寨卡病毒感染及其實(shí)驗(yàn)室檢查

林迪，孫長(zhǎng)貴

(解放軍第117醫(yī)院檢驗(yàn)科南京軍區(qū)醫(yī)學(xué)檢驗(yàn)質(zhì)量控制中心，浙江杭州310013)

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寨卡病毒感染及其實(shí)驗(yàn)室檢查

林迪，孫長(zhǎng)貴

(解放軍第117醫(yī)院檢驗(yàn)科南京軍區(qū)醫(yī)學(xué)檢驗(yàn)質(zhì)量控制中心，浙江杭州310013)

摘要:非洲埃博拉疫情還沒完全結(jié)束，又一種蚊媒病毒－寨卡病毒在美洲出現(xiàn)暴發(fā)流行。2007年以前，寨卡病毒病在全球僅有14例散發(fā)病例。2015年5月以來，巴西發(fā)生大規(guī)模寨卡病毒感染疫情，美洲、非洲等其他30多個(gè)國(guó)家和地區(qū)也相繼報(bào)告出現(xiàn)寨卡病毒傳播；新年伊始，寨卡病毒陸續(xù)進(jìn)入中國(guó)境內(nèi)，截止2016年2月26日，我國(guó)已發(fā)生6例輸入性寨卡病毒感染病例。由于寨卡病毒疫情爆發(fā)式蔓延，2016年2月1日，世界衛(wèi)生組織（WHO）把寨卡病毒感染列為國(guó)際緊急衛(wèi)生事故，引起了國(guó)際社會(huì)的廣泛關(guān)注。本文就該病毒的結(jié)構(gòu)、生物學(xué)特性、流行病學(xué)、臨床表現(xiàn)、診斷與鑒別診斷和實(shí)驗(yàn)室檢查等作簡(jiǎn)要綜述。

關(guān)鍵詞：寨卡病毒；蚊媒病毒；小頭畸形；感染

寨卡病毒病是由寨卡病毒（Zika virus，ZIKV）感染引起的，以發(fā)熱、皮疹、關(guān)節(jié)痛或結(jié)膜炎為主要臨床表現(xiàn)的自限性急性傳染病，主要通過埃及伊蚊叮咬傳播，極少引起死亡，但孕婦感染后可能會(huì)導(dǎo)致胎兒小頭畸形甚至死亡[1]。1947年，科學(xué)家首次在烏干達(dá)抓獲的用于黃熱病研究的獼猴中分離到ZIKV，而這些猴子聚居的雜草叢就被用來命名這種病毒；1952年，在烏干達(dá)和坦桑尼亞的人體中分離到ZIKV[2]。此后，多個(gè)國(guó)家有散發(fā)病例報(bào)道，但主要在全球熱帶及亞熱帶地區(qū)流行；2007年，首次在密克羅尼西亞的雅普島發(fā)生ZIKV疫情的暴發(fā)流行[3，4]，2013年10月，法屬波利尼西亞也發(fā)生大規(guī)模ZIKV暴發(fā)，約有29000人為疑似病例（約占總?cè)丝?0%）[5]；2015年5月，巴西發(fā)現(xiàn)首例本地感染病例，其后疫情持續(xù)發(fā)酵，直到發(fā)生了大規(guī)模疫情，至今已有150萬人感染ZIKV，另外，巴西衛(wèi)生部于2016年1月12日還通報(bào)了356例可能與ZIKV感染相關(guān)的小頭畸形病例；目前，非洲、美洲、亞洲和太平洋地區(qū)均有寨卡病毒病疫情暴發(fā)，ZIKV進(jìn)一步呈現(xiàn)蔓延擴(kuò)大和跨境傳播趨勢(shì)，因此引起了全球的廣泛關(guān)注。本文就ZIKV相關(guān)的結(jié)構(gòu)和生物學(xué)特性、發(fā)病機(jī)制、流行病學(xué)、臨床表現(xiàn)、診斷與鑒別診斷和實(shí)驗(yàn)室檢查等作簡(jiǎn)要綜述。

