芍藥甘草湯對(duì)中樞性肌張力增高大鼠腦內(nèi)氨基酸及其受體的影響お

王景霞 楊旭 張建軍 周恬恬 朱映黎 王林元

[摘要]探討芍藥甘草湯對(duì)中樞性肌張力增高大鼠模型的神經(jīng)遞質(zhì)及其受體的影響。采用線(xiàn)拴法所致的腦卒中恢復(fù)期痙攣性肌張力增高大鼠模型，以巴氯芬為對(duì)照，實(shí)驗(yàn)組給予芍藥甘草湯3∶1配伍比例，給藥3周后測(cè)定其神經(jīng)功能評(píng)分、肌張力、痛閾的變化，并采用HPLC測(cè)定大腦皮層GABA，Gly，Glu，Asp含量，免疫組化法測(cè)定大腦皮層GABA受體Aα1，B與NMDA受體亞基NR1，NR2A，NR2B蛋白表達(dá)。結(jié)果顯示芍藥甘草湯3∶1配伍劑量組對(duì)腦卒中后痙攣偏癱狀態(tài)有較好的改善作用，能顯著改善神經(jīng)癥狀（P<001），降低肌張力（P<001），改善痛域（P<005）；能夠顯著增加腦內(nèi)抑制性氨基酸GABA，Gly的含量（P<001），對(duì)于興奮性氨基酸Glu，Asp有降低的趨勢(shì)，但沒(méi)有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義；能夠顯著增強(qiáng)大腦抑制性神經(jīng)遞質(zhì)受體GABA受體Aα1和B的表達(dá) （P<005），并減少大腦興奮性神經(jīng)遞質(zhì)受體NMDA各亞型NR1，NR2A，NR2B的表達(dá)（P<005）。研究表明，芍藥甘草湯3∶1配伍劑量具有較好的解痙止痛之效，不僅能夠增加腦卒中后痙攣狀態(tài)大鼠腦內(nèi)抑制性氨基酸的水平，同時(shí)還可增加其受體的表達(dá)，從而增加抑制性神經(jīng)信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)的強(qiáng)度；對(duì)于腦內(nèi)興奮性氨基酸水平雖然沒(méi)有顯著性作用，但也有降低的趨勢(shì)，同時(shí)對(duì)于興奮性氨基酸受體的表達(dá)也有抑制作用，從而減弱興奮性神經(jīng)信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)的強(qiáng)度，減輕興奮性神經(jīng)毒性。結(jié)果表明，芍藥甘草湯可通過(guò)調(diào)節(jié)腦內(nèi)抑制性和興奮性神經(jīng)能系統(tǒng)的平衡，從而達(dá)到緩解腦卒中痙攣狀態(tài)，起到柔筋止痙的作用。

[關(guān)鍵詞]芍藥甘草湯；柔筋止痙；肌張力；氨基酸；氨基酸受體

芍藥甘草湯是《傷寒論》中的名方，由芍藥和甘草2味藥組成，其配伍精當(dāng)，具有酸甘化陰、養(yǎng)陰血、平肝陽(yáng)、息肝風(fēng)、柔筋脈、緩攣急、止疼痛的作用特點(diǎn)。原方雖為腳攣急所設(shè)，但后世醫(yī)家根據(jù)其配伍特點(diǎn)，對(duì)其拓展發(fā)揮，用于治療臨床各科肌肉痙攣疼痛，對(duì)于卒中后痙攣偏癱也取得了很好的療效[13]。本課題組前期研究成功復(fù)制了腦卒中痙攣偏癱大鼠模型，掌握了中樞性肌張力增高的變化規(guī)律，實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示芍藥甘草湯對(duì)腦卒中后痙攣偏癱狀態(tài)有較好的改善作用，能夠顯著改善神經(jīng)癥狀，降低肌張力，改善痛閾，具有解痙止痛之效，其解痙止痛最佳配伍比例為3∶1（芍藥甘草）[4]。但對(duì)于中樞性肌張力增高模型大鼠痙攣狀態(tài)的生化基礎(chǔ)，以及芍藥甘草湯緩解痙攣的中樞機(jī)制還不十分清楚。本實(shí)驗(yàn)在前期研究的基礎(chǔ)上，采用線(xiàn)拴法所致的腦卒中恢復(fù)期痙攣性肌張力增高大鼠模型作為實(shí)驗(yàn)對(duì)象，給予最佳配伍比例的芍藥甘草湯，對(duì)其柔筋止痙的作用進(jìn)行進(jìn)一步的確認(rèn)，同時(shí)對(duì)其腦內(nèi)氨基酸及其受體進(jìn)行測(cè)定，分析芍藥甘草湯對(duì)痙攣偏癱大鼠的中樞神經(jīng)系統(tǒng)的影響，探討其柔筋止痙的特色。

