紅鰭東方鲀轉(zhuǎn)錄因子GATA4基因的表達(dá)

郝薇薇 高長富 仇雪梅 姜志強(qiáng) 王秀利

（大連海洋大學(xué)水產(chǎn)與生命學(xué)院，大連 116023）

紅鰭東方鲀轉(zhuǎn)錄因子GATA4基因的表達(dá)

郝薇薇 高長富 仇雪梅 姜志強(qiáng) 王秀利

（大連海洋大學(xué)水產(chǎn)與生命學(xué)院，大連 116023）

利用熒光實(shí)時(shí)定量PCR（qRT-PCR）技術(shù)對(duì)紅鰭東方鲀（Takifugu rubripes）成魚的腎臟、肌肉、腦、脾臟、肝臟、精巢和卵巢等組織進(jìn)行了GATA4基因的表達(dá)分析，并對(duì)幼魚不同發(fā)育時(shí)間的個(gè)體水平上的GATA4基因的表達(dá)進(jìn)行分析。結(jié)果顯示，紅鰭東方鲀成魚的肌肉、脾臟、腎臟和腦等4個(gè)組織中的GATA4的表達(dá)量差異不顯著，精巢、卵巢和肝臟的GATA4的表達(dá)量顯著高于其他組織（P<0.05），GATA4在精巢、肝臟中的表達(dá)量顯著高于卵巢中（P<0.05）。在雄性幼魚5個(gè)發(fā)育時(shí)期中（23、30、40、60和80日齡），GATA4的表達(dá)量從23日齡到30日齡逐漸升高，30日齡最高且明顯高于同時(shí)期雌魚GATA4的表達(dá)量（P<0.01），隨后到40日齡之間表達(dá)量逐漸降低，從60日齡到80日齡又有上升的趨勢。在雌性幼魚5個(gè)發(fā)育時(shí)期中，GATA4表達(dá)量從23日齡到40日齡逐漸升高，40日齡最高且明顯高于同時(shí)期雄魚GATA4的表達(dá)量（P<0.01），到60日齡期間表達(dá)量降低，從80日齡后又有上升趨勢。各時(shí)期雌雄幼魚，除40日齡外，其他各個(gè)時(shí)期在雄性中GATA4的表達(dá)量均高于在雌性中的表達(dá)量。

紅鰭東方鲀；實(shí)時(shí)定量PCR；轉(zhuǎn)錄因子GATA4；基因表達(dá)

紅鰭東方鲀（Takifugu rubripes）隸屬于鲀形目（Telraodontiformes）、 鲀科（Tetradontidae）、東方鲀屬（Takifugu），是暖水性海洋底棲魚類，其規(guī)格較大、肉質(zhì)較緊、營養(yǎng)豐富、味道鮮美、經(jīng)濟(jì)價(jià)值高，為我國北方地區(qū)的優(yōu)良海水養(yǎng)殖魚類之一［1］。紅鰭東方鲀作為魚類中的模式生物，其基因組草圖已經(jīng)完成，為后續(xù)深入研究相關(guān)基因及其功能提供了充分的參考資料。

GATA因子是一類具有保守鋅指結(jié)構(gòu)域的轉(zhuǎn)錄因子，在脊椎動(dòng)物生長發(fā)育過程中具有多種調(diào)控功能。GATA家族成員具有2個(gè)鋅指結(jié)構(gòu)C-X2-CX17-C-X2-C（C為半胱氨酸，X為可變氨基酸，數(shù)值為氨基酸個(gè)數(shù)），并分別命名為氨基端（N）鋅指和羧基端（C）鋅指［2］。GATA因子能結(jié)合位于靶基因啟動(dòng)子和增強(qiáng)子部位上的一段共同的核苷酸序列［T/A（GATA）A/G］，因而這類轉(zhuǎn)錄因子被命名為GATA轉(zhuǎn)錄因子。根據(jù)GATA因子的基因結(jié)構(gòu)和功能，哺乳動(dòng)物GATA家族的6個(gè)成員可以分為兩個(gè)亞家族，GATA1/2/3亞家族包括GATA1、2、3，主要在造血肝細(xì)胞中表達(dá)；GATA4/5/6亞家族包括GATA4、5、6，主要在心臟、腸上皮細(xì)胞和性腺中表達(dá)［3-6］。其中GATA4在調(diào)節(jié)胚胎形態(tài)發(fā)育和細(xì)胞分化過程中具有重要作用。一些研究表明GATA4參與生物體生長發(fā)育的多個(gè)過程，如個(gè)體的存活，細(xì)胞組織的分化和心肌細(xì)胞前體的遷移［7］。在小鼠胚胎早期敲除GATA4基因，由于心血管不能形成，導(dǎo)致小鼠早期死亡［8］。小鼠早期雌雄性腺發(fā)育過程中，均在未分化的生殖脊中發(fā)現(xiàn)GATA4高表達(dá)，而在卵巢分化結(jié)束后，GATA4的表達(dá)迅速下降，在成鼠的卵泡顆粒細(xì)胞中有較高表達(dá)。在人類的睪丸發(fā)育過程中，從胎兒時(shí)期到成人，GATA4均有表達(dá)［9］。雖然GATA4在魚類中也有相關(guān)研究，如在斑馬魚和青鳉中GATA4調(diào)節(jié)多種器官的形成［10］，但GATA4在魚類性腺發(fā)育中的功能文獻(xiàn)報(bào)道較少。

