CK2β、VEGF和p53蛋白表達(dá)對(duì)宮頸癌患者預(yù)后的預(yù)測價(jià)值研究

陳曉露，張　波，吳蓉宜

(1.樂山職業(yè)技術(shù)學(xué)院病理教研室，四川樂山 614000；2.四川省成都市第六人民醫(yī)院病理科　610051)

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CK2β、VEGF和p53蛋白表達(dá)對(duì)宮頸癌患者預(yù)后的預(yù)測價(jià)值研究

陳曉露1，張波1，吳蓉宜2

(1.樂山職業(yè)技術(shù)學(xué)院病理教研室，四川樂山 614000；2.四川省成都市第六人民醫(yī)院病理科610051)

[摘要]目的探討蛋白激酶CK2β、血管內(nèi)皮生長因子(VEGF)和p53蛋白表達(dá)對(duì)宮頸癌患者預(yù)后的預(yù)測價(jià)值。方法選取成都市第六人民醫(yī)院婦科宮頸癌手術(shù)患者123例作為研究組，同期選取慢性宮頸炎手術(shù)患者119例作為對(duì)照組，采用免疫組化法檢測CK2β、VEGF和p53蛋白表達(dá)水平，比較兩組陽性表達(dá)差異和分析3者對(duì)預(yù)后的預(yù)測價(jià)值。結(jié)果研究組CK2β、VEGF和p53蛋白陽性表達(dá)率明顯高于對(duì)照組，兩組比較差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)，CK2β、VEGF和p53蛋白表達(dá)與臨床分期、病理分級(jí)、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移具有明顯的相關(guān)性，其中臨床分期和病理分級(jí)越高，合并淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移者CK2β、VEGF和p53蛋白陽性表達(dá)率越高，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)，宮頸癌患者5年生存率為47.97%(59/123)，其中預(yù)后狀況與臨床分期、病理分級(jí)、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、CK2β、VEGF及p53表達(dá)顯著相關(guān)，臨床分期和病理分級(jí)越高，合并淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移及CK2β、VEGF與p53陽性表達(dá)者5年生存率更低，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)，其中Cox多因素分析顯示，CK2β、VEGF與p53表達(dá)是預(yù)后狀況的獨(dú)立影響因素。結(jié)論宮頸癌組織CK2β、VEGF和p53陽性表達(dá)顯著上調(diào)，其中三者陽性表達(dá)預(yù)示疾病預(yù)后欠佳，對(duì)疾病的預(yù)后狀況具有重要的預(yù)測價(jià)值。

[關(guān)鍵詞]宮頸腫瘤；CK2β；血管內(nèi)皮生長因子；預(yù)后

宮頸癌是婦產(chǎn)科常見的惡性腫瘤，其中發(fā)展中國家宮頸癌的發(fā)生率約占婦產(chǎn)科惡性腫瘤的20%～30%，嚴(yán)重威脅女性身心健康[1]。目前受性傳播疾病和環(huán)境改變的影響，宮頸癌發(fā)生率呈逐漸增高的傾向，且發(fā)生年齡呈逐漸年輕化趨勢[2]。蛋白激酶CK2β可能參與惡性腫瘤的發(fā)生和發(fā)展；血管內(nèi)皮生長因子(vascular endothelial growth factor，VEGF)在惡性腫瘤中的表達(dá)明顯增加，且與腫瘤細(xì)胞浸潤、轉(zhuǎn)移和預(yù)后具有明顯的相關(guān)性；即生型p53是一種抑癌基因，p53結(jié)構(gòu)和功能異常改變與宮頸癌的發(fā)生和發(fā)展具有緊密的關(guān)系。但關(guān)于CK2β、VEGF和p53蛋白表達(dá)對(duì)宮頸癌患者預(yù)后的預(yù)測價(jià)值研究甚少，現(xiàn)報(bào)道如下。

