地木耳乳膏皮膚安全性實(shí)驗(yàn)研究

林　靜，胡程萍,劉杰書

1.湖北理工學(xué)院醫(yī)學(xué)院(湖北 黃石 435003) 2.湖北民族學(xué)院中醫(yī)藥學(xué)院(湖北 恩施 445000)

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地木耳乳膏皮膚安全性實(shí)驗(yàn)研究

林靜1，胡程萍1,劉杰書2*

1.湖北理工學(xué)院醫(yī)學(xué)院(湖北 黃石 435003) 2.湖北民族學(xué)院中醫(yī)藥學(xué)院(湖北 恩施 445000)

【摘要】目的評(píng)價(jià)地木耳乳膏皮膚用藥的安全性。方法采用家兔完整皮膚和破損皮膚分組涂抹地木耳乳膏(1.0 g/只)和空白基質(zhì)(1.0 g/只)進(jìn)行皮膚刺激性實(shí)驗(yàn)；健康豚鼠分組涂抹地木耳乳膏(0.2 g/只)、空白基質(zhì)(0.2 g/只)、1% 2,4-二硝基氯苯溶液(0.2 mL/只)進(jìn)行致敏性實(shí)驗(yàn)，均以紅斑和水腫情況為評(píng)價(jià)標(biāo)準(zhǔn)；對(duì)大鼠分組涂抹地木耳乳膏(1 g/只)、空白基質(zhì)(1 g/只)和1% 2,4-二硝基氯苯溶液(1 mL/只)進(jìn)行皮膚急性毒性實(shí)驗(yàn)，觀察各組大鼠體質(zhì)量變化、死亡及中毒反應(yīng)等。結(jié)果地木耳乳膏對(duì)家兔完整皮膚無(wú)刺激性，對(duì)破損皮膚有輕度刺激性，給藥48 h后刺激性消失；對(duì)豚鼠無(wú)過(guò)敏反應(yīng)和急性毒性反應(yīng)。結(jié)論地木耳乳膏是一種安全性較好的外用制劑。

【關(guān)鍵詞】地木耳乳膏；皮膚；刺激實(shí)驗(yàn)；過(guò)敏實(shí)驗(yàn)；急性毒性實(shí)驗(yàn)

地木耳(NostoccommuneVauch.)又稱地衣、地耳、地皮菜等，為藻類藍(lán)藻綱念珠藻科(Nostocaceae)念珠藻屬植物念珠藻(NostoccommuneVauch.)的藻體[1]。在我國(guó)，地木耳資源豐富，分布范圍廣，生命力極強(qiáng)，漫長(zhǎng)時(shí)間的進(jìn)化已經(jīng)使其適應(yīng)了干旱、強(qiáng)紫外輻射的荒漠環(huán)境[2]，富含蛋白質(zhì)、粗脂肪、粗纖維、礦物質(zhì)、維生素、氨基酸、藍(lán)藻素、多糖等各種營(yíng)養(yǎng)成分[3-5]。地木耳提取物具有良好的抗氧化、保濕和紫外線防護(hù)效果，將其制備成乳膏劑，可應(yīng)用于美容護(hù)膚方面[6]。為了解并評(píng)價(jià)該乳膏在皮膚給藥過(guò)程中是否安全, 本文通過(guò)進(jìn)行動(dòng)物皮膚刺激性實(shí)驗(yàn)、皮膚過(guò)敏性實(shí)驗(yàn)和皮膚急性毒性實(shí)驗(yàn)等研究[7-11],為臨床安全用藥提供理論依據(jù),現(xiàn)報(bào)道如下。

1材料與方法

1.1動(dòng)物普通級(jí)健康成年白家兔，雌雄兼用，體質(zhì)量(2.0±0.2)kg；普通級(jí)健康Hartley豚鼠，雌雄兼用，體質(zhì)量(450.0±5.0)g；SD成年大鼠，體質(zhì)量(200.0±15.0)g,均購(gòu)自武漢生物制品研究所有限責(zé)任公司，許可證號(hào)SCXK(鄂)2008-0003。

1.2藥物地木耳乳膏(批號(hào)20150608，用藥濃度：每10 g含0.4 g地木耳醇提物)及乳膏空白基質(zhì) (批號(hào)20150608)，均由湖北理工學(xué)院醫(yī)學(xué)院藥劑室提供； 2，4 -二硝基氯苯 (武漢威順達(dá)科技發(fā)展有限公司提供，批號(hào)20131010), 臨用前用70%乙醇制備成所需濃度的溶液。

