ERCC1在局部區(qū)域晚期鼻咽癌中的表達(dá)及臨床意義

曹軼林 邱小芬 鄧戀 屈元姣

作者單位：541002 桂林 廣西壯族自治區(qū)南溪山醫(yī)院腫瘤科

臨床研究

ERCC1在局部區(qū)域晚期鼻咽癌中的表達(dá)及臨床意義

曹軼林 邱小芬 鄧戀 屈元姣

作者單位：541002 桂林 廣西壯族自治區(qū)南溪山醫(yī)院腫瘤科

目的 探討核苷酸切除修復(fù)交叉互補(bǔ)基因1（excision repair cross complementing 1，ERCC1）在局部區(qū)域晚期鼻咽癌（nasopharyngeal carcinoma，NPC）組織中的表達(dá)及其臨床意義。方法 收集2013年1月至2015年6月收治的以接受順鉑為基礎(chǔ)化療的102例局部區(qū)域晚期NPC癌組織標(biāo)本作為觀察組，同時選取其中31例局部區(qū)域晚期NPC癌旁上皮組織為對照組。采用免疫組化法檢測兩組組織中ERCC1的表達(dá)，并分析ERCC1表達(dá)與局部區(qū)域晚期NPC患者臨床病理參數(shù)及化療療效的關(guān)系。結(jié)果 觀察組和對照組ERCC1的陽性表達(dá)率分別為62.7%和90.3%，差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P<0.05）。ERCC1表達(dá)與局部區(qū)域晚期NPC患者年齡有關(guān)（P<0.05），與性別、T分期、N分期無關(guān)（P>0.05）。ERCC1表達(dá)陽性的患者化療有效率為35.9%，ERCC1表達(dá)陰性患者為63.2%，差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P＝0.019）。結(jié)論 ERCC1在局部區(qū)域晚期鼻咽癌癌組織中低表達(dá)，ERCC1表達(dá)與化療療效呈負(fù)相關(guān)，檢測ERCC1有助于預(yù)測局部區(qū)域晚期NPC患者對順鉑化療的敏感性。

鼻咽腫瘤；局部區(qū)域晚期鼻咽癌；核苷酸切除修復(fù)交叉互補(bǔ)基因1；順鉑；化療；療效；敏感性

鼻咽癌（nasopharyngeal carcinoma，NPC）是我國南方及東南亞地區(qū)常見的頭頸部惡性腫瘤，局部侵襲力強(qiáng)、易發(fā)生遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移，就診時多屬中晚期［1］。放療聯(lián)合鉑類為基礎(chǔ)的誘導(dǎo)及同步化療是局部區(qū)域晚期NPC的主要治療方式，然而對鉑類藥物耐藥常導(dǎo)致化療失敗，探討其耐藥性有重要的臨床意義。近年研究發(fā)現(xiàn)，DNA修復(fù)異常與腫瘤多藥耐藥關(guān)系密切，切除修復(fù)交叉互補(bǔ)基因1（excision repair cross complementing 1，ERCC1）是核苷酸切除修復(fù)系統(tǒng)最關(guān)鍵的基因，其正常表達(dá)是維持該修復(fù)酶功能分子的基礎(chǔ)，過度表達(dá)可使停滯在G2/M期的損傷DNA迅速修復(fù)，導(dǎo)致其對順鉑耐藥［2，3］。本研究采用免疫組化法檢測局部區(qū)域晚期NPC癌組織中ERCC1的表達(dá)，分析其與臨床病理特征及順鉑化療敏感性的關(guān)系，為臨床制定個體化化療方案提供參考。