1資料與方法

1.1一般資料選取2008年1月至2010年1月成都市第六人民醫(yī)院婦科宮頸癌手術(shù)患者123例作為研究組，納入標(biāo)準(zhǔn)：全部患者均經(jīng)組織病理學(xué)檢查明確宮頸癌的診斷標(biāo)準(zhǔn)[3]，均經(jīng)倫理委員會(huì)同意，全部患者簽署知情同意書，并實(shí)施第1次手術(shù)治療，術(shù)前未經(jīng)化療、放療和免疫性治療等輔助治療措施，隨訪資料完整，患者年齡23～75歲，平均(49.51±7.65)歲，腺癌21例，鱗癌102例，腫瘤直徑測量根據(jù)婦科檢查和MR檢查結(jié)果確定，直徑小于4 cm 64例，直徑大于或等于6 cm 59例，臨床分期：Ⅰ期56例，Ⅱ～Ⅲ期67例；病理分級(jí)：Ⅰ～Ⅱ級(jí)98例，Ⅲ級(jí)25例，合并淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移43例，無淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移80例。同期選取慢性宮頸炎 [人乳頭瘤病毒(HPV)檢測排除HPV陽性轉(zhuǎn)化為癌前病變或癌變]手術(shù)患者119例作為對(duì)照組，年齡24～76歲，平均(50.13±6.98)歲，兩組患者年齡比較差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)，具有可比性。

1.2儀器與試劑兔抗人多克隆CK2β抗體(1∶200)，鼠抗人多克隆VEGF抗體(1∶200)，鼠抗人單克隆p53抗體(1∶800)，抗體稀釋液均由上?；蚩萍加邢薰咎峁珽livision二步法工作試劑盒，PBS緩沖液、DAB顯色劑均有北京金橋生物技術(shù)有限公司提供。

1.3方法采用Elivision免疫組織化學(xué)方法檢測CK2β、VEGF和p53蛋白表達(dá)水平。全部宮頸組織標(biāo)本均采用10%甲醛溶液固定，石蠟包埋，連續(xù)5 μm厚切片，乙醇梯度水化處理，PBS緩沖液洗滌3次，采用高溫高壓修復(fù)3 min，3%H2O2孵育10 min，PBS緩沖液洗滌3次，滴加CK2β、VEGF、p53一抗，室溫下孵育120 min，滴加二抗，室溫下孵育60 min，棄PBS緩沖液，采用DAB顯色劑顯色操作，蘇木精復(fù)染，中性樹膠封片，顯微鏡下觀察，實(shí)驗(yàn)步驟嚴(yán)格參照Elivision二步法工作試劑盒操作。

1.4觀察指標(biāo)

1.4.1臨床分期評(píng)估標(biāo)準(zhǔn)采用2009年國際婦產(chǎn)科協(xié)會(huì)(FIGO)關(guān)于國際宮頸癌分期標(biāo)準(zhǔn)[4]，0期：原位癌；Ⅰ期：癌癥病灶局限于宮頸，不累及子宮體部；Ⅱ期：癌癥病灶超出子宮頸，但尚未達(dá)到盆壁或陰道下1/3；Ⅲ期：癌癥病灶累及盆壁及陰道下1/3，合并癌癥相關(guān)性腎盂積水或腎無功能者；Ⅳ期：癌癥病灶擴(kuò)散超出真骨盆，臨床侵犯直腸黏膜或膀胱黏膜。

1.4.2病理分級(jí)采用三級(jí)分級(jí)系統(tǒng)[5]，Ⅰ級(jí)：高分化，癌巢中合并多數(shù)角化現(xiàn)象；Ⅱ級(jí)：中度分化，宮頸上皮中層細(xì)胞分化，細(xì)胞大小不一，癌巢中無明顯角化現(xiàn)象；Ⅲ級(jí)：低分化和未分化的小細(xì)胞。

1.4.3免疫組化結(jié)果判定[6]對(duì)于細(xì)胞核出現(xiàn)黃色或棕黃色顆粒為陽性細(xì)胞，200倍顯微鏡下隨機(jī)選取5個(gè)視野，計(jì)數(shù)100個(gè)細(xì)胞，采用陽性細(xì)胞率與染色強(qiáng)度的半定量積分法評(píng)估，陽性細(xì)胞率0～10%評(píng)定0分，11%～25%評(píng)定為1分，26%～50%評(píng)定為2分，51%～75%評(píng)定為3分，76%～100%評(píng)定為4分；染色強(qiáng)度無色評(píng)定為0分，染色強(qiáng)度淡黃色評(píng)定為1分，染色強(qiáng)度棕黃色評(píng)定為2分，染色強(qiáng)度棕褐色評(píng)定為3分。陽性細(xì)胞率積分+染色強(qiáng)度積分=0～1分為陰性，2～3分為弱陽性，4～5分為中度陽性，6～7分為強(qiáng)陽性，最終陰性和弱陽性作為陰性表達(dá)，以中度陽性和強(qiáng)陽性作為陽性表達(dá)。

