MGMT基因?qū)δX膠質(zhì)瘤患者啟動子甲基化變化的價值研究

陳海南　莫立根　鄧　騰

廣西南寧市醫(yī)科大學(xué)附屬腫瘤醫(yī)院神經(jīng)外科　南寧　530000

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·診治研究·

MGMT基因?qū)δX膠質(zhì)瘤患者啟動子甲基化變化的價值研究

陳海南莫立根鄧騰

廣西南寧市醫(yī)科大學(xué)附屬腫瘤醫(yī)院神經(jīng)外科南寧530000

【摘要】目的探究MGMT基因表達、啟動子甲基化與腦膠質(zhì)瘤患者預(yù)后間的關(guān)聯(lián)性。方法擇取我院2012-06-2014-09收治的82例行腦膠質(zhì)瘤個體化綜合治療的惡性膠質(zhì)瘤患者為研究對象，依據(jù)腦膠質(zhì)瘤MGMT基因表達與啟動子甲基化狀況進行分組，術(shù)后予以同步放化療，分析各組患者近期療效、安全性及無進展生存時間。結(jié)果MGMT蛋白表達與惡性膠質(zhì)瘤MGMT基因啟動子甲基化狀態(tài)呈負(fù)相關(guān)(P<0.05)，MGMT基因啟動子甲基化組近期療效(79.54% vs 75.00%)高于MGMT蛋白低表達組(P<0.05)，MGMT甲基化低表達組1、2、3 a生存率(90.62% vs 75.00%；56.25% vs 41.66%；31.25% vs 16.66%)明顯高于MGMT甲基化高低表達組(P<0.05)。結(jié)果MGMT基因表達、啟動子甲基化與腦膠質(zhì)瘤患者預(yù)后密切相關(guān)，臨床上應(yīng)引起足夠重視。

【關(guān)鍵詞】MGMT基因表達；啟動子甲基化；腦膠質(zhì)瘤；預(yù)后；關(guān)聯(lián)性

O6-甲基鳥嘌呤-DNA甲基轉(zhuǎn)移酶(MGMT)作為一種DNA直接修復(fù)酶，能有效維護細(xì)胞免受烷化劑損害，并對預(yù)防細(xì)胞癌變具有至關(guān)重要的作用。研究發(fā)現(xiàn)，細(xì)胞內(nèi)MGMT含量與其合成速度影響機體對烷化劑所誘導(dǎo)基因突變的修復(fù)能力，一旦MGMT活性或表達下降，易促使基因突變逐漸積累，最終形成細(xì)胞癌變[1]。MGMT基因啟動子甲基化作為一種較為常見的表觀遺傳學(xué)異常，與MGMT蛋白表達具有密切相關(guān)性。為了深入探討MGMT基因表達、啟動子甲基化與腦膠質(zhì)瘤患者預(yù)后間的關(guān)聯(lián)性，本文對我院收治的82例行腦膠質(zhì)瘤個體化綜合治療的惡性膠質(zhì)瘤患者進行系統(tǒng)研究，相關(guān)報告如下。

1資料與方法

1.1一般資料選擇我院2012-06-2014-09收治的行腦膠質(zhì)瘤個體化綜合治療的惡性膠質(zhì)瘤患者82例為研究對象，男40例，女42例；年齡22～68歲，平均(44.16±2.18)歲；腫瘤位置：頂葉9例，基底節(jié)區(qū)5例，額葉22例，顳頂葉16例，顳葉20例，顳枕葉10例；術(shù)后病理分型：室管膜母細(xì)胞瘤Ⅳ級2例，間變性少突膠質(zhì)細(xì)胞瘤Ⅲ級17例，間變性星形細(xì)胞瘤Ⅲ級31例，多形膠質(zhì)母細(xì)胞瘤Ⅳ級14例，間變性室管膜細(xì)胞瘤Ⅲ級5例，間變性少突-星形細(xì)胞瘤Ⅲ級10例，髓母細(xì)胞瘤Ⅳ級3例。

1.2納入標(biāo)準(zhǔn)(1)KPS>60分，肝、肺、心、腎等臟器功能正常；(2)Hb≥100 g/L，PLT≥100×109個/L，WBC≥4×109個/L；(3)首次就診者；(4)均性顯微鏡下切除腫瘤術(shù)，術(shù)中維持瘤腔圓錐形態(tài)，確保瘤腔封腔可靠；(5)術(shù)后病理提示為惡性腦膠質(zhì)瘤，WHO呈Ⅲ～Ⅳ級；(6)臨床資料齊全，均簽署知情同意書。

