非小細(xì)胞肺癌中循環(huán)腫瘤細(xì)胞與臨床特征的關(guān)系

郭迎雪，李貴新，李方超，欒可峰，李新新

1.濰坊醫(yī)學(xué)院腫瘤學(xué)(山東 濰坊 261053) 2.濰坊醫(yī)學(xué)院附屬醫(yī)院腫瘤科(山東 濰坊 261053)

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非小細(xì)胞肺癌中循環(huán)腫瘤細(xì)胞與臨床特征的關(guān)系

郭迎雪1，李貴新2*，李方超2，欒可峰1，李新新1

1.濰坊醫(yī)學(xué)院腫瘤學(xué)(山東 濰坊 261053) 2.濰坊醫(yī)學(xué)院附屬醫(yī)院腫瘤科(山東 濰坊 261053)

【摘要】目的探討分析循環(huán)腫瘤細(xì)胞(CTC)在非小細(xì)胞肺癌患者中的診斷價(jià)值及其與臨床病理特征的關(guān)系。方法選取60例非小細(xì)胞肺癌患者，40例慢性支氣管炎患者及40例健康志愿者，Cellsearch法計(jì)數(shù)患者靜脈血中CTC數(shù)目，分析其與性別、年齡、臨床病理分期及腫瘤標(biāo)志物的關(guān)系。結(jié)果非小細(xì)胞肺癌患者CTC數(shù)目顯著高于慢性支氣管炎患者和健康體檢者(P<0.01)；非小細(xì)胞肺癌患者外周血中CTC數(shù)目與性別、年齡、原發(fā)腫瘤分期無關(guān)(P>0.05)；外周血CTC陽性率與非小細(xì)胞肺癌的淋巴結(jié)分期無明顯相關(guān)性(P>0.05)；轉(zhuǎn)移性(M1)非小細(xì)胞肺癌患者CTC陽性率顯著高于非轉(zhuǎn)移性(M0)患者(P<0.05)；不同TNM分期(Ⅰ～Ⅱ，III～I(xiàn)V期)患者CTC陽性率分別為42.9%，76.1%，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。結(jié)論非小細(xì)胞肺癌患者外周血中CTC數(shù)目與臨床特征相關(guān)，通過檢測CTC可初步反映疾病狀態(tài)，并有望成為新的血液學(xué)指標(biāo)來提高非小細(xì)胞肺癌的早期診斷。

【關(guān)鍵詞】非小細(xì)胞肺癌；循環(huán)腫瘤細(xì)胞；臨床特征；腫瘤標(biāo)志物

肺癌是全世界范圍內(nèi)常見的惡性腫瘤，其發(fā)病率以及死亡率居惡性腫瘤之首[1-2]。2011年最新資料顯示[3]其死亡人數(shù)超過了因結(jié)直腸癌、乳腺癌和前列腺癌死亡人數(shù)的總和。目前肺癌發(fā)病率仍在以每年約26.9%的速度上漲，嚴(yán)重危害人類健康。高發(fā)病率、高轉(zhuǎn)移率、高死亡率使非小細(xì)胞肺癌的治療成為臨床難點(diǎn)。既往研究發(fā)現(xiàn)[4]腫瘤的惡性程度及是否伴有轉(zhuǎn)移僅靠影像學(xué)檢查并不完全可靠，因此尋找新的更為精準(zhǔn)的早期診斷及監(jiān)測其轉(zhuǎn)移情況的尤為重要。循環(huán)腫瘤細(xì)胞(circulating tumor cell，CTC)是指從實(shí)體瘤的原發(fā)部位進(jìn)入血液循環(huán)系統(tǒng)的腫瘤細(xì)胞，這些癌細(xì)胞可以通過血液到達(dá)遠(yuǎn)端部位，粘附侵入到血管壁，當(dāng)環(huán)境合適時(shí)，能在這些部位增殖，最終將形成致命性腫瘤轉(zhuǎn)移病灶[5-6]。CTC可比影像學(xué)診斷更早發(fā)現(xiàn)腫瘤細(xì)胞的微小轉(zhuǎn)移，進(jìn)而指導(dǎo)腫瘤的早期診斷。本研究選擇初診非小細(xì)胞肺癌患者作為研究對象，分析CTC數(shù)目與臨床特征、分期及腫瘤標(biāo)志物的關(guān)系，為其臨床應(yīng)用提供理論依據(jù)，現(xiàn)報(bào)道如下。

