膀胱尿路上皮癌中腫瘤轉(zhuǎn)移抑制基因TIP30/CC3基因的表達(dá)及意義

楊濤　李燕　孫福振　王剛　劉俊江

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膀胱尿路上皮癌中腫瘤轉(zhuǎn)移抑制基因TIP30/CC3基因的表達(dá)及意義

楊濤李燕孫福振王剛劉俊江

【摘要】目的探討膀胱尿路上皮癌腫的腫瘤轉(zhuǎn)移抑制基因TIP30/CC3基因的相關(guān)表達(dá)以及表達(dá)的意義。方法收集于2010至2014年存有的完整臨床以及病理資料的膀胱尿路上皮癌存檔蠟塊50例以及癌旁組織50例，通過使用免疫組織化學(xué)法對50例膀胱尿路上皮癌存檔蠟塊以及50例癌旁組織進(jìn)行相應(yīng)的檢測，分析其中的TIP30/CC3基因表達(dá)水平，同時分析TIP30/CC3基因和患者膀胱尿路上皮癌病理特征以及臨床特點(diǎn)的相關(guān)聯(lián)系，同時對TIP30/CC3基因的相關(guān)表達(dá)進(jìn)行相應(yīng)的定量分析，對患者的膀胱尿路上皮癌中以及癌旁組織中的反應(yīng)陽性顆粒的平均光密度、陽性面積率進(jìn)行對比。結(jié)果TIP30/CC3基因在膀胱尿路上皮癌中呈現(xiàn)出一種低表達(dá)狀態(tài)，但在患者的癌旁組織中呈現(xiàn)出高表達(dá)狀態(tài)。癌旁組織中TIP30/CC3的平均光密度以及陽性面積率高于膀胱尿路上皮癌，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05) ;同時TIP30/CC3基因和腫瘤的浸潤深度以及臨床的UICC分期之間差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05)，但與患者的年齡以及性別之間的差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＞0.05)。結(jié)論作為一種抑癌基因，TIP30/CC3基因在膀胱尿路上皮癌中的低表達(dá)情況極有可能促進(jìn)了膀胱尿路上皮癌的發(fā)生以及發(fā)展，在臨床對膀胱尿路上皮癌患者進(jìn)行治療以及預(yù)防膀胱尿路上皮癌的過程中需要關(guān)注TIP30/CC3基因的表達(dá)。

【關(guān)鍵詞】膀胱尿路上皮癌;腫瘤轉(zhuǎn)移抑制基因; TIP30/CC3

膀胱癌是一種發(fā)生在膀胱黏膜上的惡性腫瘤，也是一種泌尿系統(tǒng)中最為常見的惡性腫瘤。對于膀胱癌而言，若沒有對患者采取及時有效的措施，會嚴(yán)重危害患者的身體健康，甚至威脅到患者的生命［1］。在臨床治療膀胱尿路上皮癌患者的過程中，學(xué)者發(fā)現(xiàn)TIP30/CC3為一種與腫瘤轉(zhuǎn)移抑制有關(guān)的基因，TIP30/CC3基因的編碼產(chǎn)物TIP30/CC3蛋白能夠以細(xì)胞輔助因子為個體，并且能夠有效的活化并且增強(qiáng)HIV-1的相關(guān)轉(zhuǎn)錄功能，同時能夠特異性的提升HIV-1增值調(diào)節(jié)蛋白Tat的轉(zhuǎn)錄，TIP30/CC3基因在臨床上具有促進(jìn)腫瘤細(xì)胞凋亡、抑制腫瘤轉(zhuǎn)移以及抑制腫瘤血管的形成等功能［2］。我院在對膀胱尿路上皮癌患者的治療過程中，通過使用免疫組織化學(xué)法對TIP30/CC3蛋白在膀胱尿路上皮癌中的表達(dá)，發(fā)現(xiàn)了TIP30/CC3基因在膀胱尿路上皮癌發(fā)生和發(fā)展過程中的相關(guān)作用，效果報(bào)告如下。