實(shí)時(shí)定量PCR（Quantitative real-time polymerase chain reaction，qRT-PCR）是檢測基因表達(dá)最靈敏的方法之一，尤其是針對(duì)表達(dá)量較低的基因［11］。qRTPCR具有可直接監(jiān)測擴(kuò)增中熒光信號(hào)變化獲得定量結(jié)果，精確性高，定量和擴(kuò)增同步進(jìn)行［12］等優(yōu)點(diǎn)。

本研究通過qRT-PCR［13-15］對(duì)紅鰭東方鲀成魚腎臟、腦、肌肉、脾臟、肝臟、精巢和卵巢等組織進(jìn)行GATA4的組織表達(dá)分析以及不同發(fā)育時(shí)期（23、30、40、60和80日齡）的紅鰭東方鲀幼魚個(gè)體水平的GATA4表達(dá)分析，以期為今后進(jìn)一步研究紅鰭東方鲀GATA4的功能提供參考。

1 材料與方法

1.1 材料

實(shí)驗(yàn)用3齡健康的紅鰭東方鲀成魚采自大連天正實(shí)業(yè)有限公司，采集腎臟、腦、肌肉、脾臟、肝臟、精巢和卵巢，保存在RNAlater試劑中。

實(shí)驗(yàn)用健康的紅鰭東方鲀幼魚采自大連富谷水產(chǎn)有限公司，分別于23日齡、30日齡、40日齡、60日齡和80日齡時(shí)采集幼魚個(gè)體，保存在RNAlater試劑中。

1.2 方法

1.2.1 引物設(shè)計(jì)及合成 按照SYBR Premix Ex TaqTMⅡkit（Tli RNaseH Plus） 引物設(shè)計(jì)原則，用Primer Premier 5軟件［16］設(shè)計(jì)GATA4基因的qRT-PCR引物，利用NCBI上的Primer-BLAST在Takifugu rubripes的基因組和轉(zhuǎn)錄組下進(jìn)行比對(duì)，結(jié)果顯示GATA4引物的特異性好［17］。內(nèi)參基因選用紅鰭東方鲀?chǔ)?actin基因的引物［18］。引物序列由大連寶生物公司合成，引物信息見表1。

表1 本研究所用引物

1.2.2 總RNA的提取及cDNA的合成 按照Trizol說明書（上海生工）的步驟提取成魚腎臟、腦、肌肉、脾臟、肝臟、精巢、卵巢組織和各個(gè)時(shí)期幼魚的總RNA。用濃度為1%的瓊脂糖凝膠進(jìn)行電泳確定總RNA的完整性，可以明顯看到28S、18S和5S的三條帶。利用分光光度計(jì)測定RNA的OD值以確定RNA的濃度及純度，且保證OD260nm/OD280nm值在1.8-2.0之間。按照PrimeScriptTMRT reagent Kit（大連寶生物）說明書的步驟，進(jìn)行反轉(zhuǎn)錄反應(yīng)，獲得GATA4的cDNA。

1.2.3 基因序列的測序及鑒定 利用合成的GATA4引物，將獲得的cDNA進(jìn)行PCR擴(kuò)增，獲得GATA4的DNA序列，與pUCm-T vector載體連接，導(dǎo)入到DH5α大腸桿菌感受態(tài)細(xì)胞中，培養(yǎng)過夜，進(jìn)行藍(lán)白斑篩選。挑取白斑擴(kuò)增培養(yǎng)后提取質(zhì)粒，經(jīng)瓊脂糖電泳檢測后的完整質(zhì)粒送寶生物公司進(jìn)行測序，進(jìn)而鑒定引物的可用性。

