解脲/人型支原體分離培養(yǎng)與藥敏實(shí)驗(yàn)分析

目的：了解本地區(qū)解脲支原體耐藥狀況，指導(dǎo)臨床合理用藥。方法：應(yīng)用支原體微量培養(yǎng)及同步藥敏試劑盒，檢測(cè)解脲支原體及其藥敏分析。美滿霉素、交沙霉素、克拉霉素三種抗生素敏感性高，不易產(chǎn)生耐藥性，且耐藥率變化不大；結(jié)論：臨床治療UU引起的非淋菌性尿道炎，本地區(qū)應(yīng)推薦美滿霉素、強(qiáng)力霉素、交沙霉素作為治療解脲支原體的首選藥物。不論是UU單項(xiàng)感染或是UU+MH混合感染均產(chǎn)生多重耐藥，支原體的耐藥問(wèn)題嚴(yán)重，治療要根據(jù)藥物敏感性報(bào)告用藥。提示：在進(jìn)行治療前做支原體藥敏試驗(yàn)很有必要。

支原體（mycoplasma）是細(xì)胞外生存的最小微生物。是一類(lèi)缺乏細(xì)胞壁的原核細(xì)胞型微生物，大小一般在0.3～0.5um之間，呈高度多形性，有球形、桿形、絲狀、分枝狀等多種形態(tài)，能在無(wú)生命培養(yǎng)基中生長(zhǎng)繁殖的最小原核細(xì)胞型微生物。它不同于細(xì)胞，也不同于病毒。種類(lèi)繁多、分布廣泛、造成的危害相當(dāng)大，涉及人、動(dòng)物、植物及昆蟲(chóng)等多個(gè)領(lǐng)域，給人類(lèi)健康和科研工作帶來(lái)不利影響。從人體分離的16種支原體中，5種對(duì)人有致病性，即肺炎支原體、解脲支原體、人型支原體、生殖支原體及發(fā)酵支原體。脲解支原體屬（ureaplasma）含脲解支原體等體、脲解支原體及人型支原體等對(duì)人有致病性。肺炎支原體是呼吸道感染、肺炎的主要原因。能引起人類(lèi)泌尿生殖道感染的有解脲支原體（UU）、人型支原體（MH）、生殖道支原體等，其中最常見(jiàn)的是UU，約有30%～40%男性的非衣原體、非淋病性尿道炎是由UU所致；此外UU可通過(guò)胎盤(pán)感梁胎兒，引起早產(chǎn)、死胎、低體重胎兒和新生兒呼吸道感染。由于不合理使用抗生素，支原體對(duì)常用抗生素耐藥已非常普遍，對(duì)其進(jìn)行培養(yǎng)及耐藥性監(jiān)測(cè)顯得尤為重要。解脲支原體（M.urealyticum）為支原體屬中唯一的一個(gè)種，因生長(zhǎng)需要尿素而得名。菌落微小，直徑僅有15～25um，須在低倍顯微鏡下觀察，故舊稱T株 （tiny strain）。解脲支原體與女性生殖健康關(guān)系最為密切，解脲支原體可引起泌尿生殖道感染，并被認(rèn)為是非淋球菌性尿道炎中僅次于衣原體（占50%）的重要病原體。由于80%孕婦的生殖道內(nèi)帶有解脲支原體，因此可通過(guò)胎盤(pán)感染胎兒而導(dǎo)致早產(chǎn)、死胎，或在分娩時(shí)感染新生兒，引起呼吸道感染。

我國(guó)近年來(lái)發(fā)病的例數(shù)不斷增加。隨著廣譜抗生素的大量使用，耐藥菌株在不斷增加。本文對(duì)2009年7月～2009年12月我院門(mén)診患者標(biāo)本作解脲支原體（UU）、人型支原體（MH）培養(yǎng)和藥物敏感性試驗(yàn)。現(xiàn)將結(jié)論報(bào)告如下：

一、材料與方法

（一）標(biāo)本來(lái)源 2009年7月～2009年12月我院婦科、皮膚科患者標(biāo)本共9例，男性2例，女性7例，患者均為呈貢泌尿道感染者，年齡不限。男性患者均有尿道內(nèi)不適和漿液性分泌物，女性患者大多數(shù)有白帶增多，白帶涂片檢查均有膿白細(xì)胞增多。

（二）標(biāo)本采集 男性患者用無(wú)菌棉球擦干尿道口，用無(wú)菌棉拭子插入尿道2 cm～3 cm，輕輕旋轉(zhuǎn)后取出；女性患者清除陰道口分泌物后，用無(wú)菌棉拭子插入宮頸1 cm～2 cm，輕輕旋轉(zhuǎn)后取出。標(biāo)本取出后立即接種培養(yǎng)。

（三）試劑與方法 采用鄭州安圖綠科生物工程有限公司生產(chǎn)的UU和MH分離鑒定、藥敏試劑盒。嚴(yán)格按說(shuō)明書(shū)操作及判讀結(jié)。

（四）試劑 試劑盒采用鄭州安圖綠科生物工程有限公司支原體分離、鑒定、藥敏檢測(cè)試劑盒。測(cè)定藥物包括：強(qiáng)力霉素、交沙霉素、司帕沙星、羅紅霉素、美滿霉素、克拉霉素、阿奇霉素、林可霉素、大觀霉素、甲砜霉素、共10種抗生素。

