• <tr id="yyy80"></tr>
  • <sup id="yyy80"></sup>
  • <tfoot id="yyy80"><noscript id="yyy80"></noscript></tfoot>
  • 99热精品在线国产_美女午夜性视频免费_国产精品国产高清国产av_av欧美777_自拍偷自拍亚洲精品老妇_亚洲熟女精品中文字幕_www日本黄色视频网_国产精品野战在线观看 ?

    MTHFR基因多態(tài)性與非綜合征性唇腭裂的相關(guān)性研究

    2016-06-15 08:14:02焦曉輝郝嫣汝宋紅權(quán)
    中國(guó)免疫學(xué)雜志 2016年5期
    關(guān)鍵詞:相關(guān)性等位基因

    安 樂 焦曉輝 米 娜 郝嫣汝 宋紅權(quán)

    (哈爾濱醫(yī)科大學(xué),哈爾濱150000)

    ?

    MTHFR基因多態(tài)性與非綜合征性唇腭裂的相關(guān)性研究

    安樂①焦曉輝①米娜郝嫣汝宋紅權(quán)②

    (哈爾濱醫(yī)科大學(xué),哈爾濱150000)

    [摘要]目的:探討5,10-亞甲基四氫葉酸還原酶(MTHFR)基因C677T多態(tài)性與非綜合征性唇腭裂(NSCLP)遺傳易感性的相關(guān)性。方法:選取2014年6月至2015年5月在我院治療的NSCLP患者100例(病例組A),其中單純性腭裂(CPO組)23例,唇裂伴或不伴腭裂(CL/P組)77例;同時(shí)選取100名正常兒童(對(duì)照組A)、100名生育過(guò)NSCLP患兒母親(病例組B)和100名正常出生兒母親(對(duì)照組B),采用聚合酶聯(lián)式反應(yīng)-限制性片段長(zhǎng)度多態(tài)性基因分型技術(shù)檢測(cè)各組MTHFR基因C677T突變。結(jié)果:病例組A中,CL/P組C、T等位基因頻率為55.84%和44.16%,CPO組分別為54.35%和45.65%,對(duì)照組A分別為75.00%和25.00%,CL/P組和CPO組T等位基因頻率明顯高于對(duì)照組A,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05);CT基因型個(gè)體患CL/P的風(fēng)險(xiǎn)是CC基因型個(gè)體的2.39倍,患CPO的風(fēng)險(xiǎn)是CC基因型個(gè)體的2.98倍;TT基因型個(gè)體患CL/P的風(fēng)險(xiǎn)是CC基因型個(gè)體的6.70倍,患CPO的風(fēng)險(xiǎn)是CC基因型個(gè)體的7.33倍;病例組B和對(duì)照組B的等位基因頻率和基因型構(gòu)成情況比較差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)。結(jié)論:MTHFR基因C677T突變可能是NSCLP發(fā)生的遺傳危險(xiǎn)因素之一,但母親MTHFR基因C677T突變可能與子代發(fā)生NSCLP無(wú)關(guān)。

    [關(guān)鍵詞]MTHFR基因;NSCLP;相關(guān)性;等位基因

    唇腭裂是人類較為常見的先天性發(fā)育畸形之一,臨床上根據(jù)胚胎學(xué)發(fā)育時(shí)期的不同致畸機(jī)制,往往將非綜合征性唇腭裂分為單純性唇腭裂和唇裂伴或者不伴腭裂。相關(guān)臨床統(tǒng)計(jì)可見非綜合征性唇腭裂占到了唇腭裂發(fā)生的75%左右[1],但相關(guān)病因研究尚無(wú)明確進(jìn)展,迄今位置多數(shù)學(xué)者認(rèn)為,唇腭裂的發(fā)病主要為環(huán)境因素與遺傳因素相互作用的結(jié)果[2,3]。相關(guān)國(guó)外文獻(xiàn)報(bào)道認(rèn)為,孕婦在孕早期葉酸攝入不足會(huì)使得胎兒發(fā)生非綜合癥型唇腭裂的幾率增加,同時(shí)妊娠三個(gè)月內(nèi)服用葉酸拮抗劑如甲氨蝶呤或者苯妥英鈉均會(huì)不同程度的增加新生兒非綜合型唇腭裂的發(fā)生[4,5],提示了葉酸缺乏是導(dǎo)致非綜合型唇腭裂的重要原因,本次臨床研究重在分析5,10-亞甲基四氫葉酸還原酶(MTHFR)基因C677T多態(tài)性與非綜合征性唇腭裂(NSCLP)遺傳易感性的相關(guān)性,具體研究如下。

    1材料與方法

    1.1材料

    1.1.1研究對(duì)象選取2014年6月至2015年5月在我院治療的非綜合征性唇腭裂(NSCLP)患者100例(病例組A),其中男性58例,女性42例;年齡4個(gè)月~18歲,平均(4.71±2.02)歲;其中單純性腭裂(CPO組)23例,唇裂伴或不伴腭裂(CL/P組)77例,其中雙側(cè)CL/P 17例,單側(cè)CL/P 60例。排除綜合性唇腭裂或其他系統(tǒng)畸形。病例組B:選取100名生育過(guò)NSCLP患兒母親,年齡23~38歲,平均年齡(28.13±4.58)歲,排除惡性腫瘤、心腦血管方面等疾病。對(duì)照組A:選取100名正常兒童,其中男性60例,女性40例,年齡2月~17歲,平均年齡(5.02±2.51)歲,排除其他先天性畸形。對(duì)照組B:選取100名正常出生兒母親,年齡22~38歲,平均年齡(28.01±5.21)歲,排除惡性腫瘤、心腦血管方面等疾病。此次實(shí)驗(yàn)通過(guò)院內(nèi)醫(yī)學(xué)倫理委員會(huì)的批準(zhǔn),血液標(biāo)本在研究對(duì)象或在其家長(zhǎng)的知情同意的前提下獲得。

