雷公藤多苷對(duì)潰瘍性結(jié)腸炎大鼠TLR4/MyD88非依賴信號(hào)通路的作用研究

欽丹萍 周毅駿 孫佩娜 曹俊敏?┱糯豪霆┐?群

[摘要]為了研究雷公藤多苷（TWP）對(duì)三硝基苯磺酸（TNBS）/乙醇潰瘍性結(jié)腸炎（UC）大鼠TLR4/MyD88非依賴信號(hào)通路的調(diào)控作用，采用了TNBS/乙醇聯(lián)合灌腸的方法建立TNBS/乙醇UC大鼠模型。模型建立成功后，將90只雄性Wistar大鼠隨機(jī)分為正常對(duì)照組，模型對(duì)照組，TWP低、中、高劑量組（3，6，12 mg·kg-1），硫唑嘌呤（AZA）組（6 g·kg-1），每組15只。各組分別給予相應(yīng)藥物連續(xù)灌胃14 d。每隔3 d評(píng)估UC大鼠疾病活動(dòng)指數(shù)（DAI）。14 d后解剖所有大鼠，留取相應(yīng)結(jié)腸組織觀察各組大鼠結(jié)腸組織大體及鏡下病理表現(xiàn)，并對(duì)其進(jìn)行評(píng)分。采用Western blot法和RTPCR法檢測(cè)UC大鼠結(jié)腸組織中TLR4/MyD88非依賴信號(hào)通路相關(guān)分子（TLR4，TRAM，TRIF，NFκB，IFNγ）在mRNA及蛋白水平的表達(dá)情況。結(jié)果提示，DAI評(píng)分、大體及鏡下表現(xiàn)和評(píng)分均提示TNBS/乙醇UC大鼠模型造模成功，TWP對(duì)UC大鼠臨床癥狀的改善及黏膜愈合具有一定作用，該作用與AZA相比相當(dāng)或強(qiáng)于AZA。RTPCR及Western blot實(shí)驗(yàn)均提示，與正常對(duì)照組相比，模型對(duì)照組中TLR4/MyD88非依賴信號(hào)通路相關(guān)的分子無(wú)論在mRNA還是蛋白水平表達(dá)均顯著升高（P<001）。與模型對(duì)照組相比，TWP呈劑量依賴性地抑制該信號(hào)通路上各節(jié)點(diǎn)分子mRNA及蛋白水平的表達(dá)，其中TWP高劑量組中各節(jié)點(diǎn)分子mRNA及蛋白表達(dá)水平顯著低于模型對(duì)照組（P<005）。與AZA組相比，TWP高劑量組對(duì)該信號(hào)通路上游因子（TLR4，TRAM，TRIF，NFκB）mRNA及蛋白表達(dá)水平的抑制作用略好于AZA組，而對(duì)該信號(hào)通路的末端炎癥因子IFNγ mRNA及蛋白水平的抑制作用卻略遜于AZA組，但上述2種差異均無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。因此，在TNBS/乙醇 UC大鼠模型中，MyD88非依賴信號(hào)通路參與了炎癥活動(dòng)的調(diào)控，TWP可以通過(guò)抑制TLR4/MyD88非依賴信號(hào)通路抑制IFNγ的釋放，發(fā)揮抗炎作用，其作用強(qiáng)度與劑量呈正相關(guān)。

[關(guān)鍵詞]雷公藤多苷（TWP）；潰瘍性結(jié)腸炎（UC）；TLR4/MyD88非依賴信號(hào)通路

潰瘍性結(jié)腸炎（ulcerative colitis，UC）與自身免疫異常相關(guān)[1]，臨床用藥除氨基水楊酸制劑、糖皮質(zhì)激素外，指南上還推薦使用免疫抑制劑[2]，如硫唑嘌呤（AZA）等，但AZA主要副作用為骨髓抑制等，與氨基水楊酸制劑聯(lián)用時(shí)，更易發(fā)生骨髓抑制，限制了其在臨床中的應(yīng)用。而中藥雷公藤多苷（TWP）用于自身免疫性疾病治療已共識(shí)[3]，而TWP治療UC的報(bào)道甚少，臨床實(shí)踐顯示其具有較好療效，但其作用機(jī)制不明。

