CA-IX E-cadherin在非小細(xì)胞肺癌中的表達(dá)及臨床意義?

彭麗麗， 申 婷， 魏宇森， 張洪珍(.河北醫(yī)科大學(xué)研究生學(xué)院， 河北 石家莊 05007 2.河　北　省　人　民　醫(yī)　院， 河北 石家莊 05005)

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CA-IX E-cadherin在非小細(xì)胞肺癌中的表達(dá)及臨床意義?

彭麗麗1， 申 婷1， 魏宇森1， 張洪珍2??
(1.河北醫(yī)科大學(xué)研究生學(xué)院， 河北 石家莊 050017 2.河北省人民醫(yī)院， 河北 石家莊 050051)

摘 要:目的:探討碳酸酐酶-IX(carbonic anhydrase-IX，CA-IX)、上皮型鈣粘蛋白(epithe1ia1 cadherin，E-cad)在非小細(xì)胞肺癌(non-sma11 ce11 1ung cancer，NSCLC)中的表達(dá)及其與臨床病理特征的關(guān)系，并研究CA-IX與E-cad表達(dá)的相關(guān)性。方法:采用免疫組化SP法檢測(cè)78例NSCLC組織和20例正常肺組織中CA-IX、E-cad的蛋白表達(dá)情況。結(jié)果:78例NSCLC組織中CA-IX和E-cad的陽(yáng)性率分別為61.5%(48/ 78)和26.9%(21/ 78)，而正常肺組織中分別為0.0%(0/ 20)和100%(20/ 20)，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05)；NSCLC組織中CA-IX和E-cad的表達(dá)與組織分化程度、TNM分期和淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移顯著相關(guān)(P＜0.05)；NSCLC中CA-IX與E-cad表達(dá)呈負(fù)相關(guān)(r＝-0.352，P＜0.05)。結(jié)論:CA-IX和E-cad在NSCLC的發(fā)展中扮演著重要角色，同時(shí)檢測(cè)NSCLC患者癌組織中CA-IX和E -cad的表達(dá)可為臨床早期判斷侵襲和轉(zhuǎn)移提供有力證據(jù)。

關(guān)鍵詞:碳酸酐酶； 上皮型鈣粘蛋白； 非小細(xì)胞肺癌； 免疫組織化學(xué)

??通訊作者：E-mai1：hongzhenzhang456＠sohu.com

腫瘤微環(huán)境中的乏氧和酸中毒是腫瘤不良預(yù)后的主要因素。CA-IX為碳酸酐酶家族(CAs)中的一員，參與調(diào)節(jié)腫瘤細(xì)胞增殖、轉(zhuǎn)移和侵襲[1]。E-cad是一種鈣依賴(lài)性跨膜糖蛋白，介導(dǎo)上皮細(xì)胞間的粘附作用，其表達(dá)降低會(huì)減弱細(xì)胞間的黏附力，促使細(xì)胞轉(zhuǎn)移[2]。關(guān)于CA-IX和E-cad在NSCLC中表達(dá)的相關(guān)性的研究不多，本研究應(yīng)用免疫組化SP法檢測(cè)CAIX和E-cad蛋白在NSCLC組織中的表達(dá)，并探討兩者的表達(dá)與臨床病理特征的關(guān)系及其表達(dá)的相關(guān)性。

1　資料與方法

1.1臨床資料:78例NSCLC組織及20例正常肺組織蠟塊均來(lái)自于河北省人民醫(yī)院病理科2010年7月至2013年11月存檔的標(biāo)本(所有研究均取得醫(yī)院倫理委員會(huì)許可及患者知情同意)。每一個(gè)NSCLC標(biāo)本均按分化程度(根據(jù)世界衛(wèi)生組織(WHO)腫瘤分類(lèi)標(biāo)準(zhǔn))、病理類(lèi)型、TNM分期(國(guó)際肺癌研究學(xué)會(huì)(IASLC)2009版TNM分期標(biāo)準(zhǔn))、有無(wú)淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移分類(lèi)。20例正常肺組織中男14例、女6例，年齡41～75歲，中位年齡60歲。所有患者術(shù)前均未接受放化療等任何治療，均有完整的臨床病理資料。

1.2主要試劑:鼠抗人CA-IX單克隆抗體購(gòu)自Epitomics公司，鼠抗人E-cad單克隆抗體購(gòu)自Nomarker公司，DAB顯色試劑盒及SP試劑盒均購(gòu)自于北京中杉金橋生物技術(shù)有限公司。

