泮托拉唑鈉腸溶膠囊的質(zhì)量控制及穩(wěn)定性研究

尹美艷，高　蓉

(杭州中美華東制藥有限公司，浙江 杭州　310000)

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泮托拉唑鈉腸溶膠囊的質(zhì)量控制及穩(wěn)定性研究

尹美艷，高蓉

(杭州中美華東制藥有限公司，浙江 杭州310000)

摘要:目的建立泮托拉唑鈉腸溶膠囊含量及有關(guān)物質(zhì)的質(zhì)量控制方法，并對上市品進(jìn)行穩(wěn)定性研究。方法以Agilent C(18)柱(250 nm×4.6 nm，5 μm)為色譜柱，流動相為磷酸二氫鈉緩沖(1.20 g的磷酸二氫鈉溶解于1 000 mL的水中，用磷酸調(diào)節(jié)pH至7.0)—乙腈(68∶32)，流速1 mL·min(-1)，檢測波長288 nm，對膠囊進(jìn)行有關(guān)物質(zhì)及含量的檢測；采用加速試驗(yàn)，在溫度(40±2)℃、相對濕度(75±5)%的條件下放置6個(gè)月，考察其穩(wěn)定性。結(jié)果泮托拉唑鈉在(1.0～10.0)×10(-3 ) g·L(-1)濃度范圍內(nèi)線性關(guān)系良好，檢 測限為0.20 ng，定量限為0.60 ng，平均加樣回收率為100.57%(RSD=0.41%)，測定樣品平均含量為100.67%，有關(guān)物質(zhì)均小于0.2%。穩(wěn)定性試驗(yàn)結(jié)果含量在99.70%～101.16%，有關(guān)物質(zhì)小于0.2% 。結(jié)論該方法快速，簡單，穩(wěn)定，重現(xiàn)性好，可作為泮托拉唑鈉腸溶膠囊的含量及有關(guān)物質(zhì)的檢測方法。穩(wěn)定性檢測結(jié)果符合要求。

關(guān)鍵詞：泮托拉唑鈉腸溶膠囊；HPLC法；含量；有關(guān)物質(zhì)；穩(wěn)定性

泮托拉唑鈉是繼奧美拉唑鈉、蘭索拉唑鈉之后的為第三代質(zhì)子泵抑制劑，由德國百克頓公司研制生產(chǎn)，于1994年在南非首次上市?；瘜W(xué)名為：5-二氟甲氧基-2-[(3,4-二甲氧基-2-吡啶基)-甲基]亞硫酰基-1H-苯并咪唑鈉鹽一水合物，分子式為C16H12F2N3NaO4S·H2O。臨床主要用于治療急性消化性潰瘍(胃、十二指腸潰瘍)、反流性食管炎及卓—艾氏綜合征。 通過作用于H+/K+-ATP酶抑制胃酸和組胺分泌、作用時(shí)間長、起效快、強(qiáng)度大等優(yōu)點(diǎn)成為治療潰瘍的一線藥物?？?jié)儻熜Х矫嬉黠@優(yōu)于雷尼替丁，生物利用度高于奧美拉唑和蘭索拉唑[1-2]。泮托拉唑鈉腸溶膠囊國外藥典未收載，進(jìn)口注冊標(biāo)準(zhǔn)及2015版《中國藥典》[3-4]收載了泮托拉唑鈉及泮托拉唑鈉腸溶膠囊的HPLC的檢驗(yàn)方法，陳玉玲等雖報(bào)道過有關(guān)泮托拉唑鈉腸溶膠囊有關(guān)物質(zhì)的檢測方法[5-7]，通過試驗(yàn)發(fā)現(xiàn)上述方法存在分離度低，重現(xiàn)性差等弊端，本文通過對HPLC條件的優(yōu)化得到重現(xiàn)性好、分離度高、方便快捷的高效液相條件，使得泮托拉唑鈉腸溶膠囊質(zhì)量得到有效控制。

1儀器與試藥

Agilent 1260型高效液相色譜儀(DAD)，安捷倫色譜工作站，電子分析天平(XSE 105DU)。色譜純乙腈(Fisher公司)，重蒸餾水，磷酸二氫鈉(分析純，國藥集團(tuán)化學(xué)試劑有限公司)，磷酸(分析純,國藥集團(tuán)化學(xué)試劑有限公司)，氫氧化鈉(分析純,國藥集團(tuán)化學(xué)試劑有限公司)。泮托拉唑鈉對照品(中國食品藥品檢定研究院，批號100575-201408)，泮托拉唑鈉腸溶膠囊(山東綠葉制藥有限公司，批號14110202，15021001，15031802，規(guī)格40 mg)。