Toll樣受體（TLRs）是膜蛋白家族中的一員，能夠識(shí)別病原相關(guān)分子，并介導(dǎo)固有免疫應(yīng)答，與UC的發(fā)病密切相關(guān)[4]。在UC患者體內(nèi)，腸上皮固有層細(xì)胞中Toll樣受體4（TLR4）表達(dá)大幅度增加[5]，而TLR4恰好是TLRs中的一種膜蛋白受體。由此說(shuō)明TLR4信號(hào)通路在UC發(fā)病中扮演重要角色。

外來(lái)刺激因子與TLR4受體綁定是激活固有免疫系統(tǒng)的第一步，TLR4信號(hào)通路按是否需要接頭蛋白髓樣分化因子88（MyD88）介導(dǎo)，主要為MyD88依賴和非依賴的信號(hào)通路[6]。目前TLR4/MyD88依賴信號(hào)通路在UC發(fā)病中的機(jī)制研究已顯成[7]，而TLR4/MyD88非依賴信號(hào)通路（又名TLR4/TRIF信號(hào)通路）由于最終可產(chǎn)生大量的IFNγ，而IFNγ也與結(jié)腸炎癥活動(dòng)具有相關(guān)性[8]，因此，本文嘗試通過(guò)三硝基苯磺酸（TNBS）/乙醇UC大鼠模型作為研究載體，研究TWP的抗炎作用及抗炎機(jī)制，通過(guò)研究TWP干預(yù) TLR4的作用，也可進(jìn)一步明確TLR4/MyD88非依賴信號(hào)通路在炎癥調(diào)控中的作用，并闡述TWP是否對(duì)此調(diào)控具有干預(yù)作用，從而為臨床應(yīng)用及后續(xù)的研究提供基礎(chǔ)資料。

1材料

SPF級(jí)雄性Wistar大鼠90只，體重（200±20）g，7周齡，由浙江中醫(yī)藥大學(xué)動(dòng)物中心提供，動(dòng)物合格證號(hào)2007000556038，常規(guī)飼養(yǎng)。

雷公藤多苷片（浙江德恩制藥有限公司，生產(chǎn)批號(hào)1311108B）；硫唑嘌呤片（aspen，生產(chǎn)批號(hào)008953）。

5% 2，4，6三硝基苯磺酸（5% TNBS，Sigma公司）；10%水合氯醛（浙江省中醫(yī)院）；無(wú)水乙醇（杭州龍山精細(xì)化工有限公司）；中心靜脈導(dǎo)管（上海景年醫(yī)療器械有限公司，標(biāo)準(zhǔn)編號(hào)YZB/USA 39662011）；TLR4，TRAM，TRIF，NFκB，IFNγ PCR引物（Takara公司合成）；βactin（cst，4970S）；TLR4抗體（abcam，ab22048），TRAM抗體（R&D，AF4348），TRIF抗體（abcam，ab13810），NFκB抗體（cst，8242S），IFNγ抗體（R&D，AF585NA）；兔二抗，羊二抗，電泳儀及電泳槽（Biorad）；RNA抽提試劑盒（lot號(hào)9767，Takara，Shiga，Japan）；反轉(zhuǎn)錄試劑盒（lot號(hào)RR036A，Takara，Shiga，Japan）；PCR擴(kuò)增儀（Applied Biosystems， Foster City， CA， USA）。

2方法

21動(dòng)物分組分別將90只健康Wistar大鼠完全隨機(jī)分為6組，分別為正常對(duì)照組、模型對(duì)照組、TWP低劑量組、TWP中劑量組、TWP高劑量組、AZA組，每組15只。

22模型建立大鼠適應(yīng)性喂養(yǎng)1周左右，使體重達(dá)到（200±20）g，禁食24 h。10%水合氯醛3 mL·kg-1腹腔麻醉后，將石蠟油潤(rùn)滑過(guò)的深靜脈置管由肛門(mén)緩慢插入結(jié)腸約8 cm處，模型對(duì)照組和藥物組按每只大鼠0002 mL·g-1 5%TNBS+025 mL 50%乙醇進(jìn)行灌腸，正常對(duì)照組按0002 mL·g-1生理鹽水+025 mL生理鹽水進(jìn)行灌腸，灌腸結(jié)束加推03 mL空氣，用棉簽堵住大鼠肛門(mén)，輕柔大鼠腹部1 min并倒置5 min，造模結(jié)束后將大鼠平放，自然清醒后常規(guī)飲食。造模3 d后建立大鼠UC模型。

