木薯MeNRT2.1基因的克隆及表達(dá)分析

胡春吉　鄒良平　彭明

摘 要 木薯具有產(chǎn)量高、抗貧瘠等特點(diǎn)，為了了解其耐貧瘠的作用機(jī)理，提高木薯在貧瘠土壤中對(duì)氮素的利用率，以培養(yǎng)20 d的“華南5號(hào)”木薯組培苗為實(shí)驗(yàn)材料，采用同源克隆和RT-PCR技術(shù)，獲得一個(gè)高親和硝態(tài)氮轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白（NRT2）基因，命名為MeNRT2.1，該基因含有1 593 bp的開(kāi)放閱讀框架，編碼530個(gè)氨基酸。生物信息學(xué)分析結(jié)果表明，木薯MeNRT2.1與苜蓿、擬南芥、可可、楊樹(shù)等物種的NRT2.1同源性高，其中與可可樹(shù)TcNRT2.1的親緣關(guān)系最近，氨基酸相似性達(dá)到90%。實(shí)時(shí)熒光定量PCR檢測(cè)結(jié)果表明，MeNRT2.1在木薯組培苗的根中表達(dá)，并且在NO3-濃度為0.2 mmol/L時(shí)，其相對(duì)表達(dá)量較高，NO3-濃度為10 mmol/L時(shí)其相對(duì)表達(dá)量較低，NO3-濃度為0時(shí)幾乎不表達(dá)；MeNRT2.1在莖、葉中也幾乎不表達(dá)，即該基因具有誘導(dǎo)型組織特異性表達(dá)模式。原生質(zhì)體瞬時(shí)表達(dá)發(fā)現(xiàn)MeNRT2.1定位在細(xì)胞膜上。此研究為進(jìn)一步通過(guò)NRT2基因提高木薯的抗逆性奠定了基礎(chǔ)。

關(guān)鍵詞 木薯；硝態(tài)氮；NRT2；實(shí)時(shí)熒光定量PCR；亞細(xì)胞定位

中圖分類(lèi)號(hào) S533 文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼 A

Abstract Cassava（Manihot esculenta Crantz）has several agronomic traits like a high yield combined with low-nutrient soils tolerance. To insight into the molecular basis for tolerance of poor soils and improve the utilization rate of nitrate in cassava，the“Huanan 5”cassava cultivar grown for 20 days in a medium containing different nitrate concentrations was used as the experimental material in this study. The full-length cDNA encoding a high-affinity nitrate transporter gene， designated MeNRT2.1，was isolated from cassava by using homologous cloning and RT-PCR techniques，MeNRT2.1 was 1 899 bp in length and contained an open reading frame of 1 593 bp. Sequence analysis revealed that the ORF of MeNRT2.1 encoded 530 amino acid residues. Phylogeneticanalyses showed that MeNRT2.1 was highly homologous to MtNRT2，AtNRT2，TcNRT2 and PtNRT2. The closest homolog of MeNRT2.1 is Theobroma cacao NRT2.1，with 90% amino acid identity. Quantitative real-time PCR analysis showed that the MeNRT2.1 transcript of root under 0.2 mmol/L NO3-1 treatment was the highest among the three nitrate concentrations，and had a low level on 10 mmol/L in root. However，there was almost no level without nitrate in root. Little MeNRT2.1 mRNA was found in other examinated tissues. Therefore，the expression of MeNRT2.1 is induced and specific pattern. Subcellular localization of the fusion protein of MeNRT2.1 with GFP only appeared in the cytomembrane. It provides an important foundation for future studies of regulation under the condition of poor stress about this gene.

Key words Cassava；Nitrate nitrogen；NRT2；Quantitative real-time PCR；Subcellular localization

doi 10.3969/j.issn.1000-2561.2016.01.020

木薯（Manihot esculenta Crantz）屬于大戟科木薯屬植物，起源于熱帶美洲，既是世界三大薯之一[1]，也是全球六大糧食作物之一。木薯具有高光效、高淀粉產(chǎn)量、抗旱、耐貧瘠等特點(diǎn)，即使在非常貧瘠的土地上也能獲得一定的產(chǎn)量[2]。而氮素是植物生長(zhǎng)發(fā)育過(guò)程中必需的大量元素之一，同時(shí)也是組成植物體內(nèi)蛋白質(zhì)、核酸、磷脂、酶類(lèi)和維生素、生物堿、葉綠素以及其他數(shù)千種物質(zhì)的重要成分之一[3]。植物體內(nèi)的氮素水平直接或間接影響植物的生理生化過(guò)程及生長(zhǎng)發(fā)育[4]，而氮素對(duì)木薯產(chǎn)量的貢獻(xiàn)率可達(dá)50%以上[5]。

