祛風安腦口服液質(zhì)量標準研究

蔣　霞　黃銀妹　王小潔　蘭麗華　李　梅*

1.廣西醫(yī)科大學第一附屬醫(yī)院藥學部，廣西　南寧　530021；2.廣西醫(yī)科大學藥學院，廣西　南寧　530021

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祛風安腦口服液質(zhì)量標準研究

蔣霞1黃銀妹2王小潔2蘭麗華2李梅1*

1.廣西醫(yī)科大學第一附屬醫(yī)院藥學部，廣西南寧530021；2.廣西醫(yī)科大學藥學院，廣西南寧530021

【摘要】目的：建立祛風安腦口服液定性、定量分析方法。 方法：采用TLC對麻黃、黃芩、防風、川芎進行定性鑒別；采用HPLC測定阿魏酸含量，色譜條件：以Inertsil ODS-3(250mm×4.6nm，5μm)為色譜柱，甲醇-1%冰醋酸(30∶70)為流動相，檢測波長為321nm，柱溫為25℃。結(jié)果：薄層色譜斑點清晰，陰性對照無干擾；阿魏酸在1.824～10.940μg線性關(guān)系良好(r=0.9998)，平均回收率為100.51%，RSD=1.94%。結(jié)論：本方法簡便易行、結(jié)果準確，可作為該產(chǎn)品質(zhì)量控制的方法。

【關(guān)鍵詞】祛風安腦口服液；阿魏酸；HPLC ；TLC

祛風安腦口服液是我院中藥制劑，處方源于《備急千金要方》所載的續(xù)命湯，由麻黃、紅參、黃芩、肉桂、甘草、川芎、苦杏仁、熟附子、防風、干姜、石膏、赤芍、當歸這十三味藥材加工制成，具有疏通經(jīng)絡(luò)、調(diào)和營衛(wèi)、解表祛邪的功效，臨床用于中風、身體不能自持、口不能言或拘急不得轉(zhuǎn)側(cè)等癥。為保證制劑質(zhì)量穩(wěn)定可控，研究采用薄層色譜法(TLC)對該制劑主要成分麻黃、防風、川芎、黃芩進行薄層色譜鑒別，并參考相關(guān)文獻[1-2]，采用高效液相色譜法(HPLC)測定制劑中阿魏酸的含量，為制定祛風安腦口服液的質(zhì)量標準提供依據(jù)。

1儀器與材料

1.1儀器SIL-10AF高效液相(含SPD-15C紫外檢測器，島津國際貿(mào)易上海有限公司)；XS205DU十萬分之一天平(梅特勒-托利多儀器上海有限公司)；R-1001N旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀(鄭州長城科工貿(mào)有限公司)；

1.2材料硅膠板(青島海洋化工分廠)；點樣毛細管(泰州市北平貿(mào)易有限公司)；黃芩苷對照品(批號110715-200212，中國藥品生物制品鑒定所)；阿魏酸對照品(批號110773-201313，中國食品藥品檢定研究院)；甲醇為色譜純，水為超純水，其他試劑為分析純。

2方法與結(jié)果

2.1祛風安腦口服液的制備除肉桂、紅參外，其他藥材加10倍量水，加熱煎煮兩次，每次1.5h，合并2次煎液，濾過。濾液濃縮，加入乙醇至乙醇濃度為65%，靜置24h，濾過，回收乙醇至無醇味。取紅參，加10倍水，加熱煎煮2次，每次1.5h，濾過，合并2次煎液，濃縮，與上述制得的濃縮液合并，再加入肉桂粉，煮10min，過濾，加入苯甲酸3g，加蒸餾水至900ml，靜置24h，濾過，濾液調(diào)至總量為1000ml，灌裝，即得。

2.2TLC定性鑒定

2.2.1麻黃TLC取樣品20ml，加氨水調(diào)pH至1～2，用乙醚萃取2次，合并乙醚層，揮干乙醚，加鹽酸乙醇(1∶20)10ml，搖勻，水浴蒸干，殘渣加甲醇溶解，即為供試品溶液。另取鹽酸麻黃堿對照品，加甲醇制成濃度為1mg/ml的溶液，作為對照品溶液。吸取上述溶液各5ml，分別點于硅膠G薄層板上，以正丁醇-冰醋酸-水=8∶2∶1為展開劑[3]，展開，晾干，噴以茚三酮試液，105℃烘5min。供試品在與對照品的相應(yīng)色譜位置上，均顯相同紫紅色斑點，Rf=0.62。

