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    浸浴硝唑尼特對刺激隱核蟲的驅(qū)蟲效果

    2016-05-30 22:52:25樊海平林煜鐘全福秦志清
    南方農(nóng)業(yè)學報 2016年3期
    關(guān)鍵詞:大黃魚

    樊海平 林煜 鐘全福 秦志清

    摘要:【目的】明確浸浴硝唑尼特(NTZ)對刺激隱核蟲的驅(qū)蟲效果,為其在水產(chǎn)養(yǎng)殖中的推廣應用提供參考依據(jù)?!痉椒ā繉TZ溶于二甲亞砜(DMSO)制成溶液,探討NTZ對刺激隱核蟲感染幼蟲和滋養(yǎng)體的驅(qū)蟲效果,并分析藥物濃度、日換水量、硫酸銅(CuSO4)和滲透劑對其驅(qū)除刺激隱核蟲滋養(yǎng)體的影響?!窘Y(jié)果】NTZ對刺激隱核蟲感染幼蟲的殺滅作用隨藥物濃度的升高而逐漸提高,至20.0 μg/L時刺激隱核蟲感染幼蟲的死亡率達97.33%。經(jīng)1.0 g/m3 NTZ浸浴72 h后,患病大黃魚的刺激隱核蟲滋養(yǎng)體完全脫落;NTZ與CuSO4配伍能有效提高藥物對刺激隱核蟲滋養(yǎng)體的驅(qū)除效果,以NTZ 1.2 g/m3+CuSO4 0.5 g/m3浸浴72 h后患病大黃魚體表和鰓部均無刺激隱核蟲滋養(yǎng)體寄生,病魚存活率達100.00%;滲透劑氮酮和換水方式與NTZ驅(qū)除刺激隱核蟲滋養(yǎng)體的效果無相關(guān)性。【結(jié)論】NTZ浸浴魚體能有效驅(qū)殺刺激隱核蟲滋養(yǎng)體,尤其與CuSO4配伍可有效提高藥物對刺激隱核蟲滋養(yǎng)體的驅(qū)除效果,生產(chǎn)中建議使用劑量為NTZ 1.2 g/m3+CuSO4 0.5 g/m3。