NO3-和NH4+是植物根系從土壤中獲得氮素的最主要的2種形式。根系中NO3-的吸收與轉(zhuǎn)運(yùn)是由硝酸鹽轉(zhuǎn)運(yùn)體（Nitrate transporters， NRTs）實(shí)現(xiàn)的[6]，當(dāng)外界可利用的NO3-濃度低時(shí)（<1 mmol/L），其吸收主要依靠高親和轉(zhuǎn)運(yùn)體系（the high-affinity transport system HATS）完成；當(dāng)外界可利用NO3-濃度高時(shí)（>1 mmol/L），其吸收主要依靠低親和轉(zhuǎn)運(yùn)體系（the low-affinity transport system LATS）完成[7-8]。

到目前為止，前人已經(jīng)從擬南芥中鑒定出53個(gè)低親和（NRT1）與7個(gè)高親和（NRT2）NO3-轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白基因[9]。NO3-在100～50 mmol/L時(shí)，基因表達(dá)量與NO3-吸收量的相關(guān)系數(shù)說(shuō)明高親和與低親和的轉(zhuǎn)運(yùn)系統(tǒng)中主要是AtNRT2.1和AtNRT1.1在起作用[10]。AtNRT2.1在根中強(qiáng)烈表達(dá)，Wirth等[11]通過(guò)綠色熒光蛋白融合和免疫學(xué)方法研究發(fā)現(xiàn)，AtNRT2.1主要定位于擬南芥根皮層和表皮的質(zhì)膜上。Hu等[12]研究表明水稻Nrt1.1B定位于細(xì)胞膜，對(duì)NO3-從根到葉的運(yùn)輸有重要作用，提高了粳稻對(duì)硝酸鹽的利用率。徐海榮等[13]發(fā)現(xiàn)在不同氮源及不同氮濃度條件下，OsNrt2.1在水稻根中的表達(dá)均高于葉，表明OsTNrt2.1對(duì)根系吸收NO3-可能具有重要作用。Quesada等[14]通過(guò)Northern雜交發(fā)現(xiàn)，NpNRT2.1在煙草根中強(qiáng)烈表達(dá)。Amarasinghe等[15]發(fā)現(xiàn)，通過(guò)低濃度硝酸鹽誘導(dǎo)，GmNRT2基因在大豆根中表達(dá)強(qiáng)烈，屬于HATS?？酌舻萚16]研究表明，白菜BcNRT2在白菜根部的表達(dá)量最高，而且在高低2種濃度的NO3-處理下均具有較高水平的表達(dá)量。同樣，在大麥[17]、玉米[18]等植物中也克隆鑒定出了NRT2基因。而關(guān)于木薯中硝態(tài)氮轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白基因家族的報(bào)道卻很少。

本研究成功克隆出了木薯MeNRT2.1基因的編碼序列，并對(duì)其序列特征及時(shí)空表達(dá)情況進(jìn)行了研究分析，為該基因的進(jìn)一步應(yīng)用以及木薯NO3-吸收轉(zhuǎn)運(yùn)積累機(jī)制的深入研究提供了理論參考。

1 材料與方法

1.1 材料

1.1.1 植物材料 供試材料“華南五號(hào)”木薯（Manihot esculenta Crantz）由中國(guó)熱帶農(nóng)業(yè)科學(xué)院熱帶生物技術(shù)研究所提供。

1.1.2 菌種、質(zhì)粒和試劑 大腸桿菌（E. coli） DH5α、pCAMBIA1302植物表達(dá)載體由本實(shí)驗(yàn)室保存。PMD18-T載體、限制性?xún)?nèi)切酶、Taq DNA聚合酶、T4 DNA連接酶、實(shí)時(shí)熒光定量PCR試劑SYBRR Premix Ex TaqTMⅡ等均購(gòu)自TaKaRa公司。瓊脂糖凝膠DNA回收試劑盒購(gòu)自中科瑞泰公司。反轉(zhuǎn)錄試劑FastQuant RT Kit購(gòu)自天根生化科技有限公司。其它生化試劑和常規(guī)試劑均為進(jìn)口或國(guó)產(chǎn)分析純。