    1.1.2儀器和試劑tapDNA聚合酶購(gòu)自立陶宛MBI公司,hinfⅠ、MboⅡ限制性內(nèi)切酶購(gòu)自立陶宛MBI公司,2700型PCR購(gòu)自美國(guó)ABI公司,APPLIGENE垂直電泳槽、H6-1微型電泳槽購(gòu)自上海福馬實(shí)驗(yàn)設(shè)備有限公司。

    1.2實(shí)驗(yàn)方法將收集到的5 ml全血,ACD抗凝,提取基因組DNA,應(yīng)用primer5.0引物設(shè)計(jì)軟件設(shè)計(jì)引物、內(nèi)切酶,對(duì)于兩個(gè)位點(diǎn)進(jìn)行內(nèi)切,分別應(yīng)用PCR擴(kuò)增引物進(jìn)行限制性內(nèi)切酶MAV1、DdeⅠ酶切,產(chǎn)物電泳后進(jìn)行基因分型。為了驗(yàn)證基因分型正確性,隨機(jī)挑選10%的樣本直接測(cè)序,同時(shí)設(shè)立陽(yáng)性對(duì)照炎癥內(nèi)切酶的正確性。

    1.3統(tǒng)計(jì)學(xué)處理數(shù)據(jù)分析采用SPSS19.0統(tǒng)計(jì)軟件,C677T基因型及等位基因頻率使用χ2檢驗(yàn),C677T基因型與NSCLP相關(guān)性采用優(yōu)勢(shì)比表示。以P<0.05表示差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

    2結(jié)果

    2.1C677T多態(tài)性電泳結(jié)果DNA片段擴(kuò)增后長(zhǎng)度為198 bp,若發(fā)生C→T突變,則產(chǎn)生HinfⅠ酶切位點(diǎn),產(chǎn)生175 bp和23 bp片段。純和突變型(TT)產(chǎn)生175 bp,23 bp兩個(gè)DNA片段,雜合子(CT)產(chǎn)生198、175、23 bp三個(gè)DNA片段,野生型(CC)只用198 bp一個(gè)DNA片段。以標(biāo)準(zhǔn)分子量Marker為參照,在電泳圖譜上可看到CC基因型、CT基因型和TT基因型,見圖1。

    2.2病例組A與對(duì)照組A C677T基因型和等位基因頻率比較病例組A中,CL/P組C、T等位基因頻率為55.84%和44.16%,CPO組分別為54.35%和45.65%,對(duì)照組A分別為75.00%和25.00%,CL/P組和CPO組T等位基因頻率明顯高于對(duì)照組A,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(χ2=14.367、7.769,P<0.05);CT基因型個(gè)體患CL/P的風(fēng)險(xiǎn)是CC基因型個(gè)體的2.39倍,患CPO的風(fēng)險(xiǎn)是CC基因型個(gè)體的2.98倍;TT基因型個(gè)體患CL/P的風(fēng)險(xiǎn)是CC基因型個(gè)體的6.70倍,患CPO的風(fēng)險(xiǎn)是CC基因型個(gè)體的7.33倍。見表1。

    圖1 MTHFR基因C677T多態(tài)性電泳結(jié)果Fig.1 MTHFR gene C677T polymorphic electrophor-esis resultsNote: 3-6.CC genotype;1,2,8.CT genotype;7.TT genotype;M.Standard molecular weight Marker.

    表1病例組A與對(duì)照組A C677T基因型和等位基因頻率比較[n(%)]

    Tab.1Case group A and control group A C677T genotype and allele frequency comparison[n(%)]

    GroupnGenotypefrequencyCCCTTTAllelefrequencyCTCasegroupA10032(32.00)54(54.00)14(14.00)118(59.00)82(41.00)CL/Pgroup7723(29.87)40(51.95)14(18.18)86(55.84)68(44.16)CPOgroup236(26.09)13(56.52)4(17.39)25(54.35)21(45.65)ControlgroupA10055(55.00)40(40.00)5(5.00)150(75.00)50(25.00)

    表2病例組B與對(duì)照組B C677T基因型和等位基因頻率比較[n(%)]

    Tab.2Case group B and control group B C677T genotype and allele frequency comparison[n(%)]

    GroupsnGenotypefrequencyCCCTTTAllelefrequencyCTCasegroupB10043(43.00)47(47.00)10(10.00)133(66.50)67(33.50)ControlgroupB10039(39.00)50(50.00)11(11.00)128(64.00)72(36.00)

    2.3病例組B與對(duì)照組B中C677T基因型和等位基因頻率比較病例組B的C、T等位基因頻率分別為66.50%和33.50%,對(duì)照組B的等位基因頻率分別為64.00%和36.00%,差異比較無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(χ2=0.276,P>0.05);兩組基因型構(gòu)成情況比較差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(χ2=0.336,P>0.05)。見表2。

