提高新疆葡萄樹傷流液抗氧化活性穩(wěn)定性的方法研究

劉　玲，黃　瓊，艾爾肯·依不拉音*

(1.新疆醫(yī)科大學中心實驗室，烏魯木齊　830011；2.新疆埃樂欣藥業(yè)有限公司，烏魯木齊　830011)

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提高新疆葡萄樹傷流液抗氧化活性穩(wěn)定性的方法研究

劉玲1，黃瓊2，艾爾肯·依不拉音1*

(1.新疆醫(yī)科大學中心實驗室，烏魯木齊830011；2.新疆埃樂欣藥業(yè)有限公司，烏魯木齊830011)

摘要：目的考察提高新疆葡萄樹傷流液抗氧化活性穩(wěn)定性的方法。方法采用羥自由基試劑盒法測定·OH清除能力，考察高溫、淀粉和葡萄糖對新疆葡萄樹傷流液·OH清除能力的影響。結(jié)果高溫對新疆葡萄樹傷流液的·OH清除率沒有顯著影響(P>0.05)，淀粉僅對喀什木納格傷流液的·OH清除率有顯著影響(P<0.05)，低濃度葡萄糖對新疆葡萄樹傷流液的·OH清除率有顯著影響(P<0.05)。結(jié)論低濃度葡萄糖可以穩(wěn)定新疆葡萄樹傷流液抗氧化活性，其具體機制有待進一步研究。

關(guān)鍵詞：新疆葡萄樹傷流液；抗氧化活性；穩(wěn)定性

每年的4月上旬至中旬，干燥無雨，氣溫相對較高，葡萄屬(VitisL.)葡萄(ViasviniferaL.)植株從其傷口處會自動流出無色透明的液體，即葡萄樹傷流液[1]。相關(guān)文獻表明[2-4]，葡萄含有植物多酚類物質(zhì)，具有很強的抗氧化活性。本課題組研究[5-9]表明，新疆葡萄樹傷流液具有較強的抗氧化活性，特別是對·OH的清除能力較強，且葡萄樹傷流液對·OH的清除率具有較強的熱穩(wěn)定性，甚至可耐95 ℃的高溫。在體內(nèi)由各種自由基引發(fā)的氧化作用，是導致各種組織和器官損傷、病變的主要原因之一[10-11]。現(xiàn)已證實，腫瘤、腎病、肝病、動脈硬化、心臟病、糖尿病、白內(nèi)障乃至衰老等疾病的發(fā)生和發(fā)展均與氧化有關(guān)[12]。因此，新疆葡萄樹傷流液具有很大的開發(fā)應用價值。但是新疆葡萄樹傷流液存在清除·OH能力的不穩(wěn)定性和易變質(zhì)等問題，難以長期保存使用。迄今為止，新疆葡萄樹傷流液僅僅在維吾爾族民間中被少量地使用，而且只在葡萄樹萌芽前的1個月左右的時間段內(nèi)季節(jié)性地使用，更沒有其相關(guān)產(chǎn)品出現(xiàn)在市場。因此研究新疆葡萄樹傷流液抗氧化活性穩(wěn)定性的特

點及其影響因素，對利用新疆葡萄樹傷流液開發(fā)相關(guān)產(chǎn)品具有重要意義和發(fā)展前景。有研究顯示，沙棗樹膠可以穩(wěn)定和田紅葡萄樹傷流液抗氧化能力[13]，但對其他品種傷流液的作用尚未探討。本實驗探討了溫度、多糖(淀粉)和單糖(葡萄糖)對傷流液·OH清除能力的影響，以期獲得穩(wěn)定新疆葡萄樹傷流液抗氧化活性的方法。