1.2 方法

1.2.1 木薯組培苗硝態(tài)氮誘導(dǎo)處理 將發(fā)育狀態(tài)基本一致的木薯組培苗在KNO3梯度培養(yǎng)基中進(jìn)行處理，培養(yǎng)基KNO3濃度依次為0、0.2、10 mmol/L。植株幼苗生長(zhǎng)條件為光周期12 h/12 h，溫度25 ℃，相對(duì)濕度50%。幼苗培養(yǎng)20 d后，采集各處理根、莖、葉作為試驗(yàn)材料，用液氮速凍后將其儲(chǔ)存于-80 ℃冰箱內(nèi)，備用。

1.2.2 RNA的提取純化及cDNA的合成 參照阮孟斌等[19]提取總RNA的方法提取“華南5號(hào)”木薯組培苗樣品根、莖、葉的總RNA，并使用1.0%瓊脂糖凝膠對(duì)RNA質(zhì)量進(jìn)行電泳檢測(cè)。使用FastQuant RT Kit對(duì)RNA進(jìn)行純化，并將其反轉(zhuǎn)錄成cDNA。

1.2.3 木薯MeNRT2.1基因編碼序列的克隆 根據(jù)已報(bào)道的擬南芥AtNRT2.1基因，利用BioEdit與木薯全基因組進(jìn)行BLAST檢索，初步獲得木薯NRT2基因，根據(jù)JGI（http：//www.phytozome.net/search.php）中收錄的MeNRT2.1（cassava4.1_031095m）

DNA序列為參考，采用Primer Premier 5引物設(shè)計(jì)軟件設(shè)計(jì)MeNRT2.1基因的上下游引物，在上游引物5′端引入保護(hù)堿基、BglⅡ酶切位點(diǎn)和補(bǔ)充堿基G，在下游引物5′端引入保護(hù)堿基和SpeⅠ酶切位點(diǎn)。引物序列如下：

P1 5′-GGAAGATCTGATGGCTGATATTGAGG

GTTCTC-3'（Bgl Ⅱ）

P2 5′-GGACTAGTGACATGGACTGGTGTAGTG

TTCG-3′（SpeⅠ）

以低濃度KNO3誘導(dǎo)的木薯組培苗根部cDNA 第一鏈為模板進(jìn)行擴(kuò)增。PCR反應(yīng)條件為：94 ℃ 5 min；94 ℃ 30 s，58 ℃ 30 s，72 ℃ 110 s，共35個(gè)循環(huán)；72 ℃ 10 min。反應(yīng)結(jié)束后將PCR產(chǎn)物移至1%的瓊脂糖凝膠中，電泳檢測(cè)是否有特異條帶出現(xiàn)，對(duì)特異條帶進(jìn)行回收。依照PMD18-T Vector Cloning Kit，將PCR回收產(chǎn)物與pMD18-T載體進(jìn)行連接，采用熱激法將連接產(chǎn)物轉(zhuǎn)化大腸桿菌DH5α感受態(tài)細(xì)胞，挑取單菌落搖菌，進(jìn)行菌液PCR檢測(cè)，將獲得的PCR陽(yáng)性克隆命名為pMD18T-MeNRT2.1，送往上海生工生物工程有限公司測(cè)序。

1.2.4 木薯MeNRT2.1基因序列特點(diǎn)及其氨基酸序列進(jìn)化分析 根據(jù)JGI公布的MeNRT2.1基因DNA序列及cDNA序列，利用NCBI Spidey （http：//www.ncbi.nlm.nih.gov/spidey/）分析基因結(jié)構(gòu)。利用DNAMAN繪制基因結(jié)構(gòu)圖，推導(dǎo)出氨基酸序列?；蚓幋a蛋白的理化性質(zhì)預(yù)測(cè)采用ExPASy Proteomics Server 提供的在線工具Protpar-

am（http：//www.expasy.ch/tools/protparam.html）。采用在線工具（http：//www.predictprotein.org/）進(jìn)行二級(jí)結(jié)構(gòu)分析。利用PSORT（http：//psort.hgc.jp/form.html）進(jìn)行亞細(xì)胞定位預(yù)測(cè)。利用TMHMM（http：//www.cbs.dtu.dk/services/TMHMM/）預(yù)測(cè)蛋白質(zhì)的跨膜區(qū)。利用MEGA 5.1軟件，以鄰位相近法（Neighbor-Joining）構(gòu)建進(jìn)化樹(shù)。