    3討論

    近年來(lái)隨著先天性唇腭裂相關(guān)研究的進(jìn)展,多數(shù)學(xué)者認(rèn)為,先天性基因易感性以及環(huán)境因素獨(dú)立以及相互作用的方式,均可能較為顯著地參與到了先天性唇腭裂特別是非綜合型唇腭裂的發(fā)生中[6]。筆者通過(guò)回顧國(guó)內(nèi)外相關(guān)文獻(xiàn)發(fā)現(xiàn),基礎(chǔ)領(lǐng)域的研究著重探討了基因水平的變異或者易感基因的先天性獲得對(duì)于唇腭裂的發(fā)病影響[7],古麗等[8]研究者證實(shí),在孕婦懷孕早期(一般認(rèn)為懷孕3月),葉酸的攝入不足以及葉酸相關(guān)拮抗劑的攝入均在一定程度上增加了新生兒唇腭裂的發(fā)生率,但相關(guān)臨床薈萃分析較少,同時(shí)進(jìn)一步研究并未發(fā)現(xiàn)新生兒唇腭裂的發(fā)生與葉酸攝入水平存在明顯的劑量依賴性[9]。故此,近三年來(lái)部分學(xué)者通過(guò)研究提出葉酸對(duì)于唇腭裂的發(fā)生影響并不僅僅依靠葉酸攝入水平,更多依靠相關(guān)葉酸代謝途徑,進(jìn)而促進(jìn)部分致畸基因的異常激活,從而增加唇腭裂的發(fā)生率[10],而C677T多態(tài)性對(duì)于先天性唇腭裂的臨床易感性研究較少,本研究重在探討黑龍江省漢族人群中5,10-亞甲基四氫葉酸還原酶(MTHFR)基因C677T多態(tài)性與非綜合征性唇腭裂(NSCLP)遺傳易感性的相關(guān)性,進(jìn)而為相關(guān)流行病學(xué)統(tǒng)計(jì)以及公共衛(wèi)生領(lǐng)域分析提供依據(jù)。

    部分學(xué)者在探討A1298C多態(tài)性與先天性非綜合型唇腭裂的發(fā)生關(guān)系中發(fā)現(xiàn),C677正常核型均為677CC,當(dāng)非綜合型唇腭裂易感基因A1298部位核型由A1298AA突變?yōu)?298CC時(shí),部分C677核型突變?yōu)?77TT[11],提示了C677核型突變可能參與到了非綜合型唇腭裂的發(fā)生機(jī)制中。筆者通過(guò)本次研究發(fā)現(xiàn),野生型C677基因有CC突變?yōu)殡s合型(CT)或者純核型(TT),進(jìn)一步證實(shí)了相關(guān)學(xué)者的提出的假設(shè)[12],表明C677基因多態(tài)性可能參與到了非綜合型唇腭裂的發(fā)生機(jī)制中,而進(jìn)一步分析可見,單純性唇腭裂以及唇裂伴或者不伴腭裂組T等位基因頻率明顯高于正常對(duì)照人群,而相關(guān)基因型分析可見隨著C-T基因突變的發(fā)生,雜合型突變基因型導(dǎo)致新生兒患非綜合型唇腭裂的幾率增加了2~3倍,而當(dāng)C-T突變?yōu)榧兺蛔冃突蛐蜁r(shí),發(fā)生兩種唇腭裂的可能性顯著增加,風(fēng)險(xiǎn)可增加7倍左右,提示了C677基因多態(tài)性與非綜合型唇腭裂的發(fā)生關(guān)系, Desai等[13]綜合分析后認(rèn)為,MTHFR基因677C-T或1298A-C突變使控制葉酸代謝的MTHFR蛋白構(gòu)象發(fā)生變化,MTHFR酶活性顯著下降,而這一代謝途徑對(duì)于維持正常血漿5-甲基四氫葉酸和hcy的濃度至關(guān)重要,而hcy與頜面部和神經(jīng)管在胚胎發(fā)育上密切相關(guān),細(xì)胞內(nèi)MTHFR基因677C-T突變導(dǎo)致的MTHFR酶活性顯著下降,可進(jìn)一步通過(guò)促進(jìn)細(xì)胞內(nèi)Hey聚集,有可能干擾正常發(fā)育的頜面部組織,影響頜面部突起的正常融合,進(jìn)而導(dǎo)致唇腭裂的發(fā)生。但相關(guān)先天性唇腭裂畸形新生兒產(chǎn)婦的C677基因并無(wú)明顯多態(tài)性表現(xiàn),提示母體相關(guān)位點(diǎn)基因并未在唇腭裂的發(fā)生中發(fā)揮作用,同時(shí)提示相關(guān)唇腭裂新生兒C677位點(diǎn)多態(tài)性的獲得性發(fā)生機(jī)制較為少見,多數(shù)病例在胚胎發(fā)育過(guò)程中由于環(huán)境或者其他因素進(jìn)而造成相關(guān)位點(diǎn)突變,引起易感基因多態(tài)性表現(xiàn)[11]。

    綜上所述,本研究證明了MTHFR基因C677T突變與NSCLP風(fēng)險(xiǎn)增高顯著相關(guān),為葉酸攝入低或葉酸代謝障礙在NSCLP發(fā)生中起重要作用的假說(shuō)提供了遺傳學(xué)基礎(chǔ)。后續(xù)相關(guān)研究應(yīng)更加注重MTHFR基因C677T多態(tài)性與葉酸攝入量之間的交互作用,并對(duì)MTHFR酶活性、血漿hcy水平進(jìn)行綜合分析。

    參考文獻(xiàn):

    [1]朱博,王達(dá),楊博逸,等.中國(guó)人群5,10-亞甲基四氫葉酸還原酶基因C677T多態(tài)性與非綜合征性唇腭裂關(guān)系的Meta分析[J].中國(guó)全科醫(yī)學(xué),2013,43(38):3825-3827.

    [2]喻瓊瓊,石冰.孕婦補(bǔ)充葉酸與唇腭裂畸形發(fā)生的關(guān)系[J].國(guó)際口腔醫(yī)學(xué)雜志,2014,23(3):368-370.

