美藤果油增強(qiáng)免疫力的試驗(yàn)研究

◎李 慧，金 紅，王 曄，蘇風(fēng)龍

（北京頤興堂生物科技有限公司，北京 100022）

美藤果產(chǎn)自于南美洲印加地區(qū)，在該地區(qū)已有千百年食用美藤果的歷史[1]。美藤果油是經(jīng)美藤種子榨取提煉出的一類植物油，美藤果油中富含大量的不飽和脂肪酸、維生素等營養(yǎng)物質(zhì)[2]。在美藤果油中不飽和脂肪酸的比例超過90%以上，其中ω-3與ω-4的比例為1∶0.75，與人體的吸收比例非常接近。相關(guān)研究指出不飽和脂肪酸與免疫機(jī)能有關(guān)[3]，但是有關(guān)美藤果油與免疫能力的相關(guān)報(bào)道較少，為了探究美藤果油與免疫能力的關(guān)系，做了相關(guān)研究，現(xiàn)報(bào)道如下。

1 資料與方法

1.1 試驗(yàn)動(dòng)物及分組

雄性健康Wistar大鼠20只，雄性高血脂Wistar大鼠20只，體重（200±10）g，由北京市第一醫(yī)院動(dòng)物實(shí)驗(yàn)中心提供。試驗(yàn)前，為使大鼠適應(yīng)環(huán)境將大鼠放在實(shí)驗(yàn)室飼養(yǎng)一周，隨后按照隨機(jī)法將健康Wistar大鼠分為實(shí)驗(yàn)1組和對(duì)照1組，將雄性高血脂Wistar大鼠分為實(shí)驗(yàn)2組和對(duì)照2組，每組10只。

1.2 飼料配制

對(duì)照1、2組大鼠使用普通大鼠飼料，實(shí)驗(yàn)1、2組大鼠在對(duì)照組基礎(chǔ)上，每百克飼料中混合7 g美藤果油（購自于西雙版納印奇生物資源開發(fā)有限公司，批號(hào)：20140204）。

1.3 試驗(yàn)方法

1.3.1 試驗(yàn)儀器

24、96孔培養(yǎng)板（上海臥宏生物科技有限公司），高速離心機(jī)（張家港市中沃機(jī)械有限公司），全自動(dòng)生化儀（普朗醫(yī)療器械有限公司）。

1.3.2 試驗(yàn)方法

4組大鼠連續(xù)飼養(yǎng)10周。飼養(yǎng)結(jié)束后，將大鼠禁食12 h，無菌取出脾臟分離獲得脾淋巴細(xì)胞。

一是測定脾淋巴細(xì)胞增殖活性[4，5]。將在無菌條件下取出的脾臟碾碎并制作成單個(gè)細(xì)胞懸液，將細(xì)胞數(shù)調(diào)整為4×109個(gè)/L。將調(diào)整后的細(xì)胞懸液加入96孔平底板進(jìn)行培養(yǎng)，每孔加入200 μL，共加入8孔，將8孔分為陽性孔和陰性孔，其中陽性孔4孔，其中每孔加入25 μL濃度為50 mg/L的刀豆素（ConA），陰性孔也4孔則不加入ConA，加好后的平地培養(yǎng)板置于CO2培養(yǎng)箱，在37 ℃溫度下培養(yǎng)48 h。在培養(yǎng)結(jié)束前4 h，將10 μL濃度為5 g/L的MTT10加入96孔平底培養(yǎng)板的每個(gè)孔中，在培養(yǎng)結(jié)束前2 h，將100 μL緩沖液加入各個(gè)孔中用于測定光密度，加完后開始測定光密度。其中，T淋巴細(xì)胞的增殖能力用刺激指數(shù)（Stimulation Index，SI）來反映。SI=ConA刺激的陽性孔的平均光密度值／ConA未刺激的陰性孔的平均光密度值。

二是白介素-2、4（interleukin，IL-2，IL-4）測定。將淋巴細(xì)胞懸液分別加入24孔平底培養(yǎng)板，每孔1 mL，隨后再向每孔加入100 μL濃度為50 mg/L的ConA，放入CO2培養(yǎng)箱中培養(yǎng)，溫度37 ℃，培養(yǎng)時(shí)間48 h。培養(yǎng)結(jié)束后，將培養(yǎng)板中的淋巴細(xì)胞上清液在無菌條件下吸取后，載分別裝入0.5 mL EP管中，置入-20 ℃的冰箱中保存，用于IL-2和IL-4含量的檢測。采用ELISA檢測試劑盒檢測檢測IL-2和IL-4的含量。

