BRCA1在前列腺癌組織中的表達(dá)及臨床意義

相娜娜張克克

臨床研究

BRCA1在前列腺癌組織中的表達(dá)及臨床意義

相娜娜1張克克2

目的 探討乳腺癌易感基因1（breast cancer susceptibility gene-1，BRCA1）在前列腺癌組織中的表達(dá)及臨床意義。方法 采用SP免疫組化法檢測46例前列腺癌組織及14例癌旁組織中BRCA1的表達(dá)，分析BRCA1表達(dá)與前列腺癌臨床病理特征的關(guān)系。結(jié)果14例前列腺癌旁組織中BRCA1陽性表達(dá)率為78.6%（11/14），46例前列腺癌組織中BRCA1陽性表達(dá)率為45.7%（21/46），兩者比較差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P＜0.05）。BRCA1表達(dá)與前列腺癌家族史、Gleason評分和TMN分期有關(guān)（P＜0.05），與年齡和前列腺特異性抗原（prostate specific antigen，PSA）濃度無關(guān)（P＞0.05）。結(jié)論 BRCA1在前列腺癌組織中低表達(dá)，且隨腫瘤惡性程度增加其表達(dá)降低，提示檢測BRCA1蛋白對前列腺癌輔助診斷及預(yù)后判斷有一定參考價值。

前列腺腫瘤；乳腺癌易感基因1；免疫組織化學(xué)；臨床意義

前列腺癌（prostate cancer，PCa）是男性泌尿生殖系統(tǒng)最常見的惡性腫瘤之一，其發(fā)病率逐年升高［1，2］。目前前列腺癌早期診斷主要依靠檢測血清中前列腺特異性抗原（prostate specific antigen，PSA）［3］。當(dāng)PSA檢測結(jié)果在4～10 ng/mL，即所謂“灰區(qū)”時，常常不易確診。因此，亟需尋找靈敏度更高及特異性更強的標(biāo)志物。

乳腺癌易感基因1（breast cancer susceptibility gene-1，BRCA1）是一種抑癌基因。其定位于人染色體17q21，編碼含1 863個氨基酸的蛋白質(zhì)，由N端、C端和中間ATM、ATR的磷酸化區(qū)三部分組成，分子量為220kDa，是一種DNA結(jié)合蛋白［4，5］。BRCA1基因與其他腫瘤抑制因子和信號通路分子組成復(fù)合體，在DNA損傷修復(fù)及重組、轉(zhuǎn)錄、活化、抑制及細(xì)胞周期調(diào)節(jié)等生物學(xué)過程中發(fā)揮重要作用，但在腫瘤抑制方面的作用機制尚不完全清楚［6］。有研究指出BRCA1發(fā)生突變的男性更易患侵襲性強的前列腺癌［7］。但目前有關(guān)BRCA1與前列腺癌的研究較少，為探究BRCA1在前列腺癌臨床診斷及預(yù)后判斷中的價值，本研究采用SP免疫組化法檢測BRCA1在前列腺癌組織中的表達(dá)，探討其表達(dá)與前列腺癌臨床病理特征的關(guān)系，現(xiàn)將結(jié)果報道如下。

1 資料與方法

1.1 臨床資料

標(biāo)本來自洛陽市中心醫(yī)院2013年8月至2015年7月手術(shù)切除的前列腺癌組織和癌旁組織。其中癌組織標(biāo)本46例，癌旁組織標(biāo)本14例。年齡39～75歲，平均年齡64.27歲。按臨床TNM分期：T1～T2期11例，T3～T4期35例；按Gleason評分標(biāo)準(zhǔn)：低分化癌（8～10分）25例，中分化癌（5～7分）14例，高分化癌（2～4分）7例。所有標(biāo)本均經(jīng)福爾馬林固定，石蠟包埋后行4μm連續(xù)切片。14例癌旁組織作為陽性對照，以PBS液代替一抗作為陰性對照。

1.2 檢測方法

應(yīng)用SP免疫組化法，實驗步驟按試劑盒說明書進行。BRCA1抗體（兔抗人多克隆抗體）購自SIGMA公司，抗兔二抗購自北京西美杰科技有限公司，SP 9000免疫組化試劑盒購自上海研卉生物科技有限公司。