1.3排除標(biāo)準(zhǔn)(1)術(shù)后嚴(yán)重并發(fā)癥者(包括術(shù)后顱內(nèi)血腫、顱內(nèi)感染等)；(2)哺乳期或妊娠期婦女；(3)就診病案資料不完整者；(4)不配合本次研究者。

1.4方法

1.4.1研究方法：所有患者均行手術(shù)治療，經(jīng)手術(shù)收集腫瘤組織標(biāo)本，行常規(guī)組織病理檢測，并接受MGMT基因表達與啟動子甲基化檢測。MGMT表達主要劃分為兩種，即低表達(-～+)與高表達(++～+++)。根據(jù)腦膠質(zhì)瘤MGMT基因表達狀況分為MGMT基因高表達組及低表達組各41例。同時，依據(jù)MGMT基因啟動子甲基化狀況分為非甲基化組(38例)及甲基化組(44例)，依據(jù)檢測結(jié)果行TMZ會師化療同步適形放療或ACNU間質(zhì)內(nèi)化療。

1.4.2治療方案:①放療方案：于手術(shù)切口愈合時選取6MV-X線予以三維適形放療，確保50～60 Gy/(25～30)次照射劑量，維持5～6周，并同步化療，維持16周及其以上；②TMZ+ACNU化療方案：術(shù)中放置化療泵，于瘤腔中將Ommaya囊輸出端置入其中，并埋植于皮下，術(shù)后7 d予以125 mL、20%甘露醇+2.5 mg地塞米松，誘導(dǎo)血腦屏障開放。30 min后于Ommaya囊內(nèi)注射2.5 mg/mL×1 mL ACNU藥物，維持3 d。術(shù)后第1、5、9、13、17周，分別接受化療，維持1個療程。同時，服用TMZ(蒂清)，以體表面積150 mg/(m2·次)為初始劑量，1次/d，維持5 d、28 d為1周期。若第22、29天測得PLT≥100×109/L，且絕對中性粒細(xì)胞數(shù)≥1.5×109/L時，以體表面積口服一次200 mg/m2為下1周期劑量，1次/d，維持5 d。第22天(或其后48 h)，予以血常規(guī)檢測，繼后每周進行1次。PLT≥100×109/L，或(和)絕對中性粒細(xì)胞數(shù)≥1.5×109/L時，可行下一周期治療，劑量降低50 mg/m2。每4周即為1周期，維持6個周期化療。

1.5觀察指標(biāo)(1)觀察MGMT蛋白表達與惡性膠質(zhì)瘤患者MGMT基因啟動子甲基化狀態(tài)之間的相關(guān)性；(2)觀察各組近期療效；(3)觀察惡性膠質(zhì)瘤患者在治療過程中不良反應(yīng)發(fā)生情況，多表現(xiàn)為可耐受癥狀，譬如嘔吐、惡心、頭痛、乏力、脫發(fā)、骨髓抑制等。

1.6近期療效評估標(biāo)準(zhǔn)以WHO近期療效評級標(biāo)準(zhǔn)[2]為參考依據(jù)，予以臨床療效評估，其中CR為完全緩解，表明病變完全消失，維持時間在1個月以上；PR為部分緩解，腫瘤面積縮小至50%以上，持續(xù)4周左右；SD為穩(wěn)定，腫瘤面積縮小至50%以下，維持4周以上；PD為進展，腫瘤面積增大至25%以上。治療有效：CR+PR；疾病控制：CR+PR+SD。

1.7統(tǒng)計學(xué)方法數(shù)據(jù)采用SPSS(數(shù)據(jù)統(tǒng)計軟件)V19.0開展系統(tǒng)性分析，計量資料以均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差表示，采用t檢驗，計數(shù)資料以百分率(%)表示，采用χ2檢驗，P<0.05為差異有統(tǒng)計學(xué)意義。

2結(jié)果

2.1MGMT蛋白表達與惡性膠質(zhì)瘤患者MGMT基因啟動子甲基化狀態(tài)間的相關(guān)性82例患者中44例(53.65%)出現(xiàn)MGMT基因啟動子甲基化，而MGMT蛋白低表達率為72.72%(32/44),高表達率為27.28%(12/44)；38例(46.34%)MGMT基因啟動子非甲基化，其中MGMT蛋白低表達率為23.68%(9/38)，高表達率為76.32%(29/38)。經(jīng)檢驗發(fā)現(xiàn)，MGMT蛋白表達與惡性膠質(zhì)瘤MGMT基因啟動子甲基化狀態(tài)呈負(fù)相關(guān)(r=-0.516，P<0.05)。見表1。

