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    缺氧微環(huán)境下人肺腺癌A549細(xì)胞的microRNA基因芯片結(jié)果分析*

    2016-08-10 06:06:05耿瑩鮑永霞肖景濱葛冬杰梁錚
    關(guān)鍵詞:缺氧肺腺癌芯片

    耿瑩,鮑永霞,肖景濱,葛冬杰,梁錚

    (1.哈爾濱醫(yī)科大學(xué)附屬二院 呼吸科,黑龍江 哈爾濱 150081;2.黑龍江省軍區(qū)醫(yī)院 首長(zhǎng)保健室,黑龍江 哈爾濱 150009;3黑龍江省哈爾濱市第一醫(yī)院 呼吸科,黑龍江 哈爾濱 150010)

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    論著

    缺氧微環(huán)境下人肺腺癌A549細(xì)胞的microRNA基因芯片結(jié)果分析*

    耿瑩1,鮑永霞1,肖景濱2,葛冬杰3,梁錚1

    (1.哈爾濱醫(yī)科大學(xué)附屬二院 呼吸科,黑龍江 哈爾濱 150081;2.黑龍江省軍區(qū)醫(yī)院 首長(zhǎng)保健室,黑龍江 哈爾濱 150009;3黑龍江省哈爾濱市第一醫(yī)院 呼吸科,黑龍江 哈爾濱 150010)

    摘要:目的研究缺氧對(duì)肺腺癌A549細(xì)胞中microR NA(miR NA)表達(dá)譜的影響,分析靶基因參與的生物學(xué)功能和通路。方法基于miR NA芯片技術(shù)和生物信息學(xué)分析方法,分析缺氧條件和正常氧條件下培養(yǎng)的A549細(xì)胞中差異表達(dá)的miR NA,并預(yù)測(cè)該miR NA的靶基因,分析靶基因參與的生物學(xué)功能和通路。結(jié)果本研究共篩選出14個(gè)差異表達(dá)miR NA,包括9個(gè)在缺氧細(xì)胞中上調(diào)miR NA和5個(gè)下調(diào)miR NA。上調(diào)和下調(diào)miR NA的靶基因都參與DNA轉(zhuǎn)錄、核染色質(zhì)修飾等功能,并且都參與Wnt信號(hào)、轉(zhuǎn)化生長(zhǎng)因子-β信號(hào)和絲裂原活化蛋白激酶信號(hào)通路。結(jié)論缺氧的肺腺癌A549細(xì)胞中miR NA表達(dá)譜發(fā)生顯著改變,一些差異表達(dá)miR NA對(duì)某些基因具有調(diào)控作用。

    關(guān)鍵詞:肺腺癌;A549細(xì)胞;芯片;缺氧;差異表達(dá)microR NA

    肺癌是世界人口中最常見(jiàn)的惡性腫瘤之一,位居腫瘤死亡率之首,盡管其發(fā)生的蛋白和基因組圖譜已經(jīng)部分闡明,但是其發(fā)病率仍逐年升高,缺乏有效的早期診斷和治療手段是主要原因。MicroRNAs (miRNA)是近年來(lái)生命科學(xué)領(lǐng)域的一個(gè)研究熱點(diǎn)[1-2],其廣泛存在于真核生物體中,是一類高度保守、長(zhǎng)度很短的非編碼調(diào)控單鏈小分子RNA,約18~24個(gè)堿基,通過(guò)抑制mRNA的翻譯和降解靶mRNA來(lái)調(diào)控生物體中基因的表達(dá),在腫瘤發(fā)生、發(fā)展過(guò)程中起至關(guān)重要的作用。miRNA具有組織特異性,與肺組織相關(guān)的包括Let-7、Let-34、Let-21、Let-143、Let-145、Let-31、Let-146等40余種,其在肺癌組織表達(dá)中降低或升高,以癌基因或抑癌基因樣作用調(diào)解轉(zhuǎn)錄后翻譯,促進(jìn)或抑制腫瘤發(fā)生、發(fā)展。

    有研究表明,缺氧可以引起肺癌中一些基因和miRNA表達(dá)水平的變化[3-4]。盡管人們對(duì)肺癌細(xì)胞缺氧引起的分子生物學(xué)變化已經(jīng)有一定的了解,但是其中的分子機(jī)制錯(cuò)綜復(fù)雜,還有很多可能發(fā)生重大變化的基因、miRNA和相關(guān)的生物學(xué)通路等還未被發(fā)現(xiàn)。因此,還需進(jìn)一步的深入研究,而目前還沒(méi)有關(guān)于缺氧對(duì)肺癌細(xì)胞中miRNA表達(dá)譜影響的報(bào)道。