1材料

SD雄性大鼠120只，體重250～280 g，斯貝福（北京）實(shí)驗(yàn)動(dòng)物技術(shù)有限公司提供，動(dòng)物許可證編號(hào)SCXK（京）20110004。

芍藥甘草湯（18∶6）原料芍藥，炙甘草購(gòu)自北京圣惠堂中藥飲片公司，藥品生產(chǎn)許可證號(hào)分別為京20100018，京20100018。巴氯芬購(gòu)自衛(wèi)達(dá)化學(xué)制藥有限公司，批號(hào)341101，規(guī)格80 mg·d-1。γ氨基丁酸（GABA），天門(mén)冬氨酸（Asp），谷氨酸（Glu），甘氨酸（Gly）購(gòu)自美國(guó)Sigma公司。鄰苯二甲醛（OPA），碳酸鉀，甲醇，醋酸，乙腈，磷酸二氫鉀和硼酸購(gòu)自北京國(guó)藥公司分析純?cè)噭?。γ氨基丁酸受體Aα1（GABARAα1），γ氨基丁酸受體B（GABARB），N甲基D天門(mén)冬氨酸受體1（NR1），N甲基D天門(mén)冬氨酸受體2A （NR2A），N甲基D天門(mén)冬氨酸受體2B（NR2B）等抗體購(gòu)自abcam公司，貨號(hào)分別為ab52177，ab90883，ab33299，ab69873，ab84184。

MedLabU/4CS生物采集系統(tǒng)購(gòu)自南京美易科技有限公司；新航JZ100型張力換能器購(gòu)自北京新航興業(yè)科貿(mào)有限公司；高效液相色譜儀購(gòu)自美國(guó)Agilent公司；JJ12J型脫水機(jī)購(gòu)自武漢俊杰電子有限公司；JBP5型包埋機(jī)購(gòu)自武漢俊杰電子有限公司；RM2016型病理切片機(jī)購(gòu)自上海徠卡儀器有限公司；KDP型組織攤片機(jī)購(gòu)自浙江省金華市科迪儀器設(shè)備有限公司；GT1001型組化筆購(gòu)自Gene tech；Nikon Eclipse TiSR型倒置熒光顯微鏡，Nikon DSU3型成像系統(tǒng)購(gòu)自日本尼康。

2方法

21動(dòng)物分組及給藥

取雄性SD大鼠，隨機(jī)分為假手術(shù)組、模型組、陽(yáng)性藥組、芍藥甘草湯組（芍藥甘草18∶6）。造模后除去造模失敗、死亡及無(wú)癥狀大鼠，并開(kāi)始給藥，巴氯酚按135 mg·kg-1灌胃給藥，芍藥甘草湯按生藥濃度32 g·kg-1灌胃給藥（人體重按60 kg計(jì)），假手術(shù)組和模型組給等量純水，每日1次，連續(xù)給藥3周。