1.3免疫組化SP法:蠟塊標(biāo)本切片脫蠟至水，抗原修復(fù)，于3%H2O2中室溫孵育15min，采用枸櫞酸緩沖液修復(fù)抗原，然后加入一抗，置入試劑盒中4℃過(guò)夜；經(jīng)PBS沖洗，加入辣根過(guò)氧化物酶標(biāo)記的二抗，室溫孵育30min；再次經(jīng)PBS沖洗后DAB顯色，洗滌，蘇木精復(fù)染，水化，透明，中性樹(shù)脂膠封片，顯微鏡下觀察染色。(陽(yáng)性對(duì)照:已知陽(yáng)性片，陰性對(duì)照:用PBS代替一抗)

1.4結(jié)果判定:所有切片經(jīng)免疫組化SP法染色后由兩位病理科醫(yī)師進(jìn)行讀片并判定結(jié)果:以細(xì)胞膜或細(xì)胞核出現(xiàn)黃色顆粒為CA-IX陽(yáng)性，陽(yáng)性細(xì)胞數(shù)＞85%為陽(yáng)性表達(dá)，＜85%為陰性表達(dá)；E-cad以細(xì)胞膜出現(xiàn)黃色顆粒為陽(yáng)性，按陽(yáng)性細(xì)胞百分?jǐn)?shù)計(jì):0分:陽(yáng)性細(xì)胞數(shù)≤5%，1分:6%～25%，2分:26%～50%，3分:≥51%；按陽(yáng)性細(xì)胞著色強(qiáng)度計(jì):0分:不著色，1分:淺黃色，2分:黃色，3分:棕黃色。兩者乘積≥3分即判定為陽(yáng)性表達(dá)。

1.5統(tǒng)計(jì)學(xué)分析:采用軟件SPSS13.0進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析。組間率的比較采用x2檢驗(yàn)，相關(guān)性分析采用Spearman等級(jí)相關(guān)分析。P＜0.05為差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2　結(jié) 果

2.1正常肺組織和NSCLC組織中CA-IX和E-cad的表達(dá)不同:CA-IX在NSCLC組織中的陽(yáng)性表達(dá)率為61.5%，顯著高于正常肺組織，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(x2＝24.123，P＝0.000)。E-cad在NSCLC組織中陽(yáng)性表達(dá)率26.9%，顯著低于正常肺組織，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(x2＝34.934，P＝0.000)。(見(jiàn)表1)

表1　CA-IX和E-cad蛋白在正常肺組織和NSCLC組織中的表達(dá)

2.2CA-IX和E-cad的表達(dá)與NSCLC臨床病理特征的關(guān)系:NSCLC組織中CA-IX和E-cad的表達(dá)與患者性別、年齡及組織學(xué)類(lèi)型均無(wú)相關(guān)性(P＞0.05)；Ⅰ＋Ⅱ期NSCLC組織中CA-IX和E-cad的陽(yáng)性率分別為45.5%(15/33)、42.4%(14/33)，Ⅲ＋Ⅳ期中分別為73. 3%(33/45)、15.6%(7/45)，兩者之間差異均具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(x2＝6.252，P＝0.012；x2＝6.986，P＝0.017)； NSCLC組織分化越差，CA-IX的表達(dá)越高，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(x2＝7.311，P＝0.026)，而E-cad的表達(dá)越低，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(x2＝6.502，P＝0.039)；CA-IX過(guò)表達(dá)和E-cad低表達(dá)都與淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移有關(guān)(P＜0. 05)。CA-IX不同年齡、不同性別、不同組織學(xué)類(lèi)型肺癌組織中的表達(dá)陽(yáng)性率差異均無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，不不同TNM分期、不同分化程度及有無(wú)淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的肺癌陽(yáng)性率的表達(dá)陽(yáng)性率差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，(見(jiàn)表2)。

表2　NSCLC組織中CA-IX和E-cad蛋白表達(dá)與臨床病理特征之間的關(guān)系

2.3NSCLC組織中CA-IX和E-cad蛋白表達(dá)的相關(guān)性:Spearman相關(guān)分析顯示，CA-IX與E-cad的表達(dá)存在負(fù)相關(guān)(r＝-0.352，P＝0.002)。(見(jiàn)表3)