23給藥①正常對(duì)照組、模型對(duì)照組：給予001 mL·g-1生理鹽水灌胃；②AZA組：將AZA研成細(xì)末，在細(xì)末中加生理鹽水制成混懸液，按大鼠AZA 60 mg·kg-1的劑量制成每1 mL含有06 mg AZA混懸液，以001 mL·g-1的灌胃量灌胃；③TWP低、中、高劑量組：將TWP研成細(xì)末，在細(xì)末中加生理鹽水制成混懸液，按3組大鼠以TWP 30，60，120 mg·kg-1的劑量分別制成每1 mL含有03，06，12 mg TWP混懸液，以001 mL·g-1的灌胃量灌胃。以上藥物每天1次，連續(xù)14 d。

24觀察項(xiàng)目每日觀察大鼠體重、毛發(fā)、飲食、大便等一般情況，并進(jìn)行隱血試驗(yàn)及DAI評(píng)分。

25標(biāo)本采集末次給藥24 h后，處死大鼠，除正常對(duì)照組外，均留取病變最明顯處結(jié)腸組織標(biāo)本進(jìn)行相關(guān)檢測(cè)。

26結(jié)腸炎癥評(píng)價(jià)①疾病活動(dòng)指數(shù)（DAI）評(píng)分：按照Maines等[9]提出的標(biāo)準(zhǔn)，通過(guò)結(jié)合造模14 d后大鼠體重下降率、大便性狀及大便隱血情況進(jìn)行評(píng)分；②大體形態(tài)損傷評(píng)分：參照Wallace等[10]提出的標(biāo)準(zhǔn)進(jìn)行評(píng)分；③鏡下結(jié)腸損傷評(píng)分：取病變組織進(jìn)行HE染色，按照Geboes等[11]的評(píng)分標(biāo)準(zhǔn)進(jìn)行評(píng)分。

27RTPCR法測(cè)定TLR4/TRIF信號(hào)通路相關(guān)分子mRNA水平表達(dá)情況所取標(biāo)本按RNA抽提試劑盒說(shuō)明書(shū)提取總RNA，紫外分光光度計(jì)測(cè)定總RNA濃度，重復(fù)測(cè)定3次，取500 ng RNA按反轉(zhuǎn)錄試劑盒說(shuō)明書(shū)進(jìn)行逆轉(zhuǎn)錄反應(yīng)合成cDNA，用ABI 7500 PCR儀按RTPCR說(shuō)明書(shū)將cDNA進(jìn)行PCR擴(kuò)增，以βactin為內(nèi)參，以95 ℃預(yù)變性30 s，然后進(jìn)行循環(huán)擴(kuò)增，95 ℃變性5 s，60 ℃退火加延伸30 s，共40個(gè)循環(huán)，反應(yīng)結(jié)束后進(jìn)行溶解曲線分析。采用2-ΔΔCt法分析目的基因的相對(duì)表達(dá)水平。各信號(hào)蛋白分子引物情況見(jiàn)表1。

28Western blot法測(cè)定TLR4/TRIF信號(hào)通路相關(guān)分子蛋白水平表達(dá)情況將所取腸組織標(biāo)本研磨粉碎后，加入6倍劑量的冷蛋白裂解液[20 mmol·L-1 Tris/HCl （pH 75），10 mmol·L-1 APMSF，1 mmol·L-1 EDTA，1 mmol·L-1 DTT]制緩沖液。取一定量蛋白上樣，于10%聚丙烯酰胺凝膠電泳分離，分離的蛋白質(zhì)轉(zhuǎn)移至PVDF膜。5%脫脂奶封閉2 h，加入TLR4（1∶500），TRAM（1∶1 000），TRIF（1∶500），NFκB（1∶1 000），IFNγ（1∶5 000）單克隆抗體，4 ℃孵育過(guò)夜。TBST洗膜5 min×3次。分別加入相應(yīng)熒光二抗（1∶15 000），室溫緩慢震搖2 h，TBST洗膜5 min×3次。采用Odyssey曝光機(jī)進(jìn)行圖像顯影，Odyssey軟件進(jìn)行圖像數(shù)據(jù)分析，目的蛋白的表達(dá)值為目的蛋白的灰密度值比上βactin的灰密度值。