22造模方法

采用線(xiàn)拴法所致的腦卒中后痙攣性肌張力增高大鼠模型[5]，作適當(dāng)改進(jìn)。使用腹腔注射10%水合氯醛溶液（35 mg·kg-1）麻醉動(dòng)物。大鼠采取仰臥位固定，頸部正中用手術(shù)刀切開(kāi)皮膚，鈍性分離各層組織，暴露右側(cè)的頸總動(dòng)脈（CCA）。分離至頸內(nèi)動(dòng)脈（ICA）、頸外動(dòng)脈（ECA）分叉后，分離仔細(xì)避免損傷迷走神經(jīng)和氣管等，置線(xiàn)備用。于頸總、頸內(nèi)動(dòng)脈處用動(dòng)脈夾夾閉，頸外動(dòng)脈近心端及遠(yuǎn)心端進(jìn)行結(jié)扎，中間用剪刀剪斷。將頸外動(dòng)脈游離端拉至與頸內(nèi)動(dòng)脈成一條直線(xiàn)，將栓線(xiàn)由頸外動(dòng)脈插入，插入后絲線(xiàn)結(jié)扎，防止出血，去除頸內(nèi)動(dòng)脈動(dòng)脈夾，將尼龍線(xiàn)緩慢插入頸內(nèi)動(dòng)脈，繼續(xù)插入至顱內(nèi)，插入深度大約（185±05） mm至微感阻力，使栓線(xiàn)頭端通過(guò)MCA起始處，達(dá)到較細(xì)的大腦前動(dòng)脈，此時(shí)即實(shí)現(xiàn)右側(cè)大腦中動(dòng)脈的血流阻塞，結(jié)扎ICA以固定栓線(xiàn)預(yù)防出血，在傷口處撒少許青霉素積極預(yù)防術(shù)后感染，用手術(shù)線(xiàn)逐層縫合皮膚，并留置栓線(xiàn)線(xiàn)尾端15 cm于縫合皮膚外。于術(shù)后120 min將栓線(xiàn)抽至頸內(nèi)動(dòng)脈起始部恢復(fù)腦血流，并將皮膚外的栓線(xiàn)剪去。手術(shù)過(guò)程中室溫保持在24～25 ℃。

23指標(biāo)檢測(cè)

造模3周后對(duì)各組大鼠進(jìn)行神經(jīng)行為學(xué)評(píng)分、肌張力、痛閾測(cè)試等。

231神經(jīng)功能缺損評(píng)分[6]參考Zea Longa標(biāo)準(zhǔn)評(píng)定：0分，無(wú)神經(jīng)損傷癥狀；1分，不能完全伸展對(duì)側(cè)前爪；2分，向?qū)?cè)轉(zhuǎn)圈；3分，向?qū)?cè)傾倒；4分，不能自發(fā)行走，意識(shí)喪失。1～3分為模型成功，0分及4分為造模失敗。

232肌張力測(cè)定[7]將電刺激針的一端插入痙攣側(cè)后肢股四頭肌內(nèi)，另一端連于電刺激器，并在后肢下端系一絲線(xiàn)，絲線(xiàn)經(jīng)傳感器與四道生理記錄儀相連，定時(shí)對(duì)股四頭肌進(jìn)行刺激（刺激量15 mA），通過(guò)記錄儀記錄后肢伸直的幅度，觀察大鼠肌張力情況。

233痛閾測(cè)定[8]將大鼠裝入籠內(nèi)露出尾部并自然下垂，100瓦白熾燈照射刺激尾部遠(yuǎn)端1/3處，距離為5 cm。記錄從刺激開(kāi)始至大鼠出現(xiàn)甩尾動(dòng)作的時(shí)間，連續(xù)測(cè)量3次，每次間隔5 min，取平均值作為衡量痛閾的指標(biāo)。

234鄰苯二甲醛（OPA）柱前衍生HPLC熒光檢測(cè)法測(cè)定大腦皮層GABA，Gly，Glu，Asp的含量給藥結(jié)束后，各組大鼠閘刀斷頭，冰臺(tái)上快速取腦。將取得的腦組織放入標(biāo)記的凍存管中，液氮凍存數(shù)分鐘后移入-80 ℃冰箱。取適量皮層組織，稱(chēng)濕重，按1∶9加入生理鹽水，用手動(dòng)玻璃勻漿器冰浴勻漿；勻漿液在4 ℃ 3 000 r·min-1低溫離心15 min，取上清液05 mL，加04 mol·L-1高氯酸1 mL去蛋白，同時(shí)加50 μL混合標(biāo)貯備液，混合，4 ℃ 3 000 r·min-1低溫離心15 min，取上清液05 μL，加入2 mol·L-1碳酸鉀緩沖溶液1 mL，再用01 mol·L-1碳酸鉀緩沖溶液稀釋到5 mL，在4 ℃ 1萬(wàn)r·min-1離心20 min，取上清液按衍生化反應(yīng)和色譜條件進(jìn)行洗脫。用含50%甲醇的01 mol·L-1碳酸鉀緩沖液配制成1 mmol·L-1的Asp，Glu，Gly，GABA對(duì)照品貯備液。采用美國(guó)Agilen 1100高效液相色譜儀。流動(dòng)相為01 mol·L-1，pH 60磷酸二氫鉀緩沖液甲醇乙腈（6∶3∶1），用045 μm孔徑濾膜過(guò)濾，脫氣15 min。流速10 mL·min-1；熒光檢測(cè)波長(zhǎng)為發(fā)射波長(zhǎng)455 nm，激發(fā)波長(zhǎng)357 nm；柱溫35 ℃；進(jìn)樣量20 μL。以各氨基酸同內(nèi)標(biāo)的峰面積比值和各自濃度作標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)，測(cè)定含內(nèi)標(biāo)樣品的待測(cè)氨基酸與內(nèi)標(biāo)峰面積比值，求出樣品中4種氨基酸濃度。