    [3]王蘋,王紅,吳雅慧,等.中國(guó)人群葉酸/同型半胱氨酸代謝基因多態(tài)性與非綜合征型唇腭裂關(guān)聯(lián)研究[J].北京大學(xué)學(xué)報(bào)(醫(yī)學(xué)版),2013,16(03):352-358.

    [4]Pan X,Wang P,Yin X,etal.Association between maternal MTHFR polymorphisms and nonsyndromic cleft lip with or without cleft palate in offspring,A meta-analysis based on 15 case-control studies[J].Int J Fertil Steril,2015,8(4):463-480.

    [5]南欣榮,任一雄,李瑞芳,等.葉酸代謝相關(guān)基因多態(tài)性與山西地區(qū)非綜合征性唇腭裂的相關(guān)性研究[J].實(shí)用口腔醫(yī)學(xué)雜志,2015,23(1):96-100.

    [6]馬麗娟,杜雪飛,董文,等.MAFB 基因多態(tài)性在寧夏回漢人群中與非綜合征型唇腭裂的相關(guān)性研究[J].實(shí)用口腔醫(yī)學(xué)雜志,2015,21(1):57-62.

    [7]劉奕杉,凌彬,劉濤,等.探討MTHFR基因多態(tài)性與新疆地區(qū)人群唇腭裂發(fā)病的關(guān)系[J].中華臨床醫(yī)師雜志(電子版),2013,34(11):4795-4798.

    [8]古麗,王玲,阿地力·莫明.非綜合征性唇腭裂基因突變檢測(cè)方法研究[J].中華實(shí)用診斷與治療雜志,2014,23(4):313-314.

    [9]陳小梅,韓淑芬.葉酸代謝相關(guān)基因多態(tài)性在母胎醫(yī)學(xué)領(lǐng)域的應(yīng)用及相關(guān)性研究[J].中國(guó)婦幼健康研究,2015,26(1):125-128.

    [10]陳丁莉,李守霞,要跟東.非綜合征性唇腭裂候選基因和位點(diǎn)研究進(jìn)展[J].中華口腔醫(yī)學(xué)研究雜志(電子版),2014,22(4):341-345.

    [11]de Aguiar PK,Coletta RD,de Oliveira AM,etal.rs1801133C>T polymorphism in MTHFR is a risk factor for nonsyndromic cleft lip with or without cleft palate in the Brazilian population[J].Birth Defects Res A Clin Mol Teratol,2015,103(4):292-298.

    [12]Abdollahi-Fakhim S,Asghari EM,Varghaei P,etal.Common mutations of the methylenetetrahydrofolate reductase (MTHFR) gene in non-syndromic cleft lips and palates children in north-west of iran[J].Iran J Otorhinolaryngol,2015,27(78):7-14.

    [13]Desai AL,Dinesh MR,Amarnath BC,etal.Association of transforming growth factor alpha and methylenetetrahydrofolate reductase gene variants with nonsyndromic cleft lip and palate in the indian population[J].Contemp Clin Dent,2014,5(3):329-333.

    [收稿2015-09-20修回2015-10-20]

    (編輯許四平)

    MTHFR gene polymorphism and non syndrome cleft lip and palate correlation study

    ANLe,JIAOXiao-Hui,MINa,HAOYan-Ru,SONGHong-Quan.

    TheSchoolofDentistryofHarbinMedicalUniversity,Haerbin150000,China

    [Abstract]Objective:To investigate 5,10 methylenetetrahydrofolate reductase (MTHFR) gene C677T polymorphism and non syndrome cleft lip and cleft palate (NSCLP) genetic susceptibility correlation.Methods: From June 2014 to May 2015,100 NSCLP patients (case group A) were treated in our hospital,where in cleft palate (CPO group) 23 cases,77 cases of cleft lip with or without cleft palate (CL/P group);at the same time,selected 100 normal children (control group A),100 mothers of NSCLP children (case group B) and 100 normal birth mother (control group B),C677T mutation of MTHFR gene was detected by polymerase chain reaction restriction fragment length polymorphism genotyping technique.Results: in case group A,CL/P group C,T allele frequency were 55.84% and 44.16%,CPO group were 54.35% and 45.65%,control group A was 75.00% and 25.00%,CL/P and CPO group T allele frequency was significantly higher group A,the difference was statistically significant (P<0.05);CT genotypes suffering CL/P′s risk was 2.39 times the CC genotype,suffering CPO′s risk was 2.98 times the CC genotype;TT genotypes suffering CL/P′s risk was 6.70 times the CC genotype,suffering CPO′s risk was 7.33 times the CC genotype;there was no significant difference in the allele frequencies and genotype between the case group B and the control group B (P>0.05).Conclusion: C677T mutation of MTHFR gene may be one of the genetic risk factors of NSCLP,but mother MTHFR C677T mutation may unrelated with the offspring NSCLP.

