染料木素對(duì)噪聲性聾的保護(hù)作用△

肖冰　姜明春　康頌建　孫憲昌

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·基礎(chǔ)研究·

染料木素對(duì)噪聲性聾的保護(hù)作用△

肖冰姜明春＊康頌建＊孫憲昌＊

【摘要】目的探討植物雌激素染料木素是否具有預(yù)防噪聲性聾的作用。方法將30只健康豚鼠隨機(jī)分為3組，每組10只。單純?cè)肼暯M每日腹腔注射生理鹽水1 mL/kg，染料木素保護(hù)組每日腹腔注射染料木素10 mg/kg，正常對(duì)照組每日腹腔注射生理鹽水1 mL/kg，3組動(dòng)物均持續(xù)給藥10 d。除正常對(duì)照組以外的2組動(dòng)物于給藥的第4天開始給予噪聲刺激，連續(xù)7 d。噪聲模式采用4 kHz純音，強(qiáng)度為115 dB SPL，噪聲持續(xù)時(shí)間為4 h/d。每組動(dòng)物在給藥前、后均行聽性腦干反應(yīng)(ABR)檢測(cè)。末次檢測(cè)完畢后，在麻醉狀態(tài)下將豚鼠斷頭取耳蝸，采用耳蝸基底膜鋪片技術(shù)觀察耳蝸毛細(xì)胞的形態(tài)學(xué)改變，同時(shí)計(jì)算外毛細(xì)胞損傷率；觀察外毛細(xì)胞琥珀酸脫氫酶(SDH)活性的改變；采用DNA末端轉(zhuǎn)移酶介導(dǎo)的缺口末端標(biāo)記法(TUNEL)檢測(cè)耳蝸螺旋神經(jīng)節(jié)細(xì)胞的凋亡。結(jié)果噪聲刺激前，3組動(dòng)物ABR閾值無明顯差異(P﹥0.05)；接觸噪聲后，單純?cè)肼暯MABR閾值明顯升高(P<0.01)，染料木素保護(hù)組ABR閾值較單純?cè)肼暯M顯著降低(P<0.01)。耳蝸鋪片及SDH染色結(jié)果顯示：?jiǎn)渭冊(cè)肼暯M動(dòng)物耳蝸毛細(xì)胞排列紊亂并伴有大量缺失，SDH染色明顯變淺；給予染料木素后，毛細(xì)胞缺失明顯減少(P<0.01)，排列較規(guī)則，SDH染色明顯好于單純?cè)肼暯M。TUNEL結(jié)果顯示：動(dòng)物接觸噪聲后，螺旋神經(jīng)節(jié)細(xì)胞大量凋亡，染料木素能減輕細(xì)胞損傷。結(jié)論染料木素對(duì)噪聲性聾有一定的防治作用，該作用可能與其營養(yǎng)神經(jīng)、保護(hù)耳蝸毛細(xì)胞SDH的活性及線粒體功能有關(guān)。(中國眼耳鼻喉科雜志，2016，16：84-87，95)

【關(guān)鍵詞】染料木素；噪聲性聾；雌激素；毛細(xì)胞；琥珀酸脫氫酶；凋亡

△基金項(xiàng)目：泰山醫(yī)學(xué)院自然科學(xué)基金(2011ZR036)