（五）病原體檢測(cè)方法 采用鄭州安圖綠科生物工程有限公司的試劑檢測(cè)UU、Mh。嚴(yán)格按照檢測(cè)試劑使用說(shuō)明書(shū)無(wú)菌操作，標(biāo)本采集后立即送檢，室溫保存不得超過(guò)2h，2～8℃不超過(guò)5h。首先將50μl完全溶解培養(yǎng)基加入C-空白孔中，再將無(wú)菌拭子采集的樣本插入完全溶解培養(yǎng)基中，擠壓旋轉(zhuǎn)拭子數(shù)次，使拭子中樣本滲入培養(yǎng)基中，充分混勻接種了樣本的液體培養(yǎng)基，用加樣器分別準(zhǔn)確量取50ul接種到試劑條各孔中（除C-），再滴加一滴無(wú)菌石蠟油（約50ul），然后蓋上蓋子。36 ℃恒溫箱UU培養(yǎng)24 h，Mh培養(yǎng)24 h，培養(yǎng)基不變色為陰性，培養(yǎng)基由橙黃色變成紅色，且清亮透明為陽(yáng)性，表示有支原體生長(zhǎng)。

（六）實(shí)驗(yàn)材料 采用鄭州安圖綠科生物工程有限公司生產(chǎn)的

Mycoplasma culture，identification，susceptibility kit試劑盒進(jìn)行測(cè)試。該試劑盒集鑒定、藥敏為一體，在同一試劑盒分別設(shè)置生長(zhǎng)對(duì)照孔，解脲支原體（UU）、人型支原體（MH）鑒定孔及10種抗生素測(cè)試孔。操作嚴(yán)格按說(shuō)明書(shū)進(jìn)行。

二、結(jié)果

（一）支原體陽(yáng)性檢出率 從9例患者標(biāo)本中檢出支原體共7株陽(yáng)性率為 78 %。其中UU單項(xiàng)感染5例，占陽(yáng)性總數(shù)的71%，UU+MH混合感染1，占陽(yáng)性總數(shù)的14 %，H單項(xiàng)感染4例，僅占陽(yáng)性總數(shù)的57%。

（二）支原體藥物敏感試驗(yàn)結(jié)果 分別對(duì)UU陽(yáng)性、UU+MH陽(yáng)性、MH陽(yáng)性的標(biāo)本作藥物敏感性試驗(yàn)并進(jìn)行比較分析發(fā)現(xiàn)，不論是UU單項(xiàng)感染或是UU+MH混合感染者強(qiáng)力霉素、美滿霉素的耐藥率最低，其次是克拉霉素，耐藥率最高為大觀霉素。MH單項(xiàng)感染病例相對(duì)較少，耐藥情況有待進(jìn)一步探討。本次調(diào)查男性支原體感染率為0，女性支原體感染率為100%，經(jīng)統(tǒng)計(jì)學(xué)檢驗(yàn)P<0.05，可認(rèn)為支原體感染在性別上有顯著性差異，女性高于男性。這個(gè)特點(diǎn)可能與男女生殖系統(tǒng)的結(jié)構(gòu)差別有關(guān)。

在7例女性生殖道分泌物標(biāo)本中解脲人型支原體都有生長(zhǎng)的有1例，只有解脲支原體生長(zhǎng)的有5例，人型支原體的有1例。7例女性支原體生長(zhǎng)的藥敏結(jié)果如下表：

3 討論

由于試劑檢測(cè)原理是依據(jù)培養(yǎng)與生化，利用PH值的升高致基礎(chǔ)液變色而判斷結(jié)果，極少量堿性標(biāo)本可能會(huì)直接導(dǎo)致溶液變紅，出現(xiàn)假陽(yáng)性，解脲支原體如同其他支原體一樣，在人工培養(yǎng)基上可以生長(zhǎng)，但營(yíng)養(yǎng)要求較高，需要供給膽固醇和酵母。酸堿度要求低，最適PH值6.0±0.5具有尿素酶，在PH6.0含有尿素的培養(yǎng)基中，能分解尿素，產(chǎn)生NH3，因PH上升使含酚紅指示劑的培養(yǎng)液由黃變紅。如培養(yǎng)液過(guò)堿PH8.0以上時(shí)，其中UU會(huì)迅速死亡。解脲支原體生物學(xué)特性對(duì)PH要求較低（6.0），具有分解尿素產(chǎn)生氨，使酚紅指示劑變色，不分解葡萄糖、精氨酸，而人型支原體可分解精氨酸，但不分解尿素和葡萄糖，人型支原體除引起人類(lèi)非淋菌性尿道炎外，還可引起慢性前列腺炎、宮頸炎和盆腔炎。臨床能引起性病的支原體主要包括解脲支原體和人型支原體，其發(fā)病率一直呈上升趨勢(shì)，耐藥性也隨著抗生素的濫用日趨厲害，危害著人類(lèi)的健康。治療及防治支原體傳播的關(guān)鍵是及時(shí)準(zhǔn)確的診斷。

（作者單位：云南省楚雄醫(yī)藥高等專科學(xué)校）