1.3 結(jié)果判定

由兩位病理科主治醫(yī)師采用雙盲法讀片，光鏡下觀察整個切片，每例切片隨機選擇5個高倍鏡視野進行判定，每個視野計數(shù)100個細(xì)胞，每例標(biāo)本計數(shù)3張切片。免疫組化陽性染色為細(xì)胞核和（或）細(xì)胞質(zhì)內(nèi)出現(xiàn)明顯棕黃色或棕褐色顆粒。參照二級計分法：⑴陽性細(xì)胞百分率≤5%計0分，6%～25%計1分，26%～50%計2分，51%～75%計3分，＞75%為4分；⑵細(xì)胞染色強度無染色計0分，弱染色（淺黃色）計1分，中等染色（棕黃色）計2分，強染色（棕褐色）計3分。兩項得分相乘：0分設(shè)為陰性（-），1～4分為弱陽性（+），5～8分為中等陽性（++），9～12分為強陽性（+++）；設(shè)≤4分為低表達(dá)，＞4分為高表達(dá)。

1.4 統(tǒng)計學(xué)方法

采用SPSS 18.0軟件對數(shù)據(jù)進行統(tǒng)計處理，樣本率的比較采用χ2檢驗或四格表確切概率法。以P＜0.05表示差異有統(tǒng)計學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 BRCA1在前列腺癌組織和癌旁組織中的表達(dá)

BRCA1陽性染色呈棕黃色顆粒，主要位于細(xì)胞質(zhì)與細(xì)胞核。在14例前列腺癌旁組織中BRCA1陽性表達(dá)率為78.6%（11/14）；46例前列腺癌組織中BRCA1陽性表達(dá)率為45.7%（21/46），兩者比較差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P＜0.05）。見圖1。

圖1 BRCA1在前列腺癌組織和癌旁組織中的表達(dá)（SP法，×200）

2.2 前列腺癌中BRCA1表達(dá)與臨床病理特征的關(guān)系

BRCA1陽性表達(dá)與前列腺癌家族史、Gleason評分及TNM分期相關(guān)（P＜0.05），而與年齡和PSA濃度無相關(guān)性（P＞0.05）。見表1。

表1 前列腺癌中BRCA1表達(dá)與臨床病理特征的關(guān)系［n（%）］

（續(xù)表）

3 討論

BRCA1基因是1990年發(fā)現(xiàn)的直接與遺傳性乳腺癌有關(guān)的基因。BRCA1不僅是腫瘤抑制因子，還在有絲分裂細(xì)胞周期調(diào)控、DNA損傷修復(fù)、組蛋白乙酰化以及轉(zhuǎn)錄激活等生物學(xué)過程中發(fā)揮重要作用［8］。Rb、p16、p21、BRCA和PTEN等均是調(diào)控細(xì)胞周期的乳腺癌抑癌基因［9］，BRCA1基因發(fā)生突變的家族更傾向于具有高乳腺癌發(fā)生率。研究指出BRCA1基因突變者患癌癥終身風(fēng)險為50%～85%，患乳腺癌及卵巢癌風(fēng)險為15%～45%［7］。而BRCA1基因主要發(fā)生以下兩方面異常，一是腫瘤抑制基因（腫瘤生長負(fù)調(diào)節(jié)因子）突變；二是BRCA1表達(dá)缺失，這兩種異常均可能導(dǎo)致細(xì)胞正常功能失控及惡性進展。BRCA1基因與雌激素關(guān)系密切，而前列腺癌作為與乳腺癌類似的激素依賴性癌癥，BRCA1基因在前列腺癌中的作用也引起了廣泛關(guān)注。Leongamornlert等［7］研究表明，0.45%的前列腺癌患者BRCA1基因發(fā)生胚系突變，其患癌風(fēng)險增加了3.5倍，同時更易進展為惡性程度更高的前列腺癌，預(yù)后更差，說明BRCA1基因突變可能是前列腺癌發(fā)生的一個重要影響因素。有研究報道，在散發(fā)型乳腺癌和卵巢癌中均發(fā)現(xiàn)BRCA1蛋白表達(dá)明顯降低,提示其與散發(fā)型乳腺癌和卵巢癌高度相關(guān)［6，10，11］；在胰腺癌中亦有類似報道［12］。本研究采用免疫組化技術(shù)檢測46例前列腺癌組織及其14例癌旁組織中BRCA1的表達(dá)，結(jié)果發(fā)現(xiàn)，前列腺癌組織中BRCA1陽性表達(dá)率為45.7%，明顯低于癌旁組織的78.6%，表明BRCA1可能參與了前列腺癌發(fā)生、發(fā)展過程，而有效調(diào)控BRCA1表達(dá)可能有助于前列腺癌的預(yù)防及治療。