    [Key words]MTHFR gene;NSCLP;Relativity;Allele

    doi:10.3969/j.issn.1000-484X.2016.05.027

    作者簡(jiǎn)介:安樂(1988年-),男,主要從事唇腭裂發(fā)生機(jī)制研究。

    中圖分類號(hào)R782.2

    文獻(xiàn)標(biāo)志碼A

    文章編號(hào)1000-484X(2016)05-0722-04

    ①哈爾濱醫(yī)科大學(xué)第一附屬口腔醫(yī)院,哈爾濱150000。

    ②黑龍江省醫(yī)院,哈爾濱150000。

    通訊作者及指導(dǎo)教師:焦曉輝(1958年-),男,主任醫(yī)師,教授,博士生導(dǎo)師,主要從事唇腭裂發(fā)生機(jī)制研究。

    猜你喜歡
    相關(guān)性等位基因
    親子鑒定中男性個(gè)體Amelogenin基因座異常1例
    智慧健康(2021年17期)2021-07-30 14:38:32
    廣東漢族人群D18S51基因座等位基因分型現(xiàn)象分析
    基于Kronecker信道的MIMO系統(tǒng)通信性能分析
    科技視界(2016年21期)2016-10-17 17:37:34
    小兒支氣管哮喘與小兒肺炎支原體感染相關(guān)性分析
    腦梗死與高同型半胱氨酸的相關(guān)性研究(2)
    腦梗死與高同型半胱氨酸的相關(guān)性研究
    會(huì)計(jì)信息質(zhì)量可靠性與相關(guān)性的矛盾與協(xié)調(diào)
    WHOHLA命名委員會(huì)命名的新等位基因HLA-A*24∶327序列分析及確認(rèn)
    決策有用觀下財(cái)務(wù)會(huì)計(jì)信息質(zhì)量研究
    DXS101基因座稀有等位基因的確認(rèn)1例
    身体一侧抽搐| 色综合欧美亚洲国产小说| 80岁老熟妇乱子伦牲交| 亚洲国产精品合色在线| 久久久久国产一级毛片高清牌| 99re6热这里在线精品视频| 色婷婷久久久亚洲欧美| xxx96com| 久久午夜亚洲精品久久| 女性生殖器流出的白浆| 亚洲精品在线观看二区| 欧美乱色亚洲激情| 高清av免费在线| 欧美在线一区亚洲| 国产精品一区二区在线观看99| 精品久久久久久,| 黄网站色视频无遮挡免费观看| xxxhd国产人妻xxx| 欧美成人免费av一区二区三区 | 亚洲熟妇熟女久久| 精品国产超薄肉色丝袜足j| 国产1区2区3区精品| 免费久久久久久久精品成人欧美视频| 男人操女人黄网站| 精品福利永久在线观看| 亚洲人成77777在线视频| 日韩欧美三级三区| 在线视频色国产色| 国产99白浆流出| 国产精品国产高清国产av | 欧美 亚洲 国产 日韩一| av一本久久久久| 18禁裸乳无遮挡动漫免费视频| 欧美日韩成人在线一区二区| 亚洲一码二码三码区别大吗| 视频区欧美日本亚洲| 成年动漫av网址| 日本五十路高清| 成年版毛片免费区| 一级毛片高清免费大全| 人人妻人人添人人爽欧美一区卜| 熟女少妇亚洲综合色aaa.| 69精品国产乱码久久久| 亚洲av日韩在线播放| 久久精品人人爽人人爽视色| 亚洲熟妇中文字幕五十中出 | 丝瓜视频免费看黄片| 久久国产精品影院| 搡老熟女国产l中国老女人| 怎么达到女性高潮| 亚洲综合色网址| 欧美日韩亚洲国产一区二区在线观看 | 亚洲精华国产精华精| 欧美激情 高清一区二区三区| 两个人免费观看高清视频| 九色亚洲精品在线播放| 波多野结衣一区麻豆| 久久婷婷成人综合色麻豆| 精品国产一区二区久久| 国产av又大| 这个男人来自地球电影免费观看| 啪啪无遮挡十八禁网站| 久久久水蜜桃国产精品网| 日韩 欧美 亚洲 中文字幕| 18禁观看日本| 午夜激情av网站| 亚洲一区二区三区不卡视频| 99精品在免费线老司机午夜| 男女高潮啪啪啪动态图| 超色免费av| 国产精品二区激情视频| 欧美日韩黄片免| 搡老熟女国产l中国老女人| 看黄色毛片网站| 怎么达到女性高潮| 国产一卡二卡三卡精品| 亚洲欧美日韩另类电影网站| 亚洲精品国产精品久久久不卡| 亚洲第一av免费看| 国产在线观看jvid| 国产精品二区激情视频| 精品免费久久久久久久清纯 | 最新美女视频免费是黄的| 人人妻人人添人人爽欧美一区卜| 国产97色在线日韩免费| 欧美日韩视频精品一区| 18在线观看网站| 国产精品秋霞免费鲁丝片| 国产精品免费大片| 国产男女内射视频| www.