CD4+CD25+CD127-調(diào)節(jié)性T細胞在維吾爾族和漢族晚期非小細胞肺癌患者外周血中的表達及其臨床意義

段惠潔,卡哈爾江·阿不都外力,周　欣

(新疆醫(yī)科大學附屬腫瘤醫(yī)院,新疆 烏魯木齊 830011)

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CD4+CD25+CD127-調(diào)節(jié)性T細胞在維吾爾族和漢族晚期非小細胞肺癌患者外周血中的表達及其臨床意義

段惠潔,卡哈爾江·阿不都外力,周欣

(新疆醫(yī)科大學附屬腫瘤醫(yī)院,新疆 烏魯木齊 830011)

[摘要]目的探討維吾爾族和漢族晚期非小細胞肺癌患者外周血中CD4+CD25+CD127-調(diào)節(jié)性T細胞(Treg)的表達及臨床意義。方法采用流式細胞術(shù)測定58例Ⅲb、Ⅳ期非小細胞肺癌患者和20例健康人外周血中CD4+CD25+CD127-Treg的水平并進行比較，并進一步比較分析維吾爾族和漢族肺癌患者間外周血中CD4+CD25+CD127-Treg的水平。結(jié)果肺癌患者外周血中CD4+CD25+CD127-Treg占CD4+T細胞的百分率顯著高于健康人(P<0.05)。維吾爾族與漢族肺癌患者外周血中CD4+CD25+CD127-Treg占CD4+T細胞的百分率比較差異無統(tǒng)計學意義(P>0.05)。結(jié)論肺癌患者中異常增高的Treg細胞抑制了機體正常的抗腫瘤免疫效應，并與肺癌的進展有關(guān)，但在不同民族的晚期非小細胞肺癌患者中尚未觀察到Treg細胞水平存在差異。

[關(guān)鍵詞]非小細胞肺癌；調(diào)節(jié)性T細胞；流式細胞術(shù)；CD4+CD25+CD127-

調(diào)節(jié)性T細胞( Regulatory T cells,Treg)是一群具有免疫抑制和調(diào)節(jié)功能的CD4+T淋巴細胞，根據(jù)CD4+T淋巴細胞表面表達的不同可分成3個亞群，CD4+CD25+CD127-是其中的一個亞群。近些年研究發(fā)現(xiàn)，CD127-是一個與Treg相關(guān)性較好的抗原，并且有檢測簡單、經(jīng)濟、準確等優(yōu)點，因而現(xiàn)在一般用CD4+CD25+CD127-來代表調(diào)節(jié)性 T 細胞，可以去除高表達CD25+的效應性T細胞，真實準確地反映機體內(nèi)CD4+CD25+Treg的水平[1]。自Sakaguchi等[2-3]首次提出CD4+CD25+Treg的概念以來，愈來愈多的研究和發(fā)現(xiàn)證實Treg在生理和病理狀態(tài)下均具有重要的免疫調(diào)節(jié)作用[2]。尤其在病理情況下，由于Treg的免疫負調(diào)節(jié)作用增強，反而促進腫瘤的生長，抑制抗腫瘤免疫效應[4]。本研究通過對維吾爾族和漢族晚期非小細胞肺癌患者血漿中Treg淋巴細胞亞群的檢測，分析Treg水平在不同民族之間的表達有無差異，同時探討Treg對晚期肺癌患者免疫功能的影響及臨床意義?，F(xiàn)將結(jié)果報道如下。

1臨床資料

1.1一般資料選擇2014年4月—2015年4月在本院經(jīng)細胞學或組織學確診的未經(jīng)手術(shù)和任何治療的Ⅲb、Ⅳ期非小細胞肺癌患者58例作為肺癌組，年齡32～79(63.93±8.71)歲。其中漢族30例，男16例，女14例；年齡32～79(63.37±10.35)歲；鱗癌10例，腺癌 20例；Ⅲb期6例，Ⅳ期24例。維吾爾族28例，男21例，女7例；年齡46～79(64.54±6.66)歲；鱗癌7例，腺癌 21例；Ⅲb期5例，Ⅳ期23例。所有患者排除自身免疫性疾病，采血前未接受過化療、放療、手術(shù)、免疫抑制劑和其他對免疫系統(tǒng)有影響的藥物治療，無其他內(nèi)科合并癥。同期選擇本院門診體檢血常規(guī)、 胸片和腹部B超、 心電圖、 尿常規(guī)均無異常的健康人20例作為健康組，男12例，女8例；年齡47～75(62.28±9.46 )歲。

1.2主要儀器及試劑采用美國Beckman公司流式細胞儀，日本日立公司7600-120E全自動生化儀，KDC-1042離心機，CHA-S恒溫振蕩器。購自eBioscience公司熒光素標記鼠抗人單克隆抗體(FITC-CD4、APC-CD25、PE-CD127)，Beckman公司紅細胞裂解液，APC、PE和FITC標記的小鼠IgG同型對照，F(xiàn)ix/Perm 試劑盒。