1 資料與方法

1.1 一般資料

選取廣西壯族自治區(qū)南溪山醫(yī)院2013年1月至2015年6月NPC患者病理標(biāo)本，納入標(biāo)準(zhǔn)：⑴初治且病理確診為NPC，均為非角化性癌；⑵按照中國鼻咽癌2008分期判定為局部區(qū)域晚期NPC，具有完整的臨床資料；⑶預(yù)期生存期大于6個月；⑷ECOG PS分級為0或1級；⑸中性粒細(xì)胞≥2×109/L，血小板≥100×109/L，血紅蛋白≥90 g/L，肌酐清除率≥60mL/min，總膽紅素、ALT、AST均不超過正常值2.5倍，AKP不超過正常值5倍。共篩選病理標(biāo)本102例（觀察組），其中男性69例，女性33例，年齡31～67歲，中位年齡57歲。按照中國鼻咽癌2008分期：T211例，T349例，T442例；N110例，N253例，N339例；M0102例；Ⅲ期70例，Ⅳ期32例。選取其中31例局部區(qū)域晚期NPC患者癌旁上皮組織（距癌灶0.5～3 mm）為對照組，其中男性24例，女性7例，年齡29～68歲，中位年齡55歲。本研究獲得本院倫理委員會批準(zhǔn)，患者均簽署知情同意書。

1.2 治療方法

患者均接受2個周期誘導(dǎo)化療+序貫同期放化療。誘導(dǎo)化療方案：順鉑70mg/m2，d1（或分3 d），靜脈滴注；5-Fu 600mg/m2，d1～5，靜脈滴注，21 d為1個周期，完成2個周期后評價化療療效。采用直線加速器調(diào)強(qiáng)適形放療，PGTV nx和PGTV nd處方劑量為69.96～74.09 Gy，PCTV1為60.0～65.1 Gy，PCTV2為51.62～57.60 Gy，分割次數(shù)為29～33次；順鉑30mg/m2同期化療，1次/周，共6～7次。

1.3 免疫組化檢測ERCC1的表達(dá)

濃縮型鼠抗人ERCC1單克隆抗體（一抗）、即用型快捷免疫組化MaxvisionTM鼠/兔-HRP廣譜檢測試劑盒（二抗）及DAB顯色試劑盒均購自福建邁新公司。組織切片常規(guī)脫蠟水化，置入0.01 mol/L、pH6.0檸檬酸鹽緩沖液中行高溫高壓抗原修復(fù)，自然冷卻后取出切片用自來水及PBS沖洗；滴加3%過氧化氫，室溫下孵育10 min，PBS沖洗；滴加一抗ERCC1（按1∶50稀釋）置4℃冰箱過夜，PBS沖洗；滴加二抗，室溫下孵育15min，PBS沖洗；DAB顯色，蘇木素復(fù)染色，中性樹膠封片。

1.4 判定標(biāo)準(zhǔn)

1.4.1 免疫組化染色結(jié)果判定 以細(xì)胞核出現(xiàn)棕黃色顆粒為ERCC1陽性細(xì)胞。采用雙盲法統(tǒng)計實驗結(jié)果，由兩位病理科醫(yī)生讀片，鏡下隨機(jī)選取5個高倍視野（×400），觀察其陽性細(xì)胞染色強(qiáng)度并計算陽性細(xì)胞數(shù)（總細(xì)胞數(shù)不少于1 000個），按陽性細(xì)胞在同類細(xì)胞中所占百分?jǐn)?shù)判定結(jié)果：陽性細(xì)胞百分率＜10%為陰性（-），10%～24%為弱陽性（+），25%～75%為中度陽性（++），＞75%為強(qiáng)陽性（+++）。

1.4.2 化療療效評定標(biāo)準(zhǔn) 按照RECIST 1.1標(biāo)準(zhǔn)進(jìn)行評價，完全緩解（CR）：所有目標(biāo)病灶完全消失，維持4周以上；部分緩解（PR）：可測量目標(biāo)病灶的直徑總和低于基線≥30%，維持4周以上；疾病穩(wěn)定（SD）：基線病灶長徑總和縮小但未達(dá)PR或增加但未達(dá)進(jìn)展（PD）；PD：可測量目標(biāo)病灶的直徑總和增大≥20%或出現(xiàn)新病灶。以CR+PR計算總有效率。

1.5 統(tǒng)計學(xué)處理

采用SPSS17.0統(tǒng)計軟件對數(shù)據(jù)進(jìn)行處理，組間差異采用χ2檢驗。以P＜0.05為差異有統(tǒng)計學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 ERCC1在局部區(qū)域晚期NPC組織中的表達(dá)