BRCA1蛋白位于細(xì)胞核，為核內(nèi)磷酸化蛋白。最近研究指出BRCA1蛋白是一種細(xì)胞核和細(xì)胞質(zhì)互動蛋白。乳腺癌、卵巢癌及胰腺癌細(xì)胞照射后均出現(xiàn)BRCA1蛋白出核現(xiàn)象［13］。但是具體的出核機制目前尚不清楚，有可能與p53蛋白的功能相關(guān)或受其上游調(diào)節(jié)［14］。本研究在前列腺癌組織細(xì)胞質(zhì)和細(xì)胞核中均發(fā)現(xiàn)該蛋白存在，可能正是由尚不明確的核質(zhì)互動機制引起。

目前血清PSA被認(rèn)為是前列腺癌較敏感的生物學(xué)標(biāo)志物，被廣泛應(yīng)用于檢測前列腺癌發(fā)生、進展及復(fù)發(fā)。Bantis等［15］報道，當(dāng)PSA含量超過20 ng/mL且Gleason評分在8分以上時，前列腺癌發(fā)生骨轉(zhuǎn)移概率增加。本研究分析前列腺癌中BRCA1表達(dá)與其臨床病理特征的關(guān)系，但未發(fā)現(xiàn)BRCA1表達(dá)與患者年齡及PSA濃度相關(guān)，可能與本研究陽性樣本量較少有關(guān)，二者關(guān)系有待進一步研究。Gleason評分是前列腺癌診斷和預(yù)后判斷的一個重要指標(biāo)。研究表明，Gleason評分越高，患者預(yù)后越差，死亡率亦越高［16］。本研究結(jié)果顯示，BRCA1在前列腺癌組織中低表達(dá)，且隨Gleason評分與TNM分期增高其表達(dá)逐漸降低，認(rèn)為BRCA1低表達(dá)與前列腺癌發(fā)生、進展有關(guān)，檢測BRCA1蛋白對前列腺癌輔助診斷及預(yù)后判斷有一定參考價值。

［1］ S iege l R，M a J，Z ou Z，e t a l.C an c e r s t a t i s t i c s，2014［J］.CA C an c e r J C l in，2014，64（1）：9-29.

［2］ 陳鵬軍.我國人口老齡化趨勢、影響及對策研究［J］.重慶工商大學(xué)學(xué)報（社會科學(xué)版），2011，28（3）：61-64.

［3］ P a s hayan N，P ha r oah P，N ea l D E，e t a l.S t age s hi ft in P S A-d e t e ct e d p r o s t a t e c an c e r s-e ff e ct mo d i f i c a t ion b y G l ea s on s c o r e［J］.J M e d S cr een，2009，16（2）：98-101.

［4］ S a l ga d o J，Z a b a l egui N，G a rcía-A migo t F，e t a l.S tr u ct u r e-b a s e d a ss e ss men t o f BRCA1 an d BRCA2 mu t a t ion s in a s ma ll S pani s h popu l a t ion［J］.O n c o l R ep，2005，14（1）：85-88.

［5］ B an cr o ft E K，E e l e s RA.C o rr igen d um t o“t a r ge t e d p r o s t a t e c an c e r s cr eening in BRCA1 an d BRCA2 mu t a t ion c a rr ie r s：r e s u lt s fr om t he ini t ia l s cr eening r oun d o f t he I MPAC T s t u d y”［J］.E u r U r o l，2015，67（6）：e126.

［6］ G a r g K，L e v ine D A，O l v e r a N，e t a l.BRCA1 immunohi s t o c hemi s tr y in a mo l e c u l a rl y c ha r a ct e r i z e d c oho rt o f o v a r ian high-g r a d e s e r ou s c a rc inoma s［J］.A m J S u r g P a t ho l，2013，37（1）：138-146.

［7］ L eongamo r n l e rt D，M ahmu d N，T ym r a k ie w i c z M，e t a l.G e r m l ine BRCA1 mu t a t ion s in cr ea s e p r o s t a t e c an c e r r i s k［J］.B r J C an c e r，2012，106（10）：1697-1701.

［8］ F r ie d en s on B.T he BRCA1/2 pa t h w ay p r e v en t s hema t o l ogi c c an c e r s in a dd i t ion t o br ea s t an d o v a r ian c an c e r s［J］.BMC c an c e r，2007，7（1）：152.

［9］ K o t s opou l o s J，L u b in s k i J，G r on w a ld J，e t a l.F a ct o r s in fl uen c ing o v u l a t ion an d t he r i s k o f o v a r ian c an c e r in BRCA1 an d BRCA2 mu t a t ion c a rr ie r s［J］.I n t J C an c e r，2015，137（5）：1136-1146.

［10］ Z hong Q，P eng H L，Z hao X，e t a l.E ff e ct s o f BRCA1-an d BRCA2-r e l a t e d mu t a t ion s on o v a r ian an d br ea s t c an c e r s u r v i v a l：a me t a ana l y s i s［J］.C l in C an c e r R e s，2015，21（1）：211-220.