29統(tǒng)計(jì)學(xué)方法采用SPSS 170統(tǒng)計(jì)軟件處理數(shù)據(jù)。數(shù)據(jù)以±s形式表示，各組數(shù)據(jù)間采用單因素方差分析檢驗(yàn)，P<005為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

3結(jié)果

31UC大鼠結(jié)腸炎癥評(píng)分治療14 d后，與正常對(duì)照組相比，模型對(duì)照組大鼠DAI，大體形態(tài)損傷及組織學(xué)評(píng)分明顯增加 （P<001）；與模型對(duì)照組相比，TWP高劑量組及AZA組結(jié)腸炎癥評(píng)分均有明顯增加 （P<001）；與TWP高劑量組相比，AZA組結(jié)腸炎癥評(píng)分無(wú)顯著性差異，見(jiàn)表2。

正常對(duì)照組腸壁無(wú)粘連，剖開(kāi)黏膜皺襞紋理清晰，無(wú)糜爛和潰瘍等表現(xiàn)；模型對(duì)照組腸壁與周?chē)M織粘連，腸管增粗，剖開(kāi)可見(jiàn)潰瘍?cè)?，潰瘍病變處腸壁增厚，周邊黏膜充血水腫；TWP低劑量組腸壁與周?chē)M織粘連，腸管增粗，腸壁變厚，部分剖開(kāi)可見(jiàn)潰瘍、糜爛灶，局部充血、水腫；TWP中劑量組腸壁與周?chē)M織輕度粘連，腸壁增厚，剖開(kāi)偶見(jiàn)淺小潰瘍，伴黏膜充血水腫；TWP高劑量組、AZA組腸壁與周?chē)M織少有粘連，腸管未見(jiàn)明顯增粗，腸壁輕度增厚，剖開(kāi)未見(jiàn)明顯潰瘍，有輕度黏膜充血水腫，見(jiàn)圖1。

正常對(duì)照組、模型對(duì)照組可見(jiàn)結(jié)腸黏膜水腫，黏膜層及漿肌層可見(jiàn)多量淋巴細(xì)胞，漿細(xì)胞及中性粒細(xì)胞浸潤(rùn)，潰瘍形成，潰瘍表面可見(jiàn)壞死層，肉芽組織形成；TWP低劑量組偶可見(jiàn)黏膜下層潰瘍，中性粒細(xì)胞、淋巴細(xì)胞等炎性細(xì)胞浸潤(rùn)侵及肌層甚至漿膜層，部分可見(jiàn)隱窩破壞；TWP中劑量組黏膜主要表現(xiàn)為重度慢性炎癥，中性粒等炎性細(xì)胞浸潤(rùn)侵及肌層，隱窩破壞少見(jiàn)；TWP高劑量組與AZA組黏膜主要表現(xiàn)為中度慢性炎癥，部分黏膜及黏膜下層有少量炎性細(xì)胞浸潤(rùn)，見(jiàn)圖2。

32Western blot法檢測(cè)TLR4/MyD88非依賴信號(hào)通路相關(guān)蛋白的表達(dá)對(duì)TLR4/MyD88非依賴信號(hào)通路的各節(jié)點(diǎn)分子蛋白表達(dá)水平（TLR4，TRAM，TRIF，NFκB，IFNγ）而言，與正常對(duì)照組相比，模型對(duì)照組中這些重要節(jié)點(diǎn)分子的蛋白表達(dá)水平顯著升高（P<001）；與模型對(duì)照組相比，TWP呈劑量依賴性地抑制該信號(hào)通路上各節(jié)點(diǎn)分子蛋白水平的表達(dá)，其中TWP高劑量組中各節(jié)點(diǎn)分子mRNA表達(dá)水平顯著低于模型對(duì)照組（P<005）；在與陽(yáng)性對(duì)照組AZA組比較，TWP高劑量組對(duì)該信號(hào)通路上游因子（TLR4，TRAM，TRIF，NFκB）蛋白表達(dá)的抑制作用略好于AZA組，而對(duì)該信號(hào)通路的末端炎癥因子IFNγ蛋白水平的抑制作用卻略遜于AZA組，但上述2種差異均無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，見(jiàn)圖3，4。

