三七總皂苷對(duì)血脂異常動(dòng)脈粥樣硬化病人血管內(nèi)皮功能及單核細(xì)胞NF-κB表達(dá)的影響

江小萍，曾凡鵬，劉首明 ，林小鴛，馮素蓮，沈祖泓

廣東省清遠(yuǎn)市中醫(yī)院(廣東清遠(yuǎn) 511500)，E-mail：jiangping6312@163.com

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三七總皂苷對(duì)血脂異常動(dòng)脈粥樣硬化病人血管內(nèi)皮功能及單核細(xì)胞NF-κB表達(dá)的影響

江小萍，曾凡鵬，劉首明 ，林小鴛，馮素蓮，沈祖泓

廣東省清遠(yuǎn)市中醫(yī)院(廣東清遠(yuǎn) 511500)，E-mail：jiangping6312@163.com

摘要：目的探討三七總皂苷對(duì)高脂血癥動(dòng)脈粥樣硬化(AS)病人血管內(nèi)皮功能、核因子-κB(NF-κB)和頸動(dòng)脈內(nèi)膜中層厚度(CIMT)及斑塊的影響。方法將71例CIMT≥0.9 mm或(和)有頸動(dòng)脈粥樣硬化斑塊的高脂血癥病人隨機(jī)分組，三七總皂苷組與阿托伐他汀組。采用酶聯(lián)免疫法及彩色超聲顯像儀等，觀察兩組用藥前后NF-κB、細(xì)胞黏附分子-1(ICAM-1)、一氧化氮(NO)、前列環(huán)素(PGI2)、超氧化物歧化酶(SOD)、谷胱甘肽(GSH)、CIMT-1(CIMT)和斑塊的變化。結(jié)果兩組服藥12周后NF-κB、CIMT和斑塊積分較各自服藥前明顯降低(P<0.05)，NO、PGI2、SOD、GSH較各自服藥前明顯升高(P<0.05)。兩組用藥過程中出現(xiàn)的不良反應(yīng)比較差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。結(jié)論 三七總皂苷能保護(hù)高脂血癥AS病人血管內(nèi)皮功能，抑制頸動(dòng)脈內(nèi)膜增厚及動(dòng)脈粥樣硬化斑塊增大，延緩AS的進(jìn)展，其機(jī)制與其降低血清NF-κB、ICAM，升高NO、PGI2、SOD、GSH水平有關(guān)。

關(guān)鍵詞：動(dòng)脈粥樣硬化；三七總皂苷；核因子-κB；高脂血癥；血管內(nèi)皮功能

血管內(nèi)皮細(xì)胞(VEC)的損傷與功能障礙在動(dòng)脈粥樣硬化(AS)進(jìn)展中具有重要的作用，改善和提高血管內(nèi)皮細(xì)胞功能、減輕內(nèi)皮細(xì)胞損傷是防治AS的重要環(huán)節(jié)[1]。核因子-κB ( NF-κB )是一種調(diào)控基因表達(dá)的DNA結(jié)合蛋白， 其可通過調(diào)控細(xì)胞因子和黏附分子的表達(dá)， 參與機(jī)體的各種炎癥和免疫反應(yīng)。大量研究發(fā)現(xiàn)[2-3]，在動(dòng)脈粥樣硬化部位和纖維斑塊部位均發(fā)現(xiàn)了激活的NF-κB，而正常的血管很少或沒有NF-κB的表達(dá)，證明NF-κB在動(dòng)脈粥樣硬化的發(fā)生、發(fā)展過程中起重要作用。三七總皂甙(tPNS)作為臨床的常用處方藥廣泛應(yīng)用于AS、高脂血癥及冠心病等血管性疾病的治療中，具有良好的調(diào)脂、抗氧化、抑制炎癥反應(yīng)、抗血小板聚集作用[4]。本研究旨在觀察tPNS對(duì)高脂血癥的頸動(dòng)脈粥樣硬化病人血管內(nèi)皮的保護(hù)及血管炎癥的抑制作用，以探索動(dòng)脈早期粥樣硬化的有效治療方法，分析其可能機(jī)制，進(jìn)一步闡明其抗動(dòng)脈粥樣硬化的機(jī)制。

