連農(nóng)923菜豆胚培養(yǎng)技術(shù)及愈傷組織誘導(dǎo)研究

孫麗娜，王淼，吳春華（遼寧大連市農(nóng)業(yè)科學(xué)研究院，116036)

?

連農(nóng)923菜豆胚培養(yǎng)技術(shù)及愈傷組織誘導(dǎo)研究

孫麗娜，王淼，吳春華
（遼寧大連市農(nóng)業(yè)科學(xué)研究院，116036)

摘要：以連農(nóng)923菜豆種子為試驗(yàn)材料，探討不同外植體取材部位對胚培養(yǎng)的效果，并探索不同激素配比及接種方法對連農(nóng)923菜豆愈傷組織誘導(dǎo)效果的影響。試驗(yàn)結(jié)果表明，在菜豆胚培養(yǎng)過程中，完整胚芽、胚根接種法最適合胚培養(yǎng)；愈傷組織誘導(dǎo)的最佳接種方式為胚芽、胚根切段接種法，最佳培養(yǎng)基為MS基本培養(yǎng)基+2 mg/L 2，4-D，pH值5.8。

關(guān)鍵詞：菜豆；胚培養(yǎng)；愈傷組織；激素；接種方式

孫麗娜（1979-），女，碩士，農(nóng)藝師，從事植物組織培養(yǎng)工作，電話：15524577857，E-mail：511726704@qq.com

吳春華，通信作者，研究方向?yàn)橹参锝M織培養(yǎng)

菜豆（Phaseolus vulgaris Linn.)，也稱蕓豆、二季豆或四季豆，豆科菜豆屬一年生纏繞或近直立草本植物，原產(chǎn)美洲的墨西哥和阿根廷，中國在16世紀(jì)末開始引種栽培，是我國消費(fèi)者比較喜愛的蔬菜之一，但在栽培過程中病害嚴(yán)重。連農(nóng)923是一個早熟豐產(chǎn)的蔓生菜豆品種，因具有早熟、豐產(chǎn)、商品性狀好、口感佳等特點(diǎn)，深受廣大種植戶及消費(fèi)者喜愛，但是在栽培過程中病毒病發(fā)生率較高，成為困擾該品種推廣的一大難題。以連農(nóng)923種子作為試驗(yàn)材料，在前人研究的基礎(chǔ)上，比較用不同外植體取材部位進(jìn)行胚培養(yǎng)的效果及探索不同激素配比對菜豆愈傷組織誘導(dǎo)的影響。

1　材料與方法

1.1試驗(yàn)材料

連農(nóng)923菜豆種子由大連市農(nóng)業(yè)科學(xué)研究院菜豆課題組提供。

1.2試驗(yàn)方法

①胚培養(yǎng)實(shí)生苗的獲得挑選籽粒飽滿、大小一致、無病蟲害、無霉變的菜豆種子，在超菌工作臺上于室溫下用無菌水浸泡24 h，期間可換水2～3次，用75%酒精消毒30 s，用適量無菌水沖洗3次，再用升汞消毒12～15 min，然后用無菌水沖洗3次，將沖洗后的種子放置在已放置無菌濾紙的培養(yǎng)皿中，用小鑷子剝?nèi)ネ獠糠N皮，采取以下3種方式進(jìn)行組織培養(yǎng)。具體操作如下：a.將2種胚葉分離，將帶有胚芽、胚根的單瓣接種至MS基本培養(yǎng)基中，保持種臍貼近培養(yǎng)基；b.將剝凈種皮的完整豆瓣保持胚芽向下，垂直接種于MS培養(yǎng)基內(nèi)；c.剝?nèi)⊥暾哐?、胚根，將胚根垂直接種于MS培養(yǎng)基內(nèi)。每種方式培養(yǎng)50瓶，每瓶接種1枚，后置于溫濕度、光照強(qiáng)度適宜的組培室中培養(yǎng)，MS基本培養(yǎng)基pH值均為5.8。培養(yǎng)過程中注意觀察，以防種苗徒長。接種10 d后觀察長勢及污染情況，并統(tǒng)計(jì)發(fā)根數(shù)、出芽外植體數(shù)、出芽率等相應(yīng)指標(biāo)，并于田間移栽7 d后統(tǒng)計(jì)移栽成活率。

②愈傷組織誘導(dǎo)培養(yǎng)種子消毒處理同1.2①。采取3種方式分別用3種培養(yǎng)基進(jìn)行愈傷組織培養(yǎng)，1、2、3號培養(yǎng)基分別為：MS基本培養(yǎng)基+2 mg/L 2，4-D，pH值5.8；MS基本培養(yǎng)基+2 mg/L 6-BA+ 0.4 mL/L NAA，pH值5.8；MS基本培養(yǎng)基+1 mg/L 6-BA+0.2 mL/L NAA，pH值5.8。具體如下：a.剝?nèi)プ尤~，留取完整胚芽、胚根，平鋪至3種愈傷組織培養(yǎng)基表面；b.剝?nèi)⊥暾呐哐俊⑴吒?，從中間部位切斷，將切口面垂直放置于培養(yǎng)基表面；c.將帶胚芽、胚根的子葉截?cái)?，將切口面垂直放置?種培養(yǎng)基表面。置于溫濕度、光照強(qiáng)度適宜的組培室中培養(yǎng)，培養(yǎng)條件與胚培養(yǎng)實(shí)生苗條件相同。愈傷組織誘導(dǎo)率（%)=（接種后第10天產(chǎn)生愈傷組織的外植體個數(shù)/接種外植體總數(shù))×100%。