精华液| 色播在线永久视频| 欧美不卡视频在线免费观看 | 麻豆国产av国片精品| 成年人黄色毛片网站| 日本wwww免费看| 自拍欧美九色日韩亚洲蝌蚪91| 亚洲欧美日韩高清在线视频| 国产成人av激情在线播放| 看片在线看免费视频| 天天躁夜夜躁狠狠躁躁| 成年人午夜在线观看视频| 啦啦啦在线免费观看视频4| 看免费av毛片| 夜夜躁狠狠躁天天躁| 搡老乐熟女国产| 校园春色视频在线观看| 国产男女内射视频| 成人三级做爰电影| 亚洲第一欧美日韩一区二区三区| 三级毛片av免费| 无人区码免费观看不卡| 两性夫妻黄色片| 男人操女人黄网站| 99香蕉大伊视频| 久久这里只有精品19| 大片电影免费在线观看免费| 狠狠狠狠99中文字幕| 丝瓜视频免费看黄片| 欧美日韩精品网址| 欧美日韩一级在线毛片| 成年人黄色毛片网站| 精品国产超薄肉色丝袜足j| 黄色毛片三级朝国网站| 亚洲精品久久午夜乱码| 亚洲av成人一区二区三| 欧美乱码精品一区二区三区| 美女福利国产在线| 亚洲国产欧美网| 久久久久久久久免费视频了| 日日夜夜操网爽| 老司机深夜福利视频在线观看| 在线观看舔阴道视频| 丝袜美腿诱惑在线| 99国产精品免费福利视频| 另类亚洲欧美激情| 久久ye,这里只有精品| 99精品在免费线老司机午夜| 亚洲午夜精品一区,二区,三区| 欧美精品亚洲一区二区| 在线视频色国产色| 午夜精品国产一区二区电影| 日本欧美视频一区| 另类亚洲欧美激情| 天天添夜夜摸| 精品视频人人做人人爽| 久久 成人 亚洲| 欧洲精品卡2卡3卡4卡5卡区| 欧美日韩av久久| 国产男女内射视频| 欧美丝袜亚洲另类 | 久久九九热精品免费| av超薄肉色丝袜交足视频| 亚洲精品自拍成人| 啪啪无遮挡十八禁网站| 桃红色精品国产亚洲av| 亚洲五月婷婷丁香| 别揉我奶头~嗯~啊~动态视频| bbb黄色大片| 国产麻豆69| 少妇的丰满在线观看| 成人国语在线视频| 国产单亲对白刺激| 欧美日韩亚洲国产一区二区在线观看 | 中国美女看黄片| 1024视频免费在线观看| 18禁裸乳无遮挡免费网站照片 | 亚洲熟妇中文字幕五十中出 | 午夜福利在线免费观看网站| 日韩视频一区二区在线观看| 一夜夜www| av超薄肉色丝袜交足视频| 午夜精品在线福利| 两人在一起打扑克的视频| 一区在线观看完整版| 一级,二级,三级黄色视频| 免费观看人在逋| 极品教师在线免费播放| 黄频高清免费视频| 成在线人永久免费视频| 大陆偷拍与自拍| 女性生殖器流出的白浆| 亚洲精品美女久久av网站| 国产欧美日韩精品亚洲av| 男女床上黄色一级片免费看| 中文字幕人妻丝袜一区二区| 国产精品国产av在线观看| 日本欧美视频一区| 在线观看一区二区三区激情| 亚洲伊人色综图| 亚洲少妇的诱惑av| 亚洲少妇的诱惑av| 韩国精品一区二区三区| 欧美日韩黄片免| 又紧又爽又黄一区二区| 亚洲精品中文字幕在线视频| 精品亚洲成a人片在线观看| 日韩欧美三级三区| 亚洲av电影在线进入| 欧美日韩乱码在线| 久久精品91无色码中文字幕| 大香蕉久久成人网| 精品一区二区三区四区五区乱码| 99久久精品国产亚洲精品| 天天操日日干夜夜撸| 高清av免费在线| 欧美精品啪啪一区二区三区| 新久久久久国产一级毛片| 精品人妻1区二区| 国产不卡一卡二| 国产免费现黄频在线看| 国产成人影院久久av| 国产麻豆69| 校园春色视频在线观看| 欧美 亚洲 国产 日韩一| 久久香蕉精品热| 成人特级黄色片久久久久久久| 老司机靠b影院| 亚洲视频免费观看视频| 大型黄色视频在线免费观看| 精品视频人人做人人爽| 午夜福利在线免费观看网站| av网站免费在线观看视频| 亚洲第一欧美日韩一区二区三区| 日日爽夜夜爽网站| 建设人人有责人人尽责人人享有的| 久久久精品免费免费高清| 亚洲五月天丁香| 99热国产这里只有精品6| 国产熟女午夜一区二区三区| 久久 成人 亚洲| 国产一区二区三区视频了| 午夜免费观看网址| 免费人成视频x8x8入口观看| 亚洲成国产人片在线观看| 久久人人爽av亚洲精品天堂| 在线观看免费视频日本深夜| 国产成人系列免费观看| 大香蕉久久网| 天堂中文最新版在线下载| 女警被强在线播放| 国产精品永久免费网站| 久久人妻av系列| 日韩中文字幕欧美一区二区| 丁香欧美五月| 欧美日韩中文字幕国产精品一区二区三区 | 1024视频免费在线观看| 极品人妻少妇av视频| 男男h啪啪无遮挡| 天天躁日日躁夜夜躁夜夜| 欧美不卡视频在线免费观看 | 精品久久久久久久久久免费视频 | 欧美日韩亚洲国产一区二区在线观看 | 精品福利观看| 国产精品影院久久| av视频免费观看在线观看| 狠狠婷婷综合久久久久久88av| 国产麻豆69| 欧美久久黑人一区二区| 精品国产超薄肉色丝袜足j| 亚洲av成人av| 久9热在线精品视频| 一区福利在线观看| 老汉色av国产亚洲站长工具| 午夜福利在线观看吧| 热99re8久久精品国产| 久久久国产精品麻豆| 国产亚洲欧美98| 热99re8久久精品国产| 成人精品一区二区免费| 亚洲色图综合在线观看| 又黄又爽又免费观看的视频| 国产主播在线观看一区二区| a在线观看视频网站| 午夜成年电影在线免费观看| 国产在视频线精品| 老司机亚洲免费影院| 亚洲精品久久成人aⅴ小说| 亚洲av欧美aⅴ国产| 久久久国产成人精品二区 | 国产精品一区二区精品视频观看| 午夜福利一区二区在线看| av超薄肉色丝袜交足视频| 99久久国产精品久久久| 国产在线精品亚洲第一网站| 97人妻天天添夜夜摸| 80岁老熟妇乱子伦牲交| 交换朋友夫妻互换小说| 精品国产一区二区久久| 女人被狂操c到高潮| a级毛片黄视频| 精品人妻在线不人妻| 捣出白浆h1v1| 天天影视国产精品| 久久中文字幕人妻熟女| 国产区一区二久久| 深夜精品福利| 日韩欧美一区视频在线观看| 日韩人妻精品一区2区三区| 精品久久久久久电影网| 久久久久久久久免费视频了| 国产免费男女视频| 欧美日韩精品网址| 亚洲全国av大片| 在线观看免费视频网站a站| 午夜福利免费观看在线| 美女 人体艺术 gogo| 欧美乱色亚洲激情| av中文乱码字幕在线| tube8黄色片| 国产精品偷伦视频观看了| 午夜久久久在线观看| 亚洲国产精品合色在线| 一进一出好大好爽视频| 中国美女看黄片| 国产在线精品亚洲第一网站| 久久国产精品影院| 99在线人妻在线中文字幕 | 777久久人妻少妇嫩草av网站| 日韩欧美一区二区三区在线观看 | 亚洲欧洲精品一区二区精品久久久| 精品国内亚洲2022精品成人 | 波多野结衣av一区二区av| 99热只有精品国产| 成年人黄色毛片网站| 黄色丝袜av网址大全| 中文字幕制服av| 日韩视频一区二区在线观看| 国产熟女午夜一区二区三区| 国产成人啪精品午夜网站| 不卡一级毛片| 国产日韩欧美亚洲二区| 男女之事视频高清在线观看| 午夜久久久在线观看| 亚洲va日本ⅴa欧美va伊人久久| 日韩欧美一区视频在线观看| 1024视频免费在线观看| 少妇的丰满在线观看| 久久久久国产精品人妻aⅴ院 | 18在线观看网站| 好看av亚洲va欧美ⅴa在| 老熟妇乱子伦视频在线观看| 国产精品久久久av美女十八| 一级,二级,三级黄色视频| 国产精品一区二区免费欧美| 黑人巨大精品欧美一区二区蜜桃| 在线永久观看黄色视频| 亚洲av电影在线进入| 欧洲精品卡2卡3卡4卡5卡区| 一级毛片高清免费大全| 涩涩av久久男人的天堂| 中亚洲国语对白在线视频| 搡老乐熟女国产| 精品国产亚洲在线| 国产野战对白在线观看| 欧美黑人欧美精品刺激| 国产精品偷伦视频观看了| 国产精品美女特级片免费视频播放器 | 亚洲美女黄片视频| 最新在线观看一区二区三区| 热re99久久国产66热| 免费少妇av软件| 嫁个100分男人电影在线观看| xxx96com| 日本黄色视频三级网站网址 | 亚洲av成人一区二区三| 日韩欧美国产一区二区入口| 捣出白浆h1v1| 最新在线观看一区二区三区| 亚洲五月色婷婷综合| 国产欧美日韩一区二区三| 最近最新免费中文字幕在线| 9色porny在线观看| 飞空精品影院首页| 精品免费久久久久久久清纯 | 人人妻人人爽人人添夜夜欢视频| 人人妻人人澡人人看| 亚洲av成人一区二区三| 日韩 欧美 亚洲 中文字幕| 亚洲色图 男人天堂 中文字幕| 亚洲中文日韩欧美视频| 亚洲国产欧美日韩在线播放| 成人免费观看视频高清| 免费av中文字幕在线| 涩涩av久久男人的天堂| 最新的欧美精品一区二区| 18禁裸乳无遮挡动漫免费视频| 亚洲精品一卡2卡三卡4卡5卡| 91精品三级在线观看| 国产区一区二久久| 国产精品久久久久成人av| 一本一本久久a久久精品综合妖精| 日韩有码中文字幕| 手机成人av网站| 亚洲成av片中文字幕在线观看| 超色免费av| 国内久久婷婷六月综合欲色啪| 妹子高潮喷水视频| 国内毛片毛片毛片毛片毛片| 国产精品久久电影中文字幕 | 亚洲九九香蕉| 亚洲欧洲精品一区二区精品久久久| 老熟女久久久| 亚洲av日韩精品久久久久久密| 99热国产这里只有精品6| 一区二区三区国产精品乱码| 久久人人97超碰香蕉20202| 国产三级黄色录像| 国产亚洲欧美98| 亚洲国产欧美网| 午夜精品国产一区二区电影| 免费在线观看完整版高清| 大香蕉久久成人网| 欧美乱码精品一区二区三区| 一进一出好大好爽视频| 国产精品秋霞免费鲁丝片| 欧美日韩av久久| 99国产综合亚洲精品| 精品国产乱子伦一区二区三区| 精品人妻1区二区| 精品国产乱码久久久久久男人| 久久午夜综合久久蜜桃| 国产精品影院久久| 十八禁人妻一区二区| 国产成人免费无遮挡视频| 一进一出好大好爽视频| 一进一出抽搐动态| 欧美性长视频在线观看| 亚洲av成人av| 国产亚洲欧美精品永久| 侵犯人妻中文字幕一二三四区| 久久国产精品大桥未久av| 狂野欧美激情性xxxx| 亚洲欧美激情在线| 欧美老熟妇乱子伦牲交| 亚洲人成电影观看| 久久久国产成人精品二区 | 一级毛片高清免费大全| 婷婷成人精品国产| 久久香蕉国产精品| 国产亚洲av高清不卡| 美女视频免费永久观看网站| 国产一区二区激情短视频| aaaaa片日本免费| 999久久久精品免费观看国产| 国产一区二区三区在线臀色熟女 | 欧美人与性动交α欧美精品济南到| 精品一区二区三区av网在线观看| 精品一品国产午夜福利视频| x7x7x7水蜜桃| 激情视频va一区二区三区| 日韩欧美免费精品| 亚洲av成人一区二区三| 亚洲男人天堂网一区| 丰满人妻熟妇乱又伦精品不卡| 午夜影院日韩av| 两性夫妻黄色片| 亚洲色图综合在线观看| 亚洲成人手机| 91成年电影在线观看| 亚洲一码二码三码区别大吗| 国产人伦9x9x在线观看| 高潮久久久久久久久久久不卡| 久久久久久人人人人人| 欧美日韩亚洲综合一区二区三区_| 熟女少妇亚洲综合色aaa.