1　寨卡病毒的結(jié)構(gòu)和生物學(xué)特性

ZIKV是一種蚊媒病毒，屬黃病毒科黃病毒屬，為單股正鏈RNA病毒，全基因長(zhǎng)度約為11Kb，直徑40～70nm，有包膜，包含10794個(gè)核苷酸，編碼3419個(gè)氨基酸，ZIKV基因編碼3個(gè)結(jié)構(gòu)蛋白[衣殼蛋白(C)、膜前體蛋白(prM)和包膜蛋白(M)]和7個(gè)非結(jié)構(gòu)蛋白（NS1，NS2a，NS2b，NS3，NS4a，NS4b和NS5）。根據(jù)基因型分為非洲型和亞洲型，本次美洲流行的為亞洲型[3，6－8]。與ZIKV最密切相關(guān)的病毒是Spondweni病毒[9]。ZIKV的抵抗力不詳，但黃病毒屬的病毒一般不耐酸、不耐熱。60℃30min可滅活，70%乙醇、1%次氯酸鈉、脂溶劑、過氧乙酸等消毒劑及紫外線照射均可滅活[10]。

2　發(fā)病機(jī)制

目前ZIKV的發(fā)病機(jī)制還尚不明確。由于樹突狀細(xì)胞（DCs）是大多數(shù)蚊媒黃病毒感染的主要目標(biāo)，部分科學(xué)家認(rèn)為ZIKV最初是在DCs內(nèi)開始復(fù)制，隨后擴(kuò)散到淋巴結(jié)和血液中[11]；還有一項(xiàng)研究在被ZIKV感染的細(xì)胞核中發(fā)現(xiàn)相應(yīng)抗原，故ZIKV被認(rèn)為是在細(xì)胞核中進(jìn)行復(fù)制，這與其他黃病毒科病毒通常在細(xì)胞質(zhì)中復(fù)制的特點(diǎn)不同[12]；另外Rodolphe Hamel等人通過中和抗體和RNA沉默實(shí)驗(yàn)證明人皮膚成纖維細(xì)胞容許ZIKV的復(fù)制，隨后誘導(dǎo)Toll樣受體3(TLR3)、RIG－I、MDA5以及一些干擾素刺激基因（包括OAS2、ISG15以及MX1）的轉(zhuǎn)錄，最后經(jīng)感染的皮膚成纖維細(xì)胞導(dǎo)致自噬小體的形成，自噬小體的存在與病毒復(fù)制作用的增強(qiáng)有很大關(guān)系[13]。

3　流行病學(xué)

ZIKV廣泛分布于非洲大陸北部以及許多東南亞國(guó)家，包括馬來西亞、印度、菲律賓、泰國(guó)、越南、印度尼西亞以及巴基斯坦[14－21]。ZIKV活動(dòng)一直比較隱匿，僅在赤道周圍的非洲、美洲、亞洲和太平洋地區(qū)有寨卡病毒感染散發(fā)病例。近兩年，ZIKV先是在巴西興風(fēng)作浪，而后又侵入南美洲，近期，它又沖出拉丁美洲。截至2016年1月，在非洲、亞洲、美洲以及太平洋島嶼上至少45個(gè)國(guó)家發(fā)現(xiàn)寨卡病毒傳播的證據(jù)，其中在南美洲有23個(gè)國(guó)家和地區(qū)正在流行。因?yàn)樵絹碓蕉嗟淖C據(jù)表明ZIKV與小頭畸形之間的聯(lián)系，2016年1月15日，CDC發(fā)布旅行警告，建議孕婦考慮推遲前往以下國(guó)家和地區(qū)：巴西、哥倫比亞、薩爾瓦多、法屬圭亞那、危地馬拉、海地、洪都拉斯、馬提尼克島、墨西哥、巴拿馬、巴拉圭、蘇里南、委內(nèi)瑞拉和波多黎各自由邦。新年伊始，寨卡病毒陸續(xù)進(jìn)入中國(guó)境內(nèi)，截止2016年2月26日，我國(guó)已發(fā)生6例輸入性寨卡病毒感染病例。根據(jù)監(jiān)測(cè)，我國(guó)與傳播ZIKV有關(guān)的伊蚊種類主要為埃及伊蚊和白紋伊蚊，其中埃及伊蚊主要分布于海南省、廣東省雷州半島以及云南省的西雙版納州、德宏州、臨滄市等地區(qū)；白紋伊蚊則廣泛分布于我國(guó)河北、山西、陜西以南廣大區(qū)；我國(guó)南方部分地區(qū)存在可傳播寨卡病毒的媒介伊蚊。隨著寨卡病毒的輸入，特別是在我國(guó)夏秋季節(jié)伊蚊密度較高的南方地區(qū)，不排除在局部地區(qū)發(fā)生本地傳播擴(kuò)散的可能。