觀察組ERCC1陽性表達(dá)率為62.7%（64/102），其中12.5%（8/64）為強(qiáng)陽性（+++），29.7%（19/64）為中度陽性（++），56.7%（37/64）為弱陽性（+），見圖1。對照組ERCC1陽性表達(dá)率為90.3%（28/31），其中42.9%（12/28）為強(qiáng)陽性（+++），28.6%（8/28）為中度陽性（++），28.6%（8/28）為弱陽性（+）。兩組ERCC1陽性率比較差異有統(tǒng)計學(xué)意義（χ2=4.743，P=0.036）。

2.2 ERCC1表達(dá)與局部區(qū)域晚期NPC患者臨床病理特征的關(guān)系

ERCC1在＜60歲年齡組中的表達(dá)明顯高于≥60歲年齡組（P＜0.05），但在不同性別、T分期、N分期組中的表達(dá)差異均無統(tǒng)計學(xué)意義（P＞0.05），提示ERCC1表達(dá)與患者年齡有關(guān)，而與性別、T分期、N分期無關(guān)。見表1。

圖1 局部區(qū)域晚期NPC癌組織中ERCC1的表達(dá)（ABC法，×400）

表1 ERCC1表達(dá)與局部區(qū)域晚期NPC患者臨床病理特征的關(guān)系［n（%）］

2.3 ERCC1表達(dá)與化療療效的關(guān)系

102例局部區(qū)域晚期NPC患者化療總有效率為46.1%（47/102）。64例ERCC1陽性表達(dá)的患者獲CR 0例，PR 23例，SD 41例，化療有效率為35.9%（23/64）；38例ERCC1陰性表達(dá)的患者獲CR 1例，PR 23例，SD 14例，化療有效率為63.2%（24/38），兩者化療有效率比較差異有統(tǒng)計學(xué)意義（χ2=5.493，P=0.019），提示ERCC1表達(dá)與化療療效呈負(fù)相關(guān)。

3 討論

放射治療是鼻咽癌的主要治療手段之一，隨著IMRT在臨床上的應(yīng)用，早期NPC單純放療5年生存率為90%～95%，中晚期為50%～70%［4］，局部區(qū)域晚期NPC局控率得到明顯提高，但局部復(fù)發(fā)和遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移仍然是治療失敗的主要原因，放療輔以化療是近年研究較多的綜合治療方法。研究表明，采用誘導(dǎo)化療序貫同期放療治療局部區(qū)域晚期NPC，有利于緩解癥狀、減少腫瘤荷負(fù)、改善乏氧情況、消滅亞臨床轉(zhuǎn)移灶、降低遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移率等。目前的誘導(dǎo)化療方案中順鉑聯(lián)合5-氟尿嘧啶被認(rèn)為是治療頭部腫瘤較有效及安全的方案，有效率為40%～50%［5］；而同期放化療方案則采用單藥順鉑［6］。由此可見，鉑類藥物在頭頸部腫瘤化療中占據(jù)重要地位，但腫瘤對其存在原發(fā)或繼發(fā)耐藥，給臨床治療帶來了較大困擾。此外，個體之間的異質(zhì)性，使化療敏感性亦存在差異，因此，對于局部區(qū)域晚期NPC，如何篩選合適的化療人群，對提高療效有重要意義。

ERCC1基因位于染色體19q13.2-13.3，全長15 kb，由10個外顯子組成，基因編碼一種含有297個氨基酸的蛋白質(zhì)，是核苷酸切除修復(fù)活性標(biāo)志性基因［7］。研究表明ERCC1表達(dá)水平與非小細(xì)胞肺癌順鉑化療耐藥及中位生存期呈負(fù)相關(guān)［8］。Zwenger等［9］在子宮頸癌中亦有類似報道。在頭頸部腫瘤中ERCC1低水平表達(dá)者中位生存期高于高水平表達(dá)者，提示其對順鉑抗藥性增加［10～12］。本研究采用免疫組化法檢測102例接受順鉑為基礎(chǔ)化療的局部區(qū)域晚期NPC患者組織中ERCC1的表達(dá)情況，結(jié)果顯示，局部區(qū)域晚期NPC患者癌組織中ERCC1的陽性表達(dá)率顯著低于癌旁上皮組織，可能與ERCC1基因表達(dá)能在上皮細(xì)胞內(nèi)積聚有關(guān)。同時發(fā)現(xiàn)ERCC1基因表達(dá)與患者年齡有關(guān)，＜60歲年齡組的患者其表達(dá)水平明顯高于≥60歲組，但與患者性別、T分期、N分期無關(guān)，與李文華等［13］研究報道一致，原因不明，有待進(jìn)一步研究。