1.4.4隨訪全部患者均采用信訪、電話和門診等方式實(shí)施隨訪，以出院之日開始實(shí)施隨訪，以死亡、失訪及最后1次隨訪時(shí)間(2015年5月1日)作為隨訪截止日期。生存期是指確診之日至死亡之日，采用年作為計(jì)算單位。

1.5統(tǒng)計(jì)學(xué)處理采用SPSS18.0統(tǒng)計(jì)軟件進(jìn)行分析，兩組間的計(jì)數(shù)資料采用χ2檢驗(yàn)，預(yù)后生存分析采用Kaplan-Meier生存曲線，采用Cox風(fēng)險(xiǎn)回歸模型分析預(yù)后的獨(dú)立影響因素，以P<0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2結(jié)果

2.1兩組CK2β、VEGF和p53蛋白表達(dá)比較研究組CK2β、VEGF和p53蛋白陽性表達(dá)率明顯高于對(duì)照組，兩組比較差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)，見表1，圖1。

表1　兩組CK2β、VEGF和p53蛋白表達(dá)比較[n(%)]

A：CK2β；B：VEGF；C：p53；→：陽性細(xì)胞。

圖1CK2β、VEGF和p53蛋白在宮頸癌組織中呈強(qiáng)陽性表達(dá)(免疫組織化學(xué)法×200)

2.2CK2β、VEGF和p53蛋白表達(dá)與臨床病理參數(shù)的關(guān)系CK2β、VEGF和p53蛋白表達(dá)與臨床分期、病理分級(jí)、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移具有明顯的相關(guān)性，其中臨床分期和病理分級(jí)越高，合并淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移者CK2β、VEGF和p53蛋白陽性表達(dá)率越高，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)，見表2。

2.3宮頸癌預(yù)后狀況及其相關(guān)因素分析研究組5年生存率為47.97%(59/123)，其中預(yù)后狀況與臨床分期、病理分級(jí)、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、CK2β、VEGF及p53表達(dá)顯著相關(guān)，臨床分期和病理分級(jí)越高，合并淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移及CK2β、VEGF與p53陽性表達(dá)者5年生存率越低，不同臨床病理特征差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)，見表3；CK2β、VEGF與p53表達(dá)是預(yù)后狀況的獨(dú)立影響因素，見表4。

表2　CK2β、VEGF和p53蛋白表達(dá)與臨床病理參數(shù)的關(guān)系

表3　宮頸癌預(yù)后狀況的單因素分析[n(%)]

表4　宮頸癌預(yù)后狀況的多因素分析

3討論

蛋白激酶CK2β廣泛存在于真核細(xì)胞中的絲氨酸/蘇氨酸激酶內(nèi)，具有高度結(jié)構(gòu)穩(wěn)定性，存在與細(xì)胞核基質(zhì)相關(guān)的半胱氨酸殘基，可作為CK2β信號(hào)通路細(xì)胞內(nèi)傳遞間的位點(diǎn)。相關(guān)文獻(xiàn)報(bào)道表明，CK2β通過調(diào)節(jié)細(xì)胞內(nèi)腫瘤轉(zhuǎn)移侵襲相關(guān)的信號(hào)通路，促進(jìn)惡性腫瘤細(xì)胞增殖，抑制腫瘤細(xì)胞凋亡，增強(qiáng)惡性腫瘤細(xì)胞多重耐藥表型，促進(jìn)腫瘤新生血管形成等[7]。CK2β異常表達(dá)與臨床病理特征和疾病預(yù)后狀況具有明顯的相關(guān)性。食管癌組織CK2β陽性表達(dá)率明顯高于食管正常組織，且與食管癌臨床分期具有緊密的關(guān)系[8]。CK2β與惡性腫瘤臨床分期、組織學(xué)分化程度和浸潤深度等臨床病理特征緊密相關(guān)，可作為惡性腫瘤預(yù)后評(píng)估指標(biāo)之一。同時(shí)，CK2β在部分惡性腫瘤化療耐藥期間具有一定的作用，化療藥物可通過干擾CK2β因子介導(dǎo)的磷脂酰肌醇3激酶/蛋白激酶(phosphatidylinositol 3 kinase/protein kinase，PI3K/Akt)途徑顯著增強(qiáng)惡性腫瘤細(xì)胞對(duì)化療藥物的敏感程度，從而誘導(dǎo)惡性腫瘤細(xì)胞凋亡。但關(guān)于CK2β用于預(yù)測宮頸癌預(yù)后狀況的價(jià)值研究甚少。本研究結(jié)果顯示，CK2β表達(dá)在宮頸癌組織中顯著增強(qiáng)，其臨床分期、病理分級(jí)越高，CK2β陽性表達(dá)率越高；合并淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移者CK2β陽性表達(dá)率更高。本研究進(jìn)一步的預(yù)后相關(guān)因素分析顯示，CK2β陽性可作為宮頸癌預(yù)后的獨(dú)立預(yù)測指標(biāo)，其中，CK2β陰性表達(dá)者5年生存率是CK2β陽性表達(dá)者的4.285倍。因此，CK2β陽性表達(dá)預(yù)示宮頸癌預(yù)后欠佳，CK2β表達(dá)對(duì)宮頸癌患者預(yù)后具有重要的預(yù)測價(jià)值。

