费观看的视频| 人人妻人人澡欧美一区二区| 午夜福利免费观看在线| 日韩有码中文字幕| 国产1区2区3区精品| 久久精品91蜜桃| 欧美在线黄色| 一个人免费在线观看的高清视频| 美女扒开内裤让男人捅视频| 亚洲成av人片在线播放无| 亚洲中文字幕日韩| 欧美黄色片欧美黄色片| av超薄肉色丝袜交足视频| 国产区一区二久久| 日本熟妇午夜| 亚洲成人精品中文字幕电影| 嫩草影院精品99| 久久天躁狠狠躁夜夜2o2o| 日韩欧美国产在线观看| 小说图片视频综合网站| 18禁国产床啪视频网站| 亚洲欧美一区二区三区黑人| 两个人视频免费观看高清| 成人午夜高清在线视频| 欧美色视频一区免费| 欧美最黄视频在线播放免费| 国产精品综合久久久久久久免费| ponron亚洲| 国产精品免费一区二区三区在线| 久久性视频一级片| 久久热在线av| 少妇熟女aⅴ在线视频| 999精品在线视频| 午夜两性在线视频| 久久人人精品亚洲av| 露出奶头的视频| 国产亚洲av嫩草精品影院| 在线播放国产精品三级| 一二三四在线观看免费中文在| 成人三级黄色视频| 51午夜福利影视在线观看| 免费在线观看成人毛片| 欧美一级a爱片免费观看看 | 日本 av在线| 免费在线观看视频国产中文字幕亚洲| 国产在线精品亚洲第一网站| 久久人妻av系列| 99久久精品国产亚洲精品| 久久香蕉激情| 三级毛片av免费| av片东京热男人的天堂| 99久久综合精品五月天人人| 午夜福利成人在线免费观看| 91大片在线观看| 国产激情偷乱视频一区二区| 久久精品亚洲精品国产色婷小说| 国语自产精品视频在线第100页| 午夜视频精品福利| 亚洲美女黄片视频| 美女午夜性视频免费| 在线视频色国产色| 高清在线国产一区| 一本久久中文字幕| 母亲3免费完整高清在线观看| 久久精品成人免费网站| 好男人在线观看高清免费视频| 国产成人影院久久av| 一进一出抽搐动态| 制服丝袜大香蕉在线| 日日干狠狠操夜夜爽| a级毛片在线看网站| 国产熟女午夜一区二区三区| x7x7x7水蜜桃| 亚洲avbb在线观看| 97超级碰碰碰精品色视频在线观看| 中文字幕人成人乱码亚洲影| 不卡一级毛片| 亚洲 欧美 日韩 在线 免费| 亚洲中文字幕日韩| 丁香六月欧美| 久久午夜综合久久蜜桃| 国产99久久九九免费精品| 国产伦一二天堂av在线观看| 夜夜看夜夜爽夜夜摸| 亚洲 欧美 日韩 在线 免费| 国产精品99久久99久久久不卡| 成人特级黄色片久久久久久久| 精华霜和精华液先用哪个| 国产亚洲精品久久久久5区| 欧美黄色淫秽网站| 亚洲成av人片在线播放无| 亚洲中文字幕日韩| 一进一出好大好爽视频| 又大又爽又粗| 亚洲天堂国产精品一区在线| 久久国产精品影院| 亚洲精品美女久久av网站| 亚洲人成伊人成综合网2020| 亚洲va日本ⅴa欧美va伊人久久| 国内少妇人妻偷人精品xxx网站 | 亚洲自偷自拍图片 自拍| 色在线成人网| 18禁国产床啪视频网站| 国产真实乱freesex| 国产激情偷乱视频一区二区| 天天躁夜夜躁狠狠躁躁| 亚洲av电影在线进入| 99热6这里只有精品| 欧美高清成人免费视频www| 女人高潮潮喷娇喘18禁视频| 国产亚洲精品久久久久5区| 特大巨黑吊av在线直播| 国产精品1区2区在线观看.