莪術(shù)醋制對(duì)大鼠膽汁代謝的影響

顧薇　陸兔林　李金慈　王巧晗　潘自皓　季德　李林　張季　毛春芹

[摘要]通過(guò)考察莪術(shù)醋制前后對(duì)由肝臟分泌的膽汁中內(nèi)源性代謝產(chǎn)物的影響，以期探討莪術(shù)醋制對(duì)膽汁內(nèi)源性代謝物的影響。分別制備生、醋莪術(shù)醇提液及生理鹽水溶液，灌胃給藥05 h后做膽總管插管引流術(shù)收集12 h內(nèi)大鼠膽汁；膽汁樣品1∶3乙腈沉淀蛋白后進(jìn)行UPLCTOFMS分析；采用單維統(tǒng)計(jì)與多元統(tǒng)計(jì)相結(jié)合，PeakView軟件與網(wǎng)絡(luò)數(shù)據(jù)庫(kù)相比對(duì)的數(shù)據(jù)分析方法，鑒定潛在生物標(biāo)記物。 醋制前后莪術(shù)提取物對(duì)大鼠膽汁代謝譜具顯著影響，鑒別出生、醋莪術(shù)給藥組的大鼠膽汁中具有顯著性差異的13個(gè)代謝物；再結(jié)合化合物網(wǎng)絡(luò)數(shù)據(jù)庫(kù)進(jìn)行鑒定，得到8個(gè)代謝物；進(jìn)一步把給藥組與空白組進(jìn)行t檢驗(yàn)單維統(tǒng)計(jì)分析，得到與空白組比較具顯著性差異的7個(gè)代謝物，推定此7個(gè)代謝物為生、醋莪術(shù)給藥后大鼠膽汁的潛在生物標(biāo)記物，其中6個(gè)潛在生物標(biāo)記物在醋品組中顯示上調(diào)，其與磷脂代謝、脂肪代謝、膽汁酸代謝及與調(diào)控N?；掖及匪夥磻?yīng)平衡作用相關(guān)的代謝調(diào)控相關(guān)，提示通過(guò)大鼠膽汁內(nèi)源性代謝物的差異探討莪術(shù)醋制增效的機(jī)制。

[關(guān)鍵詞]莪術(shù)；醋制；膽汁；代謝組學(xué)；UPLCTOFMS

[Abstract]To explore the effect of vinegarprocessed Curcumae Rhizoma on endogenous metabolites in bile by investigating the endogenous metabolites difference in bile before and after Curcumae Rhizoma was processed with vinegar Alcohol extracts of crude and vinegarprocessed Curcumae Rhizoma， as well as normal saline were prepared respectively， which were then given to the rats by intragastric administration for 05 h Then common bile duct intubation drainage was conducted to collect 12 h bile of the rats UPLCTOFMS analysis of bile samples was applied after 1∶3 acetonitrile protein precipitation； unidimensional statistics were combined with multivariate statistics and PeakView software was compared with network database to identify the potential biomarkers Vinegarprocessed Curcumae Rhizoma extracts had significant effects on metabolites spectrum in bile of the rats With the boundaries of P<005， 13 metabolites with significant differences were found in bile of crude and vinegarprocessed Curcumae Rhizoma groups， and 8 of them were identified when considering the network database Ttest unidimensional statistical analysis was applied between administration groups and blank group to obtain 7 metabolites with significant differences and identify them as potential biomarkers 6 of the potential biomarkers were upregulated in vinegarprocessed group， which were related to the metabolism regulation of phospholipid metabolism， fat metabolism， bile acid metabolism， and Nacylethanolamine hydrolysis reaction balance， indicating the mechanism of vinegarprocessed Curcumae Rhizoma on endogenous metabolites in bile of the rats