1.2.4 標(biāo)準(zhǔn)曲線的制定 目的基因和內(nèi)參基因分別設(shè)置5組標(biāo)準(zhǔn)品，以水為模板作為陰性對(duì)照，每組設(shè)置3個(gè)平行。β-actin的模板是將上述cDNA原液按100倍、101倍、102倍、103倍和104倍進(jìn)行稀釋。GATA4的模板是將上述cDNA原液按50倍、51倍、52倍、53倍和54倍進(jìn)行稀釋。實(shí)時(shí)定量設(shè)備為ABI公司的Stepone plus熒光定量PCR儀。PCR反應(yīng)體系（20 μL）：2×TransStart?Top Green qPCR SuperMix 10 μL，Passive Reference DyeⅠ（50×）0.4 μL，上下游引物各0.2 μL，cDNA模板1.0 μL，DEPC水8.2 μL。PCR反應(yīng)條件：95℃預(yù)變性30 s；95℃變性5 s，61℃退火15 s，72℃延伸10 s，共40個(gè)循環(huán)。

1.2.5 相對(duì)表達(dá)定量熒光PCR β-actin和GATA4兩個(gè)基因分別以上述獲得的cDNA為模板，進(jìn)行相對(duì)表達(dá)實(shí)時(shí)定量PCR，成魚腎臟、腦、肌肉、脾臟、肝臟、精巢、卵巢和各時(shí)期幼魚的基因表達(dá)分別設(shè)置3個(gè)重復(fù)。

1.2.6 數(shù)據(jù)處理 在β-actin和GATA4的標(biāo)準(zhǔn)曲線的斜率接近的情況下，Stepone plus熒光定量PCR儀輸出的相對(duì)表達(dá)實(shí)時(shí)定量結(jié)果，以相同模板β-actin的表達(dá)進(jìn)行歸一化處理，進(jìn)行2-ΔΔCT數(shù)據(jù)處理［19-21］，GATA4在各個(gè)組織的表達(dá)量、不同發(fā)育時(shí)期進(jìn)行比較。使用SPSS20軟件進(jìn)行數(shù)據(jù)單因素方差分析［22］和新復(fù)極差法（Duncan法）多重比較，顯著性水平設(shè)為0.05。

2 結(jié)果

2.1 基因序列的測序及鑒定結(jié)果

用BioEdit software打開經(jīng)公司測得的 GATA4 PCR產(chǎn)物序列峰圖，查找GATA4引物序列所在位置。根據(jù)表1所示上游引物序列5'-AAACGCAAACCCAAGAACC-3'進(jìn)行比對(duì)查找，根據(jù)表1下游序列的反向互補(bǔ)序列5'-ATTTCAGCCCTGCCTGC-3'進(jìn)行比對(duì)查找，結(jié)果如圖1所示。由圖1可以算出GATA4 PCR片段總長度為191 bp，與用Primer-BLAST比對(duì)后的片段長度相同。用MegAlign software打開GATA4 PCR產(chǎn)物FASTA格式的測序結(jié)果與GATA4的mRNA序列進(jìn)行比對(duì)，完全吻合。

圖1 GATA4上游和下游引物序列與測序峰圖比對(duì)結(jié)果

2.2 GATA4和β-actin基因引物特異性的驗(yàn)證

通過實(shí)時(shí)定量PCR反應(yīng)，GATA4和β-actin的熔解曲線分別在90.64℃和87.82℃處有一峰，且無雜峰，說明此次設(shè)計(jì)的GATA4引物特異性良好，符合實(shí)時(shí)定量PCR的要求，可以繼續(xù)進(jìn)行實(shí)驗(yàn)。

2.3 β-actin和GATA4引物擴(kuò)增效率的鑒定

標(biāo)準(zhǔn)曲線由實(shí)時(shí)定量PCR儀自動(dòng)生成，其中縱坐標(biāo)是熒光信號(hào)到達(dá)閾值時(shí)所經(jīng)歷的循環(huán)數(shù)，橫坐標(biāo)表示模板的相對(duì)濃度（假設(shè)原模板的濃度時(shí)1，根據(jù)稀釋倍數(shù)，濃度依次遞減）。β-actin和GATA4引物的擴(kuò)增效率分別為99.964%和102.344%，均在90%-105%之間，線性程度在98%以上，說明兩對(duì)引物可以用于2-ΔΔCT相對(duì)定量表達(dá)分析。