2方法和結(jié)果

2.1色譜條件色譜柱：Agilent C18柱(250 nm×4.6 nm，5 μm)；流動相：磷酸二氫鈉緩沖(1.20g的磷酸二氫鈉溶解于1 000 mL的水中，用磷酸調(diào)節(jié)pH至7.0)-乙腈(68∶32)；流速：1 mL·min-1；檢測波長：288 nm；進(jìn)樣量：20 μL；柱溫：40℃。

2.2溶液配制

2.2.1含量測定對照品溶液取泮托拉唑鈉對照品適量，加入0.001 mol·L-1氫氧化鈉溶液-乙腈(1∶1)混合溶劑溶解并定量稀釋至每1 mL含有0.04 mg的溶液，備用。

2.2.2含量測定供試品溶液取泮托拉唑鈉腸溶膠囊20粒，取內(nèi)容物研細(xì)，精密稱量適量(約相當(dāng)于泮托拉唑鈉40 mg)，置100 mL量瓶中，加入0.001 mol·L-1氫氧化鈉溶液—乙腈(1∶1)混合溶劑，超聲使泮托拉唑鈉溶解，補(bǔ)加上述溶劑稀釋至刻度，搖勻，取濾液10 mL，置100 mL量瓶中，加上述溶劑稀釋至刻度，搖勻，作為供試品溶液備用。

2.2.3 有關(guān)物質(zhì)測定供試品溶液稱取“2.2.2”項(xiàng)中泮托拉唑鈉腸溶膠囊內(nèi)容物適量，研細(xì)，取粉末精密稱定，置50 mL的量瓶中，加入0.001 mol·L-1氫氧化鈉溶液—乙腈(1∶1)混合溶劑適量，超聲溶解，加入上述溶液稀釋至刻度，搖勻。配制成1 mL中含有約0.4 mg泮托拉唑鈉的溶液。

2.2.4 有關(guān)物質(zhì)對照溶液精密量取“2.2.3”項(xiàng)中的有關(guān)物質(zhì)供試品溶液1 mL，置200 mL的量瓶中，加入0.001 mol·L-1氫氧化鈉溶液—乙腈(1∶1)混合溶劑稀釋至刻度，搖勻。

2.2.5 陰性對照溶液按照處方比例稱取羥丙甲纖維素(Hydroxypropyl Methyl Cellulose，HPMC )、吐溫-80(Tween-80)相當(dāng)于一粒膠囊的輔料量，置于100 mL量瓶中，加0.001 mol·L-1氫氧化鈉溶液—乙腈(1∶1)混合溶劑稀釋至刻度，超聲，濾過，取1 mL加入上述溶劑稀釋與樣品相同倍數(shù)，即得。

2.3方法學(xué)考察

2.3.1專屬性試驗(yàn)取“2.2.1”項(xiàng)下泮托拉唑鈉對照品溶液精密量取 20 μL進(jìn)色譜儀，按照上述色譜條件測定，記錄色譜圖。按照上述方法分別取“2.2.2”項(xiàng)下含量供試品溶液、 “2.2.3”項(xiàng)有關(guān)物質(zhì)供試品溶液、“2.2.4”項(xiàng)有關(guān)物質(zhì)對照及“2.2.5”陰性對照品溶液，稀釋至同等濃度，進(jìn)色譜儀測定，記錄色譜圖，結(jié)果輔料峰未干擾測定(圖1)。分別取泮托拉唑鈉腸溶膠囊適量，取內(nèi)容物研細(xì)，精密稱定粉末(約相當(dāng)于主藥40 mg)進(jìn)行如下測試：(1)酸破壞：將精密稱定后的粉末置具塞試管中，用0.1 mol·L-1鹽酸溶液25 mL，搖勻，置于100℃水浴鍋中4 h，放冷。加入0.1 mol·L-1氫氧化鈉中和并轉(zhuǎn)移至100 mL的容量瓶中，用0.001 mol·L-1氫氧化鈉溶液—乙腈(1∶1)混合溶劑稀釋至刻度，搖勻，過濾。(2)堿破壞：將精密稱定后的粉末置具塞試管中，用0.1 mol·L-1氫氧化鈉溶液25 mL，搖勻，置于100℃水浴鍋中4 h，放冷。加入0.1 mol·L-1鹽酸中和并轉(zhuǎn)移至100 mL的容量瓶中，用0.001 mol·L-1氫氧化鈉溶液—乙腈(1∶1)混合溶劑稀釋至刻度，搖勻，過濾。(3)氧化破壞：將精密稱定后的粉末置具塞試管中，加入30%過氧化氫溶液10 mL，搖勻，放置12 h，加0.001 mol·L-1氫氧化鈉溶液—乙腈(1∶1)混合溶劑稀釋至刻度，搖勻，過濾。(4)加熱破壞：將精密稱定后的粉末置具塞試管中，加0.001 mol·L-1氫氧化鈉溶液-乙腈(1∶1)混合溶劑稀釋，配置成濃度0.04 g·L-1溶液25 mL，置于100℃水浴鍋中4 h，放冷，加上述溶液轉(zhuǎn)移至100 mL容量瓶中，用上述溶液稀釋至刻度，搖勻，過濾。(5)光破壞：將精密稱定后的粉末置具塞試管中，加0.001 mol·L-1氫氧化鈉溶液-乙腈(1∶1)混合溶劑稀釋，配置成0.04 g·L-1溶液25 mL，置于強(qiáng)光(5 000 Lx)下照射12 h后，放冷。按照上述色譜條件進(jìn)行測定，記錄色譜圖。結(jié)果顯示樣品在經(jīng)過酸、堿、氧化、加熱、光照破壞后主成分與各降解產(chǎn)物可以有效分離(圖2)。