235免疫組化法測(cè)定大腦皮層GABA受體Aα1，B和NMDA受體亞基NR1，NR2A，NR2B蛋白表達(dá)給藥結(jié)束后，各組大鼠腹腔注射3%水合氯醛10 mL·kg-1，麻醉大鼠，心臟穿刺經(jīng)升主動(dòng)脈快速灌注4 ℃生理鹽水200 mL，換用4%多聚甲醛經(jīng)心臟灌流固定，斷頭取腦放入4%多聚甲醛中后固定24 h，75%乙醇脫水，二甲苯透明，浸蠟，行石蠟包埋，制成5 μm厚度的同一冠狀面石蠟切片，用于免疫組化試驗(yàn)。組織切片常規(guī)脫蠟至水，后將組織切片置于盛滿(mǎn)EDTA抗原修復(fù)緩沖液（pH 80）的修復(fù)盒中并放于微波爐內(nèi)進(jìn)行抗原修復(fù)。先中火8 min，后停火8 min，再轉(zhuǎn)至中低火7 min；后將切片放入3%過(guò)氧化氫溶液，在室溫避光孵育25 min，將載玻片置于PBS（pH 74）溶液中在脫色搖床上洗滌晃動(dòng)3次，每次時(shí)間5 min。切片輕輕甩干后用組化筆在組織周?chē)?huà)圓圈以防止抗體流走，然后滴加3% BSA室溫封閉30 min，甩干BSA后在圈內(nèi)滴加用3% BSA按一定比例稀釋好的一抗來(lái)覆蓋組織。將切片平放置于4 ℃濕盒內(nèi)孵育過(guò)夜。后將載玻片置于PBS（pH 74）中在脫色搖床上洗滌晃動(dòng)3次，每次時(shí)間5 min。切片稍甩干后在組織上滴加新鮮配制的DAB顯色液，顯微鏡下嚴(yán)格控制顯色時(shí)間，陽(yáng)性為棕黃色，后用自來(lái)水沖洗切片以終止顯色。然后用Harris蘇木素復(fù)染3 min左右，使用自來(lái)水進(jìn)行沖洗，再用1%鹽酸乙醇分化數(shù)秒，自來(lái)水沖洗，氨水返藍(lán)，再流水反復(fù)沖洗。然后將切片依次放入70%乙醇，80%乙醇，90%乙醇，95%乙醇，無(wú)水乙醇Ⅰ，無(wú)水乙醇Ⅱ，二甲苯Ⅰ，二甲苯Ⅱ中各5 min脫水透明，后將切片從二甲苯取出稍晾干，最后中性樹(shù)膠封片。鏡下觀察細(xì)胞及軸突出現(xiàn)棕黃色為陽(yáng)性細(xì)胞。陰性對(duì)照組用一抗稀釋液（PBS液）代替一抗，其余步驟同實(shí)驗(yàn)組。顯色后封片，顯微鏡下觀察照相，每組切片20倍物鏡，10倍目鏡下隨機(jī)選取9個(gè)視野進(jìn)行測(cè)量分析。采用Imagepro plus 60病理圖像分析系統(tǒng)分析皮層中GABAARα1，GABABR，NR1，NR2A，NR2B的積分光密度（integral optical density，IOD）。