1資料與方法

1.1一般資料選擇濰坊醫(yī)學(xué)院附屬醫(yī)院2014年2月—2015年7月診斷的60例非小細(xì)胞肺癌患者為研究對象，所有患者均經(jīng)病理證實(shí)，納入標(biāo)準(zhǔn)：①經(jīng)支氣管鏡病理學(xué)或細(xì)胞學(xué)檢查確診的患者；②入組前未接受任何形式的全身治療和抗腫瘤治療；③既往無其他惡性腫瘤病史；④自愿參與此研究。排除合并終末期肝病或腎病及其他部位惡性腫瘤患者。其中男24例，女36例；年齡41～87歲，平均(67.2±8.1)歲，≤65歲者20例，>65歲者40例；I期3例，II期11例，III期28例，IV期18例。同期就診的40例慢性胃炎患者，其中男22例，女18例，年齡54～78歲，平均(63.8±9.0)歲。健康志愿者40例，其中男13例，女27例，年齡28～69歲，平均(49.3±12.9)歲，三組患者在性別、年齡等一般資料比較，差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)， 具有可比性。

1.2儀器與試劑9541循環(huán)上皮細(xì)胞自動(dòng)樣本處理系統(tǒng)(上海寶騰生物醫(yī)藥科技有限公司)；9555循環(huán)上皮細(xì)胞結(jié)果分析系統(tǒng)(上海寶騰生物醫(yī)藥科技有限公司)：CellSave儲(chǔ)存管、CellSearch試劑盒、CellTracks自動(dòng)處理系統(tǒng)、磁槽、CellTracks自動(dòng)分析儀。

1.3檢測方法

1.3.1樣本處理空腹抽取肘靜脈血7.5 mL，標(biāo)記錐形管，將每支CellSave管中的7.5 mL血液注入帶有適當(dāng)標(biāo)記的CellTracks AutoPrep錐形管內(nèi)進(jìn)行混合，加入6.5 mL稀釋緩沖液，改好裝有血液的CellTracks AutoPrep錐形管，并顛倒混勻5次，在離心機(jī)的制動(dòng)關(guān)閉狀態(tài)下，以2 000 r/min對錐形管離心10 min，樣本準(zhǔn)備完成1 h內(nèi)，在CellTracks AutoPrep系統(tǒng)上對試管進(jìn)行處理。

1.3.2CTC無創(chuàng)性標(biāo)準(zhǔn)化檢測系統(tǒng)自動(dòng)處理樣本，磁珠富集EpCAM陽性細(xì)胞，細(xì)胞固定后依次加入藻紅蛋白(phycoerythrin，PE)標(biāo)記的CK8/18/19抗體，藻藍(lán)蛋白(allophycocyan，APC)標(biāo)記的CD45抗體，使用4，6-二脒基-2-苯基吲哚(4，6-diaminodino-2-phenylindole，DAPI)對細(xì)胞核進(jìn)行染色。處理后的樣品自動(dòng)轉(zhuǎn)入MagNest，避光孵育20 min后放入Analyzer系統(tǒng)進(jìn)行熒光掃描分析并還原成圖像，系統(tǒng)分選符合腫瘤細(xì)胞形態(tài)、CK+的細(xì)胞供人工判讀，CK+DAPI+CD45的細(xì)胞被定義為CTC。

1.4統(tǒng)計(jì)學(xué)處理采用SPSS 17.0統(tǒng)計(jì)學(xué)軟件，計(jì)數(shù)資料采用χ2檢驗(yàn)，P<0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2結(jié)果

2.1CTC計(jì)數(shù)比較60例非小細(xì)胞肺癌患者41例檢出CTC，明顯高于慢性支氣管炎患者及健康體檢者(χ2=32.997、42.700，P<0.01)，見表1。

表1　各組CTC檢測結(jié)果比較

2.2CTC與非小細(xì)胞肺癌患者臨床特征與病理的關(guān)系非小細(xì)胞肺癌患者CTC數(shù)目與患者性別、年齡無關(guān)，差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)。原發(fā)腫瘤分期T1-2和T3-4患者的CTC陽性率差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)；淋巴結(jié)分期為N0-1期患者與N2-3期患者CTC陽性率的差異也無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)；轉(zhuǎn)移性(M1)非小細(xì)胞肺癌患者CTC陽性率顯著高于非轉(zhuǎn)移性(M0)患者(P<0.05)；不同TNM分期(I～I(xiàn)I，III～I(xiàn)V期)患者CTC陽性率分別為42.9%，76.1%，陽性率差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)，見表2。

2.3與肺癌腫瘤標(biāo)志物的關(guān)系CTC陽性率與CEA、CYFRA21-1和SCC水平有關(guān)(P>0.05)；CA724異常組的CTC陽性率明顯高于CA724正常組(P<0.05)，見表3。