1　資料與方法

1.1一般資料選取我院2013年5月至2014年5月的膀胱尿路上皮癌存檔蠟塊50例，其中男37例，女13例;年齡48～76歲，平均年齡(53.5±1.6)歲。同時需要使用50例膀胱尿路上皮癌的癌旁組織，距離腫瘤邊緣3～5 cm作為對照。標(biāo)本均未經(jīng)過HE染色，并且按照WHO的尿路腫瘤組織學(xué)分類法進(jìn)行分類，浸潤性尿路上皮癌32例，非浸潤性乳頭狀尿路上皮癌18例(其中高級別13例，低級別5例) ;初發(fā)腫瘤患者27例，繼發(fā)腫瘤患者23例。

1.2方法應(yīng)用免疫組織化學(xué)法對TIP30/CC3基因的表達(dá)進(jìn)行相關(guān)的測定。測定過程中，5 μm的組織切片進(jìn)行常規(guī)的脫蠟至水，在0.01 mol/L的PBS中進(jìn)行漂洗3×3 min，使抗原修復(fù)，在室溫下進(jìn)行了自然冷卻后，可以在PBS下進(jìn)行5×3 min的漂洗，并在漂洗完成后滴入3%的過氧化氫，在37℃的環(huán)境下進(jìn)行10 min的孵育，同時在0.01 mol/L的PBS中進(jìn)行漂洗3×3 min，在正常養(yǎng)血清中進(jìn)行37℃的濕盒中進(jìn)行10 min的孵育，并在去除多余的血清后，在4℃的環(huán)境下孵育過夜，并在0.01 mol/L的PBS中進(jìn)行漂洗3× 3 min，低價(jià)生物素標(biāo)記的二抗37℃孵育盒，進(jìn)行10 min的孵育，同時需要在0.01 mol/L的PBS中進(jìn)行漂洗3×3 min，最后低價(jià)鏈霉素抗生物素蛋白-過氧化物復(fù)合物37℃的濕盒中進(jìn)行10 min的孵育，并在0.01 mol/L的PBS中進(jìn)行漂洗3×3 min，滴入DAB顯色液進(jìn)行顯色，使用自來水進(jìn)行沖洗將反應(yīng)終止后，可以使用蘇木素再次染色，并使用1%的鹽酸酒精進(jìn)行數(shù)秒鐘的分色，使用流水進(jìn)行沖洗，并使用0.1%的氨水進(jìn)行返藍(lán)處理，最后使用鏡檢方法進(jìn)行檢測，并使用陽性片作為陽性對照。

1.3標(biāo)準(zhǔn)使用HPIAS-1000彩色病理圖文報(bào)告系統(tǒng)對TIP30/CC3的表達(dá)進(jìn)行分析，每張切片隨機(jī)選取5個不重疊并完整的高倍視野，測定視野下反映的陽性面積、細(xì)胞總面積以及平均光密度，同時每5個視野的陽性面積率、平均光密度作為測量值。

1.4統(tǒng)計(jì)學(xué)分析應(yīng)用PSS 17.0統(tǒng)計(jì)軟件，計(jì)量資料以±s表示，采用t檢驗(yàn)，計(jì)數(shù)資料采用χ2檢驗(yàn)，P＜0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2　結(jié)果

2.1膀胱尿路上皮癌及癌旁組織中TIP30/CC3的平均光密度以及陽性面積率比較癌旁組織中TIP30/CC3的平均光密度以及陽性面積率明顯高于膀胱尿路上皮癌，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05)。尿路上皮癌細(xì)胞能夠減少較少量的棕黃色顆粒，說明TIP30/CC3呈現(xiàn)出低表達(dá)情況，而癌旁正常膀胱組織中能夠較高高密集分布的棕黃色分布，說明TIP30/CC3呈現(xiàn)出高表達(dá)情況。見表1，圖1、2。