    關(guān)鍵詞: 刺激隱核蟲;硝唑尼特;大黃魚;浸?。或?qū)蟲效果

    中圖分類號: S941.51 文獻標志碼:A 文章編號:2095-1191(2016)03-0489-05

    0 引言

    【研究意義】刺激隱核蟲(Cryptocaryon irritans Brown)又稱海水小瓜蟲(Ichthyophthirius marinus),隸屬于原生動物門、纖毛亞門、寡膜纖毛綱、膜口亞綱、膜口目、凹口科、隱核蟲屬(許丹和劉興旺,2014)。除黃斑藍子魚(Siganus oramin)等少數(shù)魚類外,刺激隱核蟲能感染大部分海水硬骨魚類,且易導致大量死亡,對海水養(yǎng)殖業(yè)的危害極其嚴重(Wang et al.,2010)。在我國大黃魚(Pseudosciaena crocea)養(yǎng)殖生產(chǎn)中,刺激隱核蟲的發(fā)病死亡率高達60%~100%(王國良等,2013),流行季節(jié)病死率在80%以上,每年造成的經(jīng)濟損失在2億元以上(蘇躍中,2009)。因此,尋找可有效防治刺激隱核蟲病的新型藥物對保障海水產(chǎn)養(yǎng)殖業(yè)可持續(xù)發(fā)展具有重要意義。【前人研究進展】目前,水產(chǎn)養(yǎng)殖生產(chǎn)中預防刺激隱核蟲病的常見措施有強化營養(yǎng)提高魚體免疫力、降低養(yǎng)殖密度、定期消毒等(陸建學等,2007)。此外,也有采用硫酸銅、奎寧、亞甲藍、苯扎氯銨、苯氧乙醇、福爾馬林(Pironet and Jones,2000;Hirazawa et al.,2003)及四環(huán)素(Reichenbach-Klinke,1978)、中草藥(陳章群,2005)、乙酸(鄔陽等,2013)等進行浸浴治療。Reichenbach-Klinke(1978)提出,將病魚放在13 mg/L四環(huán)素溶液中浸浴30 s可殺死部分刺激隱核蟲;陳章群(2005)用檳榔、苦參和苦楝等中草藥配伍,熬制湯藥后全池潑灑,4 d后患有刺激隱核蟲病的紅鰭東方鲀體表白點消失,治愈率達90%;鄔陽等(2013)研究表明,使用157.4 mg/L乙酸累計處理2 h可有效殺滅全部刺激隱核蟲幼蟲;馬寧等(2015)研究了18種中草藥浸出液在體外對刺激隱核蟲幼蟲和包囊的殺滅效果,結(jié)果發(fā)現(xiàn)以辣椒和檳榔的殺蟲效果最佳,而牽牛子、貫眾、黃柏、茯苓、荊芥、熟地黃、鶴虱沒有殺蟲效果?!颈狙芯壳腥朦c】硝唑尼特(Nitazoxanide,NTZ)是一種新型廣譜、高效抗寄生蟲和微生物藥物,對多種原蟲、吸蟲、線蟲、蠕蟲感染和敏感腸道菌感染有特效,且安全性高、應用范圍廣(董靖等,2010)。但目前僅見NTZ對斑馬魚的急性毒性試驗報道(張德利等,2011),對其他水產(chǎn)動物的毒性及對魚類寄生蟲的驅(qū)殺效果鮮見研究報道?!緮M解決的關(guān)鍵問題】探討NTZ對刺激隱核蟲感染幼蟲和滋養(yǎng)體的驅(qū)蟲效果,并分析藥物濃度、日換水量、硫酸銅(CuSO4)和滲透劑對其驅(qū)除刺激隱核蟲滋養(yǎng)體的影響,以期為NTZ在水產(chǎn)養(yǎng)殖中的推廣應用提供參考依據(jù)。

    1 材料與方法

    1. 1 試驗材料

    NTZ(生產(chǎn)批號20150217XZ,純度在98%以上)購自湖北巨勝科技有限公司,試驗時按1∶5(g/mL)比例溶于二甲基亞砜(DMSO,天津恒興化學試劑制造有限公司);氮酮(純度在98%以上)購自南京峰云化工有限公司;CuSO4(分析純)購自天津恒興化學試劑制造有限公司;鹽酸土霉素(純度在98%以上)購自陜西正大生物科技有限公司。大黃魚由福建福鼎海鷗水產(chǎn)食品有限公司網(wǎng)箱養(yǎng)殖基地提供,其規(guī)格為50~130 g/尾,抽樣檢查發(fā)現(xiàn)魚體表和鰓部寄生有大量刺激隱核蟲;經(jīng)活水船運回實驗室后,暫養(yǎng)于直徑為1.0 m的玻璃鋼桶中,連續(xù)充氣增氧,每天換水1次(砂濾),每次換水30%左右;暫養(yǎng)2~3 d后檢查,蟲體數(shù)量不斷增加,即可用于后續(xù)試驗。

    1. 2 刺激隱核蟲感染幼蟲培養(yǎng)

    收集從大黃魚體表和鰓部脫落的刺激隱核蟲包囊,于25 ℃下孵化40 h后可獲得感染幼蟲,海水調(diào)整幼蟲濃度至1000個/mL。

    1. 3 NTZ對刺激隱核蟲感染幼蟲的殺滅試驗

    將DMSO溶解的NTZ用海水分別稀釋至2.0、4.0、10.0、20.0和40.0 μg/L,各取50.0 μL加至96孔細胞板中,然后加入刺激隱核蟲感染幼蟲液50.0 μL,NTZ終濃度為1.0、2.0、5.0、10.0和20.0 μg/L,每個濃度梯度設3個重復。培養(yǎng)板放入25 ℃培養(yǎng)箱內(nèi)培養(yǎng)4 h后,倒置顯微鏡下觀察刺激隱核蟲感染幼蟲的死亡情況。

