超高效液相色譜法在藥物分析中的應(yīng)用研究

關(guān)禮

【摘 ? 要】 目的 ?揭示超高效液相色譜技術(shù)在藥物分析中的優(yōu)勢。方法 ?應(yīng)用超高效液相色譜技術(shù)、高效液相色譜技術(shù)對利福平等藥物進(jìn)行分析。結(jié)果 ?在同等條件下，超高效液相色譜質(zhì)譜聯(lián)用技術(shù)和高效液相色譜技術(shù)的分離分析結(jié)果基本一致，但是前者所用的分離分析時間要少于后者，且檢測靈敏度、藥物回收率高于后者。結(jié)論 ?超高效液相色譜技術(shù)在藥物分析中具有顯著優(yōu)勢，值得推廣應(yīng)用。

【關(guān)鍵詞】 超高效液相色譜法;藥物分析;應(yīng)用

【中圖分類號】 R914 ? ?【文獻(xiàn)標(biāo)識碼】 A

在化學(xué)分離領(lǐng)域，高效液相色譜技術(shù)是一項常規(guī)的分離技術(shù)，由于其具有高檢測靈敏度、較高分離效率、較廣應(yīng)用范圍、較快分析速度等優(yōu)點，已經(jīng)廣泛應(yīng)用于藥物分析[1]。隨著科學(xué)技術(shù)的不斷進(jìn)步和人們對藥物分析要求的提高，超高效液相色譜技術(shù)應(yīng)運而生。超高效液相色譜技術(shù)是結(jié)合了超高壓系和小顆粒填料色譜的新型液相色譜技術(shù)，其檢測靈敏度、色譜峰分離度分別是高效液相色譜技術(shù)的3倍和1.7倍，而且極大縮短了樣品分析周期，減少了溶劑用量，降低了分析成本[2]。因此，該技術(shù)將是藥品分析新的發(fā)展方向。

1 ?儀器與試藥

儀器：EX1700S-HPLC超高效液相色譜儀（上海伍豐科學(xué)儀器有限公司）;LC210高效液相色譜儀（上海儀電分析儀器有限公司）。

試藥：利福平（黑龍江省地納制藥有限公司，批準(zhǔn)文號：國藥準(zhǔn)字H23022495）。吡嗪酰胺（廣東華南藥業(yè)集團(tuán)有限公司，國藥準(zhǔn)字H44020761）。異煙肼（上海信誼藥廠有限公司，國藥準(zhǔn)字H31020494）。磷酸伯氨喹（上海中西藥業(yè)股份有限公司，批準(zhǔn)文號：國藥準(zhǔn)字H31021292）。血栓通注射液（哈爾濱圣泰生物制藥有限公司，國藥準(zhǔn)字Z23020824）。

2 ?方法與結(jié)果

2.1 ?分析化學(xué)藥品 ?應(yīng)用超高效液相色譜技術(shù)分離、分析利福平、吡嗪酰胺、異煙肼，采用粒徑為1.7μm的色譜柱進(jìn)行梯度洗脫。當(dāng)柱溫為30℃時，三種物質(zhì)的完全分離時間只用了2分鐘，而高效液相色譜技術(shù)的分離時間則在15分鐘左右;當(dāng)柱溫上升到90℃，完全分離時間只需1分鐘。

2.2 ?分析生化藥品 ?分別以超高效液相色譜技術(shù)和高效液相色譜技術(shù)分析經(jīng)柱前衍生處理的蛋白質(zhì)水解物中氨基酸，發(fā)現(xiàn)分析結(jié)果相當(dāng)，但前者所用的時間明顯少于后者，僅相當(dāng)于后者的40%。

2.3 ?分析中藥成分 ?利用超高效液相色譜技術(shù)檢測血栓通注射液中三七皂苷R1和人參皂苷Rg1、Re、Rb1、Rd的含量，在分析時間為9.5分鐘時，五種成分已得到良好分析，而且最低檢出限、最低定量限各達(dá)到了0.2ng和0.5ng，平均回收率均在95%以上。