表2　CTC 與非小細(xì)胞肺癌患者臨床特征、分期的關(guān)系

表3　CTC與腫瘤標(biāo)志物的關(guān)系

3討論

CTC標(biāo)準(zhǔn)化檢測已成為美國乳腺癌、前列腺癌和結(jié)腸癌等腫瘤的轉(zhuǎn)移性診斷、療效檢測和預(yù)后判斷的重要依據(jù)[7]。本研究采用國際上先進(jìn)的CTC無創(chuàng)性標(biāo)準(zhǔn)化檢測技術(shù)[8]獲取國人常見腫瘤發(fā)生、發(fā)展與轉(zhuǎn)移過程中CTC的基本數(shù)據(jù)，并與血清標(biāo)志物結(jié)果進(jìn)行比對。結(jié)果表明非小細(xì)胞肺癌患者血CTC水平顯著高于慢性支氣管炎患者和健康人群(P<0.05)，表明CTC計(jì)數(shù)在非小細(xì)胞肺癌患者外周血中有陽性表達(dá)，這也許可以成為診斷非小細(xì)胞肺癌的一項(xiàng)實(shí)驗(yàn)室指標(biāo)，而且它并不受性別、年齡的影響(P>0.05)。此外，淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移患者的CTC陽性率無差異(P>0.05)，而有遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移患者CTC陽性率顯著高于非遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移患者(P<0.05)，這提示外周血中CTC的數(shù)目與血運(yùn)轉(zhuǎn)移有關(guān)而與淋巴轉(zhuǎn)移途徑不相關(guān)。另外部分早期肺癌患者外周血可查到CTC細(xì)胞，表明早期肺癌在未出現(xiàn)明顯影像學(xué)轉(zhuǎn)移灶時(shí)已發(fā)生微轉(zhuǎn)移，這將對肺癌的診斷及制定治療方案起到至關(guān)重要的作用。此外，還與以往標(biāo)準(zhǔn)血清學(xué)肺癌標(biāo)志物進(jìn)行比較，標(biāo)志物之間有明顯相關(guān)性，提示也許可以共同指導(dǎo)非小細(xì)胞肺癌的診斷、鑒別轉(zhuǎn)移和復(fù)發(fā)。

總之，此研究初步說明了外周血CTC計(jì)數(shù)可用于非小細(xì)胞肺癌的早期診斷、微轉(zhuǎn)移的評(píng)估。補(bǔ)充和修訂我國非小細(xì)胞肺癌的診斷與治療規(guī)范和標(biāo)準(zhǔn)，將明顯提升我國惡性腫瘤診療水平和醫(yī)療質(zhì)量。

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責(zé)任編輯：艾茜

The Relationship Between Circulating Tumor Cells Count and Clinical Features in Patients with Non-small Cell Lung Cancer

Guo Yingxue1，Li Guixin2*，Li Fangchao2， Luan Kefeng1，Li Xinxin1

(1.DepartmentofOncology，WeifangMedicalUniversity,，Weifang261053，China；2.DepartmentofMedicalOncology，AffiliatedHospitalofWeifangMedicalUniversity,Weifang261053，China)

【Abstract】Objective To investigate the diagnostic value of circulating tumor cells (CTC) in non-small cell lung cancer and its relationship with clinical features.Methods Totally 60 patients with non-small cell lung cancer were selected for study，40 patients with chronic bronchitis and 40 normal volunteers were selected as the control groups.The CTC expression of peripheral blood was detected by CellSearch System，and its relationship with the age, sex，clinical stage and tumor marker was analyzed. Results CTC count was significantly higher in non-small cell lung cancer patients than in chronic bronchitis patients and healthy controls (P<0.01). The number of CTC in peripheral blood has no association with the gender、age and the stage of the primary tumor(P>0.05).The positive rate of CTC in different lymph node staging has no significant correlation (P>0.05),while the number of CTC of the metastatic (M1)non-small cell lung cancer patients is higher than the non metastasis (M0) (P<0.05);The positive rate of TNM stage Ⅰ～Ⅱ and III～I(xiàn)V is 45.5% and 72.4 %, which different has statistically significance (P<0.05);The positive rate of CTC was correlated with the CEA、CYFRA21-1 and SCC(P<0.05).Conclusion CTC counting in non-small cell lung cancer patients has certain correlation with clinical characteristics,can preliminarily reflect the patient's disease states，and be expected to become new hematology indexes to improve the early diagnosis of non-small cell lung cancer.

【Key words】non-small cell lung cancer.; circulating tumor cell (CTC); clinical features; tumor markers

作者簡介郭迎雪(1991- )，女，山東濟(jì)寧人，碩士在讀，研究方向：腫瘤學(xué)。*通信作者李貴新，博士研究生，副主任醫(yī)師，主要從事腫瘤學(xué)方面研究。

【中圖分類號(hào)】R735.2

【文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼】A

【文章編號(hào)】1008-8164(2016)01-0011-03

收稿日期：2015-11-17