24統(tǒng)計(jì)學(xué)處理

采用SPSS 200統(tǒng)計(jì)軟件對(duì)數(shù)據(jù)進(jìn)行處理，結(jié)果以±s表示，組間均值比較采用T檢驗(yàn)，各組數(shù)據(jù)采用單因素方差分析（OneWay ANOVA）進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)分析，兩兩比較選擇Dunnett，方差齊采用LSD檢驗(yàn)，方差不齊采用Tamhanes T 2法進(jìn)行多重比較，以P<005為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

3結(jié)果

31芍藥甘草湯對(duì)大鼠神經(jīng)癥狀評(píng)分的影響

假手術(shù)組與模型組比較有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0001），說(shuō)明模型組出現(xiàn)明顯的神經(jīng)功能障礙；巴氯酚組與模型組比較無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義；芍藥甘草湯組與模型組比較有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<001），說(shuō)明芍藥甘草湯對(duì)卒中后痙攣偏癱大鼠的神經(jīng)功能障礙有顯著的改善作用（表1）。

32芍藥甘草湯對(duì)大鼠肌張力的影響

假手術(shù)組與模型組比較有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0001），說(shuō)明模型組大鼠的肌張力明顯增高；巴氯芬組與模型組比較有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<001）；芍藥甘草湯組與模型組比較有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<001），說(shuō)明芍藥甘草湯能顯著降低卒中后痙攣偏癱大鼠的肌張力（表1）。

33芍藥甘草湯對(duì)大鼠痛域的影響

假手術(shù)組與模型組比較有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<005），說(shuō)明模型組大鼠對(duì)疼痛耐受性降低；巴氯芬組與模型組比較無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義；芍藥甘草湯組與模型組比較有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<001），說(shuō)明芍藥甘草湯能明顯提高卒中后痙攣偏癱大鼠對(duì)疼痛的耐受，緩解痙攣期的肌肉疼痛（表1）。

34芍藥甘草湯對(duì)大鼠腦內(nèi)GABA，Gly，Glu，Asp的影響

模型組大鼠腦內(nèi)GABA，Gly含量明顯下降（假手術(shù)組與模型組比較均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，P<0001），而Glu，Asp含量明顯升高（假手術(shù)組與模型組比較均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，P<0001）；巴氯酚對(duì)GABA，Gly含量有升高的趨勢(shì)（與模型組比較均無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義），能顯著降低Glu，Asp含量（與模型組比較有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，P<0001，P<001）；芍藥甘草湯能顯著升高卒中后痙攣偏癱大鼠腦內(nèi)GABA，Gly含量（與模型組比較均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，P<001），對(duì)Glu，Asp含量有降低的趨勢(shì)（與模型組比較均無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義）（表2）。

35芍藥甘草湯對(duì)大鼠腦內(nèi)GABARAα1，GABARB，NMDAR1，NMDAR2A，NMDAR2B蛋白表達(dá)的影響

模型組大鼠腦內(nèi)GABA受體Aα1，B蛋白表達(dá)明顯減少（假手術(shù)組與模型組比較均具有極顯著統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，P<0001），NMDA受體NR1，NR2A，NR2B蛋白表達(dá)明顯增加（假手術(shù)組與模型組比較均具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，P<005或P<0001）；巴氯酚對(duì)GABA受體Aα1蛋白表達(dá)有增加趨勢(shì)（與模型組比較無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義），對(duì)GABA受體B蛋白表達(dá)表

達(dá)明顯增加（與模型組比較有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，P<0001），對(duì)NMDA受體NR1，NR2A，NR2B蛋白表達(dá)有減少趨勢(shì)（與模型組比較均無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義）；芍藥甘草湯能顯著增加卒中后痙攣偏癱大鼠腦內(nèi)GABA受體Aα1，B蛋白表達(dá)（與模型組比較均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，P<005），減少NMDA受體NR1，NR2A，NR2B蛋白表達(dá)（與模型組比較均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，P<005）（表3）。

