阿德福韋酯對(duì)慢性乙型肝炎肝硬化患者細(xì)胞免疫功能的影響*

王汝剛， 浦春文， 周　偉

(大連市第六人民醫(yī)院， 遼寧 大連　116031)

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阿德福韋酯對(duì)慢性乙型肝炎肝硬化患者細(xì)胞免疫功能的影響*

王汝剛， 浦春文， 周偉

(大連市第六人民醫(yī)院， 遼寧 大連116031)

[摘要]目的： 探討阿德福韋酯對(duì)慢性乙型肝炎肝硬化患者細(xì)胞免疫功能的影響。方法： 104例慢性乙型肝炎肝硬化患者，分為代償期組(n=56)和失代償期組(n=48)，兩組患者在對(duì)癥治療同時(shí)均給予阿德福韋酯抗病毒治療(10 mg/次，1次/d，24周)，分別于治療前和治療24周時(shí)檢測(cè)兩組患者血清HBV DNA水平、HBsAg、HBeAg、HBcAb、丙氨酸氨基轉(zhuǎn)移酶(ALT)、白蛋白(Abl)及T細(xì)胞免疫功能相關(guān)指標(biāo)CD4+、CD8+、CD4+/CD8+水平和CD4+CXCR5+濾泡性輔助性T細(xì)胞(TFH)、白細(xì)胞介素(IL)-2和干擾素(IFN)-γ水平，探討阿德福韋酯對(duì)慢性乙型肝炎肝硬化患者細(xì)胞免疫功能的影響。結(jié)果： 治療前兩組患者的HBV DNA水平和HBsAg、HBeAg、HBcAb 均陽(yáng)性比例、T細(xì)胞免疫功能比較，差異均無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)；治療后兩組HBV DNA定量水平和HBsAg、HBeAg、HBcAb 均陽(yáng)性比例均明顯低于治療前(P<0.05)，治療后代償期組ALT和Abl改善水平顯著高于失代償期組(P<0.05)；兩組CD4+、CD4+/CD8+水平均高于治療前，CD8+水平較前降低(P<0.05)； CD4+CXCR5+TFH、IL-2和IFN-γ水平均較前升高(P<0.05)；但治療后兩組同指標(biāo)比較，差異均無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)。結(jié)論： 阿德福韋酯可以提高代償期和失代償期慢性乙型肝炎肝硬化患者的T淋巴細(xì)胞免疫功能，可能與病毒轉(zhuǎn)陰和肝功能改善有關(guān)。

[關(guān)鍵詞]阿德福韋酯； 慢性乙型肝炎肝硬化； 病毒轉(zhuǎn)陰率； 濾泡性輔助性T細(xì)胞

核苷酸類似物阿德福韋酯治療慢性乙型病毒性肝炎的療效明確，除可直接干預(yù)病毒DNA轉(zhuǎn)錄外，還可能參與了調(diào)節(jié)機(jī)體免疫功能；同時(shí)，阿德福韋酯還可以提高慢性乙型病毒性肝炎患者機(jī)體CD4+和CD4+/CD8+水平，降低CD8+水平，對(duì)抗病毒和逆轉(zhuǎn)肝纖維化[1-2]。孫學(xué)華等[3]報(bào)道阿德福韋酯治療慢性乙型肝炎患者后CD4+和CD8+T細(xì)胞亞群表達(dá)頻率增加。白細(xì)胞介素-2(interleukin-2，IL-2)和干擾素-γ(IFN-γ)是T細(xì)胞分泌的細(xì)胞因子，參與細(xì)胞免疫功能的調(diào)節(jié)[3]。本研究比較阿德福韋酯治療104例慢性乙型肝炎肝硬化患者治療前后血清CD4+、CD8+、CD4+/ CD8+水平和CD4+CXCR5+濾泡性輔助性T細(xì)胞(TFH)、IL-2和IFN-γ水平變化，并分為代償期和失代償期進(jìn)行比較，探討阿德福韋酯對(duì)慢性乙型肝炎肝硬化患者T淋巴細(xì)胞免疫功能的影響。