3.1傳染源和宿主范圍患者、隱性感染者和感染ZIKV的非人靈長(zhǎng)類動(dòng)物是該病的可能傳染源。

3.2傳播途徑[22－24]⑴各種伊蚊被認(rèn)為是ZIKV的傳播媒介，主要為埃及伊蚊。通過伊蚊叮咬進(jìn)行傳播，這是最主要的途徑。⑵母嬰傳播，包括宮內(nèi)感染和分娩時(shí)感染；乳汁中可檢測(cè)到寨卡病毒核酸，但尚無通過哺乳感染新生兒的報(bào)道。⑶血源傳播和性傳播罕見。

3.3易感人群人群普遍易感。曾感染過寨卡病毒

的人可能對(duì)再次感染具有免疫力。

4　臨床表現(xiàn)和病理特點(diǎn)[10]

寨卡病毒病臨床癥狀不明顯，但患者可能會(huì)出現(xiàn)類似于其他蟲媒病毒?。ǖ歉餆岷突卓涎艧幔┑呐R床癥狀，其潛伏期目前尚不清楚，現(xiàn)有資料顯示為3～12d，常見報(bào)道的癥狀包括皮疹（90%～95%）、發(fā)熱（65%～73%）、關(guān)節(jié)痛（65%～70%）以及非化膿性結(jié)膜炎（55%～63%）[4，7]。其他癥狀還包括肌肉痛、全身乏力以及頭痛，少數(shù)患者可出現(xiàn)腹痛、惡心、腹瀉、粘膜潰瘍、皮膚瘙癢等，癥狀持續(xù)2～7天緩解，預(yù)后良好，重癥與死亡病例罕見。小兒感染病例還可出現(xiàn)神經(jīng)系統(tǒng)、眼部和聽力等改變。孕婦感染ZIKV可能導(dǎo)致新生兒小頭畸形甚至胎兒死亡。ZIKV感染可能還會(huì)增加格林－巴利綜合征（GBS）和新生兒小頭畸形的病例，但二者之間的因果關(guān)系尚未明確[25]。

5　診斷[10]

5.1診斷主要依據(jù)流行季節(jié)、地區(qū)、發(fā)病年齡等流行病學(xué)資料、臨床表現(xiàn)以及實(shí)驗(yàn)室常規(guī)檢測(cè)結(jié)果進(jìn)行診斷。

5.1.1診斷依據(jù)根據(jù)流行病學(xué)史、臨床表現(xiàn)和相關(guān)實(shí)驗(yàn)室檢查綜合判斷。

5.1.1.1疑似病例⑴流行病學(xué)史：發(fā)病前14天內(nèi)在ZIKV感染病例報(bào)告或流行地區(qū)旅行或居住。⑵臨床表現(xiàn)：難以用其他原因解釋的發(fā)熱、皮疹、關(guān)節(jié)痛或結(jié)膜炎等。

5.1.1.2臨床診斷病例疑似病例且ZIKV IgM抗體檢測(cè)陽性。

5.1.1.3確診病例疑似病例或臨床診斷病例經(jīng)實(shí)驗(yàn)室檢測(cè)符合下列情形之一者：⑴ZIKV核酸檢測(cè)陽性。⑵分離出ZIKV。⑶恢復(fù)期血清ZIKV中和抗體陽轉(zhuǎn)或者滴度較急性期呈4倍以上升高，同時(shí)排除登革、乙腦等其他常見黃病毒感染。

5.2鑒別診斷需要和以下疾病進(jìn)行鑒別診斷：⑴主要與登革熱和基孔肯雅熱進(jìn)行鑒別診斷。⑵其他：與微小病毒、風(fēng)疹、麻疹、腸道病毒、立克次體病等相鑒別。

6　實(shí)驗(yàn)室檢測(cè)[10]

6.1一般檢查血常規(guī)：部分病例可有白細(xì)胞和血小板減少。

6.2血清學(xué)檢查

6.2.1 ZIKV IgM檢測(cè)采用酶聯(lián)免疫吸附法（ELISA）、免疫熒光法等進(jìn)行檢測(cè)。

6.2.2 ZIKV中和抗體檢測(cè)采用空斑減少中和試驗(yàn)（PRNT）檢測(cè)血液中和抗體。應(yīng)盡量采集急性期和恢復(fù)期雙份血清開展檢測(cè)。

6.3病毒抗原檢測(cè)采用免疫組化法檢測(cè)寨卡ZIKV。

6.4病毒分離培養(yǎng)可將標(biāo)本接種于蚊源細(xì)胞（C6/ 36）或哺乳動(dòng)物細(xì)胞（Vero）等方法進(jìn)行分離培養(yǎng)，也可使用乳鼠腦內(nèi)接種進(jìn)行病毒分離。