1.2.5 綠色熒光蛋白（GFP）融合載體的構(gòu)建及鑒定 將序列正確的含有pMD18T-MeNRT2.1的大腸桿菌抽取質(zhì)粒，用BglⅡ/SpeⅠ雙酶切對(duì)重組質(zhì)粒進(jìn)行酶切鑒定；將MeNRT2.1基因的全長(zhǎng)CDS連接到含有GFP的植物表達(dá)載體pC1302，把連接產(chǎn)物轉(zhuǎn)入大腸桿菌DH5α感受態(tài)細(xì)胞，經(jīng)Kan抗性篩選，挑取單克隆，再次用基因特異引物進(jìn)行菌落PCR鑒定[20]，抽取質(zhì)粒并進(jìn)行雙酶切鑒定，構(gòu)建出正確的GFP融合載體pC1302- MeNRT2.1（圖1）。以pC1302空載體作為對(duì)照。

1.2.6 煙草原生質(zhì)體的分離和轉(zhuǎn)化 取健康煙草葉片用無(wú)菌水洗凈，使用刀片將葉片切成1 mm左右的細(xì)條，將其置于酶解液中，抽真空10 min，于23 ℃ 暗培養(yǎng)6 h。煙草葉肉原生質(zhì)體的分離、酶解液及W5反應(yīng)液的配制參照Sheen[21]的方法。原生質(zhì)體轉(zhuǎn)化參考Yoo等[22]的PEG轉(zhuǎn)化擬南芥原生質(zhì)體的方法。待轉(zhuǎn)化細(xì)胞暗培養(yǎng)24 h左右，用OLYMPU激光共聚焦顯微鏡（FV1000）觀察原生質(zhì)體中的熒光分布。

1.2.7 木薯MeNRT2.1基因?qū)崟r(shí)定量PCR分析

利用實(shí)時(shí)熒光定量PCR（quantitative real-time PCR，qRT-PCR）的方法檢測(cè)木薯MeNRT2.1基因在不同濃度KNO3中根部的表達(dá)情況。根據(jù)熒光定量引物設(shè)計(jì)規(guī)則，在此基因非保守區(qū)域內(nèi)設(shè)計(jì)MeNRT2.1的定量引物，以木薯MeACT基因作為目標(biāo)基因定量表達(dá)的內(nèi)參基因，引物序列見(jiàn)表1，以反轉(zhuǎn)錄cDNA為模板進(jìn)行Real-time PCR，樣本和內(nèi)參分別設(shè)置3個(gè)重復(fù)。依據(jù)TaKaRa公司SYBR Premix Ex TaqTMⅡ（Perfect Real Time）說(shuō)明書(shū)進(jìn)行，擴(kuò)增程序?yàn)椋旱谝徊筋A(yù)變性，95 ℃ 30 s；第二步，95 ℃ 5 s，60 ℃ 30 s，循環(huán)45次。

1.3 數(shù)據(jù)分析

試驗(yàn)數(shù)據(jù)通過(guò)Excel進(jìn)行分析，獲得MeNRT2.1的相對(duì)表達(dá)量。RNA-seq高通量測(cè)序由北京諾和致源生物信息科技有限公司完成。

2 結(jié)果與分析

2.1 MeNRT2.1基因cDNA的克隆

以JGI（http：//www.phytozome.net/search.php）中收錄的MeNRT2.1（cassava4.1_031095m）DNA序列為參考設(shè)計(jì)引物，以反轉(zhuǎn)錄的cDNA為模板進(jìn)行PCR擴(kuò)增，結(jié)果見(jiàn)圖2，經(jīng)測(cè)序可知獲得1 593 bp含有完整編碼序列的cDNA序列，命名為MeNRT2.1。