1對(duì)象與方法

1.1對(duì)象

2013年10月～2014年10月入院治療的104例慢性乙型肝炎肝硬化患者，診斷標(biāo)準(zhǔn)參照2010年中華醫(yī)學(xué)會(huì)肝病學(xué)分會(huì)感染病學(xué)分會(huì)聯(lián)合修訂的《慢性乙型肝炎防治指南》[5]。納入標(biāo)準(zhǔn)：(1)年齡≥18歲，<75歲；(2)符合肝硬化和分期標(biāo)準(zhǔn)；(3)首次進(jìn)行抗病毒治療。排除非乙型病毒性肝硬化，乙肝合并酒精性或自身免疫性肝病等，或進(jìn)展為肝癌；合并嚴(yán)重心、肝、腎等臟器功能障礙，阿德福韋酯不耐受或耐藥；依從性差、隨訪資料不完善及拒絕納入研究患者。所有患者按照肝臟疾病的分期，分為代償期組和失代償期組。代償期組56例，男性30例，女性26例，年齡37～66歲，平均(49.8±10.3)歲；乙肝病程1月～10年，平均(3.2±0.6)年。失代償期組48例，男性25例，女性23例，年齡36～74歲，平均(50.2±12.2)歲；乙肝病程6月～13年，平均(3.9±1.2)年。兩組患者的性別、年齡和乙肝病程比較，差異均無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)。所有患者均給予對(duì)癥治療，血紅蛋白(Hb)<60 g/L時(shí)，采用輸血治療；嚴(yán)重低蛋白血癥采用外源性白蛋白補(bǔ)充，同時(shí)給予保肝降酶、注意休息和飲食等。兩組患者同時(shí)給予阿德福韋酯(正大天晴醫(yī)藥有限公司，10 mg/次， 1次/d，24周)抗病毒治療。

1.2方法

于治療前和治療后24周時(shí)分別采取患者外周靜脈血5 mL，3 000 r/min 離心10 min，取上層血清置于-80 ℃冰箱中保存集中送檢。HBV DNA水平檢測(cè)采用熒光定量聚合酶鏈反應(yīng)法，試劑盒系中山大學(xué)達(dá)安基因股份有限公司產(chǎn)品。乙肝表面抗原(HBsAg)、乙肝e抗原(HBeAg)及乙肝c抗體(HBcAb)采用ELISA法進(jìn)行檢測(cè)，試劑盒購(gòu)自廈門(mén)英科新創(chuàng)科技有限公司。丙氨酸氨基轉(zhuǎn)移酶(ALT)及白蛋白(Abl)采用OLYMPUS全自動(dòng)生化分析儀進(jìn)行檢測(cè)。CD4+、CD8+、CD4+/ CD8+水平和CD4+CXCR5+ TFH、IL-2和IFN-γ采用美國(guó)BECKMANCOULTER公司EPICS XL型流式細(xì)胞分析儀和軟件SYSTEM II檢測(cè)。

1.3統(tǒng)計(jì)學(xué)方法

2結(jié)果

2.1HBV DNA、HBsAg、HBeAg及HBcAb檢測(cè)

兩組慢性乙型肝炎肝硬化患者血清HBV DNA水平和HBsAg、HBeAg、HBcAb 均陽(yáng)性比例，治療前比較，差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)；治療后兩組明顯低于治療前，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)，而治療后兩組同指標(biāo)比較，差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)。見(jiàn)表1。兩組慢性乙型肝炎肝硬化患者治療后ALT水平降低而Abl升高，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)；代償期組ALT和Abl改善水平顯著高于失代償期組，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。見(jiàn)表1。

2.2CD4+、CD8+和CD4+/ CD8+、CD4+CXCR5+TFH、IL-2和IFN-γ水平

治療前兩組患者T細(xì)胞免疫功能差異均無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)，治療后兩組CD4+、CD4+/CD8+水平均高于治療前，CD8+水平較前降低，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)；兩組治療后CD4+CXCR5+TFH、IL-2及IFN-γ水平較治療前升高，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)；而治療后兩組同指標(biāo)比較，差異均無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)。見(jiàn)表1。

