脾虛高脂血癥大鼠肝臟AS信號通路相關基因表達研究

李靜 賈連群 朱美林 曹媛 張允 林曉曦

【摘 ? 要】 目的 ?利用PCR array技術檢測脾虛高脂血癥大鼠肝臟動脈粥樣硬化（AS）信號通路相關基因mRNA水平，初步揭示上述基因表達變化與脾虛高脂血癥發(fā)生的關系。方法 ?SPF級健康雄性SD大鼠30只，隨機分為空白對照組和脾虛高脂血癥組，脾虛高脂血癥組采用勞倦過度加飲食不節(jié)結合高脂飼料喂飼造模。結果 ?與空白對照組相比，脾虛高脂血癥組大鼠血清 HDL-C 水平顯著降低，TC和LDL-C水平顯著升高，肝細胞形成大量脂質(zhì)沉積。結論 ?肝臟AS信號通路相關基因mRNA表達變化可能與脾虛高脂血癥發(fā)生有關。

【關鍵詞】 脾虛;高脂血癥;PCR array;肝臟;信號通路

【中圖分類號】 R122.1+2 ? ?【文獻標識碼】 A

本研究利用PCR array技術檢測脾虛高脂血癥大鼠肝臟AS信號通路相關基因mRNA水平，初步揭示上述基因表達變化與脾虛高脂血癥之間的關系。

1 ?材料

1.1 ?實驗動物 ?雄性SD大鼠30只，SPF級，體重（300±10）g，購自北京維通利華實驗動物技術有限公司，合格證號SCXK（京）2012-0001。動物購進后，飼養(yǎng)環(huán)境溫度為（25±1）℃，自然光照，喂以正常飼料自由飲食，適應環(huán)境7d，進入實驗過程。

1.2 ?方法

1.2.1 ?血脂檢測 ?全自動生化分析儀檢測血清中TG、TC、HDL-C、LDL-C含量。

1.2.2 ?肝臟病理形態(tài)學觀察 ?肝臟4%多聚甲醛溶液中固定24h，按蘇木素-伊紅（HE）染色常規(guī)方法進行70%-100%梯度酒精脫水、二甲苯透明、石蠟包埋、切片（切片厚度5μm）、貼片、烤片后，用二甲苯脫蠟、70%-100%梯度酒精脫水、二甲苯透明，中性樹膠封片石蠟包埋，光學顯微鏡下觀察肝臟形態(tài)。

1.2.3 ?油紅 O染色觀察肝臟脂質(zhì)沉積 ?肝臟樣本制備冰凍切片（6μm），切片干燥后入50%乙醇水洗，油紅O染色8min，50%乙醇分化，自來水終止分化，蘇木素復染，自來水反藍，甘油明膠封片。光學顯微鏡下觀察肝臟脂質(zhì)沉積情況。

2 ?結果

2.1 ?各組實驗大鼠血脂變化比較（見表1） ?與空白對照組相比，脾虛高脂血癥組大鼠血清TC、LDL-C、水平顯著升高（均P<0.01），HDL-C水平顯著降低（均P<0.01）。

2.2 ?各組實驗大鼠肝臟病理形態(tài)學及油紅O染色改變HE染色顯示空白對照組大鼠肝細胞索排列正常，核圓、大、居中，胞漿內(nèi)無脂滴蓄積，小葉內(nèi)無炎癥細胞浸潤。脾虛高脂血癥組大鼠肝臟組織變性明顯，肝細胞腫大變圓，胞漿疏松，內(nèi)含大的脂肪滴，部分細胞可見細胞核擠向胞膜，細胞漿內(nèi)可見大小不等的圓形脂肪空泡和炎性細胞。油紅O染色結果顯示脾虛高脂血癥組大鼠肝細胞中脂滴明顯增多。

3 ?討論

高脂血癥是以血漿中TC、TG、LDL升高，HDL降低為主要特征的血脂代謝紊亂，是導致AS并進而形成嚴重心腦血管疾病的主要危險因素之一[5]，高血脂和脂肪代謝障礙與脂肪肝的形成密切相關，脂肪肝是脂肪沉積過多引起肝內(nèi)脂肪變性細胞和泡沫細胞增多的一類臨床代謝綜合征，大量實驗與臨床資料證明，脂肪肝是促進AS形成的危險因素[6]，趙娟[7]等通過實驗證實肝內(nèi)的泡沫細胞和炎癥細胞釋放大量AS的致病因子，增加血管內(nèi)膜損傷和炎癥反應，加重AS病變。本研究發(fā)現(xiàn)，與空白對照組相比，脾虛高脂血癥組大鼠血清中TC、LDL-C水平顯著升高，HDL-C水平降低，肝臟出現(xiàn)明顯脂質(zhì)沉積，在此基礎上還出現(xiàn)了游泳耐力下降、體重減輕、食量減少、糞便時軟時溏、倦怠懶動、皮毛干枯、瞇眼、弓背現(xiàn)象，由此說明脾虛高脂血癥大鼠造模成功。

綜上所述，我們的檢測結果即便能在一定程度上證實脾虛高脂血癥與AS信號通路中相關基因mRNA表達變化相關，但基因表達的變化受多種因素的影響，且基因之間的相互關系、各基因表達改變的實際意義還有待進一步明確，仍需在后續(xù)的研究中進一步驗證和探討。

參考文獻

[1] 譚宇衛(wèi)，鄭玉姣，王雅君，等.血脂異常及動脈粥樣硬化中醫(yī)研究進展[J].現(xiàn)代生物醫(yī)學進展，2013，13（16）：3197-3200.

[2] 梁紀文.高脂血癥的中醫(yī)病因病機探討[J].中國臨床醫(yī)生，2012，40（3）：23-24.

[3] 唐新征.高脂血癥中醫(yī)病因病機及辯證分型[A].中華中醫(yī)藥學會血栓病分會第四次學術研討會論文匯編[C]，201-205.

[4] 陳長燕，顏洋.中醫(yī)治療高脂血癥的理論依據(jù)[J].內(nèi)蒙古中醫(yī)藥，2014，（22）：130.

[5] 張沛然，郭改會.高脂血癥的發(fā)病機制及分類[J].中國臨床醫(yī)生，2012，40（3）：18-20.