2.2 MeNRT2.1編碼蛋白特性分析

MeNRT2.1基因全長(zhǎng)1 899 bp，含有2個(gè)外顯子，1個(gè)內(nèi)含子（圖3），含有1 593 bp的開(kāi)放式閱讀框架（Open reading frame，ORF），編碼530個(gè)氨基酸（圖4）?；蚓幋a蛋白的理化性質(zhì)預(yù)測(cè)采用ExPASy Proteomics Server提供的在線工具Protparam，推測(cè)其蛋白相對(duì)分子質(zhì)量為57.26 ku，等電點(diǎn)為9.28。在組成 NRT2.1蛋白的20種氨基酸中，Gly所占比例最高，為10.6 %；His所占比例最低，為1.5%。帶正電殘基（Arg+Lys）為39，負(fù)電殘基（Asp+Glu）為27。該蛋白的不穩(wěn)定系數(shù)為40.61，脂肪系數(shù)為89.11，親水性系數(shù)為0.402。亞細(xì)胞定位預(yù)測(cè)結(jié)果表明，該蛋白很可能是位于質(zhì)膜上的膜蛋白。

二級(jí)結(jié)構(gòu)在線預(yù)測(cè)結(jié)果表明，氨基酸參與形成的α-螺旋（alpha helix）占63.21%，β-折疊（beta sheet）占3.4%，無(wú)規(guī)則卷曲（random coil）占33.4%。MeNRT2.1蛋白含有MFS蛋白保守結(jié)構(gòu)域，屬于MFS超級(jí)家族。通過(guò)TMHMM軟件進(jìn)行預(yù)測(cè)，依據(jù)氨基酸序列預(yù)測(cè)的NRT2.1拓?fù)鋱D（圖5）可以看出，該蛋白具有NRT2家族共有的結(jié)構(gòu)特征，有12個(gè)跨膜結(jié)構(gòu)域，屬于NRT2蛋白，并且木薯NRT2.1蛋白氨基酸N-末端和C-末端分別位于細(xì)胞膜外和細(xì)胞膜內(nèi)。

2.3 MeNRT2.1蛋白序列比對(duì)及進(jìn)化分析

將MeNRT2.1氨基酸序列與其它植物的NRT2.1進(jìn)行比較，結(jié)果發(fā)現(xiàn)MeNRT2.1與苜蓿（Medicago truncatula）、 擬南芥（Arabidopsis thaliana）、可可（Theobroma cacao）、 楊樹(shù)（Populus trichocarpa）等物種的NRT2.1的同源性分別為88%、81%、90%、89%。進(jìn)化樹(shù)分析表明，木薯MeNRT2.1氨基酸序列與可可樹(shù)TcNRT2.1的親緣關(guān)系最近（圖 6）。

2.4 MeNRT2.1在煙草原生質(zhì)體細(xì)胞中的瞬時(shí)表達(dá)

本研究構(gòu)建了以GFP為標(biāo)記的pC1302-MeNRT2.1載體，通過(guò)PEG介導(dǎo)的煙草原生質(zhì)體瞬時(shí)表達(dá)系統(tǒng)觀察目的基因融合蛋白的亞細(xì)胞定位，在激光共聚焦顯微鏡綠色熒光下觀察GFP熒光。如圖7所示，對(duì)照（空載體pC1302）的原生質(zhì)體細(xì)胞充滿(mǎn)綠色熒光，而pC1302-MeNRT2.1僅在細(xì)胞膜上出現(xiàn)GFP綠色熒光。結(jié)果表明該基因編碼的蛋白主要定位于細(xì)胞膜上，屬于跨膜轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白。

2.5 MeNRT2.1在木薯中的表達(dá)分析

為了研究在MeNRT2.1在木薯中的表達(dá)模式，采用實(shí)時(shí)熒光定量PCR對(duì)不同濃度硝酸鹽下木薯根、莖、葉中基因的表達(dá)量進(jìn)行分析，結(jié)果見(jiàn)圖8。由圖8可知，MeNRT2.1在組培苗的根中表達(dá)，在莖、葉中幾乎不表達(dá)，并且在NO3-濃度為0.2 mmol/L時(shí)表達(dá)量最高，NO3-濃度為10 mmol/L時(shí)其相對(duì)表達(dá)量較低，無(wú)NO3-時(shí)幾乎不表達(dá)，即該基因具有誘導(dǎo)型組織特異性表達(dá)模式。同時(shí)，RNA-seq高通量測(cè)序結(jié)果與本研究qRT-PCR的結(jié)果相一致。