表1　兩組患者HBsAg、HBeAg、HBcAb、HBV DNA、CD4+、CD8+、CD4+/ CD8+、

(1)與同組治療前比較，P<0.05

3討論

慢性乙型肝炎合并肝硬化的發(fā)病機(jī)制較為復(fù)雜，除了病毒本身的致病作用外，機(jī)體免疫功能紊亂也發(fā)揮重要作用。免疫應(yīng)答既可清除病毒，亦可導(dǎo)致肝細(xì)胞免疫損傷，甚至病毒變異。有研究顯示T淋巴細(xì)胞亞群的平衡在機(jī)體清除HBV過(guò)程中起重要作用[5]。CD4+T淋巴細(xì)胞識(shí)別MHC Ⅱ類分子所提呈的外源性抗原肽，活化后主要分化為T(mén)h細(xì)胞。 CD8+T淋巴細(xì)胞識(shí)別MHCⅠ類分子所提呈的內(nèi)源性抗原肽，活化后主要分化為CTL細(xì)胞。機(jī)體感染乙肝病毒后，病毒在宿主細(xì)胞內(nèi)復(fù)制，產(chǎn)生病毒蛋白，細(xì)胞內(nèi)的MHCⅠ類分子選擇性地與之結(jié)合形成復(fù)合物，此復(fù)合物被T淋巴細(xì)胞特異性抗原識(shí)別，激活CD8+T淋巴細(xì)胞細(xì)胞，導(dǎo)致肝細(xì)胞破壞；同時(shí)CD4+T淋巴細(xì)胞通過(guò)其表面的MHC Ⅱ類分子介導(dǎo)B淋巴細(xì)胞激活，促進(jìn)B淋巴細(xì)胞產(chǎn)生抗-HBs，從而清除HBV。這是HBV 引起肝細(xì)胞損傷的主要原因，也是宿主清除細(xì)胞內(nèi)病毒的主要機(jī)制。宿主外周血T淋巴細(xì)胞亞群CD4+、CD8+細(xì)胞水平和CD4+/CD8+的比值反映著機(jī)體的細(xì)胞免疫狀態(tài)。慢性乙型肝炎患者外周血T細(xì)胞亞群的改變體現(xiàn)了患者細(xì)胞免疫的免疫病理學(xué)改變[6]。最近研究證明濾泡性輔助性T細(xì)胞是輔助B細(xì)胞產(chǎn)生抗體的主要T細(xì)胞亞群，其定位于淋巴濾泡并與B細(xì)胞共定位和相互作用，通過(guò)持續(xù)表達(dá)CXCR5/ICOS/PD-1等膜表面分子和產(chǎn)生IL-21等細(xì)胞因子輔助B細(xì)胞參與體液免疫反應(yīng)[7]。阿德福韋酯為嘌吟類衍生物，口服后在體內(nèi)迅速被酯酶水解為游離阿德福韋，進(jìn)入門(mén)靜脈和全身循環(huán)，在細(xì)胞激酶的作用下被磷酸化為有活性的代謝產(chǎn)物即阿德福韋二磷酸鹽，它與自然底物脫氧腺苷三磷酸競(jìng)爭(zhēng)抑制 HBV DNA 多聚酶活性，且整合到病毒DNA 鏈中，終止 DNA 鏈的合成抑制病毒復(fù)制。另外阿德福韋可誘導(dǎo)內(nèi)生性干擾素，增加自然殺傷細(xì)胞活力和刺激機(jī)體免疫反應(yīng)，具有較強(qiáng)的抗HBV作用，對(duì)失代償期肝硬化患者是一種安全有效的藥物[8-9]。本研究中轉(zhuǎn)陰率定義為HBsAg、HBeAg、HBcAb均陽(yáng)性轉(zhuǎn)為均陰性，是因?yàn)镠BsAg、HBeAg、HBcAb 均陽(yáng)性在病毒學(xué)轉(zhuǎn)陰方面可能更有意義[4]。

輔助性T細(xì)胞(Th)的主要表面標(biāo)志物為CD4，在免疫反應(yīng)中扮演中間角色，可通過(guò)增生、擴(kuò)散等方式激活其他類型T細(xì)胞產(chǎn)生直接免疫反應(yīng)。Th1細(xì)胞主要介導(dǎo)細(xì)胞免疫反應(yīng)，可分泌多種細(xì)胞因子如IL-2、IFN-γ、TNF-β等，共同調(diào)節(jié)抗原提成、活化巨噬細(xì)胞、移植器官排斥反應(yīng)和誘導(dǎo)自身免疫性疾病中發(fā)揮重要作用。本研究結(jié)果顯示兩組的病毒轉(zhuǎn)陰率比較，差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，代償期組ALT降低水平和Alb升高水平顯著高于失代償期組(P<0.05)。兩組治療后CD4+、CD4+/ CD8+水平均高于治療前，CD8+水平較治療前降低(P<0.05)。兩組治療后CD4+CXCR5+TFH水平、IL-2和IFN-γ水平較前升高(P<0.05)。說(shuō)明阿德福韋酯可以提高代償期和失代償期慢性乙型肝硬化患者的T淋巴細(xì)胞免疫功能，可能與病毒轉(zhuǎn)陰和肝功能改善有關(guān)。