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4討論

現(xiàn)代醫(yī)學(xué)認(rèn)為痙攣主要可分為中樞性痙攣和周?chē)辕d攣[9]，而腦卒中痙攣狀態(tài)屬于中樞機(jī)制產(chǎn)生的肌張力增高異常變化，現(xiàn)代研究其與腦內(nèi)的氨基酸類(lèi)神經(jīng)遞質(zhì)失衡關(guān)系密切[1014]。氨基酸類(lèi)神經(jīng)遞質(zhì)分為興奮性氨基酸和抑制性氨基酸，抑制性神經(jīng)遞質(zhì)包括γ氨基丁酸、甘氨酸等，興奮性神經(jīng)遞質(zhì)包括谷氨酸、天門(mén)冬氨酸、P物質(zhì)等。研究表明腦內(nèi)氨基酸濃度在痙攣狀態(tài)中具有重要的作用，抑制性氨基酸濃度的降低與興奮性氨基酸濃度的升高能夠影響肌張力異常增高[15]。羊繼平等[16]研究表明抑制性氨基酸上升，興奮性氨基酸下降與緩解肌肉痙攣關(guān)系密切。研究表明甘氨酸存在于小腦、海馬、延髓、脊髓中[17]，其受體具有多個(gè)亞型，甘氨酸能夠與γ氨基丁酸具有協(xié)同釋放作用機(jī)制，甘氨酸是痙攣狀態(tài)產(chǎn)生的重要影響因素。研究發(fā)現(xiàn)[1820]，Glu至少興奮N甲基D天門(mén)冬氨酸等5種受體，受體激活后引起神經(jīng)元迅速又持久的興奮效應(yīng)，從而引起肢體痙攣狀態(tài)；GABA可通過(guò)GABAB受體結(jié)合，抑制Ca2+流入前突觸，并抑制興奮性神經(jīng)遞質(zhì)從而緩解肌痙攣。同時(shí)，GABA是負(fù)責(zé)Iα傳導(dǎo)纖維通過(guò)脊髓中間神經(jīng)元，對(duì)突觸起到抑制性作用[16]。有報(bào)道顯示[21]，局灶性腦缺血28 d后，由于抑制性中間神經(jīng)元的選擇性死亡及軸索消失，缺血梗死灶部位GABA受體的2種亞型A，B介導(dǎo)的抑制效應(yīng)分別降低了47%，37%。亦有文獻(xiàn)報(bào)道顯示[22]，腦缺血時(shí)，由于Glu暴發(fā)性釋放，其受體大量激活，突觸后神經(jīng)元過(guò)度產(chǎn)生興奮、潰變，最后導(dǎo)致神經(jīng)元的死亡，產(chǎn)生了神經(jīng)毒性。對(duì)抗興奮性損傷的治療包括減少突觸前膜氨基酸的釋放以及抑制突觸后膜氨基酸受體的激活，而這其中對(duì)于阻斷突觸后膜NMDA受體的激活尤為重要[23]。Zepeda等[24]報(bào)道，腦缺血后產(chǎn)生的細(xì)胞蛋白、NMDA受體及GABA受體表達(dá)的異常改變是由于興奮性和抑制性信號(hào)系統(tǒng)失衡而產(chǎn)生的一種功能性改變。而現(xiàn)代解痙常用藥巴氯酚屬于GABA受體激動(dòng)劑，其主要作用于突觸前GABAB受體，能夠抑制興奮性氨基酸受體的釋放，緩解神經(jīng)細(xì)胞興奮性，從而緩解痙攣，有學(xué)者研究發(fā)現(xiàn)[25]腦缺血5 min后給予GABA受體激動(dòng)劑巴氯酚具有神經(jīng)保護(hù)作用，但對(duì)于巴氯酚的其他作用機(jī)制還未明確。