[Key words]Curcumae Rhizoma； vinegarprocessing； bile； metabolism； UPLCTOFMS

doi：10.4268/cjcmm20160726

中藥莪術(shù)為姜科植物蓬莪術(shù)Curcuma phaeocaulis Val，廣西莪術(shù)C kwangsiensis SG Lee et CFLiang或溫郁金C wenyujin YHChen et CLing的干燥根莖，莪術(shù)生品行氣消積力強(qiáng)，醋制后主入肝經(jīng)血分，增強(qiáng)散瘀止痛作用。歷版《中國(guó)藥典》一部莪術(shù)炮制項(xiàng)下均收載醋莪術(shù)，莪術(shù)臨床方劑及中成藥均以醋莪術(shù)入藥，2010年版《中國(guó)藥典》收載了15種以醋制莪術(shù)入藥的成方制劑，其方解均注明莪術(shù)醋制后重入肝經(jīng)。

莪術(shù)中主要含有揮發(fā)油、姜黃素類(lèi)、微量元素及多糖等成分，其中揮發(fā)油類(lèi)和姜黃素類(lèi)是其有效成分群。揮發(fā)油在莪術(shù)中的質(zhì)量分?jǐn)?shù)約為1%～25%，為多種單萜類(lèi)及倍半萜類(lèi)化合物，其中主要生物活性成分為莪術(shù)醇（curcumol）、莪術(shù)二酮（curdione）、吉馬酮（germaerone）、β欖香烯（βelemene）和新姜黃二酮。姜黃素類(lèi)化合物是莪術(shù)中的另一類(lèi)重要成分，主要指二苯基庚烴類(lèi)化合物，目前已分離并鑒定20多個(gè)姜黃素類(lèi)化合物，其中以姜黃素（curcumin）、去甲氧基姜黃素（demethoxycurcumin）和雙去甲氧基姜黃素（bisdemethoxycurcumin）為主要活性成分[1]。

莪術(shù)具有較強(qiáng)行氣破血、活血化瘀之功，在抗纖維組織增生、抗腫瘤、抗血栓、抗菌抗病毒、抗炎等方面均有顯著功效。由莪術(shù)和紅花制成的靜脈注射劑莪紅注射液可治療缺血性心血管病[2]，莪術(shù)油葡萄糖注射液是1995年版《中國(guó)藥典》二部新收載的抗病毒藥。莪術(shù)中抗癌有效成分β欖香烯已被制成注射液使用。研究表明，莪術(shù)中主要的抗癌活性成分為姜黃素、β欖香烯、γ欖香烯、莪術(shù)醇、莪術(shù)酮、吉馬酮、異莪術(shù)烯醇等[3]，其均來(lái)源于莪術(shù)揮發(fā)油類(lèi)及姜黃素類(lèi)成分。

代謝組學(xué)最早由Nicholson等[4]提出，其關(guān)注于對(duì)限定條件下的特定生物樣品中所有內(nèi)源性代謝產(chǎn)物的定性定量分析，并指示生物體對(duì)內(nèi)源或外源刺激的代謝應(yīng)答。將系統(tǒng)論指導(dǎo)下的代謝組學(xué)與中醫(yī)藥學(xué)的整體觀念相結(jié)合，可以使中醫(yī)藥學(xué)由經(jīng)驗(yàn)描述式的科學(xué)逐步轉(zhuǎn)變成定量描述和預(yù)測(cè)的科學(xué)，所以在中藥現(xiàn)代化研究中代謝組學(xué)已逐步應(yīng)用于中藥歸經(jīng)研究、中藥安全性評(píng)價(jià)、中藥復(fù)方研究等多個(gè)領(lǐng)域中。