應(yīng)用超高效液相色譜技術(shù)、高效液相色譜技術(shù)分析丹參中丹酚酸B的含量，兩種方法得出的結(jié)果是一致的，可見前者可代替后者分析丹酚酸B的含量，在保證分析質(zhì)量的前提下，提高分析速度和靈敏度，通過減少有機(jī)溶劑的使用而降低分析成本[3]。

2.4 ?分析藥物代謝產(chǎn)物 ?利用超高效液相色譜質(zhì)譜聯(lián)用技術(shù)分析C3H/HeNCrj小鼠毛發(fā)組胺及代謝產(chǎn)物，檢測限分別為0.21、1.0、0.17、0.11pmol，顯示出了良好的線性范圍，此外，小鼠的毛干、毛根組胺及其代謝產(chǎn)物也被檢測了出來。在多反應(yīng)監(jiān)測模式下應(yīng)用超高效液相色譜質(zhì)譜聯(lián)用技術(shù)分析大鼠血漿中的雙氫槲皮素，線性范圍6ng/ml—6.75ng/ml，回收率大于92.9%，雙氫槲皮素的絕對生物利用度為0.17%。

2.5 ?提取藥物成分 ?以分離黑鰻藤藤莖提取物中的C21甾體糖苷為例。中藥黑鰻藤藤莖提取物成分復(fù)雜，常規(guī)的高效液相色譜技術(shù)一般需要60分鐘才能將其成分較好地分離，而使用超高效液相色譜技術(shù)則只需要30分鐘甚至更短的時間就可完成，可見超高效液相色譜技術(shù)在保證分離質(zhì)量地前提下，極大縮短了分離時間。

在兩種分離進(jìn)行到8-20分鐘時，高效液相色譜技術(shù)的譜圖中出現(xiàn)了1個色譜峰，而超高效液相色譜技術(shù)的譜圖則出現(xiàn)了7個色譜峰;而且在提取物濃度一致、進(jìn)樣量均為5μL的條件下，高效液相色譜技術(shù)最高峰的吸收值為2.6AU，而超高效液相色譜技術(shù)相應(yīng)的吸收值則為0.6AU，極大提高了分離度和檢測靈敏度。

3 ?討論

超高效液相色譜技術(shù)的原理與高效液相色譜技術(shù)相同，都是以范德米特方程作為理論基礎(chǔ)[4]。范德米特方程為：HETP=AdP+B/v+C（dP）2v。其中HETP表示理論塔板高度，A表示渦流擴(kuò)散系數(shù)，dP表示填料微粒直徑，B表示分子徑向擴(kuò)散技術(shù)，v表示流動相線速度，C表示傳質(zhì)因子。不同的微粒有不同的色譜柱效流速，微粒直徑越小，色譜柱效越高，流速也就越高[5]。因此在這個方程中，通過控制微粒的直徑，可以提高色譜柱效和流速，也就意味著色譜的分離度也能得到相應(yīng)的提高。盡管二者原理相同，但超高效液相色譜技術(shù)卻超越了高效液相色譜技術(shù)。

綜上所述，利用超高效液相色譜質(zhì)譜聯(lián)用技術(shù)分析藥物，有助于提高藥物回收率，提高檢測靈敏度?？梢姵咝б合嗌V技術(shù)相比于高效液相色譜技術(shù)，在藥物分析中具有顯著優(yōu)勢，值得推廣應(yīng)用。

參考文獻(xiàn)

[1] 中華人民共和國藥典（2005版）[M].

[2] 印成霞.超高效液相色譜法在藥物分析中的應(yīng)用研究[J].中國實用醫(yī)藥，2013，8（23）：231.

[3] 周之鴿.超高效液相色譜在藥物分析中的應(yīng)用觀察[J].現(xiàn)代養(yǎng)生，2014，5（10）：70.

[4] 黃琳娜.超高效液相色譜—質(zhì)譜聯(lián)用技術(shù)在藥物分析中的應(yīng)用研究[D].浙江工業(yè)大學(xué)，2010.

[5] 劉靜，陳紹鋒.超高效液相色譜在體內(nèi)藥物分析中的應(yīng)用[J].貴州醫(yī)藥，2014，38（3）：281.