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(2015-12-05收稿，2016-02-23修回)

中文編輯： 吳昌學(xué)； 英文編輯： 趙毅

關(guān)于醫(yī)學(xué)符號(hào)的使用

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化學(xué)元素及核素在醫(yī)學(xué)寫(xiě)作時(shí)一般多采用符號(hào)，都是拉丁字母正體大寫(xiě)。離子態(tài)是在右上角用數(shù)字加“-”或“+”表示。例如Na+,Ca2+,P3-等等，不采用Ca++,P---,Al+3,O-2表示；核素的核子素(質(zhì)量數(shù))應(yīng)寫(xiě)在元素符號(hào)的左上角，例如：131I,32P；表示激發(fā)狀態(tài)的m寫(xiě)在右上角，例如:99Tcm,133Inm。在科技論文和專著中不應(yīng)寫(xiě)核素的中文名稱，即不能寫(xiě)成131碘、銦133m、P32、Tc99m。

近幾年分子生物學(xué)發(fā)展很快，并已滲透到許多學(xué)科，大多數(shù)分子生物學(xué)名詞術(shù)語(yǔ)的符號(hào)已有統(tǒng)一的確定形式，要對(duì)符號(hào)的來(lái)源及其內(nèi)涵有深刻的了解，才能在使用時(shí)不致發(fā)生錯(cuò)誤，例如：RNA有rRNA(ribosomal RNA)、tRNS(transfer RNA)、mRNA(messenger RNA)3類。r、t、m是表示類型的符號(hào)應(yīng)小寫(xiě)，RNA應(yīng)大寫(xiě)。

《貴陽(yáng)醫(yī)學(xué)院學(xué)報(bào)》編輯部

Influence of Adefovir Dipivoxil on T Cell Immune Function of CHB Liver Cirrhosis

WANG Rugang， PU Chunwen, ZHOU Wei

(DalianSixthPeople'sHospital,Dalian116031,Liaoning,China)

[Abstract]Objective: To investigate the efficacy of adefovir dipivoxil on IL-2 and IFN-γ level change of CHB liver cirrhosis. Methods: A total of 104 CHB patients were divided into 56 cases of compensated cirrhosis group and 48 cases of discompensation group. Both groups received adefovir dipivoxil 10 mg/per day for 24 weeks. Serum HBV DNA level, HBsAg, HBeAg, HBcAb, ALT, Abl , T cell immune function relevant index CD4+, CD8+, CD4+/ CD8+ and CD4+CXCR5+ TFH, IL-2 and IFN-γlevel were tested before and after 24 weeks of treatment; observing HBeAG before and after treatment (HBsAg, HBeAg, HBcAball converted from positive to negative). Results: HBV DNA Quantitative levels after operation and HBsAg, HBeAg, HBcAb presented as positive proportion, which was significantly lower than before treatment(P<0.05); the ALT and Abl level in compensated group was significantly higher than discompensation group(P<0.05); CD4+ and CD4+/ CD8+ value in both groups were both higher and CD8+ value was lower after treatment(P<0.05). CD4+CXCR5+TFH，IL-2 and IFN-γ levels in both groups all increased after treatment(P>0.05). Comparing indexes of both groups, differences were not statistically significant(P>0.05). Conclusion: adefovir dipivoxil can improve T cell immune function in patients in different stages of liver cirrhosis，which may be related to virus clearance and liver function improvement.

[Key words]adefovir dipivoxil; chronic hepatitis B cirrhosis; virus clearance rate; T follicular helper cells

[中圖分類號(hào)]R575

[文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼]A

[文章編號(hào)]1000-2707(2016)03-0322-04

*[基金項(xiàng)目]遼寧省科技廳博士啟動(dòng)基金(20131024)

網(wǎng)絡(luò)出版時(shí)間：2016-03-17網(wǎng)絡(luò)出版地址：http://www.cnki.net/kcms/detail/52.5012.R.20160317.1035.030.html