膽汁為肝臟分泌的液體，主要參與脂肪的消化和吸收并將某些代謝產(chǎn)物從肝臟中排出；且肝與膽的關(guān)系很密切，病理上相互影響，治療上往往是肝膽同治。中醫(yī)理論認(rèn)為，膽位于肝內(nèi)，膽汁乃肝經(jīng)之余氣而成，兩者一臟一腑表里相屬，有絡(luò)脈相連其經(jīng)脈，皆行于脅肋。《靈樞·本臟》說(shuō)：“肝合膽”。課題組經(jīng)前期研究發(fā)現(xiàn)，莪術(shù)醋制后可以促進(jìn)大鼠的膽汁分泌，其膽汁排泄總量與生莪術(shù)組相比具有顯著性差異，本文以膽汁為研究對(duì)象，從代謝的角度研究藥物對(duì)肝臟系統(tǒng)的擾動(dòng)，采用超高效液相色譜飛行時(shí)間質(zhì)譜（UPLCTOFMS）分析技術(shù)及統(tǒng)計(jì)學(xué)分析方法，研究生、醋莪術(shù)藥物作用后對(duì)膽汁中代謝物組的擾動(dòng)，挖掘潛在的生物標(biāo)記物，探索現(xiàn)代新技術(shù)在傳統(tǒng)中藥炮制理論研究中的應(yīng)用。從膽汁代謝組學(xué)的視角探討醋制對(duì)中藥莪術(shù)的影響未見(jiàn)報(bào)道。

1材料

Ekspert ultraLC 100XL超高效液相系統(tǒng)，包括在線(xiàn)脫氣機(jī)、四元泵、自動(dòng)進(jìn)樣器、柱溫箱；AB Sciex TripleTOF 5600飛行時(shí)間質(zhì)譜儀（美國(guó)AB Sciex公司），配有Analyst TF16工作站、PeakView分析軟件、MarkerView分析軟件等；FA1104型電子分析天平（上海精密科學(xué)儀器有限公司）；LDZ52型全自動(dòng)離心機(jī)（北京醫(yī)用離心機(jī)廠(chǎng)）；KQ500B型超聲波清洗器（昆山市超聲儀器有限公司）；MilliQ Gradient A10 超純水器 （Millipore，Bedford，MA，USA）；旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀（瑞士Buchi）；渦旋振蕩混合器（上海滬西分析儀器廠(chǎng)）。

甲醇、乙腈為色譜純（德國(guó)Merck公司），水為超純水，其余試劑均為分析純；莪術(shù)，購(gòu)自浙江，批號(hào)20120506，經(jīng)南京中醫(yī)藥大學(xué)藥學(xué)院巢建國(guó)教授鑒定為溫郁金Cwenyujin的干燥根莖。

SPF級(jí)健康SD大鼠，雄性，體重280～320 g，由南京中醫(yī)藥大學(xué)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心提供，許可證號(hào)SCXK（浙）20080033，實(shí)驗(yàn)前于南京中醫(yī)藥大學(xué)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心適應(yīng)飼養(yǎng)1周，以適應(yīng)本實(shí)驗(yàn)室環(huán)境，給予標(biāo)準(zhǔn)光照周期（14 h光照、10 h黑夜），實(shí)驗(yàn)室溫度維持20～25 ℃，相對(duì)濕度控制在70%左右。

2方法

21樣品制備

211生莪術(shù)及醋莪術(shù)的制備按照《中國(guó)藥典》莪術(shù)炮制項(xiàng)下規(guī)定進(jìn)行制備生、醋莪術(shù)飲片。生莪術(shù)：取凈莪術(shù)，略泡，洗凈，蒸軟，切厚片，干燥制得生莪術(shù)飲片。醋莪術(shù)：取凈莪術(shù)加醋煮至透心，取出，稍涼，切厚片，干燥制得醋莪術(shù)飲片。

212生莪術(shù)及醋莪術(shù)提取液的制備中藥水提液中以多糖類(lèi)物質(zhì)為主，而本文研究對(duì)象為莪術(shù)中活性成分揮發(fā)油類(lèi)和姜黃素類(lèi)，其均為脂溶性成分，故采取醇提法進(jìn)行提取，具體提取方法如下：取適量生莪術(shù)或醋莪術(shù)，粉碎后提取3次，用15倍量的90%乙醇加熱回流1 h，藥渣再加6倍量60%乙醇加熱回流1 h，藥渣繼續(xù)加6倍量40%乙醇加熱回流1 h，合并以上3次提取液，過(guò)濾后40 ℃減壓濃縮使得生藥量提取液終濃度為14 g·mL-l，4 ℃保存。