    本研究利用缺氧培養(yǎng)箱對(duì)肺腺癌細(xì)胞系A(chǔ)549進(jìn)行缺氧處理,采用miRNA芯片技術(shù)分析缺氧處理的A549細(xì)胞和正常氧狀態(tài)下的A549細(xì)胞中差異表達(dá)的miRNA,并利用公共數(shù)據(jù)庫(kù)預(yù)測(cè)差異表達(dá)miRNA的靶基因,分析靶基因所參與的生物學(xué)功能和通路。

    1 材料與方法

    1.1細(xì)胞系

    本研究選取人肺腺癌A549細(xì)胞為研究材料,該細(xì)胞系購(gòu)自于中國(guó)科學(xué)院上海細(xì)胞庫(kù)。

    1.2細(xì)胞培養(yǎng)

    肺癌A549細(xì)胞系冷凍存于液氮中,取出后置于37℃電熱恒溫水浴箱中快速解凍復(fù)蘇。1 000 r/min離心10 min,棄上清液,更換新鮮的培養(yǎng)基。細(xì)胞在含有胎牛血清的培養(yǎng)基中培養(yǎng),正常條件下的培養(yǎng)條件為37℃、5%二氧化碳CO2;缺氧條件則使用缺氧細(xì)胞培養(yǎng)箱,培養(yǎng)條件為37℃、5%CO2、1%氧氣O2。選擇缺氧狀態(tài)下(1%O2)和正常條件下培養(yǎng)8 h的A549細(xì)胞用于miRNA芯片分析。

    1.3芯片數(shù)據(jù)分析

    將上述培養(yǎng)好的兩組A549細(xì)胞交給哈爾濱欣科瑞經(jīng)貿(mào)有限公司做miRNA芯片分析。

    1.4差異表達(dá)miRNA的篩選

    基于倍數(shù)法篩選兩組樣本的差異表達(dá)miRNA。計(jì)算兩組間芯片miRNA表達(dá)值的差異倍數(shù),將滿足差異倍數(shù)>2的miRNA識(shí)別為差異表達(dá)的miRNA。

    1.5預(yù)測(cè)差異表達(dá)miRNA的靶基因

    利用數(shù)據(jù)庫(kù)Target Scan,預(yù)測(cè)得到差異表達(dá)miRNA調(diào)控的所有靶基因。該數(shù)據(jù)庫(kù)是目前利用理論方法預(yù)測(cè)miRNA靶基因較為理想的數(shù)據(jù)庫(kù)。

    1.6統(tǒng)計(jì)學(xué)方法

    分別使用基因本體(gene ontology,GO)數(shù)據(jù)庫(kù)和京都基因與基因組百科全書(shū)(kyoto encyclopedia of genes and genomes,KEGG)通路數(shù)據(jù)庫(kù),對(duì)差異表達(dá)miRNA調(diào)控的靶基因進(jìn)行GO功能和KEGG通路富集分析,利用Fisher精確檢驗(yàn)和多重比較檢驗(yàn)計(jì)算每個(gè)功能的顯著性水平(P值),并用Benjamini-Hochberg法[5]校正P值,P<0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

    2 結(jié)果

    2.1差異表達(dá)miRNA的統(tǒng)計(jì)分析

    根據(jù)篩選標(biāo)準(zhǔn),本研究共篩選14個(gè)在缺氧A549細(xì)胞和正常A549細(xì)胞之間差異表達(dá)的miRNA。其中,9個(gè)在缺氧組中上調(diào)的miRNA(如hsa-miR-301b、hsa-miR-769-5p等)和5個(gè)下調(diào)的miRNA(如hsamiR-622、hsa-miR-181a-3p等)(見(jiàn)表1)。hsa-miR-301b上調(diào)的差異倍數(shù)最大,hsa-miR-622下調(diào)的差異倍數(shù)最大。

