不同血清學(xué)方法對調(diào)查現(xiàn)場包蟲病患者血清的檢測及評價

摘要：目的 探討對于調(diào)查現(xiàn)場包蟲病患者應(yīng)用不同血清學(xué)方法進(jìn)行血清檢測的效用。方法 采用3種囊型包蟲抗Dot-ELISA和IHA以及ELISA，1種泡型包蟲EM18抗原ELIB檢測臨床確診120例包蟲病患者的血清。結(jié)果 經(jīng)B超和X線影像學(xué)檢測確診的120例包蟲病患者，應(yīng)用不同血清檢驗方法檢查的結(jié)果中，囊型包蟲病和泡型包蟲病各有109例和11例，其中泡型包蟲病使用Dot-ELIS、IHA、ELISA該3種血清檢驗法與B超和X線影像學(xué)檢測結(jié)果等同；肺臟包蟲病患者應(yīng)用囊型包蟲抗原IHA檢測血清陽性率低于其它部位血清陽性率，但Dot-ELISA檢驗和IHA檢驗及ELISA檢驗所檢出的血清陽性率相近。結(jié)論 通過甄別不同血清學(xué)對包蟲病的檢測效用，能夠為臨床治療和積極預(yù)防控制包蟲病的流行提供可靠依據(jù)，具有較強(qiáng)的實用價值。

關(guān)鍵詞：血清學(xué)方法；包蟲病；預(yù)防控制

包蟲病多見于新疆、內(nèi)蒙和青海等農(nóng)牧區(qū)，導(dǎo)致棘球絳及其幼蟲寄生人體的原因有農(nóng)牧民習(xí)俗和宗教信仰等原因。隨著包蟲病感染病例的增多，也使得醫(yī)療機(jī)構(gòu)提高了預(yù)防控制包蟲病流行的力度。而影像檢查技術(shù)不容易及時發(fā)現(xiàn)囊腫或腫塊從而導(dǎo)致誤診，本文將探討通過檢測包蟲病患者血清的免疫學(xué)方法對該病進(jìn)行檢測，以達(dá)到預(yù)防控制包蟲病流行的效用；現(xiàn)報道如下。

1資料與方法

1.1抗原與血樣 從新宰綿羊肝臟或肺臟提取棘球蚴囊液，用pH 9.6的碳酸鹽稀釋使其蛋白質(zhì)含量達(dá)到50 μg/ml；采用預(yù)包被板和包蟲病抗體檢測試劑盒等。血樣采自流行病學(xué)調(diào)查現(xiàn)場，經(jīng)我B超和X線檢查確診的120例包蟲病患者的血清各取5 ml，也抽取非包蟲病體檢者陰性血清作為參照，血清經(jīng)分離后保存待用。

1.2檢驗方法 檢測方法有：點酶聯(lián)免疫吸附檢驗（Dot-ELIS）和微量間接血凝檢驗法（IHA），酶聯(lián)免疫吸附檢驗（ELISA）和EM18免疫印漬檢驗（EM18-ELIB）。②Dot-ELIS檢驗將抗原吸附在PVC反應(yīng)板表面，待充分反應(yīng)后用洗滌法徹底清除游離殘余。②IHA檢驗抗原載體經(jīng)金屬陽離子靜電作用讓蛋白質(zhì)與紅細(xì)胞表面結(jié)合達(dá)到致敏效果，并在微量滴定板上以1：64比例稀釋再加入致敏紅細(xì)胞懸液1滴，混勻1～2 h后觀察紅細(xì)胞凝集程度以確定陽性反應(yīng)孔為滴度終點。③ELISA檢驗將棘球蚴囊液抗原稀釋至每孔內(nèi)含蛋白質(zhì)10 μg/ml，其中IgG抗原酶結(jié)合物工作濃度為1：200。顯色采用TMBS底物，陽性臨界值以x+3s≥陰性為對照。④EM18-ELIB檢驗抗原采用泡型包蟲原頭蚴粗抗原，SDS-PAGE電泳結(jié)束后再轉(zhuǎn)至NC膜制成抗原膜條，再用所制成的抗原膜條做Western Bolt檢驗，血清稀釋比例為1：100，IgG抗原酶結(jié)合物按1：100比例稀釋然后經(jīng)BA底物顯色反應(yīng)后，若8 kDa處出現(xiàn)反應(yīng)帶可判斷為陽性。

1.3數(shù)據(jù)處理 采用SPSS17.0軟件處理實驗數(shù)據(jù)，計量資料使用（x±s）表示，進(jìn)行t檢驗；計數(shù)資料使用χ2檢驗；以P<0.05為差異具有統(tǒng)計學(xué)意義。

