老年白血病患者Survivin基因表達變化及其對預(yù)后的影響

劉　娜　姜麗波　張淑英　姚宇寧　許玲玲

(齊齊哈爾醫(yī)學院附屬第二醫(yī)院血液內(nèi)科，黑龍江　齊齊哈爾　161000)

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老年白血病患者Survivin基因表達變化及其對預(yù)后的影響

劉娜姜麗波張淑英姚宇寧許玲玲

(齊齊哈爾醫(yī)學院附屬第二醫(yī)院血液內(nèi)科，黑龍江齊齊哈爾161000)

〔摘要〕目的探討老年白血病患者Survivin基因表達變化及其對預(yù)后的影響。方法老年白血病患者41例，其中初治患者22例，緩解患者12例，復(fù)發(fā)患者7例。體檢的健康人群中隨機選擇15例作為對照組。檢測各組的Survivin基因表達情況及外周血白細胞計數(shù)情況。結(jié)果對Survivin基因在不同白血病細胞中的陽性表達率進行檢測和比較，急性非淋巴細胞白血病組和急性淋巴細胞白血病組均顯著高于對照組(P<0.05)。檢測各組及對照組Survivin基因的陽性表達，初治組和復(fù)發(fā)組Survivin基因陽性表達率分別為90.91%和85.71%，均顯著高于對照組的20.00%和緩解組的41.637%(P<0.05)。經(jīng)白細胞計數(shù)和檢測，處于正常水平11例，其余30例均存在計數(shù)異常。分析Survivin基因的陽性表達情況與白細胞計數(shù)的關(guān)系，白細胞計數(shù)異常組的Survivin基因陽性表達率(86.67%)顯著高于正常組(45.45%，P<0.05)。結(jié)論對老年白血病患者而言，其體內(nèi)Survivin基因表達水平的變化與疾病的發(fā)生、發(fā)展及預(yù)后存在十分密切的聯(lián)系。

〔關(guān)鍵詞〕白血病；Survivin基因；基因表達

Survivin基因?qū)儆谝环N十分重要的凋亡抑制蛋白，僅在胚胎組織及各種腫瘤組織中發(fā)生表達〔1〕。Survivin基因具有一定的腫瘤特異性，和各種腫瘤細胞的分化及轉(zhuǎn)移等活動都具有十分密切的聯(lián)系。以往有學者通過建立動物模型并進行實驗研究發(fā)現(xiàn)〔2〕，Survivin基因和p53蛋白之間存在十分密切的聯(lián)系，在胃癌前病變過程中，二者可以共同作用，發(fā)揮出一定的協(xié)同作用。為了對胃癌前病變予以有效的干預(yù)，并盡可能延緩癌變進程，可以采用下調(diào)Survivin基因的表達及降低凋亡促進基因P53突變等方式。本研究探討老年白血病患者Survivin基因表達變化及其對預(yù)后的影響。

1資料與方法

1.1一般資料老年白血病患者41例，均為本院血液科住院患者。其中男25例，女16例，年齡60～81歲，平均(69.25±8.15)歲。均經(jīng)臨床診斷，確診為白血病，急性非淋巴細胞白血病30例，急性淋巴細胞白血病11例。其中初治患者22例，緩解患者12例，復(fù)發(fā)患者7例。在本院接受體檢的健康人群中隨機選擇15例作為對照組。本次研究相關(guān)內(nèi)容和方法均經(jīng)本院倫理部門審核并批準。

1.2收集標本無菌條件下采集骨髓樣本，常規(guī)處理之后，分離單個核細胞。利用磷酸緩沖溶液(由天津百倫斯生物技術(shù)有限公司提供)進行2次洗滌，添加Trizol試劑(由北京飛美斯分析科技有限公司提供)，混合均勻之后保存待用。

1.3RT-PCR檢測利用Trizol試劑盒(由北京厚生博泰科技有限公司提供)進行總RNA提取，嚴格按照說明書進行操作，并利用分光光度計對總RNA的純度和完整性進行檢測。進行逆轉(zhuǎn)錄，獲得cDNA。進行PCR擴增，產(chǎn)物置于瓊脂糖凝膠(由上海源培生物科技股份有限公司提供)中予以電泳，并進行半定量檢測。

1.4白細胞計數(shù)抽取外周血，采用庫爾特顆粒計數(shù)法，利用全自動細胞計數(shù)儀(由杭州新景生物試劑開發(fā)有限公司提供)進行白細胞計數(shù)。

1.5統(tǒng)計學方法采用SPSS19.0統(tǒng)計學軟件進行分析，計數(shù)資料采用χ2檢驗。

2結(jié)果

2.1Survivin基因在不同白血病細胞中的表達情況急性非淋巴細胞白血病組和急性淋巴細胞白血病組Survivin基因陽性表達率〔20例(66.67%)、9例(81.82%)〕均顯著高于對照組〔3例(20.00%)，P<0.05〕。見圖1。

1～2為急性非淋巴細胞白血病組，3～4為急性淋巴細胞白血病組，5～8為對照組圖1　Survivin基因在各組表達情況

2.2各組Survivin基因的陽性表達情況初治組和復(fù)發(fā)組Survivin基因陽性表達率〔20例(90.91%)和6例(85.71%)〕均顯著高于對照組和緩解組〔5例(41.67%)，P<0.05〕。