1.3實驗方法采集所有受試者外周靜脈血，用枸櫞酸鈉(EDTA)抗凝，進行CD4+CD25+CD127-Treg檢測。樣品測定管中各加入100 μL抗凝血，然后每管中加入相應的抗體(FITC-CD4、APC-CD25、PE-CD127)各10 μL，振蕩混勻，室溫避光孵育15 min，同型空白對照測定管中不加抗體。各管加入紅細胞裂解液500 μL，振蕩混勻，室溫避光10 min，再加入PBS緩沖液1 mL，2 000 r/min離心5 min棄上清液，加入PBS緩沖液500 μL混勻后，流式細胞儀檢測樣本。Cellquest軟件收獲細胞并進行分析數(shù)據(jù)，記錄CD4+CD25+CD127-Treg占CD4+T細胞的百分率。

2結(jié)果

2.1肺癌組與健康組外周血中CD4+CD25+CD127-Treg檢測結(jié)果比較肺癌組外周血中CD4+CD25+CD127-Treg占CD4+T細胞的百分率為(2.374±1.208)%，健康組外周血中CD4+CD25+CD127-Treg占CD4+T細胞百分率為 (0.410±0.232)%，2組比較差異有統(tǒng)計學意義(P<0.05)。見圖1。

圖1　健康組外周血CD4+CD25+CD127-Treg占

2.2維吾爾族肺癌與漢族肺癌患者外周血中CD4+CD25+CD127-Treg檢測結(jié)果比較維吾爾族肺癌患者外周血中CD4+CD25+CD127-Treg占CD4+T細胞的百分率為 (2.354±1.157)%，漢族肺癌患者外周血中CD4+CD25+CD127-Treg占CD4+T細胞的百分率為 (2.393±1.273)%，二者比較差異無統(tǒng)計學意義(P>0.05)。 見圖2及圖3。

圖2　漢族肺癌患者外周血CD4+CD25+CD127-Treg占

圖3　維吾爾族肺癌患者外周血CD4+CD25+CD127-Treg占

3討論

肺癌是目前世界上最為常見的腫瘤之一，在我國，逐年升高的發(fā)病率和病死率使其居于惡性腫瘤首位[5]。近年隨著肺癌治療水平的不斷提高，在手術(shù)、化療、放療以及靶向治療等的綜合治療手段下，晚期非小細胞肺癌患者的生存期較前有所延長，但是總的治療效果仍不盡如人意。研究顯示，機體的免疫功能與肺癌的發(fā)生發(fā)展有密切關(guān)系，當患者的免疫功能低下或受抑制時，肺癌的發(fā)病率增高；而在體內(nèi)腫瘤進行性生長時，患者的免疫功能受抑制，兩者互為因果。同時，肺癌細胞有逃避免疫監(jiān)視的機制，肺癌的發(fā)生與機體免疫抑制狀態(tài)密切相關(guān)[6]。有研究證實Treg在機體中發(fā)揮了重要的免疫抑制作用，無論在免疫性疾病中還是在肺癌的發(fā)生發(fā)展中[7]。

本研究結(jié)果顯示肺癌組患者外周血中CD4+CD25+CD127-Treg水平明顯高于健康組，這與國內(nèi)外學者相關(guān)報道一致，且分期越晚Treg水平越高[8-9]。另有研究報道，在胃癌、食管癌、卵巢癌等多種實體瘤患者外周血中CD4+CD25+CD127-Treg水平也較健康人有明顯升高[10-11]。

我國是一個多民族聚集的國家，不同民族的遺傳背景在大致相似的基礎(chǔ)上又各有地方特色。 Torcia等[12]研究報道，在非洲西部弗拉尼和莫西斯兩種不同民族中，外周血Treg在弗拉尼族中呈現(xiàn)低表達，而在莫西斯民族中則相反，故因此導致弗拉尼族對瘧疾的低敏性，增加了該民族的抗感染性疾病的能力，該研究顯示不同民族間外周血Treg的表達存在著差異。在新疆的眾多少數(shù)民族中，以維吾爾族人口數(shù)目居首。維吾爾族在飲食習慣、身體素質(zhì)、遺傳基因等諸多因素上均與漢族有所不同，而針對維吾爾族晚期非小細胞肺癌患者的Treg水平的研究還相對較少，并缺乏民族間的對照研究。本研究發(fā)現(xiàn)，晚期非小細胞肺癌患者中，維吾爾族和漢族肺癌患者外周血中CD4+CD25+CD127-Treg占CD4+T細胞的百分率比較差異無統(tǒng)計學意義?？赡芤虮狙芯坎±龜?shù)較少，尚不能全面反映兩民族之間的差異，還有待進一步大樣本量臨床研究加以證實。

綜上所述，晚期肺癌患者體內(nèi)CD4+CD25+CD127-Treg占CD4+T細胞的比例顯著升高，使免疫負調(diào)節(jié)作用增強，抑制了機體的抗腫瘤免疫效應，介導了腫瘤免疫逃逸，可促進腫瘤的生長。因此，針對患者體內(nèi)異常升高的Treg數(shù)量和功能進行干預，或許可作為機體抗腫瘤免疫治療的一種方法。在維、漢兩個不同民族間進行對照研究，有助于了解不同民族之間免疫狀態(tài)的異同，進一步更好地指導臨床治療決策，幫助臨床醫(yī)師進行更精準的預后判斷。并針對兩民族間不同的免疫狀態(tài)，適時進行免疫干預治療，提高晚期非小細胞肺癌的生存率，為臨床治療提供參考依據(jù)，為更多患者帶來益處。