表1　膀胱尿路上皮癌及癌旁組織中TIP30/CC3的平均光密度以及陽性面積率比較　n=50，±s

表1　膀胱尿路上皮癌及癌旁組織中TIP30/CC3的平均光密度以及陽性面積率比較　n=50，±s

類別　平均光密度　陽性面積率膀胱尿路上皮癌0.0532±0.0017　0.0641±0.0017癌旁組織　0.2895±0.0052　0.2375±0.0052 t值305.4185　224.1201 P值0.0000　0.0000

圖1　尿路上皮癌有少量棕黃色顆粒，表明TIP30/CC3呈現(xiàn)低表達(dá)

圖2　正常膀胱組織中較高高密度分布的棕黃色分布，表明TIP30/CC3呈現(xiàn)高表達(dá)

2.2TIP30/CC3在膀胱尿路上皮癌病理分級臨床分期的關(guān)系TIP30/CC3基因和腫瘤的浸潤深度以及臨床的UICC分期之間差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05)，但與患者的年齡及性別之間差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＞0.05)。見表2。

表2　TIP30/CC3在膀胱尿路上皮癌病理分級的臨床分期的關(guān)系n=50，例(%)

3　討論

膀胱癌是一種發(fā)生在膀胱黏膜上的惡性腫瘤，也是一種泌尿系統(tǒng)中最為常見的惡性腫瘤。對于膀胱癌而言，其中一種最為常見的種類為膀胱尿路上皮癌。Zhao等［3］研究顯示，膀胱尿路上皮癌的病因較為復(fù)雜，不僅有內(nèi)在因素，同時也有外在的環(huán)境因素。目前可以明確的導(dǎo)致發(fā)生膀胱尿路上皮癌的原因有職業(yè)接觸芳香胺以及吸煙，其中約有45%的膀胱尿路上皮癌患者是由于吸煙引起的，而隨著吸煙時間的延長，發(fā)病率也越來越明顯。對于膀胱尿路上皮癌的臨床表現(xiàn)，最初表現(xiàn)為血尿，但血尿往往無痛、間歇并且為全程血尿，也有部分患者為鏡下可見的血尿。而隨著病情的發(fā)展，往往會產(chǎn)生尿頻、尿急、尿痛，甚至出現(xiàn)排尿困難等現(xiàn)象，對患者的正常工作以及生活造成嚴(yán)重影響，若沒有對患者采取及時有效的措施，會嚴(yán)重危害患者的身體健康，甚至威脅到患者的生命。

TIP30基因是Shtivelman等［4］最先利用RNA差異顯示技術(shù)，發(fā)現(xiàn)的一種基因，它與小細(xì)胞肺癌轉(zhuǎn)移抑制相關(guān)，當(dāng)時命名為CC3。腫瘤細(xì)胞向遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移是惡性細(xì)胞與宿主間相互作用的結(jié)果，同時也是導(dǎo)致腫瘤患者死亡的一個重要原因。

Baker等［5］研究顯示，人體的TIP30蛋白是一種能夠特異性的提升HIV-1增值蛋白Tat的專利輔助因子，同時其序列和CC3蛋白是相通的，但對于CC3蛋白而言，Omari等［6］研究顯示，TIP30/CC3是一種短鏈脫氫酶/還原酶家族中的一類，同時也是一種絲氨酸/蘇氨酸激酶，其抑癌功能已經(jīng)在近年來得到了較好的發(fā)現(xiàn)以及證實(shí)，同時TIP30/CC3的作用機(jī)制也在不斷的得到研究，為徹底治療腫瘤帶來了希望。

在本次研究中，使用免疫組織化學(xué)的方式，對于膀胱尿路上皮癌組織中的TIP30/CC3進(jìn)行了相應(yīng)的檢測。結(jié)果發(fā)現(xiàn)TIP30/CC3在膀胱尿路上皮癌組織中呈現(xiàn)出一種低表達(dá)的情況，但是在患者的癌旁組織中則呈現(xiàn)高表達(dá)，同時差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05)。通過分析可以發(fā)現(xiàn)，癌癥的發(fā)生以一種較為復(fù)雜的過程，同時也是一種多基因以及多因素的改變而造成的［7］。