隨著我國工業(yè)化進(jìn)程的加快，噪聲污染日趨嚴(yán)重。長(zhǎng)期接觸噪聲可造成聽覺系統(tǒng)的永久性損害導(dǎo)致噪聲性聾(noise-induced hearing loss，NIHL)，嚴(yán)重影響人們的生活質(zhì)量，給個(gè)人及社會(huì)帶來沉重的精神和經(jīng)濟(jì)負(fù)擔(dān)。因此，關(guān)于NIHL 機(jī)制與防治的研究一直是國內(nèi)外學(xué)者研究的熱點(diǎn)。雌激素是一類由內(nèi)分泌系統(tǒng)分泌的類固醇激素，通過與靶細(xì)胞內(nèi)的雌激素受體(estrogen receptor,ER)結(jié)合發(fā)揮作用。有研究[1]顯示，雌激素在體內(nèi)的作用非常廣泛，除能影響女性生殖內(nèi)分泌功能外，對(duì)心血管系統(tǒng)、免疫系統(tǒng)、神經(jīng)系統(tǒng)、骨骼均有一定的保護(hù)作用。近年來有文獻(xiàn)[2-3]報(bào)道，ER在聽覺器官內(nèi)廣泛分布，推測(cè)雌激素與聽覺功能密切相關(guān)；進(jìn)一步的臨床研究與動(dòng)物實(shí)驗(yàn)均證實(shí)雌激素對(duì)聽覺系統(tǒng)有保護(hù)作用，這為防治NIHL的研究提供了新的思路。但是長(zhǎng)期應(yīng)用雌激素會(huì)產(chǎn)生嚴(yán)重的不良反應(yīng)，因此，尋找一種更加安全的具有雌激素樣作用的替代劑具有重要意義[4]。大豆異黃酮是典型的植物雌激素，染料木素(genistein) 是其主要的活性成分， 結(jié)構(gòu)與雌激素相似。流行病學(xué)資料已證實(shí)，染料木素具有類雌激素作用，對(duì)神經(jīng)退行性疾病、骨質(zhì)疏松及心血管疾病具有一定的防治作用[5-6]；但染料木素是否能保護(hù)聽功能，國內(nèi)外尚罕見報(bào)道。因此，本實(shí)驗(yàn)擬通過建立NIHL豚鼠模型，觀察實(shí)驗(yàn)前、后聽覺功能和耳蝸毛細(xì)胞形態(tài)及代謝的變化，研究染料木素對(duì)NIHL的保護(hù)作用，并探討可能的機(jī)制。

1材料與方法

1.1試劑及儀器設(shè)備染料木素購自上海同田生化技術(shù)有限公司，白色粉末，使用前先用二甲基亞砜(DMSO)溶解，再用生理鹽水將其稀釋到所需濃度；DNA末端轉(zhuǎn)移酶介導(dǎo)的缺口末端標(biāo)記法(terminal deoxynucleotide transferase-mediated deoxyuridine triphosphote-biotin nick end labeling,TUNEL)凋亡檢測(cè)試劑盒購自美國Roche公司。其他設(shè)備：聽性腦干反應(yīng)(auditory brainstem response, ABR)儀(Bio-logic Navigator PRO;美國)，SC-1型聲刺激器(上海生理研究所)，體視顯微鏡(OLYMPUS SZ61;日本)，普通光學(xué)顯微鏡(Leica DM2500;德國)。

1.2實(shí)驗(yàn)動(dòng)物選取耳廓反射靈敏的健康紅目白毛豚鼠，體重300～350 g，購自山東省生物制品研究所(動(dòng)物合格證號(hào)為魯動(dòng)質(zhì)字D20120608號(hào))。在恒溫(21～24 ℃)、恒濕(40%～55%)、自由進(jìn)食和飲水、明暗各12 h的環(huán)境下飼養(yǎng)，適應(yīng)環(huán)境7 d后進(jìn)行實(shí)驗(yàn)。

1.3動(dòng)物分組豚鼠30只，隨機(jī)分為3組，即正常對(duì)照組、單純?cè)肼暯M、染料木素保護(hù)組，每組10只。①染料木素保護(hù)組：每天腹腔注射染料木素10 mg/kg，連續(xù)10 d，第4天起給藥后2 h接觸噪聲。②單純?cè)肼暯M：每天腹腔注射生理鹽水1 mL/kg，持續(xù)10 d,并于實(shí)驗(yàn)第4天開始給予噪聲暴露。③正常對(duì)照組：每天腹腔注射生理鹽水1 mL/kg，持續(xù)10 d，不給予噪聲處理。

1.4噪聲暴露方法將動(dòng)物分別置于獨(dú)立分隔的長(zhǎng)方形鐵絲籠內(nèi)，籠子置于自制隔音箱(箱壁由雙層木板組成，中間填充泡沫隔音材料)中央。隔音箱內(nèi)背景噪聲<40 dB SPL，暴露噪聲由SS-1型聲刺激器發(fā)出經(jīng)功率放大器放大后傳至揚(yáng)聲器，揚(yáng)聲器懸掛于隔音箱上方，聲源距動(dòng)物約25 cm；噪聲性質(zhì)為4 kHz純音，給聲強(qiáng)度為115 dB SPL，暴露時(shí)長(zhǎng)為4 h，經(jīng)監(jiān)測(cè)保證隔音箱內(nèi)各處噪聲強(qiáng)度差別<5 dB。