1儀器與試藥

1.1儀器UV-2550型紫外可見分光光度計，AEL-160型電子天平(日本Shimadu公司)；HWS26型電熱恒溫水浴鍋(上海一恒科學儀器有限公司)。

1.2試藥葡萄樹傷流液于2013年4月初分別在新疆吐魯番鄯善縣、和田市、和田縣、喀什市和阿圖什市采集，冷凍保存，原植物即葡萄品種由新疆醫(yī)科大學天藥/生藥教研室帕麗達·阿不力孜教授鑒定。羥自由基試劑盒(南京建成生物工程研究所)；可溶性淀粉(天津金匯太亞化學試劑有限公司)；葡萄糖(天津市津北精細化工有限公司)；冰乙酸(天津市恒興化學試劑制造有限公司)；蒸餾水為二次重蒸水。

2實驗方法

2.1新疆葡萄樹傷流液清除·OH能力測定按照羥自由基試劑盒說明書進行操作。在反應體系中加入新疆不同產(chǎn)地、不同品種葡萄樹傷流液0.2 mL，檢測體系中·OH的剩余量。以0.2 mg·mL-1Vc為陽性對照。清除率=(A對照-A樣品)/A對照×100%。

2.2溫度對新疆葡萄樹傷流液抗氧化活性的影響分別量取2份同產(chǎn)地、同品種葡萄樹傷流液各100 mL，1份在4 ℃冰箱中保存，1份在90 ℃下加熱30 min后在4 ℃冰箱中保存。在不同時間對其清除·OH能力進行測定。不同產(chǎn)地、不同品種葡萄樹傷流液同法操作。

2.3多糖對新疆葡萄樹傷流液抗氧化活性的影響分別量取2份同產(chǎn)地、同品種葡萄樹傷流液各100 mL，1份在4 ℃冰箱中保存，1份添加2 g可溶性淀粉后在4 ℃冰箱中保存。在不同時間對其清除·OH能力進行測定。不同產(chǎn)地、不同品種葡萄樹傷流液同法操作。

2.4單糖對新疆葡萄樹傷流液抗氧化活性的影響分別量取7份喀什木納格、吐魯番無核白葡萄樹傷流液100 mL，加入一定量的葡萄糖，使葡萄糖的含量分別為0，20，40，80，120，160和200 g·L-1，4 ℃冰箱中保存，在不同時間對其清除·OH能力進行測定。

2.5數(shù)據(jù)處理采用SPSS 17.0軟件處理數(shù)據(jù)，組間比較采用t檢驗。

3結(jié)果

3.1溫度對新疆葡萄樹傷流液抗氧化活性的影響加熱與未加熱的卡西克葡萄樹傷流液對·OH清除率數(shù)據(jù)統(tǒng)計分析顯示，2組數(shù)據(jù)沒有顯著性差異(P>0.05)。見圖1。加熱與未加熱的無核白葡萄樹傷流液對·OH清除率數(shù)據(jù)統(tǒng)計分析顯示，2組數(shù)據(jù)沒有顯著性差異(P>0.05)。見圖2。加熱與未加熱的和田薩依巴格鄉(xiāng)紅葡萄樹傷流液對·OH清除率數(shù)據(jù)統(tǒng)計分析顯示，2組數(shù)據(jù)沒有顯著性差異(P>0.05)。見圖3。加熱與未加熱的喀什木納格傷流液對·OH清除率數(shù)據(jù)統(tǒng)計分析顯示，2組數(shù)據(jù)有顯著性差異(P<0.05)。見圖4。

圖1溫度對卡西克葡萄樹傷流液·OH清除能力的影響

(：·OH清除率；：90 ℃ 30 min處理后對·OH清除率)

Fig.1 The influence of temperature on the ·OH clearance rate of Kashyyyk GBS

(: ·OH clearance rate;:·OH clearance rate after sample processed by 90 ℃ in 30 min)

圖2溫度對無核白葡萄樹傷流液·OH清除能力的影響

(：·OH清除率；：90 ℃ 30 min處理后對·OH清除率)

Fig.2 The influence of temperature on the ·OH clearance rate of seedless white GBS

(: ·OH clearance rate;:·OH clearance rate after sample processed by 90 ℃ in 30 min)

圖3溫度對和田薩依巴格鄉(xiāng)紅葡萄樹傷流液·OH清除能力的影響

(：·OH清除率；：90 ℃ 30 min處理后對·OH清除率)