33RTPCR法檢測(cè)TLR4/MyD88非依賴信號(hào)通路相關(guān)分子mRNA的表達(dá)與正常對(duì)照組相比，模型對(duì)照組中這些重要節(jié)點(diǎn)分子的mRNA表達(dá)水平顯著升高（P<001）；與模型對(duì)照組相比，TWP呈劑量依賴性地抑制該信號(hào)通路上各節(jié)點(diǎn)分子mRNA的表達(dá)，其中TWP高劑量組中各節(jié)點(diǎn)分子mRNA表達(dá)水平顯著低于模型對(duì)照組（P<005）；在與

陽(yáng)性對(duì)照組AZA組比較，TWP高劑量組對(duì)該信號(hào)通路上游因子（TLR4，TRAM，TRIF，NFκB）mRNA表達(dá)的抑制作用略好于AZA組，而對(duì)該信號(hào)通路的末端炎癥因子IFNγ mRNA水平的抑制作用卻略遜于AZA組，但上述2種差異均無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，見(jiàn)圖5。

4討論

本研究采用的TNBS/乙醇UC大鼠模型為研究UC的極佳模型[12]。在TNBS/乙醇灌腸造模后，觀察模型對(duì)照組造模后一般情況，發(fā)現(xiàn)造模2 d后模型對(duì)照組大鼠出現(xiàn)精神、飲食、毛發(fā)、大便次數(shù)及性狀的改變，隱血測(cè)試陽(yáng)性。造模后DAI評(píng)分浮動(dòng)于7～13分，較正常對(duì)照組顯著升高，實(shí)驗(yàn)結(jié)束后解剖大體，觀察其結(jié)腸組織均可見(jiàn)病變部位組織與周?chē)?/p>

組織粘連，有較多較大的潰瘍病灶，周?chē)M織充血

水腫，高倍鏡下可見(jiàn)結(jié)腸黏膜水腫，黏膜層及漿肌層可見(jiàn)大量炎癥細(xì)胞浸潤(rùn)，潰瘍形成，潰瘍表面可見(jiàn)壞死層，肉芽組織形成，結(jié)腸組織大體形態(tài)及鏡下組織病理學(xué)評(píng)分較正常對(duì)照組均有顯著升高（P<001），證實(shí)本次研究應(yīng)用TNBS/乙醇方法制備大鼠潰瘍性結(jié)腸炎模型成功。

用TWP進(jìn)行3 d的灌胃治療后，可見(jiàn)大鼠精神狀態(tài)開(kāi)始好轉(zhuǎn)，進(jìn)食飲水量及活動(dòng)量較模型對(duì)照組好轉(zhuǎn)明顯，灌胃8 d后，大便逐漸成形，偶有稀便，肛周皮毛稍黏，但無(wú)便血，體重有所恢復(fù)。實(shí)驗(yàn)結(jié)束后TWP高劑量組大鼠腸道黏膜潰瘍、炎癥狀態(tài)較模型對(duì)照組改善明顯，組間差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<001）；與模型對(duì)照組相比，TWP高劑量組淋巴細(xì)胞、中性粒細(xì)胞、漿細(xì)胞等炎性細(xì)胞浸潤(rùn)減少，偶可見(jiàn)潰瘍，潰瘍較淺表，組間差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<001）；與AZA組比較，鏡下組織損傷評(píng)分有所降低（P<005），大體形態(tài)損傷評(píng)分略高，但差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，說(shuō)明TWP能改善UC大鼠癥狀、