VEGF是目前發(fā)現(xiàn)的特異性血管內(nèi)皮生長刺激因子之一，其在腫瘤組織中顯著性高表達(dá)，通過促進(jìn)新生血管內(nèi)皮細(xì)胞形成，從而促進(jìn)腫瘤新生血管形成。大量研究證實(shí)，VEGF與腫瘤發(fā)生和發(fā)展的關(guān)系密切，采用免疫組織化學(xué)法、原位雜交法和PT-PCR法檢測VEGF表達(dá)均顯示子宮內(nèi)膜癌、肺癌、甲狀腺癌、前列腺癌、食管癌、胃癌、結(jié)直腸癌和乳腺癌等多種惡性腫瘤中的臨床分期、病理分級(jí)和淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移程度均與VEGF表達(dá)水平具有明顯的相關(guān)性[9]。相關(guān)研究顯示，VEGF具有誘導(dǎo)宮頸癌組織周圍新生淋巴管形成，增強(qiáng)惡性腫瘤淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移和浸潤侵襲程度。同時(shí)，VEGF表達(dá)上調(diào)現(xiàn)象更容易發(fā)生于合并盆腔淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移者[10]。因此，VEGF過表達(dá)和宮頸癌的發(fā)生和發(fā)展具有明顯的關(guān)系。VEGF作為下游信號(hào)傳遞關(guān)鍵因子，其通過促進(jìn)HPV持續(xù)感染宮頸上皮過表達(dá)增加HPV含量，并促進(jìn)HPV持續(xù)感染形成VEGF，誘導(dǎo)腫瘤細(xì)胞新生血管和淋巴管形成過程，參與宮頸上皮內(nèi)瘤變向?qū)m頸癌的發(fā)展過程，同時(shí)促進(jìn)宮頸癌的轉(zhuǎn)移、侵襲和浸潤。因此，VEGF在宮頸癌的診斷中具有一定的價(jià)值，但關(guān)于其對(duì)宮頸癌疾病預(yù)后的預(yù)測價(jià)值研究甚少。本研究結(jié)果顯示，宮頸癌組織VEGF陽性表達(dá)率顯著增加，其增加程度與臨床分期、病理分級(jí)和淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移顯著相關(guān)，其中VEGF陽性表達(dá)的宮頸癌患者5年生存率顯著下降，甚至為VEGF陰性表達(dá)者的0.334倍(1/2.996)。因此，VEGF陰性表達(dá)預(yù)示宮頸癌預(yù)后狀況良好，VEGF表達(dá)對(duì)宮頸癌預(yù)后具有重要的預(yù)測價(jià)值。

p53基因是目前發(fā)現(xiàn)與人類腫瘤發(fā)生和發(fā)展緊密相關(guān)的基因，正常細(xì)胞中存在野生型p53基因，具有參與細(xì)胞凋亡和細(xì)胞周期、細(xì)胞分化、血管形成和DNA代謝等生理活動(dòng)過程。但p53基因突變則導(dǎo)致正常生理功能喪失，且具有癌基因活性，促進(jìn)細(xì)胞惡變和細(xì)胞過度增殖，促進(jìn)腫瘤發(fā)生和發(fā)展。相關(guān)研究顯示，人類大部分惡性腫瘤普遍存在突變型p53基因，其產(chǎn)物p53蛋白表達(dá)在骨巨細(xì)胞瘤惡變或復(fù)發(fā)者中明顯增強(qiáng)，提示p53基因在細(xì)胞惡性轉(zhuǎn)化過程中發(fā)揮重要的作用，進(jìn)一步生存分析研究顯示，p53蛋白陽性表達(dá)患者總生存時(shí)間顯著縮短，可作為評(píng)估骨巨細(xì)胞瘤預(yù)后的預(yù)測指標(biāo)[11]。但關(guān)于p53蛋白對(duì)宮頸癌預(yù)后預(yù)測價(jià)值研究甚少，本研究結(jié)果顯示，p53蛋白表達(dá)對(duì)宮頸癌預(yù)后狀況具有重要的預(yù)測價(jià)值，其中p53蛋白陽性表達(dá)者預(yù)后狀況欠佳，5年生存率顯著降低，僅為p53蛋白陰性表達(dá)者的0.327倍(1/3.056)，分析其原因可能與p53蛋白陽性表達(dá)者臨床分期、病理分級(jí)及合并淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移率更高等因素顯著相關(guān)，最終導(dǎo)致p53蛋白陽性表達(dá)的宮頸癌預(yù)后狀況欠佳，反之，p53蛋白陰性表達(dá)者疾病預(yù)后狀況良好。大量研究表明，p53在惡性腫瘤組織中的表達(dá)顯著增高[12]。但關(guān)于其對(duì)宮頸癌臨床療效的評(píng)估價(jià)值研究甚少。