1.3方法

1.3.1皮膚刺激性實(shí)驗(yàn)家兔10只，隨機(jī)分為2組，即完整皮膚組和破損皮膚組，每組各5只，以乳膏空白基質(zhì)為對(duì)照，給藥前24 h將兔脊柱左右兩側(cè)約3 cm×3 cm的面積內(nèi)剃去毛，并用75%乙醇消毒該區(qū)域。在此脫去毛區(qū)域內(nèi)繼續(xù)用消過(guò)毒的手術(shù)剪刀劃破皮膚，直至損傷角質(zhì)層、皮膚輕微滲血，即為破損皮膚組。采用同體自身左右對(duì)比法，每天左側(cè)去毛區(qū)域均勻涂抹地木耳乳膏)，右側(cè)對(duì)照區(qū)涂抹空白基質(zhì)，每只各1.0 g，均用無(wú)菌紗布覆蓋，膠布固定，24 h后用溫水洗除受試物，連續(xù)給藥7 d，洗除受試物后1、24、48、72 h觀察并記錄紅斑及水腫情況。按表1評(píng)分標(biāo)準(zhǔn)進(jìn)行評(píng)分[3],計(jì)算平均分值以判斷刺激性的強(qiáng)度，刺激性反應(yīng)積分平均分值=(紅斑形成總積分+水腫形成總積分)/實(shí)驗(yàn)動(dòng)物數(shù)。

表1　皮膚刺激強(qiáng)度評(píng)分標(biāo)準(zhǔn)

1.3.2皮膚致敏性實(shí)驗(yàn)取豚鼠30只，雌雄各半，隨機(jī)分成3組，每組各10只，給藥前24 h將豚鼠背部脊柱左右兩側(cè)的毛剃去，去毛面積每側(cè)約為3 cm×3 cm。①致敏接觸：分別在各組豚鼠的左側(cè)脫毛區(qū)均勻涂抹地木耳乳膏(0.2 g/只)、空白基質(zhì)(0.2 g/只)和1%的2,4-二硝基氯苯溶液(0.2 mL/只)，用無(wú)菌紗布固定，持續(xù)6 h，于第7、14 d時(shí)再使用同法給藥1次，于每次藥物去除后觀察皮膚紅斑和水腫情況。②激發(fā)接觸：末次致敏后14 d，分別在相應(yīng)組豚鼠的右側(cè)脫毛區(qū)域均勻涂抹地木耳乳膏(0.2 g/只)、空白基質(zhì)(0.2 g/只)、1%的2,4-二硝基氯苯溶液(0.2 mL/只)，6 h后除去藥物，即刻觀察，然后于24、48、72 h再次觀察各組豚鼠涂藥區(qū)域皮膚的過(guò)敏情況，按表2評(píng)分標(biāo)準(zhǔn)進(jìn)行致敏率的評(píng)價(jià)[3]。致敏反應(yīng)平均分值=(紅斑形成總積分+水腫形成總積分)/實(shí)驗(yàn)動(dòng)物數(shù)；致敏反應(yīng)發(fā)生率=有過(guò)敏反應(yīng)動(dòng)物數(shù)/動(dòng)物總數(shù)×100%。

表2　皮膚致敏強(qiáng)度評(píng)分標(biāo)準(zhǔn)

1.3.3皮膚急性毒性實(shí)驗(yàn)取大鼠12只，隨機(jī)分成3組，每組各4只，皮膚準(zhǔn)備方法同1.3.2。分別在各組豚鼠的左側(cè)脫毛區(qū)均勻涂抹地木耳乳膏(1 g/只)、空白基質(zhì)(1 g/只)和1%的2,4-二硝基氯苯溶液(1 mL/只)，用無(wú)菌紗布固定，涂藥24 h后用溫水洗除受試物，觀察，之后同法連續(xù)7 d。觀察大鼠的中毒反應(yīng)和死亡情況，以及動(dòng)物的體質(zhì)量變化、毛發(fā)、四肢活動(dòng)和進(jìn)食等情況。如有死亡，及時(shí)進(jìn)行尸檢和觀察,必要時(shí)行病理組織學(xué)檢查。