2.4 紅鰭東方鲀GATA4的組織表達(dá)

紅鰭東方鲀GATA4的組織表達(dá)結(jié)果見圖2。根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)曲線中目的基因各個(gè)濃度的CT值的大小，選擇原液作為模板進(jìn)行GATA4相對(duì)表達(dá)（2-??ct法）實(shí)時(shí)定量實(shí)驗(yàn)，選用性腺發(fā)育成熟后的紅鰭東方鲀的腎臟、腦、肌肉、脾臟、肝臟、精巢和卵巢組織作為本實(shí)驗(yàn)的樣本，分別獲得3個(gè)個(gè)體的腎臟、腦、肌肉、脾臟、肝臟、精巢、卵巢和各時(shí)期幼魚組織的RNA后進(jìn)行反轉(zhuǎn)錄。將模板cDNA和實(shí)時(shí)定量試劑盒進(jìn)行混合，用ABI 公司的Stepone plus實(shí)時(shí)定量儀進(jìn)行定量，將獲得的結(jié)果進(jìn)行整理，得到的結(jié)果每個(gè)組織3個(gè)復(fù)孔之間的標(biāo)準(zhǔn)差SD均<0.5。

通過SPSS軟件進(jìn)行單因素方差分析和Duncan法多重比較獲得兩兩組織之間的差異顯著性，成魚紅鰭東方鲀精巢、卵巢和肝臟GATA4表達(dá)量顯著高于其他組織（P<0.05）；GATA4在精巢中顯著性高于肝臟中的表達(dá)（P<0.05），而肝臟中的表達(dá)量顯著高于卵巢中的表達(dá)；在肌肉、脾臟、腎臟和腦4個(gè)組織中的表達(dá)差異不顯著。圖2顯示，GATA4在精巢中的表達(dá)量最高，在腦中最低。精巢中的表達(dá)量約是卵巢中的2倍。結(jié)果顯示，表達(dá)量順序是：精巢＞肝臟＞卵巢＞肌肉＞脾臟＞腎臟＞腦。

圖2 紅鰭東方鲀GATA4基因的表達(dá)譜

2.5 紅鰭東方鲀GATA4的不同發(fā)育時(shí)期表達(dá)

紅鰭東方鲀GATA4的不同發(fā)育時(shí)期表達(dá)結(jié)果如圖3所示。紅鰭東方鲀雌性個(gè)體各個(gè)發(fā)育時(shí)期GATA4的表達(dá)情況為：40日齡幼魚 GATA4的表達(dá)量最高，與其他時(shí)期GATA4的表達(dá)量相比，存在顯著性差異（P<0.05）。23日齡、30日齡和80日齡幼魚之間GATA4表達(dá)差異不顯著；23日齡幼魚和60日齡幼魚之間GATA4表達(dá)量差異不顯著。在雄性個(gè)體不同發(fā)育時(shí)期，30日齡幼魚GATA4的表達(dá)水平顯著性高于其他時(shí)期（P<0.05）。同樣，23日齡幼魚和80日齡幼魚，60日齡幼魚和40日齡幼魚，兩兩之間GATA4表達(dá)差異不顯著，但與其他時(shí)期存在顯著性差異（P<0.05）。23日齡、30日齡、60日齡雄性幼魚GATA4的表達(dá)量極顯著高于同時(shí)期的雌性幼魚，在40日齡時(shí)雌性GATA4的表達(dá)極顯著高于雄性表達(dá)；80日齡雄性幼魚的表達(dá)顯著性高于雌性幼魚。

雌性幼魚5個(gè)發(fā)育時(shí)期中，從23日齡到40日齡逐漸升高，40日齡最高，隨后表達(dá)量降低到60日齡，從80日齡后又有上升的趨勢。在雄性幼魚5個(gè)發(fā)育時(shí)期，GATA4表達(dá)量從23日齡到30日齡逐漸升高，30日齡最高，隨后表達(dá)量降低到40日齡，從60日齡到80日齡又有上升的趨勢。各時(shí)期雌雄幼魚GATA4的表達(dá)量比較，除40日齡外，其他各個(gè)時(shí)期在雄性中的表達(dá)量均高于在雌性中的表達(dá)量。