圖1　HPLC圖譜

圖2　泮托拉唑鈉方法學(xué)圖譜

2.3.2系統(tǒng)適用性試驗(yàn)分別精密量取“2.2.1”項(xiàng)中泮托拉唑鈉對照品溶液、“2.2.2”泮托拉唑鈉腸溶膠囊供試品溶液及“2.2.5”項(xiàng)陰性對照溶液20 μL，按上述色譜條件進(jìn)樣測定，色譜柱的理論塔板數(shù)按照泮托拉唑鈉計(jì)算不得少于3 000，泮托拉唑峰與相鄰雜質(zhì)峰分離度不低于2.0。

2.3.3檢測限及定量限測定取“2.2.1”項(xiàng)中配制的泮托拉唑鈉對照品溶液，稀釋至0.4×10-3g·L-1，按照上述色譜條件進(jìn)樣，根據(jù)信噪比法進(jìn)行試驗(yàn)，得到的結(jié)果：檢測限為0.20 ng(S/N=3)，定量限為0.60 ng(S/N=10)。

2.3.4精密度及重復(fù)性試驗(yàn)取“2.2.1”項(xiàng)下泮托拉唑鈉對照品溶液，按照上述色譜條件進(jìn)樣，重復(fù)測定6次，記錄泮托拉唑鈉的峰面積，計(jì)算相對標(biāo)準(zhǔn)偏差RSD=0.31%，表明儀器精密度良好。

表1　加樣回收率試驗(yàn)

取14110202批次泮托拉唑鈉腸溶膠囊6粒，分別取內(nèi)容物研細(xì)，精密稱量適量粉末(相當(dāng)于主藥20 mg)，加0.001 mol·L-1氫氧化鈉溶液—乙腈(1∶1)混合溶劑配制成濃度為0.4 g·L-1供試品溶液6份，按照上述色譜條件在同一高效液相色譜儀上分別進(jìn)樣，記錄泮托拉唑鈉峰面積，計(jì)算相對標(biāo)準(zhǔn)偏差RSD=0.37%，顯示重現(xiàn)性良好。

2.3.5加樣回收率試驗(yàn)按照處方比例稱量適量輔料(相當(dāng)于1粒膠囊輔料的量)，分別加入處方量的80%，100%，120%的泮托拉唑鈉的對照品，加0.001 mol·L-1氫氧化鈉溶液—乙腈(1∶1)混合溶劑溶解并稀釋至刻度，搖勻，每個(gè)含量的溶液分別取3份作為供試品溶液。精密量取20 μL溶液，按照上述色譜條件進(jìn)高效液相色譜儀，記錄圖譜，結(jié)果見表1。計(jì)算得平均加樣回收率為100.57%，RSD=0.41%。

2.3.6樣品溶液穩(wěn)定性試驗(yàn)取14110202批次樣品制備成濃度為0.4 g·L-1供試品溶液，分別在0、2、4、6、12、18 h精密吸取20 μL進(jìn)樣，記錄色譜圖，根據(jù)泮托拉唑鈉峰面積，計(jì)算其相對標(biāo)準(zhǔn)偏差RSD為0.07%，說明在18 h內(nèi)泮托拉唑鈉在溶液內(nèi)穩(wěn)定。

2.4樣品測定

2.4.1有關(guān)物質(zhì)測定取3批上市品泮托拉唑鈉腸溶膠囊各10粒，取內(nèi)容物研細(xì)，精密稱量適量粉末(相當(dāng)于泮托拉唑鈉40 mg)，置100 mL的量瓶中，加0.001 mol·L-1氫氧化鈉溶液—乙腈(1∶1)混合溶劑振蕩溶解，并稀釋至刻度，搖勻，過濾，濾液作為供試品。取“2.2.1”項(xiàng)中泮托拉唑鈉對照品溶液稀釋與供試品同等濃度作為對照溶液。精密量取供試品和對照品溶液20 μL進(jìn)高效液相色譜儀，記錄色譜圖。根據(jù)面積歸一化法計(jì)算有關(guān)主峰及有關(guān)物質(zhì)的峰面積。