    2.2差異表達(dá)miRNA的靶基因分析

    為研究差異表達(dá)的miRNA在缺氧條件下對(duì)哪些基因產(chǎn)生調(diào)控作用,本研究利用Target Scan數(shù)據(jù)庫(kù)來(lái)預(yù)測(cè)差異表達(dá)miRNA的靶基因。共有4個(gè)上調(diào)的miRNA(hsa-mir-301b、hsa-mir-148b-3p、hsa-mir-769-5p和hsa-mir-1180)和2個(gè)下調(diào)的miRNA(hsamir-622和hsa-mir-202-3p)預(yù)測(cè)到靶基因,靶基因數(shù)目總共3259個(gè),例如,上調(diào)表達(dá)的hsa-miR-301b調(diào)控的靶基因包括FOXF2、CRE5B、MARK3和MYB等;hsa-mir-148b-3p調(diào)控NOG、WNT10B等基因;hsa-miR-769-5p調(diào)控ARID1A、PTCH1、GRAMD3等基因;hsa-mir-1180調(diào)控SCN5A、ISOC2等基因。而下調(diào)表達(dá)的hsa-mir-622調(diào)控G3BP1、CELF2等基因;hsa-mir-202-3p調(diào)控TFAP2B、CLCN5等基因。見(jiàn)表2。

    表2 差異表達(dá)miRNA調(diào)控的靶基因

    2.3差異表達(dá)miRNA靶基因的生物學(xué)功能分析

    為進(jìn)一步研究差異表達(dá)miRNA所涉及的生物學(xué)功能,本研究對(duì)預(yù)測(cè)到的miRNA靶基因進(jìn)行GO功能和KEGG通路富集分析,間接揭示差異表達(dá)miRNA所參與的生物學(xué)功能。

    在上調(diào)miRNA靶基因富集的GO功能中,DNA轉(zhuǎn)錄、多細(xì)胞有機(jī)體發(fā)育、離子轉(zhuǎn)運(yùn)、核染色質(zhì)修飾、代謝過(guò)程和細(xì)胞周期等功能被富集到。其中DNA轉(zhuǎn)錄、多細(xì)胞有機(jī)體發(fā)育、離子轉(zhuǎn)運(yùn)、核染色質(zhì)修飾與代謝過(guò)程功能也被下調(diào)miRNA靶基因富集到,另外,下調(diào)miRNA靶基因還富集在血液凝固等GO功能上。見(jiàn)表3。

    在上調(diào)miRNA和下調(diào)miRNA靶基因富集的顯著通路中,有很多通路是一樣的,比如Wnt信號(hào)通路、轉(zhuǎn)化生長(zhǎng)因子-β(transforming growth factorβ,TGF-β)信號(hào)通路、絲裂原活化蛋白激酶(mitogen activated protein kinases,MAPK)信號(hào)通路、黏著斑等。見(jiàn)表4。

    表3 miRNA靶基因富集到的排名前10的GO功能 (按P值由小到大)

    續(xù)表3

    表4 miRNA靶基因富集到的排名前10的KEGG通路 (按P值由小到大)

    3 討論

    在腫瘤中,細(xì)胞快速增殖,但新生血管的生成速度相對(duì)較慢,來(lái)不及為實(shí)體瘤內(nèi)部和腫瘤周圍細(xì)胞供應(yīng)血氧,所以這些細(xì)胞就會(huì)產(chǎn)生缺氧狀態(tài)。有研究表明,幾乎所有的實(shí)體瘤中都存在缺氧細(xì)胞[6]。缺氧對(duì)于腫瘤的發(fā)展具有十分重要的意義[7]。①缺氧會(huì)直接導(dǎo)致細(xì)胞凋亡或者壞死;②缺氧會(huì)激活與細(xì)胞代謝和蛋白質(zhì)合成等相關(guān)基因的轉(zhuǎn)錄,從而減緩增殖速度,增加無(wú)氧糖酵解,使細(xì)胞能適應(yīng)缺氧環(huán)境,抑制細(xì)胞的凋亡;③缺氧可以刺激肺癌細(xì)胞中血管內(nèi)皮細(xì)胞生長(zhǎng)因子和堿性成纖維細(xì)胞生長(zhǎng)因子的表達(dá),促進(jìn)移植瘤中新血管的生成,提高腫瘤的生長(zhǎng)能力;④缺氧還會(huì)刺激缺氧誘導(dǎo)因子-1α(hypoxia inducible factor-1α,HIF-1α)的表達(dá),激活轉(zhuǎn)錄調(diào)節(jié)因子核轉(zhuǎn)錄因子-κB(nuclear transcription factor-κB,NF-κB)通路[8]。

    本研究利用miRNA芯片技術(shù)和生物信息學(xué)方法,分析缺氧對(duì)肺腺癌A549細(xì)胞中miRNA表達(dá)譜的影響,并預(yù)測(cè)差異表達(dá)miRNA的靶基因,分析靶基因所參與的生物學(xué)功能和通路。