    1. 4 NTZ對刺激隱核蟲滋養(yǎng)體的驅(qū)蟲試驗

    設NTZ 0.5 g/m3、NTZ 1.0 g/m3、NTZ 0.5 g/m3+ CuSO4 0.5 g/m3及無藥對照組(CK),每組6尾病魚,3個重復。試驗期間連續(xù)充氣增氧,水溫控制在26~27 ℃,每隔24 h換水補藥(1/2)一次。共浸浴72 h,每日記錄魚體死亡情況,并分別于浸浴48和72 h取全鰓鏡檢刺激隱核蟲滋養(yǎng)體數(shù)量。

    1. 5 NTZ驅(qū)除刺激隱核蟲滋養(yǎng)體的正交試驗

    選取NTZ濃度(0、1.0和1.6 g/m3)、日換水量(0、40%和70%)、CuSO4(0、0.3和0.6 g/m3)和滲透劑氮酮(0、0.3和0.6 g/m3)4個因素進行正交試驗(表1),每組20尾大黃魚苗(規(guī)格6~8 cm)。試驗在盛有50 L海水的150 L塑料桶內(nèi)進行,試驗期間連續(xù)充氣增氧,水溫控制在26~27 ℃,每隔24 h換水補藥(1/2)一次。共浸浴72 h,分別于浸浴24、48和72 h取病魚的鰓、鰭和30%左右體表黏液進行鏡檢,每組每次取病魚3尾。

    1. 6 NTZ與CuSO4配伍對刺激隱核蟲滋養(yǎng)體的驅(qū)蟲試驗

    設NTZ 2.0 g/m3+CuSO4 0.5 g/m3、NTZ 1.5 g/m3+ CuSO4 0.5 g/m3及無藥對照組(CK),每組15尾病魚。試驗期間連續(xù)充氣增氧,水溫控制在26~27 ℃,每隔24 h換水補藥(1/2)一次。共浸浴72 h,分別于浸浴48和72 h取病魚全鰓和30%左右黏液檢查刺激隱核蟲滋養(yǎng)體寄生情況。同時,以NTZ 1.2 g/m3+CuSO4 0.5 g/m3對刺激隱核蟲感染率達100%且出現(xiàn)輕度爛鰓和鱗片脫落的大黃魚苗(規(guī)格6~8 cm)進行驅(qū)蟲治療。

    2 結(jié)果與分析

    2. 1 NTZ對刺激隱核蟲感染幼蟲的殺滅效果

    由表2可以看出,在4 h內(nèi)1.0 μg/L NTZ對刺激隱核蟲感染幼蟲無殺滅作用,但隨藥物濃度的升高,其殺滅能力逐漸提高,至20.0 μg/L時刺激隱核蟲感染幼蟲的死亡率達97.33%。

    2. 3 NTZ驅(qū)除刺激隱核蟲滋養(yǎng)體的正交試驗結(jié)果

    由表4可以看出,NTZ驅(qū)除刺激隱核蟲滋養(yǎng)體的效果與藥物濃度呈正相關(guān),即藥物濃度越高,其驅(qū)除刺激隱核蟲滋養(yǎng)體的效果越佳;NTZ與CuSO4配伍可明顯提高其對刺激隱核蟲滋養(yǎng)體的驅(qū)除效果,呈疊加效應;滲透劑氮酮和日換水量與NTZ驅(qū)除刺激隱核蟲滋養(yǎng)體的效果無相關(guān)性。

    2. 4 NTZ與CuSO4配伍對刺激隱核蟲滋養(yǎng)體的驅(qū)除效果

    由表5可以看出,NTZ 2.0 g/m3+CuSO4 0.5 g/m3和NTZ 1.5 g/m3+CuSO4 0.5 g/m3處理組病魚經(jīng)浸浴24、48和72 h的死亡率分別為6.67%、20.00%、26.67%和6.67%、19.67%、26.33%;而CK組病魚在浸浴24、48和72 h的死亡率分別為13.33%、73.33%和100.00%。浸浴48和72 h后檢查試驗組大黃魚的體表和鰓,未發(fā)現(xiàn)有刺激隱核蟲滋養(yǎng)體寄生;而CK組48 h時檢查大黃魚的體表和鰓,發(fā)現(xiàn)仍有大量刺激隱核蟲滋養(yǎng)體寄生。以NTZ 1.2 g/m3+CuSO4 0.5 g/m3對刺激隱核蟲感染率達100%且出現(xiàn)輕度爛鰓和鱗片脫落的大黃魚苗進行驅(qū)蟲治療,病魚存活率達100.00%,浸浴48 h檢查發(fā)現(xiàn)病魚的鰓和體表有少量刺激隱核蟲滋養(yǎng)體寄生,浸浴72 h后大黃魚體表和鰓部已無刺激隱核蟲滋養(yǎng)體寄生。