控制炎癥活動(dòng)、促進(jìn)黏膜愈合上具有作用，其作用強(qiáng)度或相當(dāng)于AZA的作用。

在TLR4/MyD88非依賴信號(hào)通路中，TLR4直接或間接通過(guò)一種Mal蛋白、Toll樣受體相關(guān)分子（tolllike receptors associated molecule，TRAM）激活TIR域含適配器誘導(dǎo)β干擾素（TIRdomaincontaining adapterinducing interferonβ，TRIF），TRIF立即與接頭蛋白募集腫瘤壞死因子受體相關(guān)因子6（TNF receptorassociated factor 6，TRAF6）綁定，激活下游TRNK結(jié)合激酶1 （TANKbinding kinase 1， TBK1），TBK1緊接著激活絲裂原激活的蛋白激酶（mitogenactivated protein kinase，MAPK）和核轉(zhuǎn)錄因子κB（nuclear factorκB，NFκB），而NFκB可以激活干擾素調(diào)節(jié)因子3（interferon regulatory factor 3，IRF3）[13]，IRF3是誘導(dǎo)干擾素（IFN）家族釋放IFN的重要激活因子。因此，TLR4，TRAM，TRIF，NFκB是TLR4/MyD88非依賴信號(hào)通路中的重要上游節(jié)點(diǎn)分子，將上述四者作為檢測(cè)分子，能很好地說(shuō)明四者在該信號(hào)通路中相互之間的緊密連接關(guān)系。

末端炎癥因子IFNγ是一種強(qiáng)有力的且具有多向性的促炎癥細(xì)胞因子，執(zhí)行眾多免疫調(diào)控功能。IFNγ可以激活一系列具有免疫活性的細(xì)胞，包括巨噬細(xì)胞、內(nèi)皮細(xì)胞、淋巴細(xì)胞。同時(shí)，它又是抗原遞呈細(xì)胞表面表達(dá)主要組織相容性復(fù)合體Ⅱ（MHCⅡ）分子的重要刺激因子[14]。另外，IFNγ還能降低上皮細(xì)胞屏障功能，它可以通過(guò)上調(diào)表達(dá)某些趨化因子及自身受體，促進(jìn)中性粒細(xì)胞遷移，引起炎癥反應(yīng)[15]。在許多Th1細(xì)胞介導(dǎo)的實(shí)驗(yàn)性結(jié)腸炎模型中，腸黏膜上IFNγ的表達(dá)水平明顯增高[16]。在炎癥性腸?。╥nflammatory bowel disease，IBD）患者中，Th1細(xì)胞表型在免疫反應(yīng)中起到重要作用，同時(shí)IFNγ在IBD患者腸黏膜上的表達(dá)也明顯增加[17]。因此選擇IFNγ作為評(píng)估TLR4/MyD88非依賴信號(hào)通路的末端炎癥因子是合理的且具有意義的。

對(duì)TLR4/MyD88非依賴信號(hào)通路的上游分子（TLR4，TRAM，TRIF，NFκB）而言，Western blot及RTPCR結(jié)果均提示，與正常對(duì)照組相比，該信號(hào)通路上游分子無(wú)論在mRNA水平還是蛋白水平，模型對(duì)照組表達(dá)顯著升高（P<001），提示該疾病模型與TLR4/MyD88非依賴信號(hào)通路的異常表達(dá)密切相關(guān)。與模型對(duì)照組相比，TWP呈劑量依賴性地抑制該信號(hào)通路的上游因子，其中高劑量組與模型對(duì)照組相比具有顯著差異（P<005）。同時(shí)，TWP對(duì)TLR4，TRAM，TRIF，NFκB這4點(diǎn)組成的級(jí)聯(lián)反應(yīng)無(wú)論在mRNA及蛋白水平，其抑制作用呈現(xiàn)隨劑量增加而增強(qiáng)的趨勢(shì)。在與AZA組比較中，高劑量TWP對(duì)該信號(hào)通路上游因子的抑制作用略好于AZA組，但無(wú)顯著性差異，提示抑制該信號(hào)通路為T(mén)WP抗炎的途徑之一。

對(duì)TLR4/MyD88非依賴信號(hào)通路的末端炎癥因子IFNγ而言，Western blot及RTPCR結(jié)果均提示，與正常對(duì)照組相比，該信號(hào)通路末端炎癥因子IFNγ無(wú)論在mRNA水平還是蛋白水平模型對(duì)照組表達(dá)顯著升高（P<001）。與模型對(duì)照組相比，TWP呈劑量依賴性地抑制該信號(hào)通路的末端炎癥因子IFNγ，其中高劑量組與模型對(duì)照組相比具有顯著差異（P<001）。與AZA組相比，高劑量TWP對(duì)該信號(hào)通路末端炎癥因子的抑制作用略遜于AZA組，但無(wú)顯著性差異，提示TWP對(duì)末端炎癥因子IFNγ具有抑制作用。