1.5ABR測(cè)定所有動(dòng)物在噪聲暴露前和實(shí)驗(yàn)結(jié)束后各測(cè)1次ABR。動(dòng)物在清醒狀態(tài)下用固定裝置固定后置于隔音屏蔽室內(nèi)進(jìn)行測(cè)試。將記錄電極插入豚鼠顱頂正中，參考電極和接地電極分別插入同側(cè)和對(duì)側(cè)乳突部；采用短聲(click)刺激，經(jīng)EDL-903型耳機(jī)輸出(聲源距耳0.5 cm)，頻率13次/s，濾波帶寬為80～3 000 Hz，疊加500次，以Ⅲ波剛出現(xiàn)時(shí)的最小刺激強(qiáng)度判斷閾值，重復(fù)2次，取平均值。

1.6耳蝸基底膜鋪片及琥珀酸脫氫酶染色每組各取5只動(dòng)物，乙醚麻醉后迅速斷頭取出雙側(cè)聽泡；打開聽泡，用細(xì)針在蝸尖鉆孔，開放蝸窗(圓窗)和前庭窗(卵圓窗)；用吸管吸取新鮮配制的琥珀酸脫氫酶(succinate dehydrogenase, SDH)作用液[0.2 mol/L琥珀酸鈉、0.2 mol/L磷酸鹽緩沖液(phosphate buffer saline, PBS)、0.1%硝基四氮唑藍(lán)，配置比例為1∶1∶1]，從蝸尖小孔緩慢注入，最后經(jīng)蝸窗(圓窗)和前庭窗(卵圓窗)流出，共灌注2～3次；然后將耳蝸浸入SDH作用液中，37 ℃孵育1～2 h；再用10%多聚甲醛溶液自蝸頂灌流3次，并將標(biāo)本浸入10%多聚甲醛溶液后固定過夜；10%乙二胺四乙酸(ethylene diamine tetraacetic acid, EDTA)溶液中脫鈣2周后在立體顯微鏡(解剖顯微鏡)下剝?nèi)ノ仛?，分離基底膜置于載玻片上，70%甘油封片，光學(xué)顯微鏡下觀察毛細(xì)胞內(nèi)SDH的變化及基底膜各回外毛細(xì)胞缺失情況。毛細(xì)胞計(jì)數(shù)參考茅犁春等[7]描述的方法，選取第一、二、三回中下部3個(gè)視野內(nèi)的外毛細(xì)胞進(jìn)行計(jì)數(shù)，視野周邊不完整的毛細(xì)胞，只記一邊，即計(jì)左不計(jì)右，計(jì)上不計(jì)下。統(tǒng)計(jì)學(xué)比較時(shí)以正常對(duì)照組均數(shù)為基準(zhǔn)。

1.7耳蝸石蠟切片標(biāo)本制備每組取5只動(dòng)物的耳蝸制作石蠟切片標(biāo)本。動(dòng)物麻醉后斷頭處死，快速取出聽泡，暴露耳蝸，蝸尖鉆孔，打開前庭窗(卵圓窗)及蝸窗(圓窗)，吸管吸取4%多聚甲醛從蝸尖小孔灌入耳蝸，每個(gè)標(biāo)本灌流4～5次，然后將標(biāo)本浸入固定液中過夜。固定好的聽泡浸入10%EDTA溶液中，室溫下脫鈣2周，脫鈣液每日更換1次，以骨質(zhì)軟化為標(biāo)準(zhǔn)。低熔點(diǎn)石蠟包埋，平行于蝸軸方向進(jìn)行連續(xù)切片，片厚8 μm；用于蘇木素-伊紅(hematoxylin-eosin, HE)染色及細(xì)胞凋亡檢測(cè)。