22分組與給藥

實(shí)驗(yàn)分成空白組（Control）、生莪術(shù)組（RRC）、醋莪術(shù)組（VRC），每組5只，實(shí)驗(yàn)開(kāi)始前12 h禁食，自由飲水。生、醋莪術(shù)組分別灌胃給予生、醋莪術(shù)藥液1417 g·kg-1，空白組灌胃等量的生理鹽水溶液。

23大鼠膽汁采集

于給藥05 h后腹腔注射10%水合氯醛（3 mL·kg-1）麻醉后，迅速打開(kāi)腹腔，仰位固定，做膽總管插管引流術(shù)，并以生理鹽水紗布覆蓋腹部。插管成功后，收集12 h內(nèi)大鼠膽汁，-80 ℃冰箱保存?zhèn)溆谩?/p>

24大鼠膽汁前處理

取各膽汁樣品1 mL，加3倍量乙腈，渦旋3 min，12 000 r·min-1離心10 min，取上清液35 ℃氮?dú)獯蹈?，殘?jiān)?0 μL甲醇復(fù)溶，再次12 000 r·min-1離心，取上清液。

25UPLCTOFMS分析

251色譜條件Agilent Zorbax SBC18色譜柱（21 mm×50 mm，18 μm）；流動(dòng)相乙腈（A）01%甲酸水（B），梯度洗脫，0～5 min，5%～35%A，5～10 min，35%～50%A，10～20 min，50%～65%A，20～25 min，65%～100%A，25～28 min，100%A，流速04 mL·min-1，進(jìn)樣量2 μL，柱溫30 ℃，運(yùn)行30 min。

252TOFMS質(zhì)譜條件采用ESI離子源，正離子模式下采集信號(hào)。DuoSpray離子源，源參數(shù)設(shè)置如下：噴霧電壓（ion voltage）5 500 V，解簇電壓（declustering potential）60 V，離子源溫度（sorce temperature）550 ℃，氣簾氣（curtain gas）35 Pa，Gas1（nebulizer gas）55 Pa，Gas2（heater gas）65 Pa；采用MS/MS二級(jí)質(zhì)譜掃描模式，質(zhì)量數(shù)掃描范圍m/z 100～1 000；動(dòng)態(tài)背景扣除。

253數(shù)據(jù)分析樣品UPLCTOFMS圖譜及數(shù)據(jù)導(dǎo)入MarkerView軟件進(jìn)行PCA多元統(tǒng)計(jì)分析并進(jìn)行t檢驗(yàn)單維統(tǒng)計(jì)分析得到差異代謝產(chǎn)物，進(jìn)而采用AB Sciex的PeakView軟件對(duì)差異代謝產(chǎn)物的色譜峰進(jìn)行識(shí)別和峰匹配，對(duì)照標(biāo)準(zhǔn)譜圖鑒定潛在生物標(biāo)記物種類(lèi)，最后與空白組進(jìn)行t檢驗(yàn)單維統(tǒng)計(jì)分析排除掉給藥前后不發(fā)生顯著變化的代謝物，最終確認(rèn)潛在生物標(biāo)記物。

3結(jié)果

31膽汁樣品UPLCTOFMS總離子流圖

各組大鼠的膽汁樣品UPLCTOFMS總離子流圖見(jiàn)圖1。經(jīng)直觀分析，各組大鼠膽汁代謝物譜有明顯的不同。在本實(shí)驗(yàn)條件下，22～26 min有大量的物質(zhì)被洗脫出，生、醋莪術(shù)代謝物譜的組間差異還需進(jìn)一步分析。