Fig.3 The influence of temperature on the ·OH clearance rate of Hotan Sayibagy village red grape GBS

(: ·OH clearance rate;:·OH clearance rate after sample processed by 90 ℃ in 30 min)

圖4溫度對喀什木納格葡萄樹傷流液·OH清除能力的影響

(：·OH清除率；：90 ℃ 30 min處理后對·OH清除率)

Fig.4 The influence of temperature on the ·OH clearance rate of Kashgar Munage GBS

(: ·OH clearance rate;:·OH clearance rate after sample processed by 90 ℃ in 30 min)

3.2多糖對新疆葡萄樹傷流液抗氧化活性的影響由圖5可知，淀粉的添加與否對卡西克葡萄樹傷流液的·OH清除率數(shù)據(jù)統(tǒng)計分析顯示，2組數(shù)據(jù)有顯著性差異(P<0.05)。見圖5。淀粉的添加對無核白葡萄樹傷流液的·OH清除率數(shù)據(jù)統(tǒng)計分析顯示，2組數(shù)據(jù)沒有顯著性差異(P>0.05)。見圖6。淀粉的添加對和田薩依巴格鄉(xiāng)紅葡萄樹傷流液的·OH清除率數(shù)據(jù)統(tǒng)計分析顯示，2組數(shù)據(jù)沒有顯著性差異(P>0.05)。見圖7。淀粉的添加對喀什木納格傷流液的·OH清除率數(shù)據(jù)統(tǒng)計分析顯示，2組數(shù)據(jù)有顯著性差異(P<0.05)。見圖8。

圖5多糖對卡西克葡萄樹傷流液·OH清除能力的影響

(：·OH清除率；：可溶性淀粉處理后對·OH清除率)

Fig.5 The influence of polysaccharide on the ·OH clearance rate of Kashyyyk GBS

(: ·OH clearance rate;:·OH clearance rate after sample processed by soluble starch)

圖6多糖對無核白葡萄樹傷流液·OH清除能力的影響

(：·OH清除率；：可溶性淀粉處理后對·OH清除率)

Fig.6 The influence of polysaccharide on the ·OH clearance rate of seedless white GBS

(: ·OH clearance rate;:·OH clearance rate after sample processed by soluble starch)

圖7多糖對和田薩依巴格鄉(xiāng)紅葡萄樹傷流液·OH清除能力的影響

(：·OH清除率；：可溶性淀粉處理后對·OH清除率)

Fig.7 The influence of polysaccharide on the ·OH clearance rate of Hotan Sayibagy red grape GBS

(: ·OH clearance rate;:·OH clearance rate after sample processed by soluble starch)

圖8多糖對喀什木納格葡萄樹傷流液·OH清除能力的影響

(：·OH清除率；：可溶性淀粉處理后對·OH清除率)

Fig.8 The influence of polysaccharide on the ·OH clearance rate of Kashgar Munage GBS

(: ·OH clearance rate;:·OH clearance rate after sample processed by soluble starch)

3.3葡萄糖對新疆葡萄樹傷流液抗氧化活性的影響見圖9和圖10。由圖9可知，喀什木納格傷流液原液和葡萄糖加入量為20和80 g·L-1時的·OH清除率統(tǒng)計分析顯示，2組數(shù)據(jù)有顯著性差異(P<0.05)。由圖10可知，吐魯番無核白傷流液原液和葡萄糖加入量20 g·L-1時的·OH清除率數(shù)據(jù)統(tǒng)計分析顯示，2組數(shù)據(jù)有顯著性差異(P<0.05)。

圖9葡萄糖對喀什木納格傷流液清除·OH能力的影響

(：2%；：8%；：原液；：4%；：12%；：16%；：20%)

Fig.9 The influence of glucose on the ·OH clearance rate of Kashgar Munage GBS

(: 2%;: 8%;: stock solution;: 4%;: 12%;: 16%;: 20%)

圖10葡萄糖對吐魯番無核白傷流液清除·OH能力的影響(：2%；：16%；：12%；：8%；：4%；：20%；：原液)

Fig.10 the influence of glucose on the ·OH clearance rate of Turpan seedless white GBS