有研究結(jié)果顯示TIP30/CC3在人的全身各種組織中均有表達(dá)，如心臟、肺部、腦、腎、骨胳、胰腺等［8］，但在很多腫瘤組織中表達(dá)減低或缺失，證明TIP30的低表達(dá)促進(jìn)腫瘤細(xì)胞的生成。進(jìn)一步實(shí)驗(yàn)發(fā)現(xiàn)，如果敲除小鼠的TIP30/CC3基因研究［7］結(jié)果顯示，缺失了TIP30/CC3基因的小鼠自發(fā)引起肝細(xì)胞癌、膀胱移行細(xì)胞癌、卵巢脂肪細(xì)胞瘤和血管肉瘤等［8］。TIP30/CC3還可以抑制腫瘤細(xì)胞生長，通過細(xì)胞周期分析的方法，發(fā)現(xiàn)TIP30對G0～G1期細(xì)胞明顯有阻滯作用，并導(dǎo)致S期細(xì)胞比例下降，從而抑制腫瘤細(xì)胞增殖［9］。同時有研究發(fā)現(xiàn)，TIP30有促進(jìn)腫瘤細(xì)胞凋亡的作用，通過結(jié)合核膜物質(zhì)運(yùn)輸相關(guān)蛋白，并抑制細(xì)胞核內(nèi)外的流通性，導(dǎo)致促進(jìn)腫瘤細(xì)胞的凋亡［6］。TIP30還可以通過抑制血管生成刺激因子-1，并上調(diào)其抑制因子(血管生成刺激因子-2)的表達(dá)，可以誘導(dǎo)腦特異性血管生成抑制因子-1蛋白的表達(dá)，并也能促進(jìn)富半胱酸的酸性蛋白的表達(dá)，最終抑制腫瘤新生血管形成［10］。

本研究顯示，抑癌基因TIP30在膀胱尿路上皮癌患者組織中的失表達(dá)極有可能會促成膀胱尿路上皮癌的發(fā)生。對于抑癌作用，也是一種極為復(fù)雜的過程，并且是需要使用多種因素共同作用的。TIP30/CC3基因具有一種促凋亡的作用，通過在患者組織中的高表達(dá)，能夠幫助患者抑制腫瘤的生長，同時能夠通過TIP30/CC3的高表達(dá)形式，幫助抑制患者膀胱尿路上皮癌組織中的發(fā)生和發(fā)展，在對患者臨床早期的診斷以及治療的過程中有指導(dǎo)性的作用［11］。

而在本次研究中也能夠顯示，TIP30/CC3和患者膀胱尿路上皮癌的臨床分期和病理分級都有著顯著性的差異。在今后的研究中，我們將會進(jìn)一步的探索TIP30基因?qū)τ诙喾N腫瘤組織表達(dá)降低的相關(guān)機(jī)制，對惡性腫瘤患者的治療提供臨床依據(jù)。

參考文獻(xiàn)

1陜光，夏樾.腫瘤轉(zhuǎn)移抑制基因TIP30/CC3在膀胱尿路上皮癌中的作用.中國組織化學(xué)與細(xì)胞化學(xué)雜志，2012，21:439-442.

2黃奇迪，胡孝渠，萬麗，等.CC3/TIP30蛋白在乳腺癌中的表達(dá)及其與HER－2/neu基因的相關(guān)性研究.中華外科雜志，2012，50:57-61.

3 Zhao J，Ni H，Ma Y.TIP30/CC3 expression in breast carcinoma: relation to metastasis，clinicopathologic parameters and p53 expression.Human Pathology，2007，38:293-298.

4Shtivelman E.A link between metastasis and resistance to apoptosis of variant small cell lung carcinoma.Oncogene，1997，14:2167-2173.

5 Baker ME，Yan L，Pear MR，et al.Three－dimensional model of human TIP30，a coactivator for HIV-1 Tat－activated transcription，and CC3，a protein associated with metastasis suppression.Cellular and molecular life sciences，2000，57:851-858.