3 討論

3.1 GATA4的組織表達(dá)

人們曾對(duì)一些動(dòng)物GATA4的結(jié)構(gòu)和功能做了深入研究，其中，對(duì)人、小鼠等哺乳動(dòng)物中GATA4的研究較廣、較全面，研究了各組織中的表達(dá)，發(fā)現(xiàn)GATA4在很多器官的重要發(fā)育時(shí)期都有表達(dá)，如：心臟、肝臟、胃、胰腺、腸、腎上腺等，并且在雌雄性腺中均有表達(dá)，GATA4在性腺的發(fā)育早期高表達(dá)，之后的發(fā)育過程中，在精巢的支持細(xì)胞和間質(zhì)細(xì)胞中表達(dá)，在卵巢的顆粒細(xì)胞中有表達(dá)［23］。葉凱等［24］通過qRT-PCR研究羅非魚GATA4組織表達(dá)模式，檢測到GATA4在心臟、肝臟、腸、精巢、卵巢和頭腎中均有表達(dá)。與哺乳動(dòng)物和羅非魚中的GATA4組織表達(dá)情況一樣，qRT-PCR檢測紅鰭東方鲀成魚的7個(gè)組織：腎臟、腦、肌肉、脾臟、肝臟、精巢和卵巢組織中GATA4在各組織中也有廣泛表達(dá)。

在哺乳動(dòng)物中，Hu等［25］通過對(duì)小鼠GATA4的沉默，進(jìn)行包埋熒光免疫切片觀察，結(jié)果顯示實(shí)驗(yàn)組小鼠胚胎中沒有性腺發(fā)育的痕跡，而在對(duì)照組中發(fā)現(xiàn)性腺發(fā)育的上皮細(xì)胞明顯增厚，也發(fā)現(xiàn)GATA4在性腺的形成中必不可少。紅鰭東方鲀在精巢中GATA4表達(dá)量最高，其次是肝臟中的表達(dá)量，卵巢中的表達(dá)量排第3，在肌肉中少量表達(dá)，腎臟、腦和脾臟中表達(dá)量極少。羅非魚［26］GATA4主要在肝臟中表達(dá)，其次是精巢、卵巢和心臟，可以看出GATA4在紅鰭東方鲀和羅非魚的性腺中均有較高的表達(dá)，推測GATA4對(duì)性腺發(fā)育過程具有重要作用。

本研究還發(fā)現(xiàn)紅鰭東方鲀精巢的表達(dá)量高于卵巢，預(yù)測紅鰭東方鲀中的GATA4對(duì)雄性性腺發(fā)育至關(guān)重要。葉凱等［24］通過qRT-PCR研究羅非魚GATA4組織表達(dá)模式，發(fā)現(xiàn)GATA4能上調(diào)雄性相關(guān)基因Amh的表達(dá)，抑制雌雄通路相關(guān)基因cyp19a1a的表達(dá)，通過基因調(diào)節(jié)苗勒管的退化和雄性激素的產(chǎn)生來促成雄性生殖腺的發(fā)育，從而表明GATA4可能是雄性通路上的重要基因。Manuylov等［27］通過敲除GATA4的小鼠胚胎，發(fā)現(xiàn)睪丸間質(zhì)細(xì)胞急劇減少，而且卵巢特異性表達(dá)基因foxl2被發(fā)現(xiàn)，GATA4在小鼠中影響性腺的分化［28，29］。這些實(shí)驗(yàn)均表明GATA4在雄性性腺發(fā)育中具有重要作用。

3.2 GATA4在不同發(fā)育時(shí)期的表達(dá)

應(yīng)用qRT-PCR檢測紅鰭東方鲀不同發(fā)育時(shí)期（23、30、40、60和80日齡）個(gè)體GATA4的表達(dá)情況，各時(shí)期雌雄幼魚的GATA4表達(dá)量對(duì)比發(fā)現(xiàn)，除40日齡外，其他各個(gè)時(shí)期GATA4表達(dá)量在雄性中均高于在雌性中的表達(dá)量，這與前面得出的結(jié)果一致。

雌性幼魚GATA4表達(dá)從23-40日齡之間表達(dá)量逐漸升高，在40日齡時(shí)表達(dá)量最高，之后下降。幼魚雄魚GATA4表達(dá)從23-30日齡之間，表達(dá)量逐漸升高，在30日齡時(shí)表達(dá)量最高，之后下降。斑馬魚［30］GATA4在胚胎發(fā)育50%外包之前表達(dá)量較低，從75%外包開始升高并且在胚胎封口期表達(dá)量達(dá)到最高，隨后表達(dá)量降低，穩(wěn)定表達(dá)到12 d左右，之后有所降低。兩者的GATA4不同時(shí)期表達(dá)量的總體趨勢相同，都是先升高后降低，但是出現(xiàn)表達(dá)量最高的時(shí)間不同，這是由于紅鰭東方鲀和斑馬魚的發(fā)育周期不同。在兩種魚的形態(tài)發(fā)育早期，GATA4均表現(xiàn)出高水平表達(dá)。