綜上所述，宮頸癌組織CK2β、VEGF和p53陽性表達(dá)顯著上調(diào)，三者均通過調(diào)控腫瘤細(xì)胞凋亡過程，從而在惡性腫瘤的發(fā)生與發(fā)展中發(fā)揮重要的作用，其中三者陽性表達(dá)預(yù)示疾病預(yù)后欠佳，對(duì)疾病的預(yù)后狀況具有重要的預(yù)測價(jià)值。

參考文獻(xiàn)

[1]黃團(tuán)明,王婉.DNA甲基轉(zhuǎn)移酶在宮頸癌組織中的表達(dá)及其與HPV的相關(guān)性分析[J].重慶醫(yī)學(xué),2015,44(13):1752-1755.

[2]黃小莉.Slit2/Robo1在宮頸癌中的表達(dá)及意義[J].中國臨床藥理學(xué)雜志,2015,31(6):429-431.

[3]卜嵐,馬毓梅.CD31、CD105和PTEN在宮頸癌中的表達(dá)及其臨床病理意義[J].中國婦幼保健,2015,30(9):1446-1449.

[4]馬莉娟,何金彩,柴澤英.細(xì)胞分化抑制因子-1與細(xì)胞增殖核抗原Ki-67在宮頸癌中的表達(dá)及相關(guān)性研究[J].中國臨床藥理學(xué)雜志,2015,31(8):627-630.

[5]蔡斌,吳昊.100例宮頸癌臨床病理特征與宮旁侵犯和盆腔淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的關(guān)系分析[J].實(shí)用婦產(chǎn)科雜志,2015,31(5):366-368.

[6]丁玉梅,王新美,馬麗麗.Cyclin D1在宮頸癌組織中的表達(dá)及臨床評(píng)價(jià)[J].中國婦幼保健,2015,30(6):946-948.

[7]Jennifer H,Dirk L,Michaela S,et al.Development of a high-throughput screening-compatible assay to identify inhibitors of the CK2α/CK2β interaction[J].Analytical Biochemistry,2015,468(1):4-14.

[8]韓立波,孫冬梅,豐立忠.蛋白激酶CK2β在食管癌組織中的表達(dá)及臨床意義[J].中國腫瘤臨床與康復(fù),2013,(10):1084-1085.

[9]Boris W,Luisa F,Edward H,et al.PG545 enhances anti-cancer activity of chemotherapy in ovarian models and increases surrogate biomarkers such as VEGF in preclinical and clinical plasma samples[J].Europ J Cancer,2015,51(7):879-892.

[10]李杰.宮頸癌組織中VEGF和微血管密度與HPV感染的關(guān)系[J].中國婦幼保健,2015,30(2):295-299.

[11]張浩,于泓波,李景先,等.PCNA,Ki-67,p53在骨巨細(xì)胞瘤中的表達(dá)與預(yù)后的相關(guān)性[J].航空航天醫(yī)學(xué)雜志,2015,26(2):140-142.

[12]汪小霞,孟剛,李麗,等.乳腺癌中EZH2和p53蛋白表達(dá)及其臨床意義[J].臨床與實(shí)驗(yàn)病理學(xué)雜志,2015,31(3):273-276.

doi:·經(jīng)驗(yàn)交流·10.3969/j.issn.1671-8348.2016.08.027

作者簡介：陳曉露(1977-),學(xué)士，副教授，主要從事病理學(xué)方面的研究。

[中圖分類號(hào)]R711.74

[文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼]B

[文章編號(hào)]1671-8348(2016)08-1083-04

(收稿日期：2015-09-15修回日期：2015-11-06)