2　結(jié)果與分析

2.1不同外植體對胚培養(yǎng)效果的影響

由表1可知，接種10 d后觀察，雖然完整胚芽、胚根接種法萌發(fā)天數(shù)較其他2種接種方法長，但植株根部發(fā)育程度較好，發(fā)根數(shù)、出芽外植體數(shù)、出芽率、移栽成活率等均高于其他2種方式。無種皮完整豆瓣胚培養(yǎng)效果最差，子葉明顯變黑褐色，3種接種方式中，以完整胚芽、胚根接種方式最佳。

2.2愈傷組織的誘導(dǎo)培養(yǎng)

由表2可知，以胚芽、胚根切斷接種法的愈傷組織誘導(dǎo)情況最好，子葉切段接種法效果次之，以完整胚芽、胚根平鋪接種法的誘導(dǎo)情況最差。因此，胚芽、胚根切段接種法是菜豆愈傷組織誘導(dǎo)的最佳外植體，且本試驗(yàn)中，胚芽、胚根切段接種法誘導(dǎo)愈傷組織的最適培養(yǎng)基為：MS基本培養(yǎng)基+2 mg/L 2，4-D，pH值5.8。

3　討論與結(jié)論

脫毒菜豆實(shí)生苗的培養(yǎng)方式有很多，外植體取材部位及接種方法對實(shí)生苗發(fā)育起決定作用，本試驗(yàn)探索了3種外植體部位對實(shí)生苗形成的影響，結(jié)果顯示以完整胚芽、胚根接種法效果最佳。

不同外植體接種方式及不同培養(yǎng)基對愈傷組織誘導(dǎo)率有明顯差異。本試驗(yàn)中，胚芽、胚根切段接種法的誘導(dǎo)率遠(yuǎn)高于其他2種接種方法，愈傷組織呈黃綠色、生長迅速且愈傷程度較高，子葉切段接種方法的誘導(dǎo)率略高于胚芽、胚根平鋪接種法。通過接種于不同培養(yǎng)基上培養(yǎng)可以看出，以胚芽、胚根切斷接種法為獲得菜豆愈傷組織的最佳接種法，MS基本培養(yǎng)基+2 mg/L 2，4-D是最適合培養(yǎng)連農(nóng)923菜豆愈傷組織。

表1　外植體對胚培養(yǎng)效果生長的影響

表2　不同外植體接種方法對愈傷組織誘導(dǎo)的影響

參考文獻(xiàn)

[1]卓孝康，蘭思仁.大苞鞘石斛胚組織培養(yǎng)及植株再生研究[J].福建林學(xué)院學(xué)報(bào)，2014（4)：289-296.

[2]任海燕，杜學(xué)梅.棗胚培養(yǎng)研究進(jìn)展[J].果樹學(xué)報(bào)，2014 （5)：967-972.

[3]陶興魁，陳鋒.不同植物激素對藍(lán)莓幼莖愈傷組織誘導(dǎo)的比較研究[J].科技視界，2014（5)：967-972.

[4]王德信.馬鈴薯愈傷組織誘導(dǎo)中激素濃度配比優(yōu)化研究[J].安徽農(nóng)業(yè)科學(xué)，2012（10)：5 795-5 796.

[5]周紅菊.TDZ對歐亞旋覆花愈傷組織誘導(dǎo)的影響研究[J].湖北農(nóng)業(yè)科學(xué)，2010（4)：798-799.

[6]韓啟厚，古瑜，于海龍.菜豆組織培養(yǎng)及遺傳轉(zhuǎn)化研究進(jìn)展[J].中國農(nóng)學(xué)通報(bào)，2013（4)：97-101.

[7]姜英林，馮霄漢.早熟西洋梨胚培養(yǎng)技術(shù)研究[J].北方果樹2012（6)：5-8.

Studies on Embryo Culture Technology and Callus Induction of Kidney Bean Cultivar Liannong 923

SUN Lina,WANG Miao,WU Chunhua
(Dalian Academy of Agricultural Sciences,Liaoning 116036)

Abstract:Taking seeds of kidney bean cultivar Liannong 923 as material,we investigated the effects of different explants on embryo culture and studied the effects of different hormone combinations and inoculation methods on callus induction.The results showed that,the complete radicle and germ was the most suitable cultivation method for embryo culture of Liannong 923.In addition,crosscutting radicle and germ was the best inoculation method for callus induction,and the optimized medium was MS medium+2 mg/L 2,4-D,with pH value of 5.8.

Key words:Kidney bean;Embryo culture;Callus;Hormone;Inoculum method

收稿日期：2015-11-18

DOI:10.3865/j.issn.1001-3547.2016.04.022

中圖分類號：S643.1

文獻(xiàn)標(biāo)識碼：A

文章編號：1001-3547（2016)04-0056-02