本研究結(jié)果顯示，在TNBS/乙醇 UC大鼠模型中，MyD88非依賴信號(hào)通路參與了炎癥活動(dòng)的調(diào)控，TWP可以通過(guò)抑制TLR4/MyD88非依賴信號(hào)通路抑制IFNγ的釋放，發(fā)揮抗炎的作用，其作用強(qiáng)度與劑量呈正相關(guān)。

[參考文獻(xiàn)]

[1]Zhu H， Li Y R Oxidative stress and redox signaling mechanisms of inflammatory bowel disease： updated experimental and clinical evidence[J] Exp Biol Med （Maywood）， 2012， 237（5）： 474

[2]中華醫(yī)學(xué)會(huì)消化病分會(huì)炎癥性腸病學(xué)組 炎癥性腸病診斷與治療的共識(shí)意見(jiàn)[J] 中華內(nèi)科雜志，2012，51 （10）：818

[3]Zhang C， Jiang M， He X， et al Clinical trials of integrative medicine for rheumatoid arthritis：issues and recommendations[J] Chin J Integr Med， 2015， 21（6）： 403

[4]Fukata M， Shang L， Santaolalla R， et al Constitutive activation of epithelial TLR4 augments inflammatory responses to mucosal injury and drives colitisassociated tumorigenesis[J] Inflamm Bowel Dis， 2011， 17（7）： 1464

[5]Shen X， Shi R， Zhang H， et al The Tolllikereceptor 4 D299G and T3991 polymorphisms are associated with Crohn′s disease and ulcerative colitis： a Metaanalysis[J] Digestion，2010，81（2）： 69

[6]Wang W， Xia T， Yu X Wogonin suppresses inflammatory response and maintains intestinal barrier function via TLR4MyD88TAK1mediated NFκB pathway in vitro[J] Inflamm Res， 2015， 64（6）： 423

[7]GonzálezNavajas J M， Fine S， Law J， et al TLR4 signaling in effector CD4+ T cells regulates TCR activation and experimental colitis in mice[J] J Clin Invest， 2010， 120（2）： 570

[8]Kanagavelu S， Flores C， Termini J M， et al TIRdomaincontaining adapterinducing interferonβ（TRIF） regulates Th17mediated intestinal immunopathology in colitis[J] Mucosal Immunol，2015，8（2）：296

[9]Marines L W， Fitzpatrick L R， French K J， et al Supression of ulcerative colitis in mice by orally available inhibitors of sphingosine kinase[J]Dig Dis Sci，2008，53（4）：997

[10]Wallace J L， Keenan C M， Gale D， et al Exacerbation of experimental colitis by nonsteroidal antiinflammatory drugs is not related to elevated leukotriene B4 synthesis[J] Gastroenterology，1992，102（1）： 18

[11]Geboes K， Riddell R， Ost A， et al A reproducible grading scale for histological assessment of inflammation in ulcerative colitis [J] Gut， 2000， 47（3）： 404

[12]Xu J， Zheng C， Huang Y， et al Efficacy of thalidomide on trinitrobenzene sulfonateinduced colitis in young rats and its mechanism[J] Chin Med J （Engl）， 2014， 127（12）： 2368

[13]Kawai T ， Akira SThe role of patternrecognition receptors in innate immunity： update on Tolllike receptors[J]Nat Immunol，2010，11（5）：373

[14]Schroder K， Hertzog P J， Ravasi T， et al Interferonγ： an overview of signals， mechanisms and functions[J] J Leukoc Biol， 2004， 75（2）： 163

[15]Soyka M B， Wawrzyniak P， Eiwegger T， et al Defective epithelial barrier in chronic rhinosinusitis： the regulation of tight junctions by IFNγ and IL4[J] J Allergy Clin Immunol， 2012， 130（5）： 1087

[16]Harbour S N， Maynard C L， Zindl C L， et al Th17 cells give rise to Th1 cells that are required for the pathogenesis of colitis[J] Proc Natl Acad Sci USA， 2015，112（22）：7061

[17]Dongarrà M L， Belvedere A， Ferlazzo G， et al Clinical drug response to thiopurines is associated to a lower interferonγ production by IBD patient′s T lymphocytes[J] J Crohns Colitis， 2013， 7（10）： e497

[責(zé)任編輯馬超一]