6.5病毒核酸檢測(cè)[26]血清學(xué)方法只適用于急性和/或恢復(fù)期標(biāo)本，因?yàn)樵诟腥驹缙贗gM和IgG抗體滴度較低，且ZIKV抗體與同為黃病毒屬的登革病毒、黃熱病毒和西尼羅病毒抗體等有較強(qiáng)的交叉反應(yīng)，易于產(chǎn)生假陽性；病毒分離培養(yǎng)對(duì)實(shí)驗(yàn)室要求高、耗費(fèi)時(shí)間長(zhǎng)；相比之下，實(shí)時(shí)RT－PCR（rRTPCR）在感染早期能更快速、準(zhǔn)確、靈敏地檢測(cè)出標(biāo)本中的ZIKV，成為ZIKV診斷的金標(biāo)準(zhǔn)。ZIKV rRT－PCR檢測(cè)引物序列見表1。rRT－PCR反應(yīng)總體積為25μl：kit enzyme mixture（包括逆轉(zhuǎn)錄酶和Taq酶）0.25μl；2×Quantitect RT－PCR buffer 10μl，上下游引物各1.25μl（10μmol/L），探針0.5μl （10μmol/L），RNA5μl，DEPC水補(bǔ)足體系到25μl；推薦循環(huán)參數(shù)：先逆轉(zhuǎn)錄50℃×10min，95℃×15min循環(huán)一次；再按95℃×15s，60℃×1min循環(huán)40次（退火/延伸）。

表1　rRT- PCR檢測(cè)寨卡病毒引物序列

7　結(jié)束語

目前世界范圍內(nèi)尚無針對(duì)寨卡病毒的疫苗，也沒有特異的抗病毒藥物用于臨床，主要是對(duì)癥處理，防止蚊蟲叮咬是最佳的預(yù)防方式。由于寨卡病毒感染可能與小頭畸形、GBS有關(guān)，所以建議準(zhǔn)備妊娠及妊娠期女性謹(jǐn)慎前往寨卡病毒流行地區(qū)。當(dāng)前，寨卡病毒的傳播出現(xiàn)上升趨勢(shì)，為防止疫情傳入我國(guó)，我們應(yīng)該做好預(yù)防控制工作，例如加強(qiáng)出入境檢疫、做好疫情監(jiān)測(cè)、大力開展衛(wèi)生防病工作、加強(qiáng)環(huán)境衛(wèi)生綜合整治以及清除蚊媒滋生地，確保做到早發(fā)現(xiàn)、早報(bào)告、早診斷、早隔離、早治療。

參考文獻(xiàn)

[1]Thomas DL，Sharp TM，Torres J，et al. Local Transmission of Zika Virus－Puerto Rico，November 23，2015－January 28，2016 [J]. MMWR Morb Mortal Wkly Rep，2016，65(6)：154－158.

[2]Dick GW，Kitchen SF，Haddow AJ. Zika Virus (I). Isolations and serological specificity[J]. Trans R Soc Trop Med Hyg，1952，46(5)：509－520.

[3]Lanciotti RS，Kosoy OL，Laven JJ，et al. Genetic and serologic properties of Zika virus associated with an epidemic，Yap State，Micronesia，2007[J]. Emerg Infect Dis，2008，14(8)：1232－1239.

[4]Duffy MR，Chen TH，Hancock WT，et al. Zika virus outbreak on Yap Island，F(xiàn)ederated States of Micronesia [J]. N Engl J Med，2009，360(24)：2536－2543.

[5]Ioos S，Mallet HP，Leparc GI，et al. Current Zika virus epidemiology and recent epidemics[J]. Med Mal Infect，2014，44(7)：302－307.

[6]Kuno G，Chang GJ. Full－length sequencing and genomic characterization of Bagaza，Kedougou，and Zika viruses [J]. Arch Virol，2007，152(4)：687－696.

[7]Cao－Lormeau VM，Roche C，Teissier A，et al. Zika virus，F(xiàn)rench polynesia，South pacific，2013 [J]. Emerg Infect Dis，2014，20(6)：1085－1086.