| 色综合亚洲欧美另类图片| 久久精品成人免费网站| 99热这里只有是精品50| 精品电影一区二区在线| 国产亚洲精品久久久久5区| 成熟少妇高潮喷水视频| 小说图片视频综合网站| 亚洲精品久久成人aⅴ小说| 日本a在线网址| 色综合欧美亚洲国产小说| 国产乱人伦免费视频| 久久精品国产清高在天天线| 亚洲欧美日韩高清专用| 亚洲专区字幕在线| 久久亚洲精品不卡| 男插女下体视频免费在线播放| 免费观看精品视频网站| 悠悠久久av| 老汉色av国产亚洲站长工具| x7x7x7水蜜桃| 天天一区二区日本电影三级| 国产免费av片在线观看野外av| 国模一区二区三区四区视频 | 韩国av一区二区三区四区| 亚洲精品一区av在线观看| 宅男免费午夜| 亚洲精品国产一区二区精华液| 午夜视频精品福利| 国产精品久久久久久人妻精品电影| 亚洲精品国产一区二区精华液| 国产精品亚洲一级av第二区| 波多野结衣高清作品| 黄色片一级片一级黄色片| 99热这里只有是精品50| av天堂在线播放| 国产黄色小视频在线观看| 午夜福利成人在线免费观看| 变态另类成人亚洲欧美熟女| 宅男免费午夜| 18禁黄网站禁片午夜丰满| 亚洲午夜理论影院| 中文字幕人成人乱码亚洲影| 18禁裸乳无遮挡免费网站照片| 看免费av毛片| 色在线成人网| 两性夫妻黄色片| 黄色毛片三级朝国网站| 国产精品香港三级国产av潘金莲| 午夜福利在线观看吧| 久久这里只有精品19| 狂野欧美激情性xxxx| 给我免费播放毛片高清在线观看| 精品一区二区三区四区五区乱码| 可以免费在线观看a视频的电影网站| 伦理电影免费视频| 久久久久免费精品人妻一区二区| 一级黄色大片毛片| 2021天堂中文幕一二区在线观| 国产高清视频在线观看网站| 免费人成视频x8x8入口观看| 成人av在线播放网站| 在线播放国产精品三级| 亚洲午夜理论影院| 久久人人精品亚洲av| 欧美zozozo另类| 成人18禁高潮啪啪吃奶动态图| 两个人的视频大全免费| 成在线人永久免费视频| 亚洲国产中文字幕在线视频| 麻豆成人av在线观看| 亚洲av成人av| 久久久国产成人免费| 麻豆一二三区av精品| 变态另类成人亚洲欧美熟女| 久久国产乱子伦精品免费另类| 亚洲熟妇中文字幕五十中出| 在线看三级毛片| 国内久久婷婷六月综合欲色啪| 亚洲av成人精品一区久久| 白带黄色成豆腐渣| 最好的美女福利视频网| 亚洲av美国av| 大型av网站在线播放| 国内精品久久久久久久电影| 国产av麻豆久久久久久久| 亚洲熟妇中文字幕五十中出| av超薄肉色丝袜交足视频| 女人被狂操c到高潮| 人人妻人人看人人澡| 中文资源天堂在线| ponron亚洲| 亚洲精品色激情综合| 精品欧美国产一区二区三| 99国产精品99久久久久| 一a级毛片在线观看| 亚洲五月婷婷丁香| 欧美绝顶高潮抽搐喷水| 美女黄网站色视频| 又爽又黄无遮挡网站| 黑人巨大精品欧美一区二区mp4| 久久香蕉国产精品| 法律面前人人平等表现在哪些方面| 老汉色∧v一级毛片| 久久人妻福利社区极品人妻图片| 99精品在免费线老司机午夜| av国产免费在线观看| 久久九九热精品免费| 国产亚洲精品av在线| 国产又色又爽无遮挡免费看| 久久香蕉激情| 欧美不卡视频在线免费观看 | 老鸭窝网址在线观看| 精品国内亚洲2022精品成人| 美女免费视频网站| 99精品久久久久人妻精品| 成人一区二区视频在线观看| 久久久久久久久免费视频了| 国产激情偷乱视频一区二区| 在线观看66精品国产| 午夜影院日韩av| 99精品欧美一区二区三区四区| 俺也久久电影网| 欧美成人免费av一区二区三区| 9191精品国产免费久久| 日本黄色视频三级网站网址| www日本黄色视频网| 极品教师在线免费播放| 无人区码免费观看不卡| 脱女人内裤的视频| 每晚都被弄得嗷嗷叫到高潮| 亚洲成人国产一区在线观看| 视频区欧美日本亚洲| 1024手机看黄色片| 99精品在免费线老司机午夜| 在线十欧美十亚洲十日本专区| 日韩欧美三级三区| 色av中文字幕| 欧美一区二区精品小视频在线| 床上黄色一级片| 日韩欧美在线二视频| 老司机靠b影院| 国产精品,欧美在线| 精品一区二区三区四区五区乱码| 精品国产亚洲在线| 日韩三级视频一区二区三区| 美女扒开内裤让男人捅视频| 