    本研究共篩選出14個(gè)在缺氧A549細(xì)胞和正常A549細(xì)胞之間差異表達(dá)的miRNA,包括9個(gè)在缺氧組中上調(diào)的miRNA和5個(gè)下調(diào)的miRNA。在上調(diào)表達(dá)的miRNA中,hsa-miR-769-5p調(diào)控ARID1A 和SMAD2等基因。ARID1A基因編碼SWI/SNF家族蛋白,該蛋白具有解旋酶和腺苷三磷酸酶活性。本研究發(fā)現(xiàn),ARID1A被富集到染色質(zhì)修飾功能上。有研究報(bào)道,ARID1A可以通過(guò)改變核染色質(zhì)結(jié)構(gòu)來(lái)調(diào)控某些基因的轉(zhuǎn)錄[9]。有研究報(bào)道稱,SWI/SNF家族蛋白可以結(jié)合到缺氧誘導(dǎo)因子HIF-1α的啟動(dòng)子上,通過(guò)HIF-1α的表達(dá)來(lái)調(diào)控細(xì)胞缺氧應(yīng)答[10]。目前,還沒(méi)有研究報(bào)道ARID1A基因與缺氧肺癌的關(guān)系。筆者推測(cè),ARID1A可能是通過(guò)其染色質(zhì)修飾功能來(lái)調(diào)節(jié)某些與缺氧相關(guān)基因的轉(zhuǎn)錄和表達(dá),從而對(duì)肺腺癌細(xì)胞的缺氧應(yīng)答產(chǎn)生影響。

    SMAD2基因編碼的蛋白是信號(hào)傳感器和轉(zhuǎn)錄調(diào)節(jié)器,調(diào)節(jié)多個(gè)信號(hào)通路。在本研究中,SMAD2被富集在Wnt信號(hào)通路和TGF-β信號(hào)通路上。已有很多文獻(xiàn)報(bào)道,Wnt信號(hào)與缺氧之間的關(guān)系,例如,Wnt信號(hào)通路中的β-連環(huán)蛋白可以與缺氧誘導(dǎo)因子HIF-1α相互作用,增強(qiáng)細(xì)胞對(duì)缺氧的適應(yīng)能力[11]。HIF-1α可以通過(guò)抑制β-連環(huán)蛋白的活性來(lái)阻礙Wnt信號(hào)通路,該機(jī)制可能與缺氧誘導(dǎo)的腫瘤細(xì)胞生長(zhǎng)抑制有關(guān)[12]。上述研究表明,Wnt信號(hào)通路在細(xì)胞缺氧應(yīng)答過(guò)程中具有非常重要的作用。另外,目前也有很多關(guān)于缺氧與TGF-β信號(hào)關(guān)系的研究報(bào)道,例如缺氧(1%O2)可以誘導(dǎo)TGF-β1的表達(dá)和SMAD2磷酸化,激活肝星狀細(xì)胞的活性[13]。TGF-β信號(hào)通路還可以調(diào)節(jié)缺氧誘導(dǎo)的新生小鼠肺血管重建過(guò)程[14]。上述研究結(jié)果顯示,TGF-β信號(hào)通路與缺氧關(guān)系密切。缺氧會(huì)誘導(dǎo)SMAD2蛋白的磷酸化,這是細(xì)胞缺氧應(yīng)答過(guò)程中一個(gè)十分重要的機(jī)制[15-16]。但目前還沒(méi)有文獻(xiàn)報(bào)道hsa-miR-769-5p與缺氧的關(guān)系。筆者推測(cè),hsa-miR-769-5p可能通過(guò)調(diào)節(jié)ARID1A和SMAD2等基因的表達(dá),間接調(diào)控Wnt信號(hào)通路和TGF-β信號(hào)通路,從而在肺腺癌細(xì)胞的缺氧應(yīng)答中發(fā)揮重要功能。