(: 2%;: 16%;:12%;: 8%;: 4%;: 20%;: stock solution)

4討論

不同地區(qū)、不同產(chǎn)地的葡萄樹傷流液的抗氧化活性不同，這與其氣候條件、溫度、生態(tài)環(huán)境有關(guān)。除喀什木納格葡萄樹傷流液外，溫度對不同地區(qū)、不同產(chǎn)地的葡萄樹傷流液的·OH清除能力幾乎沒有影響，加熱與未加熱的葡萄樹傷流液對·OH清除率變化趨勢幾乎一致。除喀什木納格葡萄樹傷流液外，可溶性淀粉對其他品種葡萄樹傷流液抗氧化活性沒有影響。在添加2 g可溶性淀粉后，喀什木納格葡萄樹傷流液的清除·OH能力在40 d內(nèi)是穩(wěn)定的，可溶性淀粉有可能穩(wěn)定喀什木納格葡萄樹傷流液的抗氧化活性。

喀什木納格葡萄樹傷流液原液的活性隨著時間的增加而降低，至第6天趨于穩(wěn)定；含20和80 g·L-1葡萄糖的傷流液的活性幾乎不變，但含40 g·L-1葡萄糖的傷流液的活性自第8天開始出現(xiàn)下降；含120，160和200 g·L-1葡萄糖的傷流液的活性自第8天開始出現(xiàn)下降，并于第12天達到平衡。總體來說，低含量的葡萄糖可以穩(wěn)定喀什木納格葡萄樹傷流液的抗氧化活性，而高含量的葡萄糖加速了其抗氧化活性的破壞。

吐魯番無核白傷流液原液的活性前10 d幾乎保持不變，到第10天時突然沒有活性，說明原液的活性下降快；含20 g·L-1葡萄糖的傷流液的活性幾乎不變，含40，80，120，160和200 g·L-1葡萄糖的傷流液的活性分別自第16，14，18，18和14天開始出現(xiàn)下降，活性開始下降的時間相似。由此可知，20 g·L-1的葡萄糖可以穩(wěn)定吐魯番無核白葡萄樹傷流液的抗氧化活性，而高濃度的葡萄糖雖然在開始可以穩(wěn)定活性，但隨后都出現(xiàn)不同程度的下降。說明低濃度葡萄糖可以穩(wěn)定吐魯番無核白葡萄樹傷流液和喀什木納格葡萄樹傷流液的抗氧化活性，葡萄糖對其余品種葡萄樹傷流液抗氧化活性的影響課題組將在后期進行研究。

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Study on the stabilized method of Xinjiang grapevine bleeding sap

LIU Ling1,HUANG Qiong2, Arkin IBURAIM1*

(1.Central Labratory, Xinjiang Medical University, Urumqi 830011,China；2.Xinjiang Ailexin Pharmacy Limited Company, Urumqi 830011, China)

Abstract:ObjectiveTo investigate the stabilized methods of Xinjiang grapevine bleeding sap(GBS) antioxidant activity. Methods

Xinjiang GBS′s antioxidant activities were evaluated by hydroxyl radical reagent kit. Using·OH clearance rate as an indicator, the impacts of high temperature, starch and glucose to Xinjiang GBS were studied. ResultsHigh temperature had no influence on the·OH clearance rate of Xinjiang GBS(P>0.05), but the lower concentration glucose was opposite(P<0.05), and starch only affected the ·OH clearance rate of Kashgar Munage(P<0.05). ConclusionThe antioxidant ability of Xinjiang GBS can be stabilized by low concentration glucose, whose exact mechanism needs further study.

Key words:Xinjiang grapevine bleeding sap; antioxidant ability; stability

(收稿日期：2015-09-16)

中圖分類號：R284

文獻標志碼：A

文章編號：1004-2407(2016)03-0228-04

doi:10.3969/j.issn.1004-2407.2016.03.003

*通信作者：艾爾肯·依不拉音,男,教授,博士生導師

作者簡介：劉玲,女,在讀碩士研究生

基金項目：國家自然科學基金項目(編號：21162030)