亚洲精品在线观看二区| a在线观看视频网站| 成人18禁高潮啪啪吃奶动态图| 97碰自拍视频| av超薄肉色丝袜交足视频| 黄色毛片三级朝国网站| 色综合亚洲欧美另类图片| 免费在线观看亚洲国产| 日本黄大片高清| 最近最新中文字幕大全免费视频| 亚洲 欧美一区二区三区| 亚洲国产看品久久| 久99久视频精品免费| av福利片在线观看| 国内毛片毛片毛片毛片毛片| 久久热在线av| 美女大奶头视频| 精品欧美国产一区二区三| 亚洲午夜精品一区,二区,三区| av有码第一页| 国产人伦9x9x在线观看| 丁香欧美五月| 俺也久久电影网| 特级一级黄色大片| 国产精品一区二区三区四区久久| 蜜桃久久精品国产亚洲av| 99久久久亚洲精品蜜臀av| 免费人成视频x8x8入口观看| 好看av亚洲va欧美ⅴa在| 99精品欧美一区二区三区四区| 久久久久久亚洲精品国产蜜桃av| 12—13女人毛片做爰片一| av视频在线观看入口| 黄色a级毛片大全视频| 中文字幕人成人乱码亚洲影| 别揉我奶头~嗯~啊~动态视频| av免费在线观看网站| or卡值多少钱| 韩国av一区二区三区四区| 天堂av国产一区二区熟女人妻 | 在线观看午夜福利视频| 亚洲精品中文字幕在线视频| 国产成人av教育| www.自偷自拍.com| 别揉我奶头~嗯~啊~动态视频| 又黄又爽又免费观看的视频| 18禁国产床啪视频网站| 亚洲五月婷婷丁香| 国产探花在线观看一区二区| av中文乱码字幕在线| cao死你这个sao货| 久久热在线av| 97人妻精品一区二区三区麻豆| 精品一区二区三区四区五区乱码| 美女大奶头视频| 一卡2卡三卡四卡精品乱码亚洲| 亚洲精品久久成人aⅴ小说| 精品久久久久久久久久久久久| 精品乱码久久久久久99久播| 国产1区2区3区精品| 亚洲中文av在线| 亚洲中文日韩欧美视频| 男女之事视频高清在线观看| 国产精品国产高清国产av| 中亚洲国语对白在线视频| 全区人妻精品视频| 99精品久久久久人妻精品| 波多野结衣高清无吗| 中文字幕精品亚洲无线码一区| 亚洲av成人不卡在线观看播放网| 老司机午夜福利在线观看视频| avwww免费| 91大片在线观看| 国产欧美日韩精品亚洲av| 一级毛片高清免费大全| 免费看美女性在线毛片视频| 国产精品乱码一区二三区的特点| 大型av网站在线播放| 麻豆成人av在线观看| 欧美成狂野欧美在线观看| 亚洲专区中文字幕在线| 欧美中文日本在线观看视频| 国产一区在线观看成人免费| 中文在线观看免费www的网站 | 国产成人精品久久二区二区免费| 黄频高清免费视频| 国产精品99久久99久久久不卡| 男插女下体视频免费在线播放| 日韩欧美 国产精品| 欧美在线一区亚洲| 国内久久婷婷六月综合欲色啪| 国产一区二区在线观看日韩 | 亚洲av成人精品一区久久| 无遮挡黄片免费观看| 中国美女看黄片| 国产精品亚洲美女久久久| 美女高潮喷水抽搐中文字幕| 色av中文字幕| 精品久久久久久,| 狂野欧美白嫩少妇大欣赏| 色哟哟哟哟哟哟| 丝袜人妻中文字幕| 欧美日韩精品网址| 亚洲七黄色美女视频| 韩国av一区二区三区四区| 国产亚洲欧美在线一区二区| 亚洲在线自拍视频| 国产精品一及| 熟女少妇亚洲综合色aaa.| 国产野战对白在线观看| 免费在线观看黄色视频的| 黑人巨大精品欧美一区二区mp4| 国产精品久久久久久人妻精品电影| 亚洲欧美日韩东京热| 俄罗斯特黄特色一大片| 久久精品国产综合久久久| 嫩草影院精品99| 手机成人av网站| 欧美乱妇无乱码| 久久欧美精品欧美久久欧美| 亚洲男人的天堂狠狠| 中文字幕人妻丝袜一区二区| 国产亚洲精品一区二区www| 国产精品 国内视频| 日本黄色视频三级网站网址| 日本一区二区免费在线视频| 五月伊人婷婷丁香| 淫妇啪啪啪对白视频| 