2.2.2川芎TLC取制劑樣品10ml，加乙醚20ml萃取，超聲10min，過濾，揮干乙醚，加乙酸乙酯1ml，即為供試品溶液。另取相同制備工藝制成的缺川芎的陰性樣品，同法制成陰性對照品溶液。取川芎對照藥材1g，加乙醚20ml，超聲10min，濾過，揮干，加乙酸乙酯1ml，制成對照液。吸取上述溶液各5μl，分別點于同一硅膠G板，以氯仿-甲醇=8∶1為展開劑[4]，展開，取出，晾干，置紫外光燈365nm下檢視，供試品色譜中，在與對照藥材相應(yīng)的位置上，顯相同顏色的斑點。陰性對照無干擾，Rf=0.857。

2.2.3防風TLC取制劑樣品15ml，用乙酸乙酯萃取2次，每次20ml，合并乙酸乙酯層，水浴蒸干，殘渣加甲醇1ml使溶解，作為供試品溶液。另取相同制備工藝制成的缺防風的陰性樣品，同法制成陰性對照液，取防風對照藥材1g，加甲醇10ml，回流30min，濾過，濾液蒸干，加水20ml使溶解，用乙酸乙酯萃取2次，每次15ml，合并乙酸乙酯層，水浴蒸干，殘渣加甲醇1ml使溶解作為對照藥材溶液。吸取上述溶液各5μl，分別點于同一硅膠G薄層板上，以氯仿-甲醇=4∶1為展開劑[5]，展開，取出，晾干。置紫外光燈365nm下檢視，供試品色譜中，在與對照藥材相應(yīng)的位置上，顯相同顏色的斑點。陰性對照無干擾，Rf=0.758。

2.2.4黃芩TLC取制劑樣品10ml，用乙酸乙酯萃取2次，合并乙酸乙酯層，水浴蒸干，加甲醇溶解，作為供試液。另取相同制備工藝制成的缺黃芩的陰性樣品，同法制成陰性對照品溶液。另取黃芩苷對照品，加甲醇制成濃度為1mg/ml的溶液，作為對照品溶液。吸取上述溶液各5μl，分別點于硅膠G薄層板上，以乙酸乙酯-甲醇-甲酸-水=7∶2∶0.5∶0.5為展開劑[6]，展開，取出，晾干。噴三氯化鐵的乙醇溶液，晾干，供試品色譜中，在與對照品相應(yīng)的位置上，顯相同墨綠色的斑點，陰性對照無干擾，Rf=0.756。

2.3HPLC含量測定

2.3.1色譜條件色譜柱：InertsilODS-3(250mm×4.6nm，5μm)；流動相：甲醇-1%冰醋酸(30∶70)；檢測波長：321nm；柱溫：25℃；流速：1ml/min；進樣量：10μl。在上述色譜條件下，按阿魏酸峰計算，理論塔板數(shù)在4000以上[5]；祛風安腦口服液中阿魏酸的色譜峰與其他成分的色譜峰分離良好，且陰性樣品溶液無干擾。見圖1。2.3.2對照品溶液的制備精密稱取阿魏酸4.56mg定容于25ml棕色容量瓶中，加甲醇配成182.40μg/ml對照品儲備液，精密量取1ml對照品儲備液，定容于10ml的棕色容量瓶中，制成含70%甲醇，濃度為18.24μg/ml的對照品溶液，用0.45μm微孔濾膜濾過，取續(xù)濾液，即得。

2.3.3供試品溶液的制備精密稱取祛風安腦口服液10ml，用乙醚10ml萃取，萃取3次，揮干乙醚，用甲醇定容于100ml的容量瓶，制成供試品液，搖勻，用0.45μm微孔濾膜濾過，取續(xù)濾液，即得。

2.3.4陰性對照品溶液的制備按處方量制成缺當歸及川芎的陰性樣品，同供試品溶液的制備制成陰性對照液。

2.3.5線性關(guān)系考察分別精密吸取對照品溶液(18.24μg/ml)1、2、3、4、5、6ml置于10ml的容量瓶中，加甲醇至刻度，搖勻。按上述色譜條件，測定峰面積。以峰面積為縱坐標(Y)，以進樣量(μg)為橫坐標(X)，繪制標準曲線，計算得回歸方程Y=58526X+11512，r=