1.8凋亡細(xì)胞的檢測(cè)采用TUNEL檢測(cè)凋亡細(xì)胞。將切片常規(guī)脫蠟入水，0.3%過氧化氫(雙氧水)孵育10 min，雙蒸水沖洗3次。將玻片浸入盛有0.01 mol/L枸櫞酸鹽緩沖液(pH=6.0)的燒杯中，750 W微波下加熱5 min，自然冷卻，PBS沖洗。每張切片加50 μL TUNEL反應(yīng)液[內(nèi)含5 μL 10×末端脫氧核糖核酸轉(zhuǎn)移酶(TdT)和45 μL熒光素標(biāo)記的核苷酸(dUTP)，現(xiàn)用現(xiàn)配]，37 ℃濕盒內(nèi)孵育60 min。PBS沖洗3次，加入適量POD轉(zhuǎn)換劑，37 ℃孵育30 min。PBS沖洗后加入適量底物顯色液，顯微鏡下控制顯色時(shí)間。梯度乙醇脫水，二甲苯透明后中性樹膠封片。于400倍光學(xué)顯微鏡下觀察耳蝸各回所對(duì)應(yīng)的螺旋神經(jīng)節(jié)內(nèi)細(xì)胞的凋亡情況，陽性細(xì)胞的細(xì)胞核染成棕黃色并伴有不同程度的形態(tài)改變或固縮。

2結(jié)果

2.1ABR檢測(cè)噪聲暴露前、后各組動(dòng)物ABR閾值見表1。正常對(duì)照組實(shí)驗(yàn)前、后ABR閾值差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)，單純?cè)肼暯M動(dòng)物接噪后ABR反應(yīng)閾值明顯高于噪聲暴露前(P<0.01)。噪聲暴露后，染料木素保護(hù)組閾值顯著低于單純?cè)肼暯M(P<0.05)。

表1　各組動(dòng)物給藥前、后ABR閾值變化情況±s)

注：a示與正常對(duì)照組比較P<0.01；b示與染料木素保護(hù)組比較P<0.05；C示與正常對(duì)照組比較，P<0.05

2.2耳蝸基底膜鋪片及SDH染色正常對(duì)照組豚鼠耳蝸在光學(xué)顯微鏡下可見排列整齊的3排外毛細(xì)胞和1排內(nèi)毛細(xì)胞，毛細(xì)胞內(nèi)有深紫藍(lán)色沉淀，細(xì)胞染色均勻、輪廓清晰，SDH活性較強(qiáng)(圖1)。單純?cè)肼暯M豚鼠耳蝸毛細(xì)胞SDH染色明顯減弱；細(xì)胞排列紊亂、輪廓不清，外毛細(xì)胞明顯受損，其中以第一、二回?fù)p傷較為嚴(yán)重；而內(nèi)毛細(xì)胞基本正常。接噪過程中給予染料木素保護(hù)的豚鼠耳蝸毛細(xì)胞SDH染色比正常變淺，外毛細(xì)胞也有部分損傷缺失；但與單純?cè)肼暯M比較，毛細(xì)胞SDH染色基本正常，細(xì)胞缺失數(shù)量明顯減少，排列基本規(guī)則。

圖1.　3組豚鼠耳蝸螺旋神經(jīng)節(jié)細(xì)胞TUNEL染色結(jié)果(400×)A. 正常對(duì)照組；B. 單純?cè)肼暯M；C. 染料木素保護(hù)組

2.3耳蝸外毛細(xì)胞計(jì)數(shù)400倍顯微鏡下選取耳蝸基底膜各回連續(xù)3個(gè)視野，觀察外毛細(xì)胞缺失率。正常對(duì)照組外毛細(xì)胞排列整齊，無明顯缺失；單純?cè)肼暯M豚鼠耳蝸外毛細(xì)胞呈片狀缺失，損傷嚴(yán)重，缺失率達(dá)41.7%，數(shù)量明顯多于染料木素保護(hù)組(25.7%)(P<0.01)(表2)。

2.43組耳蝸螺旋神經(jīng)節(jié)TUNEL染色光學(xué)顯微鏡下觀察，正常對(duì)照組豚鼠耳螺旋神經(jīng)節(jié)內(nèi)未發(fā)現(xiàn)明顯的棕黃色TUNEL染色陽性細(xì)胞。單純?cè)肼暯M豚鼠耳蝸各回對(duì)應(yīng)的螺旋神經(jīng)節(jié)內(nèi)均發(fā)現(xiàn)胞核固縮、呈棕黃色的TUNEL陽性細(xì)胞，并且部分螺旋神經(jīng)節(jié)細(xì)胞發(fā)生空泡樣改變甚至缺失；其中底回對(duì)應(yīng)的螺旋神經(jīng)節(jié)內(nèi)陽性細(xì)胞數(shù)量最多并伴有明顯的細(xì)胞缺失。給予染料木素保護(hù)的豚鼠耳螺旋神經(jīng)節(jié)內(nèi)也有TUNEL陽性細(xì)胞出現(xiàn)，并伴有細(xì)胞缺失，但數(shù)量比單純?cè)肼暯M動(dòng)物明顯減少(圖2)。