[8]Kuno G，Chang GJ，Tsuchiya KR，et al. Phylogeny of the genus Flavivirus[J]. J Virol，1998，72(1)：73－83.

[9]Buathong R，Hermann L，Thaisomboonsuk B，et al. Detection of Zika Virus Infection in Thailand，2012－2014 [J]. Am J Trop Med Hyg，2015，93(2)：380－383.

[10]中華人民共和國(guó)國(guó)家衛(wèi)生和計(jì)劃生育委員會(huì).寨卡病毒病診療方案[S]. 2016．

[11]Zammarchi L，Stella G，Mantella A，et al. Zika virus infections imported to Italy：clinical，immunological and virological findings，and public health implications[J]. J Clin Virol，2015，63(2)：32－35. [12]Buckley A，Gould EA. Detection of virus－specific antigen in the nuclei or nucleoli of cells infected with Zika or Langat virus [J]. J Gen Virol，1988，69(Pt 8)：1913－1920.

[13]Hamel R，Dejarnac O，Wichit S，et al. Biology of Zika Virus Infection in Human Skin Cells[J]. J Virol，2015，89(17)：8880－8896.

[14]Moore DL，Causey OR，Carey DE，et al. Arthropod－borne viral infections of man in Nigeria，1964－1970 [J]. Ann Trop Med Parasitol，1975，69(1)：49－64.

[15]Simpson DI. Zika virus infection in man[J]. Trans R Soc Trop Med Hyg，1964，58(4)：335－338.

[16]Smithburn KC. Neutralizing antibodies against arthropod－borne viruses in the sera of long－time residents of Malaya and Borneo[J]. Am J Hyg，1954，59(2)：157－163.

[17]Fagbami AH. Zika virus infections in Nigeria：virological and seroepidemiological investigations in Oyo State [J]. J Hyg (Lond)，1979，83(2)：213－219.

[18]Hammon WM，Schrack WJ，Sather GE. Serological survey for a arthropod－borne virus infections in the Philippines [J]. Am J Trop Med Hyg，1958，7(3)：323－328.

[19]Pond WL. Arthropod－borne virus antibodies in sera from residents of South－East Asia [J]. Trans R Soc Trop Med Hyg，1963，57(5)：364－371.

[20]Olson JG，Ksiazek TG，Suhandiman，et al. Zika virus，a cause of fever in Central Java，Indonesia [J]. Trans R Soc Trop Med Hyg，1981，75(3)：389－393.

[21]Darwish MA，Hoogstraal H，Roberts TJ，et al. A sero－epidemiological survey for Bunyaviridae and certain other arboviruses in Pak-

istan[J]. Trans R Soc Trop Med Hyg，1983，77(4)：446-450.

[22]Marchette NJ，Garcia R，Rudnick A. Isolation of Zika virus from Aedes aegypti mosquitoes in Malaysia [J]. Am J Trop Med Hyg，1969，18(3)：411-415.

[23]Li MI，Wong PS，Ng LC，et al. Oral susceptibility of Singapore Aedes (Stegomyia) aegypti (Linnaeus) to Zika virus[J]. PLoS Negl Trop Dis，2012，6(8)：e1792.

[24]Boorman JP，Porterfield JS. A simple technique for infection of mosquitoes with viruses；transmission of Zika virus[J]. Trans R Soc Trop Med Hyg，1956，50(3)：238-242.

[25]Oehler E，Watrin L，Larre P，et al. Zika virus infection complicated by Guillain-Barre syndrome-case report，F(xiàn)rench Polynesia，December 2013[J/OL]. Euro Surveill，2014，19(9)：pii=20720. http：// www.eurosurveillance.org/ViewArticle.

[26]Faye O，F(xiàn)aye O，Diallo D，et al. Quantitative real-time PCR detection of Zika virus and evaluation with field-caught mosquitoes [J]. Virol J，2013，10：311.

·論著·

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(收稿日期2016-03-01；修回日期2016-03-04)

通信作者：孫長(zhǎng)貴，男，生于1962年9月，碩士研究生導(dǎo)師，主任技師，教授，suncgui@163.com。

作者簡(jiǎn)介：林迪，女，生于1987年10月，本科，技師，從事臨床微生物學(xué)檢驗(yàn)。

DOI：10.3969/j.issn.1674－1129.2016.02.001

中圖分類號(hào)：R373.9，R446

文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼：A

文章編號(hào)：1674－1129(2016)02－0131－03