［11］ P huah S Y，L ooi LM，H a ss an N，e t a l.Tr ip l e-nega t i v e br ea s t c an c e r an d P T E N（pho s pha t a s e an d t en s in homo l ogue）l o ss a r e p r e d i ct o r s o f BRCA1 ge r m l inemu t a t ion s in w omen w i t h ea rl y-on s e t an d f ami lia l br ea s t c an c e r，b u t no t in w omen w i t h i s o l a t e d l a t e-on s e t br ea s t c an c e r［J］.B r ea s t C an c e r R e s，2012，14（6）：R142.

［12］L yn c h H T，De t e r s CA，S ny d e r CL，e t a l.BRCA1 an d pan cr ea t i c c anc e r：pe d ig r ee f in d ing s an d t hei r c au s a l r e l a t ion s hip s［J］.C an c e r G ene t C y t ogene t，2005，158（2）：119-125.

［13］ W iene r D，G aja rd o-M ene s e s P，O rt ega-H e r nán d e z V，e t a l.BRCA1 an d BAR D1 c o l o c a l i z emain l y in t he c y t op l a s m o f br ea s t c an c e r t umo r s，an d t hei r i s o f o r m s s ho w d i ff e r en t ia l e x p r e ss ion［J］.B r ea s t C anc e r R e s Tr ea t，2015，153（3）：669-678.

［14］V an d e W ou w e r M，C ou z iniéC，S e rr ano-P a l e r o M，e t a l.A ct i v a t ion o f t he BRCA1/C h k1/p53/p21（C ip1/W a f1）pa t h w ay b y ni tr i c o x i d e an d c e ll c y cl e a rr e s t in human neu r o bl a s t oma N B69 c e ll s［J］.N i tr i c O xi d e，2012，26（3）：182-191.

［15］B an t i s A，G r amma t i c o s P.P r o s t a t i c s pe c i f i c an t igen an d b one s c an in t he d iagno s i s an d f o ll o w-up o f p r o s t a t e c an c e r.C an d iagno s t i c s igni f ic an c e o f P S A b e in cr ea s e d?［J］.H e ll J N u cl M e d，2011，15（3）：241-246.

［16］ M i t ha l P，H o w a rd LE，A r on s on W J，e t a l.P r o s t a t e-s pe c i f i c an t igen l e v e l，s t age o r G l ea s on s c o r e：W hi c h i s b e s t f o r p r e d i ct ing ou tc ome s a ft e r r a d i c a l p r o s t a t e ct omy，an d d oe s i t v a r y b y t he ou tc ome b eing mea s u r e d?R e s u lt s fr om S ha r e d E q ua l A cc e ss R egiona l C an c e r H o spi t a l d a t a b a s e［J］.I n t J U r o l，2015，22（4）：362-366.

［2016-06-03收稿］［2016-07-18修回］［編輯 江德吉］

BRCA1 expression in prostate carcinoma and its clinical significance

Xiang Nana1，Zhang Keke2（1Department of Oncology，Luoyang Central Hospital Affiliated to Zhengzhou University，Luoyang 471000，P.R.China；2Department of Urology，Xijing Hospital，the Fourth Military Medical University，Xi′an 710032，P.R.China）

Objective To analyze breast cancer susceptibility gene-1（BRCA1）expression and its clinical significance in prostate carcinoma.M ethods BRCA1 expression was analyzed using immunohistochemistry in 46 prostate carcinoma tissue sections and 14 adjacent normal tissue sections.Possible relationships were explored between BRCA1 expression and clinicopathological variables. Results Rate of BRCA1 positivity was 78.6%for adjacent normal tissue，but only 45.7%for prostate carcinoma.BRCA1 expression levels were significantly lower in prostate carcinoma tissues than in adjacent normal tissues（P<0.05）.BRCA1 expression level correlated with family history，Gleason classification and TMN stage（P<0.05），but not with age or prostate-specific antigen（PSA）（P>0.05）.Conclusion Prostate carcinoma is associated with lower BRCA1 expression，and lower expression may correlate with greater tumormalignancy.BRCA1may be a useful diagnostic and prognostic biomarker in prostate cancer.

Prostatic neoplasm；Breast cancer susceptibility gene-1；Immunohistochemistry；Clinical significance

471000 洛陽1鄭州大學(xué)附屬洛陽中心醫(yī)院腫瘤科；710032 西安2第四軍醫(yī)大學(xué)西京醫(yī)院泌尿外科

R737.25

A

1674-5671（2016）04-04

10.3969/j.issn.1674-5671.2016.04.04