    3 討論

    NTZ為口服藥物,是第一個被美國食品和藥品管理局(FDA)批準為專門用于治療隱孢子蟲感染的藥物(劉耀文,2003),其優(yōu)點是既可驅(qū)治多種蠕蟲,又可驅(qū)治原蟲(主要是腸道及腔道寄生原蟲)(沈一平等,2006),但至今其藥效作用機制尚未明確。根據(jù)藥物活性譜研究結(jié)果可知,NTZ首先對厭氧或微需氧蟲種有效,其結(jié)構(gòu)特征與氯氰碘柳胺及其相關(guān)化合物相似,與阿苯達唑、甲苯達唑和甲硝唑相比,NTZ的抗寄生蟲譜與抗菌譜更廣(張可煜等,2007)。在國外,NTZ主要用于治療犬、貓的蠕蟲感染(趙占中,2009);而國內(nèi)的研究表明,NTZ對犬、羊、雞、兔、鼠等動物體內(nèi)的寄生蟲均有治療作用(趙占中,2009;Zhang et al.,2010)。本研究通過對大黃魚刺激隱核蟲進行藥物浸浴驅(qū)殺試驗,結(jié)果證實NTZ浸浴魚體能有效驅(qū)殺刺激隱核蟲滋養(yǎng)體,也佐證了該藥在水產(chǎn)寄生蟲病防治中應用的可能性。

    CuSO4對刺激隱核蟲的有效性已得到證實(潘孝益等,1994;毛國民等,2005;陸建學等,2007)。本研究通過TNZ與CuSO4配伍,既充分發(fā)揮TNZ對寄生蟲幼蟲和滋養(yǎng)體的殺滅作用及對包囊的抑制作用,又兼顧CuSO4對刺激隱核蟲成蟲和幼蟲的殺滅作用,結(jié)果顯示,以NTZ 1.2 g/m3+CuSO4 0.5 g/m3對感染刺激隱核蟲且出現(xiàn)輕度爛鰓和鱗片脫落的大黃魚苗進行浸浴治療,病魚存活率達100.00%,浸浴72 h后大黃魚體表和鰓部已無刺激隱核蟲滋養(yǎng)體寄生??梢姡琓NZ與CuSO4配伍可有效提高藥物對刺激隱核蟲滋養(yǎng)體的驅(qū)除效果。

    本研究結(jié)果表明,通過浸浴驅(qū)殺刺激隱核蟲,除部分蟲體被殺滅外,大部分滋養(yǎng)體在藥物作用下迅速形成包囊并脫離魚體。這些脫落的刺激隱核蟲包囊經(jīng)過一段時間的發(fā)育,又能孵化出感染幼蟲重復感染魚體,且感染幼蟲數(shù)量較原滋養(yǎng)體數(shù)量呈幾百倍增長,重復感染對魚體危害更嚴重。因此,實際生產(chǎn)中要有效控制刺激隱核蟲重復感染,可用水流將脫落的刺激隱核蟲包囊沖出養(yǎng)殖區(qū),并集中進行殺滅處理,且必須在包囊孵出感染幼蟲前進行殺滅處理等。

    4 結(jié)論

    NTZ浸浴魚體能有效驅(qū)殺刺激隱核蟲滋養(yǎng)體,尤其與CuSO4配伍可有效提高藥物對刺激隱核蟲滋養(yǎng)體的驅(qū)除效果,生產(chǎn)中建議使用劑量為NTZ 1.2 g/m3+

    CuSO4 0.5 g/m3。

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    (責任編輯 蘭宗寶)

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