表2　各組動(dòng)物實(shí)驗(yàn)后3個(gè)視野外毛細(xì)胞計(jì)數(shù)±s；個(gè))

注：a示與對(duì)照組比較，P<0.01；b示與染料木素保護(hù)組比較，P<0.01；c示與正常對(duì)照組比較，P<0.05

圖2.3組豚鼠耳蝸螺旋神經(jīng)節(jié)TUNEL染色結(jié)果(400×)
A. 正常對(duì)照組豚鼠耳蝸螺旋神經(jīng)節(jié)未見棕黃色陽性凋亡細(xì)胞；B. 單純?cè)肼暯M，螺旋神經(jīng)節(jié)內(nèi)可見大量棕黃色、核固縮的陽性細(xì)胞(如箭頭所示)；C. 染料木素保護(hù)組，可見少量的TUNEL陽性細(xì)胞

3討論

NIHL是指人們長(zhǎng)期遭受噪聲或短時(shí)接受強(qiáng)噪聲而導(dǎo)致的一種感音神經(jīng)性聾。近年來，其發(fā)病率呈現(xiàn)逐年升高的趨勢(shì)；因此，如何預(yù)防NIHL的發(fā)生，降低其聽覺損害已成為一項(xiàng)亟須解決的課題。

本實(shí)驗(yàn)應(yīng)用115 dB SPL強(qiáng)度的穩(wěn)態(tài)噪聲對(duì)豚鼠進(jìn)行持續(xù)暴露，NIHL組動(dòng)物接觸噪聲后ABR閾值明顯升高，閾移平均超過30 dB；耳蝸底回和中回外毛細(xì)胞及對(duì)應(yīng)的螺旋神經(jīng)節(jié)內(nèi)神經(jīng)元損傷嚴(yán)重。這些損傷特點(diǎn)與文獻(xiàn)[7]報(bào)道一致，成功建立了NIHL動(dòng)物模型。關(guān)于NIHL的詳細(xì)發(fā)病機(jī)制目前尚未明確，但是通過以往的研究可知，NIHL的發(fā)生主要與噪聲所致的內(nèi)耳氧自由基增加、微循環(huán)障礙及能量代謝紊亂有關(guān)[8]。線粒體既是細(xì)胞內(nèi)能量代謝的主要場(chǎng)所，又是細(xì)胞自由基生成的主要部位，因此線粒體功能是否正常與NIHL的發(fā)生有著密切的聯(lián)系。SDH是存在于細(xì)胞線粒體內(nèi)膜的一種重要氧化還原酶，參與三羧酸循環(huán)的ATP生成過程，因其定位清楚，已成為檢測(cè)線粒體功能的標(biāo)志酶[9]。本實(shí)驗(yàn)通過SDH染色，觀察動(dòng)物接觸噪聲后內(nèi)耳毛細(xì)胞線粒體功能及能量代謝的改變。實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示，噪聲暴露后，耳蝸毛細(xì)胞內(nèi)SDH染色明顯變淺，伴有大片缺失，說明噪聲引起毛細(xì)胞內(nèi)線粒體呼吸鏈顯著破壞，進(jìn)而減少了ATP的生成，加速了能量代謝的衰竭；同時(shí)使毛細(xì)胞內(nèi)產(chǎn)生大量的自由基，最終導(dǎo)致了毛細(xì)胞的損傷與死亡，引起聽覺功能障礙。因此，可以認(rèn)為線粒體的能量轉(zhuǎn)換在NIHL的發(fā)生中起著關(guān)鍵作用。