目前有國外學(xué)者將化療藥物敏感試驗用于指導(dǎo)腫瘤患者化療，在減少臨床治療盲目性、延長患者生存期中取得良好效果［14，15］。有報道ERCC1陽性表達(dá)反映了腫瘤組織中DNA修復(fù)活性較低，而修復(fù)DNA能力較弱，使腫瘤細(xì)胞易于逃避免疫和凋亡監(jiān)控［16］。李文華等［17］研究發(fā)現(xiàn)中晚期NPC患者ERCC1低表達(dá)順鉑化療有效率較高。為此本研究進(jìn)一步分析ERCC1陽性表達(dá)與陰性表達(dá)者的化療療效，結(jié)果發(fā)現(xiàn)ERCC1陰性表達(dá)的患者其化療有效率顯著高于ERCC1陽性表達(dá)者，分析原因可能由于ERCC1使順鉑誘導(dǎo)的DNA絡(luò)合物的清除增加，從而降低了療效。提示ERCC1表達(dá)與局部區(qū)域晚期NPC順鉑敏感性有關(guān)，可作為順鉑治療鼻咽癌的有效篩選指標(biāo)，與Hu等［18］報道一致。

本研究結(jié)果顯示，ERCC1在局部晚期鼻咽癌患者癌組織中明顯低表達(dá)，陽性表達(dá)患者的化療療效亦明顯低于陰性表達(dá)者，提示其表達(dá)水平可能與患者順鉑化療敏感性有關(guān)，有望成為鉑類化療療效的預(yù)測指標(biāo)，為局部區(qū)域晚期NPC患者制訂化療方案提供一定依據(jù)。但因本研究病例數(shù)較少，有關(guān)結(jié)論仍需進(jìn)一步開展大樣本臨床試驗加以證實。

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［2016-06-27收稿］［2016-07-24修回］［編輯 羅惠予］

ERCC1 expression in local regionally advanced nasopharyngeal carcinoma and its clinical significance

Cao Yilin，Qiu Xiaofen，Deng Lian，Qu Yuanjiao（Department of Oncology，Nanxishan Hospital of Guangxi Zhuang Automomous Region，Guilin 541002，P.R.China）

Objective To determine the status of ERCC1 protein expression and its potential clinical significance in patients with local regionally advanced nasopharyngeal carcinoma（NPC）.M ethods Nasopharyngeal endoscopy biopsies were collected from 102 patientswith local regionally advanced NPC at diagnosis，and biopsies of cancer-adjacent normal nasopharyngeal tissueswere collected from 31 patients.ERCC1 expression in the two sets of samples was compared by immunohistochemistry using monoclonal antibody. Results Rate of ERCC1 expression was 90.3%in NPC tissues and 62.7%in adjacent tissues（P<0.05）.Rate of response to cisplatinbased chemotherapy was 35.9%in patients positive for ERCC1 expression and 63.2%in patients negative for ERCC1（P<0.05）. ERCC1 expression correlated significantly with age，but notwith gender or TN stage.Conclusion ERCC1 is expressed at low levels in local regionally advanced NPC，and its expression correlates negatively with chemosensitivity.ERCC1 may be useful for predicting sensitivity of NPC patients to cisplatin-based chemotherapy.

Nasopharyngealneoplasm；Local regionally advanced nasopharyngeal carcinoma；Excision repair cross complementing 1；Platinum；Chemotherapy；Efficacy；Sensitivity

R739.6

A

1674-5671（2016）04-04

10.3969/j.issn.1674-5671.2016.04.05