[參考文獻]

[1]Seddiki N,Santner-Nanan B,Martinson J,et al. Expression of interleukin(IL)-2 and IL-7 receptors discriminates between human regulatory and activated T cells[J]. Exp Med, 2006,203(7):1693-1700

[2]Hori S,Normura T,Sakaguchi S. Control of regulatory T cell development by the transcription factor Foxp3[J]. Science，2003，299(5609):1057-1061

[3]Sakaguchi S，Sakanguchi N，Asano M，et al. Immunological self-tolerance maintained by activated T cells expressing IL-2 receptor alpha-chains(CD25).Breakdown of a single mechanism of self-tolerance causes various autoimmune disease[J]. J Immunol，1995，155(3)：1151-1164

[4]Curiel TJ. Tregs and rethinking cancer immunotherapy[J]. J Clin Invest,2007,117(5):1167-1174

[5]陳萬青，張思維，鄒小農(nóng). 中國肺癌發(fā)病死亡的估計和流行趨勢研究[J]. 中國肺癌雜志，2010，13(5)：283-285

[6]Jones E，Dahm-Vicker M，Golgher D，et al. CD25+regulatory T ceHs and tumor immunity[J]. Immunol Lett，2003，85(2)：141-143

[7]Whiteside TL. Regulatory T cell subsets in human cancer：are they regulating for or against tumor progression?[J]. Cancer Immunol Immunother，2014，63(1)：67-72

[8]Chen C,Chen D,Zhang Y,et al. Changes of CD4+CD25+Foxp3+and CD8+CD28-regulatory T cells in non-small cell lung cancer patients undergoing surgery[J]． Int Immunopharmacol，2014，18(2)：255-261

[9]劉俊才，王麗萍，張嵐，等. CD4+CD25+Foxp3+調(diào)節(jié)性T細胞在肺癌患者體內(nèi)檢測及其意義[J]. 中國實用醫(yī)刊，2009，36(8)：3-5

[10] Okita R,Saeki T，Takashima S，et al. CD4+CD25+regulatory T cells in the peripheral blood of patients with breast cancer and non-small cell lung catlcer[J]． Oncol Rep，2005，14(5)：1269-1273

[11] Ichiham F，Kono K，Takahashi A，et al． Increased populations of regulatory T cells in peripheral blood and tumor-infiltrating lymphocytes in patients with gastric and esophageal cancers[J]． Clin Cancer Res，2003，9(12)；4404-4408

[12] Torcia MG,Santarlasci V,Cosmi L,et al. Functional deficit of T regulatory cells in Fulani, an ethnic group with low susceptibility to Plasmodium falciparum malaria[J]. Proc Natl Acad Sci USA，2008，105(2):646-651

Expression of CD4+CD25+CD127-regulatory T cells and clinical significance in peripheral blood in the Uygur and Han patients with advanced non-small cell lung cancer

DUAN Huijie, KAHAR Jiang·ABUDU Waili, ZHOU Xin

(The Affiliated Tumor Hospital of Xinjiang Medical University, Urumqi 830011, Xinjiang, China)

Abstract:Objective It is to investigate the expression and clinical significance of CD4+CD25+CD127- regulatory T cells (Treg) in peripheral blood in the Uygur and Han patients with advanced non-small cell lung cancer. Methods The levels of CD4+CD25+CD127- Treg in peripheral blood of 58 patients with advanced non-small cell lung cancer and 20 healthy subjects were detected by flow cytometry and compared between the two groups. Then the levels of CD4+CD25+CD127- Treg in the Uygur and Han patients were compared and analyzed. Results The percentage of CD4+CD25+CD127- Treg in peripheral blood of patients with lung cancer was significantly higher than that of healthy people (P<0.05). There was no significant difference in the percentage of CD4+CD25+CD127- Treg in peripheral blood between the Uygur and Han patients with non-small lung cancer (P>0.05). Conclusion The abnormally increased Treg cells in lung cancer patients can inhibit the immune response of body to tumor, and it is related to the progress of lung cancer. There was no significant difference in the level of Treg cells in patients with advanced non-small cell lung cancer in different nationalities.

Key words:non-small cell lung cancer; regulatory T cells; flow cytometry; CD4+CD25+CD127-

[收稿日期]2015-09-01

[中圖分類號]R734.2

[文獻標識碼]A

[文章編號]1008-8849(2016)09-0929-03

doi:10.3969/j.issn.1008-8849.2016.09.006

[基金項目]新疆醫(yī)科大學創(chuàng)新基金項目(XJC201399)

[作者簡介]段惠潔，女，主治醫(yī)師，碩士，研究方向為腫瘤的臨床診斷與治療。[通信作者]周欣，E-mail：yutianjinzhong@126.com