關(guān)于NIHL的防治一直是耳科學(xué)研究的熱點(diǎn)問題。近幾年的研究[1，10-11]發(fā)現(xiàn)，雌激素對(duì)聽覺系統(tǒng)具有保護(hù)作用。有研究[12]指出,內(nèi)耳毛細(xì)胞及螺旋神經(jīng)節(jié)上存在大量的ER，雌激素可作用于內(nèi)耳發(fā)揮作用，清除內(nèi)耳自由基，改善內(nèi)耳微循環(huán)，保護(hù)線粒體功能，從而對(duì)聽覺功能起到保護(hù)作用。雌激素的這種作用為研發(fā)NIHL的防治藥物提供了新的思路；但臨床研究發(fā)現(xiàn)，長(zhǎng)期使用雌激素可增加罹患生殖系統(tǒng)惡性腫瘤的風(fēng)險(xiǎn)，對(duì)于患者而言其帶來的危害遠(yuǎn)大于收益，因此大大限制了它的應(yīng)用[13]。所以尋找一種既能夠發(fā)揮雌激素樣保護(hù)作用又沒有嚴(yán)重不良反應(yīng)的替代品是研究重點(diǎn)。染料木素的化學(xué)結(jié)構(gòu)與雌二醇相似，可與雌激素受體結(jié)合發(fā)揮作用，而且能防止雌激素替代治療出現(xiàn)的嚴(yán)重不良反應(yīng)，被認(rèn)為是雌激素的天然替代品，已逐漸受到人們的關(guān)注[14]。但染料木素對(duì)聽功能是否具有保護(hù)作用尚罕見報(bào)道，因此本實(shí)驗(yàn)觀察了染料木素對(duì)NIHL的作用。結(jié)果表明，染料木素能明顯減輕動(dòng)物接觸噪聲后所致的ABR閾值提高、耳蝸外毛細(xì)胞損傷及螺旋神經(jīng)節(jié)內(nèi)神經(jīng)元的凋亡，說明染料木素能保護(hù)動(dòng)物的聽功能，對(duì)NIHL具有一定的防護(hù)作用。其作用機(jī)制可能與染料木素的雌激素樣作用有關(guān)，染料木素可與內(nèi)耳毛細(xì)胞及螺旋神經(jīng)節(jié)內(nèi)神經(jīng)元上的ER結(jié)合，發(fā)揮抗氧化、清除自由基、改善微循環(huán)的作用，從而保護(hù)線粒體的功能，防止毛細(xì)胞的大量損傷；而染料木素減輕螺旋神經(jīng)元凋亡的作用可能與其促進(jìn)神經(jīng)營養(yǎng)因子的釋放、保護(hù)神經(jīng)元的功能有關(guān)[15]。當(dāng)然，染料木素的詳細(xì)作用機(jī)制還有待進(jìn)一步的研究。

綜上所述，本實(shí)驗(yàn)利用NIHL動(dòng)物模型，首次揭示了植物雌激素染料木素對(duì)NIHL的保護(hù)作用，這為研究NIHL的防治提供了新的策略及實(shí)驗(yàn)依據(jù)。

參 考 文 獻(xiàn)

[1]王剛，吳瑋，韓浩倫，等. 雌激素對(duì)模擬失重及噪聲條件下豚鼠聽功能的影響[J].中華耳科學(xué)雜志，2013，11(2)：293-295.

[2]Hultcrantz M, Simonoska R, Stenberg AE. Estrogen and hearing: a summary of recent investigations[J]. Acta Otolaryngol， 2006 ，126(1)：10-14.

[3]Stenberg AE，Wang H，Sahlin L，et al．Mapping of estrogen receptors alpha and beta in the inner ear of mouse and rat [J]．Hear Res，1999，136 (1/2)： 29-34.

[4]Horner KC，Troadec JD，Dallaporta M，et al. Effect of chronic estradiol administration on vimentin and GFAP immunohistochemistry within the inner ear[J]. Neurobiol Dis，2009，35(2)：201-208.

[5]Saha S，Sadhukhan P，Sil PC．Genistein: a phytoestrogen with multifaceted therapeutic properties[J]． Mini Rev Med Chem，2014，14：920-940.