2結(jié)果

2.1皮膚刺激性實(shí)驗(yàn)多次給藥后，空白基質(zhì)與地木耳乳膏對(duì)完整皮膚無(wú)刺激性；破損皮膚組動(dòng)物中，空白基質(zhì)的平均反應(yīng)分值均低于0.49分，對(duì)皮膚無(wú)刺激性；地木耳乳膏在用藥1、24 h后均有輕度刺激性，但在給藥48 h后平均反應(yīng)分值均為0，刺激性消失，見(jiàn)表3。

表3　家兔皮膚刺激性實(shí)驗(yàn)結(jié)果(n=5，分)

2.2皮膚致敏性實(shí)驗(yàn)地木耳乳膏與空白基質(zhì)對(duì)皮膚無(wú)致敏作用，均未出現(xiàn)紅斑、水腫等反應(yīng)，致敏率為0。而陽(yáng)性致敏物2,4-二硝基氯苯激發(fā)給藥6～72 h后，豚鼠皮膚可見(jiàn)不同程度的紅斑和水腫，其致敏率達(dá)100%，見(jiàn)表4。

表4　豚鼠皮膚過(guò)敏性實(shí)驗(yàn)結(jié)果(n=10)

2.3皮膚急性毒性實(shí)驗(yàn)去除受試物后第7 d，空白基質(zhì)組、完整皮膚地木耳乳膏組、破損皮膚地木耳乳膏組的豚鼠全部存活。實(shí)驗(yàn)期間，3組豚鼠的采食、大便、四肢活動(dòng)均未見(jiàn)明顯異常，未出現(xiàn)體質(zhì)量異常變化和全身中毒反應(yīng),表明地木耳乳膏對(duì)豚鼠皮膚無(wú)明顯的急性毒性。

3討論

地木耳醇提取物具有良好的抗氧化、保濕和紫外線防護(hù)效果，可對(duì)皮膚產(chǎn)生良好的保濕和防曬作用，且天然植物的提取物具有光化學(xué)穩(wěn)定、安全可靠等優(yōu)點(diǎn)。本實(shí)驗(yàn)通過(guò)家兔皮膚刺激性實(shí)驗(yàn)，家兔完整皮膚涂以地木耳乳膏，無(wú)刺激反應(yīng)，破損皮膚涂以地木耳乳膏1、24 h后有輕度刺激性，但在給藥48 h后恢復(fù)正常狀態(tài)；皮膚致敏性實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明地木耳乳膏無(wú)致敏性；急性毒性實(shí)驗(yàn)顯示無(wú)明顯毒性作用。由此可見(jiàn)，地木耳乳膏作為皮膚局部用藥的不良反應(yīng)較小，使用安全，值得進(jìn)一步臨床推廣應(yīng)用。

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責(zé)任編輯：艾茜

Experimental Study on the Safety ofNostoccommuneVauch Cream

Lin Jing1,Hu Chengping1,Liu Jieshu2*

(1.SchoolofMedicine,HubeiPolytechnicUniversity,Huangshi435003，China;2.SchoolofTraditionalChineseMedicine,HubeiUniversityforNationalities,Enshi445000,China)

【Abstract】Objective To evaluate the safety of Nostoc commune Vauch cream.Methods The skin irritation test was performed on the skin of rabbits.The skin allergy test and acute toxicity test were performed on the skin of guinea pigs. Results Nostoc commune Vauch cream had no irritation on the intact skin of rabbits, but the mild irritation on the damaged skin was observed,which faded away 48 hs afterwards.Nostoc commune Vauch cream had no allergical reaction and acute toxicity on the skin of guinea pigs.Conclusion It is safe to use Nostoc commune Vauch cream which can treat the cutaneous diseases.

【Key words】Nostoc commune Vauch cream;skin;irritation test;allergy test;acute toxicity test

基金項(xiàng)目湖北省教育廳青年項(xiàng)目(Q20122905)。

作者簡(jiǎn)介林靜(1979- )，女，湖北黃石人，講師，碩士，研究方向：天然藥物開發(fā)應(yīng)用。*通信作者劉杰書，男，教授，研究方向：民族醫(yī)藥學(xué)。

【中圖分類號(hào)】R965.3

【文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼】A

【文章編號(hào)】1008-8164(2016)01-0053-03

收稿日期：2016-01-16