精品久久久久久久毛片微露脸| 亚洲午夜精品一区,二区,三区| 91国产中文字幕| 嫩草影视91久久| 亚洲欧美精品综合久久99| 一级a爱片免费观看的视频| 国产片内射在线| 女生性感内裤真人,穿戴方法视频| 一本综合久久免费| 岛国在线免费视频观看| 身体一侧抽搐| 免费看日本二区| 国产主播在线观看一区二区| 国产精品久久电影中文字幕| 亚洲国产看品久久| xxxwww97欧美| 国产爱豆传媒在线观看 | 久久久久免费精品人妻一区二区| 黄色女人牲交| 精品午夜福利视频在线观看一区| 亚洲成人中文字幕在线播放| 色综合欧美亚洲国产小说| 美女免费视频网站| 欧美中文日本在线观看视频| 无遮挡黄片免费观看| 久久久国产成人精品二区| av天堂在线播放| 国产日本99.免费观看| 久久欧美精品欧美久久欧美| x7x7x7水蜜桃| 人人妻,人人澡人人爽秒播| 亚洲欧美激情综合另类| 久久欧美精品欧美久久欧美| x7x7x7水蜜桃| 亚洲精品一区av在线观看| av片东京热男人的天堂| 人人妻,人人澡人人爽秒播| av片东京热男人的天堂| 国产野战对白在线观看| 又爽又黄无遮挡网站| 美女免费视频网站| 一卡2卡三卡四卡精品乱码亚洲| 国产主播在线观看一区二区| 精品久久久久久久久久久久久| 亚洲,欧美精品.| 日韩大尺度精品在线看网址| 久久精品国产亚洲av高清一级| 国产一级毛片七仙女欲春2| 国产成人欧美在线观看| 男女床上黄色一级片免费看| 欧美日韩国产亚洲二区| 男插女下体视频免费在线播放| 午夜影院日韩av| 久久热在线av| 午夜亚洲福利在线播放| 亚洲国产高清在线一区二区三| 欧美3d第一页| www.999成人在线观看| 欧美精品啪啪一区二区三区| 麻豆国产av国片精品| 美女免费视频网站| 欧美最黄视频在线播放免费| 人成视频在线观看免费观看| 又粗又爽又猛毛片免费看| 欧洲精品卡2卡3卡4卡5卡区| 亚洲无线在线观看| 久久国产精品影院| 国产亚洲欧美98| 美女高潮喷水抽搐中文字幕| 两性午夜刺激爽爽歪歪视频在线观看 | 99国产精品99久久久久| 精品久久久久久久末码| 亚洲真实伦在线观看| 一本精品99久久精品77| 免费观看人在逋| 三级国产精品欧美在线观看 | 日韩国内少妇激情av| 麻豆国产av国片精品| av在线播放免费不卡| 一区二区三区国产精品乱码| 亚洲精品久久国产高清桃花| 无遮挡黄片免费观看| 一级毛片女人18水好多| 夜夜爽天天搞| 欧美+亚洲+日韩+国产| 国产人伦9x9x在线观看| 少妇裸体淫交视频免费看高清 | 最近最新免费中文字幕在线| 神马国产精品三级电影在线观看 | 国产一区二区三区在线臀色熟女| 亚洲成人免费电影在线观看| 国产成人欧美在线观看| 国产午夜精品久久久久久| av福利片在线观看| 国产69精品久久久久777片 | 亚洲欧美日韩高清专用| 国内揄拍国产精品人妻在线| 国产亚洲精品综合一区在线观看 | 最好的美女福利视频网| 午夜精品一区二区三区免费看| 人成视频在线观看免费观看| 久久久久亚洲av毛片大全| 国产精品一区二区免费欧美| 99国产精品一区二区蜜桃av| 久久欧美精品欧美久久欧美| 男女那种视频在线观看| 亚洲aⅴ乱码一区二区在线播放 | 99热这里只有精品一区 | a级毛片在线看网站| 日韩欧美国产一区二区入口| 一级a爱片免费观看的视频| 窝窝影院91人妻| 亚洲精品久久国产高清桃花| 亚洲国产精品999在线| 欧美最黄视频在线播放免费| 18美女黄网站色大片免费观看| 色在线成人网| 一级毛片女人18水好多| 久久天躁狠狠躁夜夜2o2o| 999久久久精品免费观看国产| 精品久久久久久成人av| 国产精品自产拍在线观看55亚洲| 熟女电影av网| 精品午夜福利视频在线观看一区| 90打野战视频偷拍视频| 妹子高潮喷水视频|