[6]Polkowski K，Mazurek AP．Biological properties of genistein. A review of in vitro and in vivo data[J]．Acta Pol Pharm，2000，57(2)：135-155．

[7]茅犁春，趙榮祥，葉再元．天麻素對(duì)噪聲性聾聽覺腦干誘發(fā)電位及耳蝸毛細(xì)胞的影響[J]. 醫(yī)學(xué)研究雜志，2013，42(7)：80-83．

[8]韓維舉，陳星睿．噪聲暴露引起耳蝸損傷機(jī)制的研究[J]. 中華耳科學(xué)雜志，2013，11(3)：357-362．

[9]楊衛(wèi)平，胡博華．噪聲暴露后耳蝸凋亡與壞死毛細(xì)胞琥珀酸脫氫酶活性的變化[J]. 中華耳科學(xué)雜志，2007，5(2)：198-201．

[10]Kosus N，Kosus A，Turhan NO．Discrepancy in improvement of hearing loss between left and right ears after postmenopausal hormone therapy[J]．Med Hypotheses，2011，76(3)：447-449．

[11]Liu M，Kelley MH，Herson PS，et al．Neuroprotection of sex steroids[J]. Minerva Endocrinol，2010，35(2)：127-143．

[12]Stenberg AE，Wang H，F(xiàn)ish J 3rd，et al. Estrogen receptors in the normal adult and developing human inner ear and in Turner syndrome[J]．Hear Res，2001，157(1/2)：87-92．

[13]Narod SA．Hormone replacement therapy and the risk of breast cancer[J]. Nat Rev Clin Oncol，2011，8(11)：669-676．

[14]羅思，婧黃慶，任冬冬，等．染料木素的神經(jīng)保護(hù)作用及其機(jī)制的研究進(jìn)展[J]. 廣東藥學(xué)院學(xué)報(bào)，2011，21(1)：94-97．

[15]黃志華，李良東，韓立民．染料木素的腦保護(hù)作用及機(jī)制研究進(jìn)展[J]. 中國藥理學(xué)與毒理學(xué)雜志，2015，29(1)：141-146．

(本文編輯楊美琴)

Protection of genistein against noise-induced hearing loss

XIAOBing,JIANGMing-chun＊,KANGSong-jian＊,SUNXian-chang＊.

Tai’anFouthSanatoriumforRetiredCadres,Tai’anMilitarySubarea,Tai’an271000,China

【Abstract】ObjectiveTo investigate the effects of genistein on preventing noise-induced hearing loss(NIHL) in guinea pigs. MethodsThirty healthy guinea pigs with normal auricle reflex were randomly divided into the following 3 groups (10 guinea pigs in each group): treatment group with saline (1 mL/kg), treatment group with genistein (10 mg/kg), and normal control group treated with saline(1 mL/kg). The drug administration lasted for a consecutive 10 days. After 3 days of administration, all of the animals except for normal group were simultaneously exposed to steady white noise at 115 dB SPL for 4 h/d, and lasted for 7 days. Auditory brainstem response(ABR) was tested to study the variation of the auditory function. The morphological changes of hair cells were observed on the stretched preparation of basilar membrane. The variety of succinate dehydrogenase(SDH) of hair cells was observed by light microscope. The apoptosis of spiral ganglion cells was observed by terminal deoxynucleotide transferase-mediated deoxyuridine triphosphate-biotin nick end labeling method. ResultsThere was no significant difference(P>0.05) between ABR threshold values of the three groups before noise exposure．After noise exposure, the ABR threshold value was significantly increased in the simple noise group(P<0.01). However, animals that received genistein treatment showed a significantly lower ABR threshold(P<0.01) . The SDH chemical reaction color obviously disappeared in cochlear hair cells of guinea pigs in noise group；there was a light change of the SDH level in genistein-treated animals compared to normal animals．Compared to the noise group，the apoptosis of spiral ganglion cells were significantly lower in treatment group with genistein. ConclusionsGenistein can reduce the injury of the cochlear induced by NIHL and protect the vitality of mitochondrial respiratory enzyme in the cochlear hair cells. (Chin J Ophthalmol and Otorhinolaryngol,2016,16:84-87,95)

【Key words】Genistein; Noise-induced hearing loss; Estrogen； Hair cell; Succinate dehydrogenase；Apoptosis

(收稿日期2015-05-12)

DOI:10.14166/j.issn.1671-2420.2016.02.005

通訊作者：孫憲昌(Email: hotsss@163.com)

Corresponding author：SUN Xian-chang, Email: hotss@163.com

作者單位：泰安軍分區(qū)第四干休所衛(wèi)生所泰安271000；＊泰山醫(yī)學(xué)院生理教研室泰安271000