表1　MGMT蛋白表達與惡性膠質(zhì)瘤患者MGMT

2.24組近期療效比較MGMT基因啟動子甲基化組近期療效為79.54%,非甲基化組僅達5.26%，差異有統(tǒng)計學(xué)意(P<0.05)；MGMT蛋白低表達組近期療效為75.00%,高表達組達14.63%(6/41)，差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05)；MGMT基因啟動子甲基化組近期療效高于MGMT蛋白低表達組，差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05)。見表2。

表2　4組近期療效比較　[n(%)]

注：與甲基化組比較，MP<0.05；與高表達組比較，NP<0.05，GP<0.05

2.34組無進展生存時間比較MGMT甲基化低表達組1、2、3 a生存率明顯高于MGMT甲基化高表達組(P<0.05)，MGMT非甲基化高表達組1、2 a生存率顯著高于MGMT非甲基化低表達組(P<0.05)。見表3。

表3　4組無進展生存時間比較　[n(%)]

注：與MGMT非甲基化低表達組比較，MP<0.05；與MGMT甲基化低表達組比較，NP<0.05

3討論

腦膠質(zhì)瘤作為臨床上一種較為常見的原發(fā)性惡性腫瘤，病死率及病殘率極高，目前多提倡MGMT綜合療法，主張聯(lián)合手術(shù)、化療及放療，但對預(yù)后并無明顯變化。烷化劑類化療藥屬于惡性膠質(zhì)瘤治療的關(guān)鍵藥物，經(jīng)誘導(dǎo)DNA烷基化受損而促使腫瘤細(xì)胞調(diào)亡，但常規(guī)烷化劑達至腫瘤局部的濃度小，易引起胃腸道反應(yīng)及血功能抑制。研究發(fā)現(xiàn)，伴隨著硝脲類藥物及TMZ在臨床上的廣泛應(yīng)用，基于手術(shù)或放療前提下對惡性膠質(zhì)瘤患者輔以TMZ聯(lián)合方案，可提高MGMT年生存率[3]。

烷化劑屬于致癌物質(zhì)及誘變劑，可誘導(dǎo)DNA堿基烷基化損傷，加大O6-甲基鳥嘌呤對細(xì)胞的刺激，形成堿基錯誤配對，進而發(fā)揮骨髓抑制及致癌作用。MGMT屬于DNA修復(fù)蛋白，經(jīng)自殺反應(yīng)促使烷化基團共價移至自身半胱氨酸殘基活性位點上，誘導(dǎo)受損鳥嘌呤早日恢復(fù)，預(yù)防染色體免遭受烷化劑細(xì)胞毒及致突變作用，進而規(guī)避細(xì)胞影響抗烷化劑基團[4]。在惡性膠質(zhì)瘤組織中，MGMT蛋白表達對烷化劑治療效果具有明顯的影響，其接受基因啟動子CpG島甲基化控制，而基因啟動子CpG島甲基化對MGMT蛋白表達下降具有重要的影響。由此可見，重視MGMT基因啟動子甲基化檢測，全面評估藥物敏感性顯得尤為必要。

本文結(jié)果提示，MGMT蛋白表達與惡性膠質(zhì)瘤MGMT基因啟動子甲基化狀態(tài)呈負(fù)相關(guān)(P<0.05)，且MGMT基因啟動子甲基化者治療后1、2、3 a生存率明顯高于MGMT基因啟動子非甲基化者，多因MGMT基因啟動子甲基化狀態(tài)對MGMT蛋白表達具有調(diào)控作用，易刺激腫瘤對烷化劑的敏感性。

研究[5]證實，MGMT基因啟動子甲基化對MGMT蛋白表達具有一定的調(diào)控作用，可誘導(dǎo)膠質(zhì)瘤甲基化細(xì)胞株MGMT蛋白呈缺失或低表達狀，而MGMT蛋白表達與膠質(zhì)瘤細(xì)胞株MGMT基因啟動子甲基化狀態(tài)具有相關(guān)性，且細(xì)胞株對烷化劑藥物的敏感性與后者亦密切相關(guān)。MGMT蛋白呈高表達時，易降低其對亞硝脲類藥物及TMZ的敏感性，而MGMT基因啟動子甲基化狀態(tài)對對亞硝脲類藥物及TMZ具有較高的敏感性。國外有學(xué)者[6-8]認(rèn)為，細(xì)胞內(nèi)MGMT蛋白缺失的關(guān)鍵誘因為MGMT基因啟動子甲基化，一旦MGMT蛋白呈缺失或低表達狀，提示其對烷化劑藥物較為敏感，不利于延長腦膠質(zhì)瘤者生存期，故基因啟動子甲基化、MGMT基因表達與腦膠質(zhì)瘤者需考慮應(yīng)用TMZ+ACNU化療方案改善預(yù)后。