2.3Survivin基因的陽性表達情況與白細胞計數(shù)的關(guān)系經(jīng)白細胞計數(shù)和檢測，處于正常水平的有11例，其余30例均計數(shù)異常。白細胞計數(shù)異常組Survivin基因的陽性表達率 〔26例(86.67%)〕顯著高于白細胞計數(shù)正常組〔5例(45.45%)，P<0.05〕。

3討論

在各種腫瘤的發(fā)生及發(fā)展過程中，細胞凋亡都發(fā)揮著十分重要的作用〔3〕。而對腫瘤細胞而言，其凋亡會受到諸多凋亡相關(guān)基因的控制和影響。凋亡抑制蛋白是一類特殊的調(diào)節(jié)因子，可以參與細胞周期之中，并在終效應(yīng)階段發(fā)揮出十分重要的作用〔4〕。Survivin即為一種重要的凋亡抑制蛋白，由142個氨基酸組成，位于染色體的17q25。Survivin沒有環(huán)指結(jié)構(gòu)，僅含有單一的BIR功能區(qū)〔5〕。Survivin基因可以有效防止細胞發(fā)生凋亡，其作用機制主要通過對凋亡酶產(chǎn)生移植來阻礙細胞的凋亡。Survivin基因在正常細胞中幾乎不存在，但在人類各種腫瘤組織癌細胞中，Survivin含量十分豐富〔6〕。Survivin可在多種轉(zhuǎn)化細胞系中表達，并見于所有人類十分常見的腫瘤組織，例如前列腺癌、乳腺癌、胰腺癌、肺癌、結(jié)腸癌等。胡夢澤等〔7〕指出，在多種腫瘤之中，均存在survivin基因表達的情況，為了對腫瘤細胞的增殖予以有效的抑制，可以積極設(shè)計不同的具有一定活性的survivin 小干擾RNA序列，以實現(xiàn)對survivin基因表達的有效沉默。孫文宣〔8〕對Survivin在急性髓系白血病中的表達及其在白血病中的致病作用進行了分析，Survivin表達量和白血病患者的、外周血、血紅蛋白水平及骨髓原始細胞計數(shù)、年齡、白細胞計數(shù)、性別等變量之間不存在關(guān)系，但如果經(jīng)檢測Survivin呈現(xiàn)出陽性，則表明可能會出現(xiàn)嚴重感染。對于經(jīng)檢測Survivin呈現(xiàn)出陽性的患者，其治愈率低于Survivin呈陰性的患者，但復(fù)發(fā)率高于陰性患者。最終認為，在急性髓系白血病患者的骨髓中，Survivin會出現(xiàn)高水平表達的情況，表明Survivin和急性髓系白血病的發(fā)生及發(fā)展之間存在十分密切的聯(lián)系，且可作為急性髓系白血病患者預(yù)后不良的重要參考指標。本研究表明在白血病患者體內(nèi)白血病細胞的各項活動中，包括增殖和分化、抗凋亡等，Survivin基因的表達均可以發(fā)揮出十分重要的作用來。

4參考文獻

1曲延章，王蘇亮，韓英杰，等.中樞神經(jīng)系統(tǒng)白血病與非中樞神經(jīng)系統(tǒng)白血病患者腦脊液中基質(zhì)細胞衍生因子-1α的表達對比〔J〕.中國老年學雜志，2014；34(22)：6295-6.

2李美麗，朱西杰，李衛(wèi)強，等.復(fù)方蜥蜴散不同微粒組合劑對胃癌前病變模型大鼠Bcl-2和Survivin表達的影響〔J〕.中國實驗方劑學雜志，2014；20(15)：150-3.

3李勇，王力利，王銀潔，等.胃癌原發(fā)灶和淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移灶中鋅指蛋白139與腫瘤細胞凋亡和生存素及B細胞淋巴瘤/白血病-2的關(guān)系及意義研究〔J〕.中國全科醫(yī)學，2015；18(3)：250-4.

4李世武，陳瑤.X連鎖凋亡抑制蛋白表達對腫瘤患者生存預(yù)后影響的Meta分析〔J〕.中國新藥與臨床雜志，2015；34(4)：262-70.

5Tsubaki M，Komai M，Itoh T.etal.By inhibiting Src，verapamil and dasatinib overcome multidrug resistance via increased expression of Bim and decreased expressions of MDR1 and survivin in human multidrug-resistant myeloma cells〔J〕.Leukemia Res,2014；38(1)：121-30.

6檀碧波，李勇，范立僑，等.胃癌凋亡相關(guān)蛋白Survivin、B淋巴細胞/白血病-2、bax表達與腫瘤細胞體外化療藥敏性的關(guān)系〔J〕.中華實驗外科雜志，2012；29(7)：1315-7.

7胡夢澤，師曉東，王天有，等.小干擾RNA沉默survivin基因表達對腫瘤細胞A549、Hela S3和K562的影響及小干擾RNA序列的篩選〔J〕.中華實用兒科臨床雜志，2014；29(3)：194-8.

8孫文宣.Survivin在急性髓系白血病中的表達及AML1a對小鼠造血干祖細胞的調(diào)節(jié)作用及其在白血病中的致病作用研究〔D〕.北京：北京協(xié)和醫(yī)學院中國醫(yī)學科學院，2013.

〔2014-12-11修回〕

(編輯苑云杰)

第一作者：劉娜(1979-)，女，碩士，主治醫(yī)師，主要從事白血病研究。

〔中圖分類號〕R733.7

〔文獻標識碼〕A

〔文章編號〕1005-9202(2016)09-2178-02；

doi：10.3969/j.issn.1005-9202.2016.09.059