0.9998。結(jié)果表明：阿魏酸在1.824～10.940μg范圍內(nèi)呈良好的線性關(guān)系。

2.3.6精密度試驗吸取對照品溶液10μl，在所選色譜條件下連續(xù)進樣5次，測定阿魏酸峰面積值，RSD=1.11%。結(jié)果表明，儀器的精密度良好。

2.3.7重復性試驗精密量取同一批樣品5份，按供試品溶液制備方法項下方法操作，共配制5份供試液，各進樣10μl，結(jié)果測定出的含量RSD為1.67%，表明實驗重復性良好。

2.3.8穩(wěn)定性試驗取同一供試品溶液，分別于0、2、4、6、8、10h進樣，測定阿魏酸色譜峰面積，比較10h內(nèi)測得制劑含量RSD值。實驗結(jié)果顯示，RSD為2.00%，表明本供試品溶液在室溫下放置10h內(nèi)穩(wěn)定。

2.3.9加樣回收率試驗采用加樣回收法，取已知含量同一樣品，分別加標0.8倍、1.0倍、1.2倍，每個水平重復3次。按上述的色譜條件進樣，計算回收率，結(jié)果見表1。

表1　阿魏酸回收率試驗結(jié)果

2.3.10樣品測定精密量取5批祛風安腦口服液，并按“2.3.3”項下制成供試品溶液，分別取10μl，注入高效液相色譜儀，在上述的色譜條件下記錄峰面積，計算阿魏酸的含量。結(jié)果見表2。

表2　樣品阿魏酸測定結(jié)果

3討論

祛風安腦口服液為中藥復方制劑，當歸和川芎中的共有成分阿魏酸為有效成分之一，故實驗選擇阿魏酸的含量作為祛風安腦口服液質(zhì)量控制的參考依據(jù)。

由于本品為中藥復方制劑，成分復雜，故采用水提后，65%乙醇醇沉，除去水提液中的淀粉、樹膠、多糖、粘液質(zhì)色素等，而乙醇的上清液含有鞣質(zhì)、生物堿、苷類等[7]。測定阿魏酸含量時，先用乙醚萃取3次，以減少其他成分干擾。報道阿魏酸對光和熱不穩(wěn)定[8]，因此稀釋后應(yīng)置于棕色瓶中，于冰箱中保存。

實驗結(jié)果表明，通過薄層色譜的定性鑒別，各檢出成分不受處方中其他成分的干擾，方法簡便、快速、專屬性強、重復性好。通過阿魏酸的含量測定，可知祛風安腦口服液中阿魏酸在1.824～10.940g/ml范圍內(nèi)線性良好，方法的精密度實驗、重復性試驗均在合理的范圍內(nèi)，且本供試品溶液在10h內(nèi)穩(wěn)定，可見運用本方法測定祛風安腦口服液中阿魏酸的含量可行。

參考文獻

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Quality control of Qu Feng An Nao oral liquid

JIANG Xia1HUANG Yinmei2WANG Xiaojie2LAN Lihua2LI Mei1*

1.Department of Pharmacy, The First Affiliated Hospital of Guangxi Medical Univrsity, Nanning, Guangxi, 530021，China;

2.Pharmacy College, Guangxi Medical University, Nanning, Guangxi, 530021,China

Abstract:Objective To establish Qu Feng An Nao oral liquid qualitative analysis method. Methods Using TLC to ephedra herb, radix scutellariae,radixsileris and rhizoma chuanxiong for qualitative identification, Preparation of ferulaic acid content is determined by HPLC, Inertsil ODS-3 (250mm×4.6nm, 5μm) chromatographic column was used.The mobile phase consisted of methanol and 1% Acetic acid (30∶70); The ultraviolet wavelength was set at 321nm, the colum temperature at 25℃.Results The thin layer plate by TLC spots were clear, Negative control without interference. Ferulaic acid showed a good linear relationship at a range of 1.824-10.940μg(r=0.9998),the average recovery rate was 100.51%, RSD was 1.94%.Conclusions The analysis method is simple feasible and the result is accurate; it can be used for quality control of Qu Feng An Nao oral liquid.

Key words:Qu Feng An Nao oral liquid; ferulaic acid; HPLC; TLC

(收稿日期：2016.01.04)

【中圖分類號】R286

【文獻標志碼】A

【文章編號】1007-8517(2016)06-0019-04

作者簡介：蔣霞，副主任藥師，碩士，主要從事中藥藥理學與生藥學研究。E-mail：jiangxia771@sina.com通信作者：李梅，主任藥師，碩士生導師，主要從事中藥學與新藥的研究開發(fā)。E-mail：326159970@qq.com

基金項目：廣西衛(wèi)生廳中醫(yī)藥科技專項課題(GZYZ 1116)。