3 討論與結(jié)論

本研究根據(jù)擬南芥中已知的NRT2.1基因，利用同源克隆和RT-PCR技術(shù)，獲得木薯中一個(gè)高親和硝態(tài)氮轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白基因MeNRT2.1。該基因含有1 593 bp的CDS序列，編碼530個(gè)氨基酸。生物信息學(xué)分析結(jié)果表明，NRT2.1基因核苷酸及氨基酸序列與其他植物NRT2.1有較高的同源性，MeNRT2.1與可可樹(shù)[23]、楊樹(shù)[24]和苜蓿[25]的同源性分別高達(dá)90%、89%和88%，這與聚類(lèi)分析的結(jié)果相一致，表明該基因可能為木薯NRT2.1基因，與其他植物中報(bào)道的NRT2.1基因具有相似的功能[11，13-16]。

研究已表明擬南芥AtNRT2.1基因?qū)ο鯌B(tài)氮信號(hào)反應(yīng)較快，在低濃度下短時(shí)間內(nèi)表達(dá)量可能達(dá)到峰值，然后恢復(fù)正常水平[26]，并且AtNRT2.1的表達(dá)具有階段性，低濃度NO3-處理2、4、10 d時(shí)均有最大峰值出現(xiàn)[27]，在木薯中可能具有類(lèi)似的表達(dá)模式。但因木薯長(zhǎng)期生長(zhǎng)于貧瘠土壤中，本研究將木薯幼苗在不同濃度硝態(tài)氮中處理20 d，既保證了苗期植株發(fā)育的完整性，又符合木薯生理特征及自然生長(zhǎng)環(huán)境。通過(guò)qRT-PCR、RNA-seq（另文發(fā)表）的表達(dá)模式分析可知，木薯MeNRT2.1基因能夠被低濃度的硝態(tài)氮（0.2 mmol/L NO3-）在根中誘導(dǎo)表達(dá)，與已經(jīng)報(bào)道的煙草[14]、大豆[15]、平邑甜茶[28]等植物中的NRT2表達(dá)模式相似。MeNRT2.1在低濃度（0.2 mmol/L）的NO3-中相對(duì)表達(dá)量較高，在10 mmol/L的NO3-中相對(duì)表達(dá)量較低，可能受到高濃度NO3-的抑制，這與高親和轉(zhuǎn)運(yùn)體系NRT2基因功能基本相似。不同環(huán)境中基因發(fā)揮不同的功能，有利于植物長(zhǎng)期適應(yīng)氮貧瘠環(huán)境。

跨膜結(jié)構(gòu)預(yù)測(cè)顯示該蛋白具有12個(gè)跨膜區(qū)，符合NRT2家族蛋白共有的跨膜結(jié)構(gòu)特征，原生質(zhì)體瞬時(shí)表達(dá)結(jié)果表明該蛋白位于質(zhì)膜上，為膜結(jié)構(gòu)蛋白。有研究結(jié)果表明，AtNRT2.1主要定位于擬南芥根皮層和表皮的質(zhì)膜上[11]，孔敏等[16]也發(fā)現(xiàn)BcNRT2 定位于白菜細(xì)胞膜上。膜上的蛋白質(zhì)主要有載體蛋白、通道蛋白、蛋白受體以及與細(xì)胞活動(dòng)有關(guān)的離子泵等，說(shuō)明MeNRT2.1的編碼產(chǎn)物對(duì)于細(xì)胞質(zhì)膜的穩(wěn)定性或控制蛋白轉(zhuǎn)運(yùn)具有一定的作用[29]。需進(jìn)一步優(yōu)化實(shí)驗(yàn)條件，利用轉(zhuǎn)基因、蛙卵異源表達(dá)系統(tǒng)等技術(shù)對(duì)有關(guān)該基因編碼蛋白親和NO3-的分子機(jī)制及編碼蛋白在質(zhì)膜上發(fā)揮的轉(zhuǎn)運(yùn)功能進(jìn)行深入研究。

本研究成功克隆木薯MeNRT2.1基因，并對(duì)其序列結(jié)構(gòu)和表達(dá)模式進(jìn)行了初步分析，為深入認(rèn)識(shí)木薯耐低氮和氮素高效利用的理論機(jī)制提供了相關(guān)依據(jù)，也為木薯NO3-吸收轉(zhuǎn)運(yùn)積累機(jī)制的深入研究提供了理論參考。

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責(zé)任編輯：林海妹