32主成分分析

為了使樣本的分析結(jié)果更加直觀，首先采用主成分分析進(jìn)行LCMS復(fù)雜數(shù)據(jù)的降維處理，以便直觀區(qū)分各組樣本差異。將空白組、生莪術(shù)組和醋莪術(shù)組膽汁代謝物的UPLCTOFMS原始圖譜及數(shù)據(jù)導(dǎo)入MarkerView軟件進(jìn)行主成分分析（PCA分析）并進(jìn)行降維處理，繪制反映組間離散程度的Score Scatter Plot散點(diǎn)圖見(jiàn)圖2，任一點(diǎn)表示一個(gè)對(duì)應(yīng)的樣本，可以發(fā)現(xiàn)給藥組與空白組間的代謝輪廓呈分離趨勢(shì)，提示給藥組與空白組的代謝譜存在組間差異；從圖2中看出，醋品組，同時(shí)生、醋莪術(shù)組之間的代謝輪廓也呈分離趨勢(shì)，提示2組代謝物譜存在差異。

33生、醋莪術(shù)膽汁代謝物組間差異代謝物的探尋

生物標(biāo)記物是能夠代表性反映生物體的生理病理變化或外界環(huán)境刺激的內(nèi)源性物質(zhì)。為了進(jìn)一步明確生、醋莪術(shù)膽汁代謝物的組間差異及尋找具有顯著性差異的生物標(biāo)志物，采用單維統(tǒng)計(jì)分析（獨(dú)立樣本t檢驗(yàn)）對(duì)組間數(shù)據(jù)進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)分析，鑒別出生、醋組間具有顯著性差異的13個(gè)代謝物（P<005），提取相應(yīng)離子峰進(jìn)行比對(duì)，各成分按順序排列為潛在生物標(biāo)記物，見(jiàn)表1。

34生、醋莪術(shù)膽汁代謝物組間差異代謝物的鑒定

從生、醋組膽汁樣品UPLCTOFMS總離子流圖中根據(jù)表1羅列的13個(gè)差異代謝產(chǎn)物的m/z提取相應(yīng)離子峰進(jìn)行比對(duì)，采用AB Sciex的PeakView軟件進(jìn)行峰識(shí)別，對(duì)照METLIN，HMDB等化合物網(wǎng)絡(luò)數(shù)據(jù)庫(kù)，以誤差小于10 ppm為界，綜合分析鑒定了其中的8個(gè)潛在生物標(biāo)記物，見(jiàn)表2。M2～M4，M6～M10及M12（M8，M9為同一物質(zhì)），均為脂肪代謝過(guò)程中的相關(guān)物質(zhì)，提示莪術(shù)醋制后對(duì)機(jī)體的脂質(zhì)代謝過(guò)程產(chǎn)生了重要影響，但這些生物標(biāo)記物的結(jié)構(gòu)確認(rèn)有待進(jìn)一步研究。

35空白組與生、醋莪術(shù)組的差異代謝物分析

根據(jù)表2中8個(gè)潛在生物標(biāo)記物的m/z，從樣品UPLCTOFMS總離子流圖中提取相應(yīng)離子峰，進(jìn)行生品組與空白組、醋品組與空白組的兩兩比對(duì)（由于M8與M9為同一物質(zhì)，故分析時(shí)此2組強(qiáng)度相加），采用單維統(tǒng)計(jì)分析（獨(dú)立樣本t檢驗(yàn)）對(duì)組間數(shù)據(jù)進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)分析，鑒別出空白組與生品組組間、空白組與醋品組組間具有顯著性差異的代謝物（P<005）和不具統(tǒng)計(jì)學(xué)差異的代謝物，見(jiàn)圖3。由圖3可知，M2代謝物在給藥組與空白組間均無(wú)顯著性差異，即此代謝物在給藥組與空白組間無(wú)差異，故排除M2為潛在生物標(biāo)記物；其他7個(gè)已鑒定的生、醋莪術(shù)組差異代謝物中5個(gè)與空白組比較均具顯著性差異，M8與M10代謝物顯示空白組僅與其中一組給藥組具顯著性差異。由此確定M3，M4，M6，M7，M8（含M9），M10，M12 7個(gè)代謝物為生、醋莪術(shù)給藥后的潛在生物標(biāo)記物。