6 Omari KE，Bird LE，Nichols CE，et al.Crystal structure of CC3 (TIP30) : implications for its role al a tumor suppressor.J Biol Chem，2005，280: 18229-18236.

7Chen V，Shtivelman E.CC3/TIP30 regulates metabolic adaptation of tumor cells to glucose limitation.Ceu Cycle，2010，4941-4953.

8 Ito M，Jiang C，Krumm K，et al.TIP30 deficiency increases susceptibility to tumorigenesis.Cancer Res，2003，63:8763-8767.

9張蕾，呂春堂，周中華.TIP30蛋白在涎腺腺樣囊性癌高轉(zhuǎn)移細(xì)胞中的表達(dá)鑒定及作用.現(xiàn)代口腔醫(yī)學(xué)雜志，2005，19:54-56.

10 NicAmhlaoibh R，Shtivelman E.Metastasis suppressor CC3 inhibits angiogenic properties of tumor cells in vitro.Oncogene，2001，20:270-275.

11 Baker ME.TIP30，a cofactor for HIV-1 Tat-activated transcription，is homologous to short-chain dehydrogenases/reductases.Currentiology，1999，9:478-482.

·論著·

Expression and significance of tumor metastasis suppressor gene－TIP30/CC3 gene in bladder urothelium carcinoma

YANG Tao*，LI Yan，SUN Fuzhen*，et al.*
Department of Urinary Surgery，Hebei Provincial People’s Hospital，Shijiazhuang 050051，China

【Abstract】Objective To investigate the expression and significance of tumor metastasis suppressor gene－TIP30/CC3 gene in bladder urothelium carcinoma.Methods Fifty cases of bladder urothelial carcinoma paraffin blocks and 50 cases of carcinoma adjacent tissues paraffin blocks that were stored in Department of Pathology of our hospital from 2010 to 2014 were collected in the study，with complete clinical and pathological data.The expression levels of TIP30/CC3 gene in these specimens were detected by immunohistochemistry (SP)，at the same time，the correlation between the expressions of TIP30/CC3 gene and pathological characteristics as well as clinical features of bladder urothelial carcinoma was analyzed.Besides the expressions of TIP30/CC3 gene were quantitatively analyzed，and the average optical density and positive area rate in positive reaction granules were measured and compared between bladder urothelial carcinoma tissues and carcinoma adjacent tissues.Results The low－expression of TIP30/CC3 gene was observed in bladder urothelial carcinoma，however，high－expression of TIP30/CC3 gene was observed in carcinoma adjacent tissues.The average optical density and positive area rate in carcinoma adjacent tissues were significantly higher than those in bladder urothelial carcinoma tissues，moreover，there was a significant difference between the expression of TIP30/CC3 gene and tumor’s infiltration depth as well as clinical UICC stages (P＜0.05).However there was no significant difference between the expression of TIP30/CC3 gene and patient’s age and sex (P＞0.05).ConclusionAs a tumor suppressor gene，the low－expression of TIP30/CC3 gene in bladder urothelial carcinoma may promote the pathogenesis and development of bladder urothelial carcinoma，therefore，we should pay much attention to the expression of TIP30/CC3 gene in treatment and prevention of bladder urothelial carcinoma.

【Key words】bladder urothelial carcinoma; tumor metastasis suppressor gene; TIP30/CC3

(收稿日期:2015－11－17)

doi:10.3969/j.issn.1002－7386.2016.05.002

通訊作者:劉俊江，050051石家莊市，河北省人民醫(yī)院泌尿外科; E-mail: liujunjiang67@163.com

【中圖分類號】R 737.14

【文獻(xiàn)標(biāo)識碼】A

【文章編號】1002－7386(2016) 05－0650－03

作者單位: 050051石家莊市，河北省人民醫(yī)院泌尿外科(楊濤、孫福振、王剛、劉俊江)，血液科(李燕)