1.4 數(shù)據(jù)記錄與統(tǒng)計(jì)分析

飼養(yǎng)期間觀察4組大鼠的活動(dòng)情況及死亡情況并記錄；對(duì)4組大鼠淋巴細(xì)胞的增殖能力用刺激指數(shù)及白介素-2、4結(jié)果進(jìn)行記錄。

本次研究所獲得數(shù)據(jù)均采用SPSS20.0進(jìn)行處理，組件比較采用t檢驗(yàn)，以（x±s）表示，以P＜0.05為統(tǒng)計(jì)學(xué)存在差異。

2 結(jié)果

2.1 觀察結(jié)果

在飼養(yǎng)期間，4組大鼠均未出現(xiàn)死亡，且通過觀察發(fā)現(xiàn)實(shí)驗(yàn)1組大鼠活力及精力均強(qiáng)于其他大鼠，且對(duì)照2組大鼠的精力及活力最差。

2.2 小鼠脾淋巴細(xì)胞增殖活性和白介素含量對(duì)比

實(shí)驗(yàn)1組淋巴細(xì)胞刺激指數(shù)、IL-2、IL-4的含量顯著高于實(shí)驗(yàn)2組、對(duì)照1組及對(duì)照2組大鼠（P＜0.05），實(shí)驗(yàn)2組與對(duì)照1組則不存在顯著性差異（P＞0.05），對(duì)照2組大鼠顯著低于實(shí)驗(yàn)2組（P＜0.05），詳見表1。

表1 鼠脾淋巴細(xì)胞增殖活性和白介素含量對(duì)比表（x±s）

3 討論

美藤果油是一種對(duì)人類健康十分有益的可食用植物油，而且也是世界上質(zhì)量最佳的食用油之一[6]。相關(guān)報(bào)道指出[6]，美藤果油中含有豐富的蛋白質(zhì)及不飽和脂肪酸，其中蛋白質(zhì)含量遠(yuǎn)遠(yuǎn)高于花生中蛋白質(zhì)的含量，而不飽和脂肪酸的含量僅僅低于核桃中不飽和脂肪酸的含量。劉付英[2]曾對(duì)美藤果油中不飽和脂肪酸的含量進(jìn)行過分析，發(fā)現(xiàn)美藤果油中不飽和脂肪酸含量高達(dá)92.46%，其中亞麻酸的含量高達(dá)45.62%，進(jìn)一步證明了美藤果油的營養(yǎng)價(jià)值。吳爭[7]等人曾對(duì)美藤果油做過相關(guān)安全性評(píng)價(jià)，結(jié)果發(fā)現(xiàn)，在實(shí)驗(yàn)室條件下，并未觀察到美藤果油的不良生物學(xué)影響，說明美藤果油是一類無任何毒副作用的食品油。此外，還有學(xué)者就美藤果油的功效進(jìn)行過研究，結(jié)果顯示美藤果油具有良好的降脂作用[8]，這可能與其含有豐富的不飽和脂肪酸有關(guān)，因?yàn)椴伙柡椭舅峋哂泻芎玫慕抵饔肹9]，所以美藤果油也具有良好的降脂作用。研究結(jié)果還顯示，美藤果油具有保護(hù)上皮細(xì)胞完整的作用，筆者認(rèn)為這與其含有豐富的蛋白質(zhì)存在關(guān)系。

但是，目前臨床上有關(guān)美藤果油增強(qiáng)免疫力的報(bào)道較少，為了探究美藤果油與免疫力的關(guān)系，筆者做了相關(guān)研究，結(jié)果顯示4組大鼠均未出現(xiàn)死亡，且實(shí)驗(yàn)1組大鼠活力及精力均強(qiáng)于其他大鼠，對(duì)照2組大鼠的精力及活力最差；實(shí)驗(yàn)1組淋巴細(xì)胞刺激指數(shù)、IL-2、IL-4 的含量顯著高于其他組（P＜0.05），實(shí)驗(yàn)2組與對(duì)照1組則不存在顯著性差異（P＞0.05），對(duì)照2組大鼠則顯著低于實(shí)驗(yàn)2組（P＜0.05）。本次研究結(jié)果說明高血脂大鼠的免疫力低于健康大鼠，但是在喂養(yǎng)添加美藤果油的飼料后，健康大鼠及高血脂大鼠的免疫力均有提高，充分證實(shí)了美藤果油具有提高免疫力的作用。

綜上所述，美藤果油具有增強(qiáng)免疫力的功能，值得推廣食用。

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