1資料與方法

1.1研究對(duì)象納入2012年10月—2013年12月在我院住院的血脂異常病人75例。納入標(biāo)準(zhǔn)：血脂異常、頸動(dòng)脈內(nèi)膜中層厚度(CIMT)≥0.9 mm或(和)有頸動(dòng)脈粥樣硬化斑塊的病人；血脂異常符合《中國成人血脂異常防治指南》[5]的診斷標(biāo)準(zhǔn)。排除標(biāo)準(zhǔn)：已知或在隨訪期間發(fā)生患嚴(yán)重肝腎疾病、內(nèi)分泌代謝疾病、結(jié)締組織疾病和腫瘤的病人。所有病人入選時(shí)均簽署知情同意書，71例隨機(jī)分成兩組(4例失訪)。本研究經(jīng)我院倫理委員會(huì)批準(zhǔn)。

1.2方法

1.2.1主要試劑與儀器三七總皂苷(血塞通軟膠囊，昆明制藥集團(tuán)股份有限公司，國藥準(zhǔn)字Z20040016)，阿托伐他汀鈣片(輝瑞制藥有限公司，國藥準(zhǔn)字H20051408)，一氧化氮(NO)、前列環(huán)素(PGI2)、超氧化物歧化酶(SOD)、谷胱甘肽(GSH)測定試劑盒(南京建成生物工程研究所)，單克隆抗體CD54-PE、IgG-PE(美國PharMingen)，細(xì)胞黏附分子-1(ICAM-1)測定試劑盒購自生工生物工程(上海)股份有限公司，彩色多普勒超聲診斷儀(GE Vivid7)。

1.2.2檢測CIMT由經(jīng)驗(yàn)豐富的醫(yī)生對(duì)所有病人進(jìn)行頸動(dòng)脈超聲檢查。采用美國通用彩色多普勒超聲診斷儀(GE Vivid7)，周圍血管探頭頻率為(7.5～10) MHz，于采血前后24 h內(nèi)測量雙側(cè)頸總動(dòng)脈、頸內(nèi)動(dòng)脈和頸動(dòng)脈分叉處IMT及動(dòng)脈硬化斑塊。CIMT<0.9 mm定義為內(nèi)膜中層厚度正常，0.9 mm≤CIMT<1.3 mm 為內(nèi)膜中層增厚，以內(nèi)膜局限性突出管腔、內(nèi)膜厚度≥1.3 mm為斑塊形成指標(biāo)。頸動(dòng)脈粥樣硬化斑塊積分方法：測定雙側(cè)頸總動(dòng)脈、頸內(nèi)動(dòng)脈和頸動(dòng)脈分叉處斑塊面積，將斑塊面積相加即為其斑塊總積分。

1.2.3分組將入選的71例病人隨機(jī)分為兩組。三七總皂苷組(A組)36例，男21例，女15例；年齡64.81歲±12.41歲。阿托伐他汀組(B組)35例，男20例，女15例；年齡64.29歲±13.46歲。

1.3治療71例病人均予飲食治療和改善生活方式等處理，對(duì)高血壓病、糖尿病病人予降壓、降糖治療。A組予三七總皂苷100 mg口服，每日3次，共12周。B組予阿托伐他汀鈣片20 mg口服，每天一次，共12周。停用阿托伐他汀警戒值[5]：血清總膽固醇(TC)<2.6 mmol/L；服藥期間出現(xiàn)肌痛同時(shí)肌酸激酶(CK)正常高限5倍、天門冬酸氨基轉(zhuǎn)移酶(AST)正常高限3倍、肌酐221 mmol/L等嚴(yán)重副反應(yīng)需停藥。

1.4觀察指標(biāo)記錄入選病人的年齡、性別、體重指數(shù)、吸煙指數(shù)、高血壓病、糖尿病，在入選病人服藥前、服藥12周分別測定下列指標(biāo)，并取空腹血測血常規(guī)、肝腎功能、CK-κB、HDL-C、LDL-C、TG、TC和血糖，采血前 72 h 禁酒及高脂飲食，空腹 12 h 取靜脈血。