36代謝通路分析

本實(shí)驗(yàn)鑒定出的7種潛在生物標(biāo)記物的主要代謝通路和生物功能見(jiàn)表3，可知這些潛在生物標(biāo)記物主要與機(jī)體的脂質(zhì)代謝途徑相關(guān)，包括磷脂代謝、膽汁酸代謝和脂肪轉(zhuǎn)化過(guò)程。由此推測(cè)莪術(shù)醋制后可能通過(guò)調(diào)控脂質(zhì)代謝過(guò)程，促進(jìn)脂肪轉(zhuǎn)化，提高機(jī)體抗氧化能力而達(dá)到增強(qiáng)散瘀止痛的功效，其具體作用機(jī)制與信號(hào)通道需進(jìn)一步研究。

4討論

中藥經(jīng)炮制增效，效應(yīng)的變化與炮制后化學(xué)成分改變有密切聯(lián)系，而中藥多成分難以其直接闡明；代謝組學(xué)可以從藥物經(jīng)體內(nèi)代謝和藥效作用后的生物標(biāo)記物入手，通過(guò)分析不同狀態(tài)下生物標(biāo)記物的變化規(guī)律，探討中藥效應(yīng)。本文基于UPLCTOFMS的代謝組學(xué)方法，采用單維統(tǒng)計(jì)與多元統(tǒng)計(jì)相結(jié)合，PeakView軟件與網(wǎng)絡(luò)數(shù)據(jù)庫(kù)相比對(duì)的數(shù)據(jù)分析方法，分析醋制前后莪術(shù)提取物對(duì)大鼠膽汁代謝譜的影響，鑒定得7種潛在生物標(biāo)記物（表3），并對(duì)其參與的代謝通路進(jìn)行分析。

41磷脂代謝相關(guān)的潛在生物標(biāo)記物

化合物M6，M4，M12分別被鑒定為溶血磷脂酰膽堿（lysophosphatidylcholine，lysoPC）、磷脂酰乙醇胺（phosphatidylethanolamine，PE）和磷脂酰肌醇（phosphatidylinositol，PI）。

大鼠給予醋莪術(shù)提取液后，體內(nèi)LPC呈降低趨勢(shì)，PE和PI呈升高趨勢(shì)，這3種化合物均為體內(nèi)內(nèi)源性磷脂類(lèi)成分，lysoPC是低密度脂蛋白的主要成分，被認(rèn)為是影響血管內(nèi)皮功能的重要因素之一，在動(dòng)脈粥樣硬化和炎癥疾病中有重要作用。一般而言，它在細(xì)胞或組織中含量很少，如果濃度過(guò)高則會(huì)對(duì)細(xì)胞的膜系統(tǒng)造成傷害[5]。PE是甘油磷脂之一，是構(gòu)成生物膜脂雙層的基本骨架，王亮等[6]發(fā)現(xiàn)肝源性PE對(duì)肝癌細(xì)胞的生長(zhǎng)具有明顯的抑制作用，且能誘導(dǎo)其發(fā)生凋亡。PI是第二信使的前體，其4，5位羥基被磷酸化生成的磷脂酰肌醇4，5二磷酸（phosphatidylinositol 4，5bisphosphate，PIP2）是細(xì)胞膜磷脂的重要組成，主要存在于細(xì)胞膜的內(nèi)層。在激素等刺激下可被裂解為甘油二酯和三磷酸肌醇（inositol triphosphate，IP3），均為胞內(nèi)傳遞刺激信號(hào)至細(xì)胞核的胞內(nèi)第二信使。由此推測(cè)，莪術(shù)醋制后可以下調(diào)lysoPC的水平，上調(diào)PE和PI水平，調(diào)控機(jī)體的磷脂代謝，從而產(chǎn)生優(yōu)于生莪術(shù)的療效，起到“醋制入肝經(jīng)”的效果。