2結(jié)果

2.1不同血清檢驗方法的檢測結(jié)果 經(jīng)B超和X線影像學(xué)檢測確診的120例包蟲病患者，應(yīng)用不同血清檢驗方法檢查的結(jié)果中，囊型包蟲病和泡型包蟲病各有109例和11例，其中對泡型包蟲病使用Dot-ELIS、IHA、ELISA該3種血清檢驗法與B超和X線影像學(xué)檢測結(jié)果等同，Dot-ELIS、IHA、ELISA和EM18-ELIB這4中血清檢驗法也與上述檢測方法所得出的結(jié)果等同，見表1。

2.2不同血清學(xué)方法對包蟲病患不同位置的檢測結(jié)果 肺臟包蟲病患者應(yīng)用囊型包蟲抗原IHA檢測血清陽性率低于其它部位血清陽性率，但Dot-ELISA檢驗和IHA檢驗及ELISA檢驗所檢出的血清陽性率相近，見表2。

3討論

包蟲病容易寄生于人體組織和器官以至于臨床難以依據(jù)病原學(xué)進(jìn)行確診，所以臨床對于包蟲病的檢測通常將查體和影像學(xué)以及免疫學(xué)等檢驗結(jié)果做綜合性判斷。影像學(xué)檢驗雖然能夠有較高檢出率，但影像檢查技術(shù)不容易及時發(fā)現(xiàn)囊腫或腫塊從而導(dǎo)致誤診。而包蟲病作為地方性疾病，由于感染病例的增多也相應(yīng)提高臨床對其的重視程度。

本次探討中不同檢驗方法對囊型和泡型包蟲病敏感程度也不盡相同，其中Dot-ELISA抗原和IHA抗原對于該兩型包蟲病的敏感度相似。對泡型包蟲病使用Dot-ELIS、IHA、ELISA該3種血清檢驗法與B超和X線影像學(xué)檢測結(jié)果等同，但ELISA抗原檢出囊型包蟲陽性率低于Dot-ELISA和IHA檢驗法，說明該兩種囊型包蟲生理和生化代謝各異。因此，需要在臨床診斷中加強(qiáng)檢測的敏感度。

泡球蚴缺乏完整角質(zhì)層使得故血清中抗多含有囊型包蟲病，B超和影像檢驗出的鈣化的囊型或灶型包蟲病多分布于肝、肺2臟，血清學(xué)檢驗方法不易檢出的原因，通常為包蟲囊腫生長受到抑制后出現(xiàn)退行性改變，減少了血清抗體滴度導(dǎo)致血清學(xué)方法難以發(fā)現(xiàn)特異性抗體[1]。此外，還需看到本次檢測結(jié)果中還存在肝臟、肺臟的囊塊符合影像征象，但3種血清學(xué)檢查結(jié)果均不支持該結(jié)果，這也說明對包蟲病的診斷需綜合臨床和各類檢驗結(jié)果做出判斷。

本次探討可見囊型和泡型該2型包蟲病的致病性及診療方法各異，也導(dǎo)致了臨床需審慎做出判斷。在鈣化的灶型或囊型中若EM18-ELIB檢查為陽性則可考慮為泡型包蟲病，而單發(fā)單囊包蟲患者血清呈陽性則說明囊型包蟲也會分泌出EM18抗原，同時也說明種棘球絳蟲的生理生化代謝因種類不同其差異也不盡相同[2]。據(jù)盧愛桃，郭衛(wèi)東，宋壯志，等報道[3]，目前通過將泡型包蟲的原頭節(jié)進(jìn)行分離發(fā)現(xiàn)其具有EM2、EM2a和EM18特異性抗原，也說明泡型包蟲有特異性較強(qiáng)，與本文所探討的結(jié)果具有一致性。

綜上，通過采用不同血清學(xué)對包蟲病進(jìn)行檢測，并對比各種檢查方法的檢測結(jié)果的敏感度和準(zhǔn)確率，便于臨床分析各種檢測方法的效用，有助于臨床對包蟲病作出準(zhǔn)確的診療判斷，進(jìn)而可以起到積極預(yù)防控制包蟲病的流行的作用。

參考文獻(xiàn)：

[1]侯巖巖，趙江山.新疆6～12歲學(xué)生包蟲病血清學(xué)調(diào)查分析[J].疾病預(yù)防控制通報，2014，29（6）：4-5.

[2]高春花，汪俊云，楊玥濤.等.5種抗原檢測囊型包蟲病血清學(xué)評價[J].中國人獸共患病學(xué)報，2012，28（8）：811-814.

[3]盧愛桃，郭衛(wèi)東，宋壯志，等.呼和浩特農(nóng)村地區(qū)人群包蟲病血清學(xué)調(diào)查研究[J].醫(yī)學(xué)動物防制，2013，29（2）：184-185.

編輯/孫杰