目前，國內(nèi)外研究[9-10]表明，MGMT蛋白表達與啟動子甲基化與腦膠質(zhì)瘤患者預(yù)后密切相關(guān)，但臨床上MGMT蛋白表達與其啟動子甲基化狀態(tài)對烷化劑類化療藥物的合理選擇存在矛盾。本研究中，所有患者均接受TMZ會師化療同步適形放療及ACNU間質(zhì)內(nèi)化療，結(jié)果發(fā)現(xiàn)，MGMT基因啟動子甲基化者近期療效與1、2、3 a生存率均優(yōu)于MGMT基因啟動子非甲基化者(P<0.05)，且MGMT基因啟動子甲基化組近期療效高于MGMT蛋白低表達組(P<0.05)，表明基于MGMT啟動子甲基化或低表達狀況下，對化療敏感藥物具有較高的敏感性，予以TMZ+ACNU化療方案療效確切；于MGMT啟動子非甲基化及高表達下，對化療藥物的敏感性低，予以TMZ+ACNU化療方案療效差，需考慮其他化療藥物。

綜上所述，MGMT基因表達、啟動子甲基化與腦膠質(zhì)瘤患者預(yù)后間具有相關(guān)性，臨床應(yīng)引起足夠重視。

4參考文獻

[1]鄭長青,季守平,宮鋒,等.MGMT基因啟動子甲基化檢測在腦膠質(zhì)瘤化療中的意義[J].癌癥,2009,28(6):575-580.

[2]羅敏捷,張旺明,王軍,等.惡性腦膠質(zhì)瘤MGMT基因啟動子甲基化狀態(tài)與患者臨床預(yù)后的相關(guān)性[J].中華神經(jīng)醫(yī)學(xué)雜志,2012,11(6):565-569.

[3]王士浩,何杰,朱海青,等.腦膠質(zhì)瘤MGMT基因啟動子甲基化與蛋白表達的研究[J].現(xiàn)代醫(yī)學(xué),2009,37(3):216-219.

[4]鄭長青,季守平,宮鋒,等.MGMT、hMLH1和hMSH2基因啟動子甲基化狀態(tài)對腦膠質(zhì)瘤預(yù)后的影響[J].山東醫(yī)藥,2009,49(1):23-25.

[5]袁強,步星耀,閆兆月,等.腦膠質(zhì)瘤MGMT基因表達及啟動子甲基化與患者臨床預(yù)后關(guān)系的觀察[J].中華腦科疾病與康復(fù)雜志(電子版),2014,24(5):9-14.

[6]鄭長青,季守平,宮鋒，等.腦膠質(zhì)瘤患者組織和血清MGMT、hMLH1和hMSH2基因啟動子甲基化狀態(tài)檢測[J].醫(yī)學(xué)分子生物學(xué)雜志,2009,6(1):1-5.

[7]程建杰,趙妤,李正金，等.MGMT基因啟動子甲基化與MGMT蛋白和NF-κB在腦膠質(zhì)瘤的表達及意義[J].中華臨床醫(yī)師雜志(電子版),2013,16(4):1 467-1 470.

[8]鄭長青,季守平,宮鋒，等.腦膠質(zhì)瘤MGMT、hMLH1和hMSH2基因啟動子甲基化狀態(tài)研究[J].生物技術(shù)通訊,2009,20(3):315-318.

[9]劉楠,佟志國,周敏，等.膠質(zhì)瘤患者外周血DNA修復(fù)基因甲基化與蛋白表達的相關(guān)性[J].實用腫瘤學(xué)雜志,2014,23(3):198-201.

[10]鄭長青,季守平,宮鋒，等.腦膠質(zhì)瘤SHG-44細(xì)胞MGMT基因甲基化狀態(tài)及其與細(xì)胞對烷化劑藥物耐藥性關(guān)系的研究[J].中國醫(yī)藥生物技術(shù),2009,4(2):90-95.

(收稿2015-03-13)

【中圖分類號】R739.4

【文獻標(biāo)識碼】B

【文章編號】1673-5110(2016)06-0061-02