    本研究發(fā)現(xiàn),在上調(diào)miRNA和下調(diào)miRNA靶基因富集的GO功能和KEGG通路中,有些功能和通路是一樣的,例如在GO功能富集結(jié)果中,DNA轉(zhuǎn)錄、多細(xì)胞有機(jī)體發(fā)育、離子轉(zhuǎn)運(yùn)、核染色質(zhì)修飾與代謝過(guò)程等功能均被上調(diào)miRNA和下調(diào)miRNA的靶基因富集到。該研究結(jié)果表明,在肺腺癌細(xì)胞的缺氧應(yīng)答中,該功能可能受上調(diào)miRNA和下調(diào)miRNA的共同調(diào)控。在KEGG通路富集結(jié)果中,Wnt信號(hào)通路、TGF-β信號(hào)通路、MAPK信號(hào)通路和黏著斑等通路均被上調(diào)miRNA和下調(diào)miRNA的靶基因富集到。心肌缺氧導(dǎo)致細(xì)胞內(nèi)pH降低,促進(jìn)P38 MAPK的磷酸化,從而激活該信號(hào)通路,而抑制該通路則會(huì)使心肌細(xì)胞免于缺氧導(dǎo)致的細(xì)胞凋亡[17]。還有研究報(bào)道,缺氧可以激活MAPK信號(hào)通路[18]。另外,缺氧也會(huì)激活黏著斑激酶的活性和亞細(xì)胞遷移,促進(jìn)黏著斑蛋白的磷酸化[19]。

    綜上所述,本研究利用miRNA芯片技術(shù)和相關(guān)生物信息學(xué)分析手段,在經(jīng)缺氧處理的人肺腺癌A549細(xì)胞中篩選出14個(gè)差異表達(dá)的miRNA,包括9個(gè)上調(diào)miRNA和5個(gè)下調(diào)miRNA。而且差異表達(dá)的miRNA及其靶基因可能在肺腺癌A549細(xì)胞的缺氧反應(yīng)中具有十分重要的功能。另外,靶基因參與的一些生物學(xué)功能以及一些通路功能可能在肺腺癌細(xì)胞的缺氧反應(yīng)中發(fā)揮重要作用。該miRNA和靶基因的表達(dá)水平變化,以及對(duì)肺腺癌細(xì)胞的一些功能影響還需后續(xù)實(shí)驗(yàn)進(jìn)一步驗(yàn)證。本研究結(jié)果為深入探索缺氧對(duì)肺癌細(xì)胞在分子層面的影響提供理論基礎(chǔ)和實(shí)驗(yàn)依據(jù),也為臨床治療肺癌提供一些潛在藥物靶點(diǎn)。

    參考文獻(xiàn):

    [1]SHENOUDA S K,ALAHARI S K.MicroRNA function in cancer: oncogene or a tumrosuppressor[J].Cancer Metastasis Rev,2009, 28(3/4):369-378.

    [2]KULSHRESHTHA R,DAVULURI R V,CALIN G A,et al.A microRNA component of the hypoxicresponse[J].Cell Death Differ, 2008,15(4):667-671.

    [3]BABAR I A,CZOCHOR J,STEINMETZ A,et al.Inhibition of hypoxia-induced miR-155radiosensitizes hypoxiclung cancer cells[J].Cancer Biology Therapy,2011,12(10):908-914.

    [4]GROSSO S,DOYEN J,PARKS S K,et al.MiR-210 promotes a hypoxic phenotype and increases radioresistance in human lung cancer cell lines[J].Cell Death Disease,2013,4(3):544.

    [5]BENJAMINI Y,HOCHBERG Y.Controlling the false discovery rate:a practical and powerful approach to multiple testing[J]. Journal of the Royal Statistical Society,1995,57(57):289-300.

    [6]TALKS K L,TURLEY H,GATTER K C,et al.The expression and distribution of the hypoxia-inducible factors HIF-1α and HIF-2α in normal human tissues,cancers,and tumor-associated macrophages[J].the American Journal of Pathology,2000,157(2): 411-421.

    [7]DEHDASHTI F,MINTUN M A,LEWIS J S,et al.In vivo assessment of tumor hypoxia in lung cancer with 60Cu-ATSM[J]. European Journal of Nuclear Medicine and Molecular Imaging,2003,30(6):844-850.

    [8]YANG C,YANG Z,ZHANG M,et al.Hydrogen sulfide protects against chemical hypoxia-induced cytotoxicity and inflammation in HaCaT cells through inhibition of ROS/NF-κB/COX-2 pathway[J]. PLoS one,2011,6(7):DOI:10.1371/journal.pone.0021971.

    [9]NIE Z,XUE Y,YANG D,et al.A specificity and targeting subunit of a human SWI/SNF family-related chromatin-remodeling complex[J].Mol Cell Biol,2000,20(23):8879-8888.