| 久久人人97超碰香蕉20202| 91成年电影在线观看| svipshipincom国产片| 99国产极品粉嫩在线观看| 亚洲视频免费观看视频| 亚洲欧美日韩另类电影网站| a级毛片黄视频| 中文字幕制服av| 12—13女人毛片做爰片一| 日韩视频一区二区在线观看| 操美女的视频在线观看| 777久久人妻少妇嫩草av网站| 天天添夜夜摸| 日韩欧美在线二视频 | 精品久久久久久久久久免费视频 | 在线观看午夜福利视频| 精品国产乱子伦一区二区三区| 亚洲第一av免费看| 日本一区二区免费在线视频| 超碰成人久久| 精品国产一区二区三区四区第35| 亚洲人成电影免费在线| 亚洲欧美日韩另类电影网站| 亚洲精品中文字幕一二三四区| 在线观看免费高清a一片| 国产精品久久久人人做人人爽| 国产熟女午夜一区二区三区| 精品少妇一区二区三区视频日本电影| 亚洲九九香蕉| 女人被狂操c到高潮| 国产精品久久久久久人妻精品电影| 看片在线看免费视频| 美女高潮喷水抽搐中文字幕| 国内久久婷婷六月综合欲色啪| 久久国产精品男人的天堂亚洲| 别揉我奶头~嗯~啊~动态视频| 亚洲欧美日韩另类电影网站| 亚洲精品中文字幕一二三四区| 黄色毛片三级朝国网站| 亚洲精品一二三| 高清av免费在线| 午夜影院日韩av| 国产国语露脸激情在线看| 精品福利观看| 男女免费视频国产| 国产在视频线精品| 视频区欧美日本亚洲| 精品久久久久久久久久免费视频 | 国产精品欧美亚洲77777| 久久精品国产a三级三级三级| 大香蕉久久成人网| 国产精品乱码一区二三区的特点 | 天堂俺去俺来也www色官网| 精品免费久久久久久久清纯 | 露出奶头的视频| 黄色a级毛片大全视频| 18禁国产床啪视频网站| 精品午夜福利视频在线观看一区| 人人妻,人人澡人人爽秒播| 后天国语完整版免费观看| 日韩中文字幕欧美一区二区| 夜夜爽天天搞| 好看av亚洲va欧美ⅴa在| 欧美激情极品国产一区二区三区| 欧美精品av麻豆av| 国产真人三级小视频在线观看| 无人区码免费观看不卡| 欧美亚洲日本最大视频资源| 在线看a的网站| 精品久久久精品久久久| 亚洲精品国产精品久久久不卡| 久久人妻av系列| 国产又色又爽无遮挡免费看| 免费在线观看亚洲国产| 久久久久久久国产电影| 两性夫妻黄色片| 国产精品亚洲一级av第二区| 狠狠狠狠99中文字幕| 成人永久免费在线观看视频| 欧美色视频一区免费| 一边摸一边抽搐一进一出视频| 成在线人永久免费视频| 国产激情欧美一区二区| 欧美老熟妇乱子伦牲交| svipshipincom国产片| 欧美精品高潮呻吟av久久| 热99re8久久精品国产| 国产一区二区三区视频了| 欧美日韩成人在线一区二区| 亚洲精品一卡2卡三卡4卡5卡| 亚洲七黄色美女视频| 韩国av一区二区三区四区| 国产免费现黄频在线看| 亚洲午夜理论影院| 精品国产一区二区三区久久久樱花| 国产成人免费无遮挡视频| 久久久水蜜桃国产精品网| 国产日韩一区二区三区精品不卡| 精品一品国产午夜福利视频| 中出人妻视频一区二区| 91成人精品电影| 99久久精品国产亚洲精品| 日韩免费av在线播放| 欧美人与性动交α欧美精品济南到| 天堂俺去俺来也www色官网| 高清毛片免费观看视频网站 | 怎么达到女性高潮| 美女高潮喷水抽搐中文字幕| 中文字幕最新亚洲高清| 欧美午夜高清在线| 国产精品欧美亚洲77777| 久久精品aⅴ一区二区三区四区| 亚洲精品国产一区二区精华液| 午夜福利欧美成人| 欧美丝袜亚洲另类 | 1024香蕉在线观看| 中文字幕最新亚洲高清| 1024香蕉在线观看| www.熟女人妻精品国产| 久久精品熟女亚洲av麻豆精品| 一级片'在线观看视频| 欧美在线黄色| 人妻久久中文字幕网| 亚洲第一av免费看| 99久久综合精品五月天人人| 国产xxxxx性猛交| 可以免费在线观看a视频的电影网站| 亚洲全国av大片| 精品无人区乱码1区二区| 韩国精品一区二区三区| 三级毛片av免费| 日本五十路高清| 国产单亲对白刺激| 欧美在线黄色| 丰满人妻熟妇乱又伦精品不卡| 精品国产美女av久久久久小说| 夫妻午夜视频| 亚洲精品在线美女| 欧美成狂野欧美在线观看| 天堂俺去俺来也www色官网| 在线观看午夜福利视频| 亚洲欧美激情在线| 在线观看免费日韩欧美大片| 中文亚洲av片在线观看爽 | 午夜激情av网站| 视频在线观看一区二区三区| 亚洲中文日韩欧美视频| 露出奶头的视频| 精品国产国语对白av|