42膽汁酸代謝相關(guān)的潛在生物標(biāo)記物

化合物M8和M9被鑒定為?；蛆Z去氧膽酸（tauroursodeoxycholic acid，TCDCA），化合物M8和M9為T(mén)CDCA的不同加合離子峰，TCDCA為膽汁酸的重要組成成分。膽汁酸是膽汁中的一類(lèi)膽烷酸的總稱(chēng)，按結(jié)構(gòu)分為游離型和結(jié)合型，其中結(jié)合型膽汁酸是一類(lèi)重要的生命物質(zhì)，對(duì)脂肪代謝和調(diào)節(jié)膽固醇、磷脂、膽紅素的溶解平衡及穩(wěn)定起著重要作用[7]。與生莪術(shù)組相比，醋莪術(shù)組膽汁中的TCDCA量呈升高趨勢(shì)，且由于?；蛆Z去氧膽酸在生品中未見(jiàn)與空白組的差異，提示莪術(shù)醋制后可調(diào)節(jié)膽汁酸的代謝從而達(dá)到入肝經(jīng)的效果。

43與調(diào)控N酰基乙醇胺水解反應(yīng)平衡作用相關(guān)的潛在生物標(biāo)記物

化合物M3鑒定為Ncyclohexanecarbonylpenta decylamine NcyclohexanecarbonylpentadecylamineN cyclohexanecarbonylpentadecylamine是體內(nèi)N脂肪?；掖及匪饷福∟acylethanolaminehydrolyzing acid amidase，NAAA）的選擇性抑制劑[8]。NAAA是一類(lèi)與酸性神經(jīng)酰胺結(jié)構(gòu)和功能相類(lèi)似的水解酶，主要存在于溶酶體中，在巨噬細(xì)胞中有較高的表達(dá)，能夠?qū)⒅舅徭滈L(zhǎng)度為C12～C20的N酰基乙醇胺（Nacylethanolamines，NAEs）水解為相應(yīng)的脂肪酸和乙醇胺，從而抑制乙醇胺在體內(nèi)生物活性的發(fā)揮。如N花生四烯酰乙醇胺（anandamide，AEA）儲(chǔ)存與肝臟中，對(duì)于各種肝病均有潛在的治療作用；棕櫚酸乙醇胺（Npalmitoylethanolamine，PEA）是一類(lèi)重要的鎮(zhèn)痛、抗炎和神經(jīng)保護(hù)物質(zhì)。本實(shí)驗(yàn)發(fā)現(xiàn)醋莪術(shù)組大鼠膽汁中NAAA的選擇性抑制劑含量始終高于生莪術(shù)組，提示莪術(shù)醋制后可能具有調(diào)控N?；掖及匪夥磻?yīng)平衡的作用。

44與脂肪代謝相關(guān)的潛在生物標(biāo)記物

化合物M7，M10分別被鑒定為deterrol stearate，人參環(huán)氧炔醇酯（panaxydol linoleate）。

deterrol stearate及panaxydol linoleate均為體內(nèi)脂肪酸代謝途徑中的化合物，醋制后呈現(xiàn)不同程度的升高，提示莪術(shù)醋制前后可能對(duì)機(jī)體脂質(zhì)代謝途徑產(chǎn)生了重要影響。

由以上結(jié)果可知，與生莪術(shù)組相比，醋莪術(shù)組大鼠膽汁中內(nèi)源性代謝物中涉及到脂質(zhì)代謝過(guò)程的標(biāo)記物的量增加，提示醋制莪術(shù)組脂質(zhì)代謝強(qiáng)于生莪術(shù)組，二者效應(yīng)存在差異，代謝物組學(xué)可用于探討炮制對(duì)中藥效應(yīng)的影響研究。

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[責(zé)任編輯曹陽(yáng)陽(yáng)]