1.4.1NF-κB表達(dá)測定分離單核細(xì)胞：6 mL抗凝血等體積PBS 緩沖液稀釋后緩慢加于6 mL的淋巴分離液上，以3 000 r/min離心25 min，吸出試管中間的一層乳白色液體，加入等體積的PBS緩沖液稀釋液1 500 r/min離心10 min，共洗滌3次，棄上清液，瑞氏染色試驗(yàn)活細(xì)胞比例；第二，各組分離的單核細(xì)胞4%多聚甲醛固定，一抗為NF-κB P65兔多克隆IgG抗體，稀釋比例為1∶200；余步驟按試劑盒操作步驟進(jìn)行。

1.4.2血清細(xì)胞黏附分子的表達(dá)入選病人均在入院后48 h內(nèi)抽取空腹靜脈血5 mL，3 000 r/min離心10 min分離血清，置于-20℃冰箱內(nèi)保存。采用酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)(ELISA)雙抗體夾心法測定血漿ICAM-1表達(dá)。

1.4.3SOD、GSH測定收集各組血清，采用黃嘌呤過氧化物酶法、硫代巴比妥酸比色法分別測定SOD、GSH含量。

1.4.4NO、PGI2測定收集各組病人血清，按試劑盒操作步驟測定NO、PGI2含量。

1.4.5觀察用藥后反應(yīng)胃腸道反應(yīng)，肝腎功能，出血情況及其他副反應(yīng)。

2結(jié)果

入選病人75例，隨訪12周，資料完全病例71例，A組36例，B組35例，男41例，女30例。失訪4例，其中違背實(shí)驗(yàn)方案，未按時(shí)用藥或中途停藥者3例；服用阿托伐他汀出現(xiàn)轉(zhuǎn)氨酶升高，終止用藥1例。

2.1兩組臨床資料分析兩組性別、年齡、體重指數(shù)、吸煙指數(shù)、高血壓病、糖尿病等比較差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)，具有可比性。詳見表1。

表1　兩組病人基本情況比較(±s)

2.2兩組監(jiān)測指標(biāo)結(jié)果兩組服藥前、服藥12周后NF-κB、ICAM-1、NO、PGI2、SOD、GSH水平、CIMT和斑塊積分比較差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。兩組病人服藥12周HDL-C、CK、GLU、HbA1C較各自服藥前無明顯變化 ，LDL-C、TG、TC和NF-κB、ICAM-1水平、CIMT和斑塊積分較各自服藥前明顯降低(P<0.05)。兩組NO、PGI2、SOD、GSH水平較各自服藥前明顯升高(P<0.05)。詳見表2。

表2　兩組監(jiān)測指標(biāo)比較(±s)

2.3兩組不良反應(yīng)兩組用藥過程中胃腸道反應(yīng)、肝腎功能、出血情況及其他副反應(yīng)比較差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。三七總皂苷組無不良反應(yīng)。阿托伐他汀組ALT異常1例，AST異常1例。

3討論

在動(dòng)脈粥樣硬化的發(fā)生和發(fā)展過程中，NF-κB可以調(diào)節(jié)一系列基因的表達(dá)，包括細(xì)胞因子、單核細(xì)胞趨化蛋白和黏附分子(VCAM-1、ICAM-1)等的表達(dá)，它是細(xì)胞因子、黏附分子和生長因子間重要的聯(lián)絡(luò)因子，可導(dǎo)致動(dòng)脈硬化斑塊的形成、生長和斑塊破裂[6-7]。研究表明[8]，抑制NF-κB表達(dá)，可改善抗氧自由基功能、保護(hù)血管內(nèi)皮，防止AS斑塊的形成和發(fā)展，促進(jìn)斑塊的穩(wěn)定。本研究結(jié)果發(fā)現(xiàn)，病人外周血單核細(xì)胞NF-κB、血清ICAM-1水平在兩組用藥后明顯低于用藥前、CIMT及斑塊積分明顯低于用藥前，SOD、GSH水平明顯高于用藥前，提示三七總皂苷、阿托伐他汀均可有效降低NF-κB、ICAM-1的表達(dá)，減輕炎癥反應(yīng)，保護(hù)血管內(nèi)皮功能，抑制頸動(dòng)脈內(nèi)膜增厚及動(dòng)脈粥樣硬化斑塊增大。