中醫(yī)學(xué)認(rèn)為中樞性肌張力增高的基本病機(jī)主要為陰陽(yáng)失調(diào)，氣血逆亂，其病理多屬于本虛標(biāo)實(shí)。氣血衰少，肝腎陰虛為其致病之本，風(fēng)、火、痰、氣、瘀為其發(fā)病之標(biāo)，兩者可互為因果。人體的陰陽(yáng)處于不斷消長(zhǎng)平衡的狀態(tài)，如果某一方出現(xiàn)偏盛或偏衰就成了一種病理狀態(tài)。正常情況下，剛?cè)嵯酀?jì)，陽(yáng)剛陰柔，內(nèi)外陰陽(yáng)平衡，則人體處于健康狀態(tài)，肢體運(yùn)動(dòng)功能正常。在卒中狀態(tài)下，人體肝腎陰津匱乏，則肝陽(yáng)上亢，風(fēng)中于腦，則發(fā)為中風(fēng)，陰精虧虛，肢體筋脈得不到濡養(yǎng)，則筋脈攣急，產(chǎn)生痙攣狀態(tài)。所以對(duì)卒中后痙攣狀態(tài)的治療，當(dāng)以平調(diào)陰陽(yáng)為本。芍藥甘草湯作為解痙止痛的經(jīng)典方劑，可酸甘化陰，使筋脈得到陰津濡潤(rùn)，則攣急諸證皆平。但是其作用機(jī)制研究還不夠深入，現(xiàn)代研究多為芍藥與甘草的單體成分，李冬梅等[26]研究發(fā)現(xiàn)芍藥苷能夠明顯降低腦缺血再灌注沙土鼠腦內(nèi)興奮性氨基酸水平，王景霞等[27]研究發(fā)現(xiàn)芍藥苷能夠顯著降低抑郁癥大鼠腦內(nèi)谷氨酸的含量，對(duì)于芍藥甘草配伍對(duì)腦損傷的保護(hù)作用及其解痙機(jī)制還未明確。本實(shí)驗(yàn)結(jié)果再次驗(yàn)證了芍藥甘草湯緩解中樞性痙攣、降低肌張力的療效，同時(shí)腦內(nèi)氨基酸含量及其受體表達(dá)測(cè)定結(jié)果表明，芍藥甘草湯能夠顯著性升高模型大鼠腦內(nèi)抑制性氨基酸GABA，Gly的含量水平，對(duì)于興奮性氨基酸Glu，Asp的含量有降低趨勢(shì)，能顯著增加GABA受體Aα1，B蛋白表達(dá)，減少NMDA受體NR1，NR2A，NR2B蛋白表達(dá)。

本實(shí)驗(yàn)研究表明，腦卒中大鼠腦內(nèi)不同氨基酸含量以及相應(yīng)受體的異常表達(dá)可能是導(dǎo)致痙攣狀態(tài)的重要因素。芍藥甘草湯既能增加抑制性氨基酸GABA，Gly的含量，又能激活GABA受體Aα1和B，促進(jìn)γ氨基丁酸與其受體的結(jié)合，使得GABA神經(jīng)信號(hào)傳導(dǎo)加強(qiáng)，抑制性神經(jīng)信號(hào)占主導(dǎo)地位；同時(shí)芍藥甘草湯雖然對(duì)興奮性氨基酸Glu，Asp的含量沒(méi)有明顯影響，但卻可以抑制谷氨酸的離子型受體NMDAR1，NMDAR2A，NMDAR2B的表達(dá)，減少谷氨酸與其受體的結(jié)合，從而抑制Glu神經(jīng)信號(hào)的傳導(dǎo)，興奮性神經(jīng)信號(hào)受到抑制。按照中醫(yī)對(duì)物質(zhì)陰陽(yáng)屬性的劃分，大腦中樞抑制性神經(jīng)遞質(zhì)屬“陰”，而興奮性神經(jīng)遞質(zhì)屬“陽(yáng)”。正常情況下興奮性神經(jīng)遞質(zhì)和抑制性神經(jīng)遞質(zhì)處于一個(gè)動(dòng)態(tài)平衡中，即“陰平陽(yáng)秘”。腦卒中后由于中樞神經(jīng)受損引致抑制性神經(jīng)遞質(zhì)不能制約興奮性神經(jīng)遞質(zhì)，即“陰不制陽(yáng)”，從而導(dǎo)致興奮性神經(jīng)遞質(zhì)的過(guò)度釋放，即“陽(yáng)亢無(wú)制”，引起骨骼肌的張力增高，呈痙攣狀態(tài)。芍藥甘草配伍可通過(guò)“酸甘化陰”功能，滋陰制陽(yáng)，即調(diào)節(jié)大腦中樞抑制性和興奮性神經(jīng)遞質(zhì)系統(tǒng)，達(dá)到“柔筋止痙”的作用，即緩解腦卒中后的肢體痙攣狀態(tài)。綜合來(lái)看，芍藥甘草湯可以調(diào)節(jié)抑制性和興奮性能神經(jīng)的平衡，但以增強(qiáng)抑制性神經(jīng)通路為主，這與巴氯酚對(duì)GABABR的單向激活作用是不同的，可能與芍藥甘草湯成分復(fù)雜，具有多項(xiàng)調(diào)節(jié)功能有關(guān)。

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