    [10]KENNETH N S,MUDIE S,VAN UDEN P,et al.SWI/SNF regulates the cellular response to hypoxia[J].Journal of Biological Chemistry,2009,284(7):4123-4131.

    [11]KAIDI A,WILLIAMS A C,PARASKEVA C.Interaction between β-catenin and HIF-1 promotes cellular adaptation to hypoxia[J].Nature Cell Biology,2007,9(2):210-217.

    [12]LIM J H,CHUN Y S,PARK J W.Hypoxia-inducible factor-1α obstructs a Wnt signaling pathway by inhibiting the hARD1-mediated activation of β-catenin[J].Cancer Research,2008,68(13): 5177-5184.

    [13]SHI Y F,FONG C C,ZHANG Q,et al.Hypoxia induces the activation of human hepatic stellate cells LX-2 through TGF-β signaling pathway[J].FEBS Letters,2007,581(2):203-210.

    [14]AMBALAVANAN N,NICOLA T,HAGOOD J,et al.Transforming growth factor-βsignaling mediates hypoxia-induced pulmonary arterial remodeling and inhibition of alveolar development in newborn mouse lung[J].American Journal of Physiology-Lung Cellular and Molecular Physiology,2008,295(1):86-95.

    [15]ZHANG H,AKMAN H O,SMITH E L,et al.Cellular response to hypoxia involves signaling via smad proteins[J].Blood,2003, 101(6):2253-2260.

    [16]TAKAHASHI T,TAKAHASHI I,KOMATSU M,et al.Mutations of the NOG gene in individuals with proximal symphalangism and multiple synostosis syndrome[J].Clin Genet,2001, 60(6):447-451.

    [17]ZHENG M,REYNOLDS C,JO S H,et al.Intracellular acidosis-activated p38 MAPK signaling and its essential role in cardiomyocyte hypoxic hypoxia and reoxygenation stimulates MAP kinase signaling injury[J].The FASEB Journal,2005,19(1): 109-111.

    [18]MILLAR T M,PHAN V,TIBBLES L A.ROS generation in endothelial and kinase-dependent neutrophil recruitment[J].Free Radical Biology and Medicine,2007,42(8):1165-1177.

    [19]SEKO Y,TAKAHASHI N,SABE H,et al.Hypoxia induces activation and subcellular translocation of focal adhesion kinase (p125 FAK)in cultured rat cardiac myocytes[J].Biochemical and Biophysical Research Communications,1999,262(1):290-296.

    (童穎丹編輯)

    中圖分類號(hào):R 734.2

    文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼:A

    DOI:10.3969/j.issn.1005-8982.2016.13.007

    文章編號(hào):1005-8982(2016)13-0037-06

    收稿日期:2015-12-21

    *基金項(xiàng)目:黑龍江省自然科學(xué)然基金(No:D201230)

    [通信作者]鮑永霞,E-mail:baoyongxia@126.com;Tel:13936196255

    MicroRNA gene chip analysis of human lung adenocarcinoma A549 cells in anoxic microenvironment*

    Ying Geng1,Yong-xia Bao1,Jing-bin Xiao2,Dong-jie Ge3,Zheng Liang1
    (1.Department of Respiratory Diseases,the Second Affiliated Hospital,Harbin Medical University,Harbin,Heilongjiang 150081,China;2.Director Healthcare Room,the Military Region Hospital of Heilongjiang Province,Harbin,Heilongjiang 150009,China;3.Department of Respiratory Diseases,the First Hospital of Harbin,Harbin,Heilongjiang 150010,China)

    Abstract:Objective To analyze the effect of hypoxia on miRNA expression in lung adenocarcinoma A549 cells.Methods Based on miRNA chip technology and bioinformatic analysis methods,differential expression of miRNAs between hypoxia-treated A549 cells and normoxia-treated A549 cells were identified,and their target genes were predicted.Besides,biological functions and pathways of target genes were analyzed. Results In total,14 differentially-expressed miRNAs were screened,including 9 upregulated miRNAs and 5 downregulated miRNAs in the hypoxia-treated A549 cells.Target genes of both upregulated and downregulated miRNAs were enriched in GO terms,such as DNA transcription,chromatin modification,as well as a set of pathways,such as Wnt signaling,TGF-beta signaling and MAPK signaling.Conclusions In the hypoxic A549 cells,miRNA expressions have significantly changed.A series of differentially-expressed miRNAs regulate certain genes.

    Keywords:lung adenocarcinoma;A549 cell;chip;hypoxia;differentially-expressed microRNA

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