2.4.2含量測定取3批次上市品泮托拉唑鈉腸溶膠囊各10粒，取內(nèi)容物研細(xì)，制備成濃度同2.2.1項(xiàng)中濃度作為供試品溶液。分別精密量取“2.2.1”項(xiàng)中泮托拉唑鈉對照品溶液稀釋與供試品各20 μL，進(jìn)高效液相色譜儀，記錄圖譜。按照外標(biāo)法分別測定測定3批上市品含量。3批樣品的有關(guān)物質(zhì)及含量的結(jié)果見表2。

表2　泮托拉唑鈉腸溶膠囊有關(guān)物質(zhì)及含量測定結(jié)果

表3　泮托拉唑鈉腸溶膠囊的穩(wěn)定性果

2.5穩(wěn)定性研究參照《中國藥典》2015版附錄9001 原料藥物與制劑穩(wěn)定性試驗(yàn)指導(dǎo)原則，對市售的3批制劑(14110202，15021001，15031802)進(jìn)行加速試驗(yàn)，取市售最小包裝，在溫度(40±2)℃、相對濕度(75±5)%的條件下放置6個(gè)月。分別于1月、2月、3月和6月取樣一次，按照“2.4”項(xiàng)中有關(guān)物質(zhì)及含量的測定方法對泮托拉唑鈉腸溶膠囊的穩(wěn)定性進(jìn)行考察，結(jié)果見表3。

3討論

泮托拉唑鈉因含有亞磺酰基苯并咪唑機(jī)構(gòu)，導(dǎo)致產(chǎn)品對熱、光不穩(wěn)定，在酸性條件下不穩(wěn)定[8]，在做產(chǎn)品的方法學(xué)時(shí)，選擇0.001 mol·L-1氫氧化鈉溶液—乙腈(1∶1)的混合溶液溶解測定，避免在偏酸或中性的溶劑中產(chǎn)生降解雜質(zhì)。

本文通過對比《中國藥典》提供的Kromasil、Waters及Agilent的C18柱，通過在同一儀器上的驗(yàn)證得到Agilent的C18柱具有分離度高、柱效穩(wěn)定，能有效分離雜質(zhì)優(yōu)點(diǎn)，并且在288 nm，主峰和破壞雜質(zhì)峰有最大吸收。通過對泮托拉唑鈉腸溶膠囊的測定結(jié)果，在擬定的HPLC條件下，主峰、輔料峰及有關(guān)物質(zhì)能夠達(dá)到基線分離，符合檢測要求。方便簡便，快捷，且能滿足質(zhì)量控制要求。

通過對3批不同批次的市售藥品進(jìn)行了6個(gè)月加速試驗(yàn)，從測定結(jié)果可以看出，產(chǎn)品穩(wěn)定性較好，在制劑的條件下能有效避免原料藥不穩(wěn)定的因素，說明產(chǎn)品的制劑工藝成熟、穩(wěn)定，能有效控制雜質(zhì)，保證含量，對藥物在臨床的使用提供安全保障。

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The study of quality and stability on pantoprazole sodium enteric-coated capsules

YIN Mei-yan,GAO Rong

(HuadongMedicineCo.,LTD.,Hangzhou,Zhejiang310000)

Abstract:ObjectiveAn HPLC method was established for determination of the content of Pantoprazole Sodium Enteric-Coated Capsules and Its Related Substances,and study the stability .Methods The chromatographic separation was performed on AgilentC(18)(250 nm×4.6 nm，5 μm),Sodium dihydrogen phosphate buffer(dissolved 1.20 g sodium dihydrogen phosphate in 1 000 mL water,and ajust pH 7.0 with phosphoric acid)—acetonitrile=68∶32,the flow rate was 1.0 mL·min(-1),the detection wavelength was 288 nm,and detective the related substances and the content . Theacceleration test was carried outat temperature (40±2)℃,relative humidity of (75±5)%,and test the result.ResultsThe linear of Pantoprazole Sodium of atorvastatin calcium was (1.0～10.0)×10(-3) g·L(-1),the limits of detection was 0.20 ng,the limit of quantitation was 0.60 ng,the average recovery was 100.57%(RSD=0.41%),Determination of the sample average content was 100.67%,and the related substance was less than 0.2%. The result of stability test that the content was 99.70%～101.16%,the related substance was less than 0.2%.ConeclusionThe method was quick,simple,stable,good repeatability,and it could be used as the content of pantoprazole sodium enteric-coated capsules and its related substances. The stability results conform to the requirement.

Key words:pantoprazole sodium enteric-coated capsules;HPLC;content;related substances;stability

(收稿日期:2015-10-16,修回日期:2015-12-21)

doi:10.3969/j.issn.1009-6469.2016.04.013