根據(jù)GATA4介導(dǎo)類固醇生物合成步驟中所需要的基因，從而調(diào)節(jié)雌雄激素的合成，影響性腺的發(fā)育，成熟。紅鰭東方鲀幼魚性腺分化或者發(fā)育的關(guān)鍵時(shí)期，雌雄性激素大量合成，需要GATA4進(jìn)行調(diào)節(jié)，從而導(dǎo)致GATA4的高表達(dá)。雄魚23日齡，雌魚40日齡GATA4的高表達(dá)是否由于性腺的分化引起，有待進(jìn)一步探究，例如可以研究GATA4調(diào)節(jié)的下游雌性相關(guān)基因cyp19a或者雄性相關(guān)基因gsdf在紅鰭東方鲀發(fā)育過程中的表達(dá)及其功能。

4 結(jié)論

本研究利用qRT-PCR對(duì)GATA4在紅鰭東方鲀成魚不同組織中和幼魚不同發(fā)育階段的表達(dá)進(jìn)行了初步的分析，GATA4在精巢中表達(dá)量最高，其次是在肝臟、卵巢中的表達(dá)量，且在精巢中的表達(dá)量接近在卵巢中的表達(dá)量的2倍。GATA4在23日齡、30日齡、40日齡、60日齡和80日齡各階段的表達(dá)，除40日齡外，其他各個(gè)時(shí)期GATA4在雄性中的表達(dá)量均高于在雌性中的表達(dá)量。雌性幼魚GATA4的表達(dá)量從23-40日齡，表達(dá)量逐漸升高，在40日齡時(shí)達(dá)到最高值，之后下降。雄魚幼魚GATA4的表達(dá)量從23 日齡到30日齡，表達(dá)量逐漸升高，30日齡時(shí)表達(dá)量最高，之后下降。

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（責(zé)任編輯 馬鑫）

The Expression of Transcription Factor GATA4 Gene in Takifugu rubripes

HAO Wei-wei GAO Chang-fu QIU Xue-mei JIANG Zhi-qiang WANG Xiu-li
（College of Fisheries and Life Science，Dalian Ocean University，Dalian 116023）

In this study，GATA4 expression were analyzed in kidney，muscle，brain，spleen，liver，testis and ovary of mature Takifugu rubripes，and were analyzed at individual level during different times in young T. rubripes by flurescence quantitative Real-time Polymerase Chain Reaction（qRT-PCR）. The results showed that no statistically significant difference was observed of expression level among muscle，spleen，kidney and brain. There was the significantly higher expressionof GATA4 in testis ，liver and ovary，than that in other organs（P<0.05）. The GATA4 expression level of testis and liver were significantly higher（P<0.05），than that in ovary. During the different periods（23，30，40，60，80 days of age（d）） of T. rubripes，the GATA4 expression level in males increased gradually from 23 d to 30 d and subsequently decreased at 40 d，and the 30 d expression level of GATA4 was higher than that in 30 d female individuals significantly（P<0.01）. While from 60 d to 80 d，the GATA4 expression level went steadily up. In females，as the same as the expression tend in males，the GATA4 expression level increased gradually from 23 d to 40 d and subsequently decreased at 60 d，and the 40 d GATA4 gene expressed higher than that in the same time male individuals significantly（P<0.01）. Nevertheless from 80 d，the GATA4 expression level stared to rise. Apart from 40 d individuals，the GATA4 expression level were higher in males than in female in every period.

Takifugu rubripes；quantitative Real-time PCR；transcription factor GATA4；gene expression

10.13560/j.cnki.biotech.bull.1985.2016.06.022

2015-08-24

大連市科技計(jì)劃項(xiàng)目（2014B11NC091），大連海洋大學(xué)科研項(xiàng)目（2012HYDX07）

郝薇薇，女，碩士研究生，研究方向：生物化學(xué)與分子生物學(xué)；E-mail：276700693@qq.com

仇雪梅，女，教授，研究方向：分子遺傳學(xué)；E-mail：xmqiu@dlou.edu.cn