NO是血管內(nèi)皮釋放的重要舒血管因子，具有擴(kuò)張血管、抗血小板聚集、抑制平滑肌細(xì)胞增殖等保護(hù)作用[9]。PGI2主要由內(nèi)皮細(xì)胞合成，具有強(qiáng)大的擴(kuò)血管作用和抗血小板聚積作用，它不僅可以擴(kuò)張小血管，同時(shí)還能抑制血小板聚集、抗栓，抑制炎性介質(zhì)的釋放、抗重構(gòu)。高脂血癥可引起內(nèi)皮細(xì)胞損傷和內(nèi)皮細(xì)胞通透性增加，可使內(nèi)皮細(xì)胞合成和分泌的多種血管活性物質(zhì)和細(xì)胞因子間的平衡遭到破壞：NO、PGI2的合成減少或生物活性降低，導(dǎo)致內(nèi)皮調(diào)節(jié)血管張力、抗血小板聚集和白細(xì)胞黏附、抗凝血和血栓形成等功能障礙，最終導(dǎo)致動(dòng)脈內(nèi)膜脂紋、纖維斑塊和(或)粥樣斑塊形成[10]。傳統(tǒng)中藥三七具有抗血栓、降血脂、抑制血小板聚集、改善內(nèi)皮功能等作用。前期研究發(fā)現(xiàn)缺氧再給氧可使人臍靜脈內(nèi)皮細(xì)胞株NO及PGI2含量明顯下降，細(xì)胞活力明顯降低；tPNS能有效增加NO及PGI2含量、改善細(xì)胞活力，改善內(nèi)皮細(xì)胞分泌功能[11]。本研究發(fā)現(xiàn)，病人外周血NO、PGI2水平在兩組用藥后明顯高于用藥前、CIMT及斑塊積分明顯低于用藥前，提示三七總皂苷、阿托伐他汀均可有效提升NO、PGI2含量，保護(hù)血管內(nèi)皮功能，抑制頸動(dòng)脈內(nèi)膜增厚及動(dòng)脈粥樣硬化斑塊增大。

長期服用三七總皂苷能有效降低AS病人NF-κB、ICAM-1的表達(dá)，有效增加病人血清NO及PGI2含量，保護(hù)血管內(nèi)皮功能，抑制頸動(dòng)脈內(nèi)膜增厚及動(dòng)脈粥樣硬化斑塊增大，延緩AS的進(jìn)展。

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(本文編輯王雅潔)

The Influence of Total Panax Notoginseng Saponins on Vascular Endothelium Function and Nuclear Factor kappa-B Expression in Patients with Atherosclerosis and Hyperlipidemia

Jiang Xiaoping，Zeng Fanpeng，Liu Shouming，Lin Xiaoyuan，F(xiàn)eng Sulian，Shen Zuhong

Qingyuan Hospital of Traditional Chinese Medicine， Qingyuan 511500，Guangdong，China

Abstract：Objective To study the effect of total panax notoginseng saponins (tPNS) on vascular endothelium function and nuclear factor kappa-B(NF-κB) in patients with atherosclerosis and hyperlipidemia.MethodsSeventy-one patients were randomly divided into tPNS group and atorvastatin group.Before and after medication，the levels of serum NF-κB，intracellular adhesion molecule-1(ICAM-1)， nitric oxide (NO)， prostacyclin (PGI2)， superoxide dismutase (SOD)， glutathione (GSH)， carotid intima-media thickness(CIMT) and atherosclerotic plaque were measured.ResultsAfter medication，the levels of serum NF-κB，ICAM-1，and the scores of CIMT and atherosclerotic plaque were decreased while the levels of serum SOD and GSH were increased(P<0.05).ConclusiontPNS had protective effect on vascular endothelium function in patients with atherosclerosis and hyperlipidemia.This effect was related with downregulation of NF-κB， ICAM-1 level and increase of NO， PGI2，SOD，GSH expression in patients with atherosclerosis and hyperlipidemia.

Key words：atherosclerosis；total panax notoginseng saponins；nuclear factor kappa-B；hyperlipidemia；vascnlar endothelium

(收稿日期：2015-07-07)

中圖分類號(hào)：R54R289

文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼：A

doi：10.3969/j.issn.1672-1349.2016.07.004

文章編號(hào)：1672-1349(2016)07-0682-04

基金項(xiàng)目：廣東省中醫(yī)藥局建設(shè)中醫(yī)藥強(qiáng)省科研基金資助項(xiàng)目(No.20121098)