3　討 論

惡性實(shí)體腫瘤的乏氧微環(huán)境對(duì)腫瘤的發(fā)生、發(fā)展有重要影響。CA-IX是腫瘤相關(guān)抗原，與腫瘤的乏氧代謝有關(guān)，缺氧狀態(tài)下被HIF-1α激活，表達(dá)上調(diào)。CA-IX的酶活性主要是催化H2O＋CO2→H＋＋H2CO3反應(yīng)，通過(guò)離子轉(zhuǎn)運(yùn)，使細(xì)胞外pH下降，保持酸性微環(huán)境，增加了腫瘤細(xì)胞對(duì)缺氧的耐受力[3]。CA-IX在食管鱗癌[4]、肺癌中的表達(dá)與細(xì)胞分化程度、TNM分期呈現(xiàn)正相關(guān)，而在腎透明細(xì)胞癌中存在負(fù)相關(guān)。本研究結(jié)果顯示，CA-IX在NSCLC組織中的表達(dá)明顯高于正常肺組織，細(xì)胞分化越差，CA-IX的過(guò)表達(dá)率越高。而隨著TNM分期越晚，CA-IX表達(dá)越強(qiáng)。此結(jié)果表明，CA-IX在NSCLC組織中的表達(dá)與分化程度、TNM分期及淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移等因素顯著相關(guān)，即CA-IX表達(dá)越強(qiáng)，臨床分期越晚，更易發(fā)生轉(zhuǎn)移。

上皮間質(zhì)化(EMT)是細(xì)胞與細(xì)胞間粘附作用減弱從而使上皮細(xì)胞間松散、分離并獲得間充質(zhì)和遷移表型的過(guò)程。腫瘤轉(zhuǎn)移是以EMT開(kāi)始，從原發(fā)腫瘤解離，侵襲遠(yuǎn)端的一個(gè)多步驟的級(jí)聯(lián)反應(yīng)。E-cad的損失是EMT的標(biāo)志，E-cad分布在各類(lèi)上皮細(xì)胞表面，介導(dǎo)粘附作用，在腫瘤的發(fā)生、發(fā)展中很關(guān)鍵[2]。E-cad的高表達(dá)可降低腫瘤細(xì)胞的侵襲和轉(zhuǎn)移能力，低表達(dá)會(huì)提高轉(zhuǎn)移的潛能。目前的研究關(guān)于E-cad在NSCLC中的表達(dá)與細(xì)胞分化程度的關(guān)系沒(méi)有達(dá)成一致的結(jié)論，既有的研究存在相關(guān)，有的顯示無(wú)關(guān)。本實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示，E-cad表達(dá)與腫瘤細(xì)胞分化程度顯著相關(guān)，即分化越差，陽(yáng)性表達(dá)率越低，最終導(dǎo)致侵襲和轉(zhuǎn)移。本研究還發(fā)現(xiàn)，E-cad在非小細(xì)胞肺癌中的表達(dá)與淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、TNM分期有關(guān)。

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Expression and Significance of CA-IX and E-cadherin in Non-small Cell Lung Cancer

PENG Lili， SHEN Ting， WEI Yusen， et al
(Hebei Medical University，Hebei Shijiazhuang 050017，China)

Abstract:Objective:To investigate the expression of carbonic anhydrase-IX (CA-IX) and epithe1ia1 cadherin (E-cad) in non-sma11 ce11 1ung cancer (NSCLC) and their re1ationship with the c1inicopatho1ogica1 features，and to study the corre1ation among the expression of CA-IX and E-cad. Method: Both CA-IX and E-cad expressions of 78 cases of NSCLC and 20 cases of norma1 1ung tissues specimens were retrospective1y assessed through immunohistochemica1 (IHC) ana1yses. Result: The positive expression rates of CAIX and E-cad was 61.5%(48/78) and 26.9%(21/78) in 78 cases of 1ung cancer，whi1e 0.0%(0/20) and 100%(20/20) in norma1 tissues，the difference was statistica11y significant (P＜0.05). Significant corre1ations between CA-IX and E-cad expression with many c1inicopatho1ogica1 measurements such as differentiation，TNM stage and 1ymph node metastasis were found (P＜0.05). The expression of CA-IX and E-cadwas significant1y inverse1y corre1ated (r＝-0.352，P＜0.05). Conclusion: CA-IX and E-cad associates each other and both p1ay key ro1es in the progression of NSCLC. So to detect the expression of CA-IX and E -cad together may provide strong evidence to judge NSCLC invasion and metastasis in ear1y c1inica1 time.

Key words:CA-IX； E-cad； NSCLC； Immunohistochemica1

文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼:A

doi:10.3969/ j.issn.1006-6233.2016.02.004

文章編號(hào):1006-6233(2016)02-0187-04

基金項(xiàng)目：?河北省醫(yī)學(xué)科學(xué)研究重點(diǎn)項(xiàng)目計(jì)劃，(編號(hào)：ZD20140478)