新型三唑并[4,5-d]嘧啶類化合物的合成及其抗血小板聚集活性

王　兵， 楊　靜， 姜希明， 劉　穎， 劉登科， 王平保*

(1. 天津醫(yī)科大學(xué) 研究生院，天津　300070； 2. 天津渤海職業(yè)技術(shù)學(xué)院 生物與環(huán)境工程系，天津　300408；

3. 天津法莫西醫(yī)藥科技有限公司，天津　300384； 4. 天津藥物研究院有限公司，天津　300193)

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·研究論文·

新型三唑并[4,5-d]嘧啶類化合物的合成及其抗血小板聚集活性

王兵1，4， 楊靜2， 姜希明3， 劉穎4， 劉登科4， 王平保4*

(1. 天津醫(yī)科大學(xué) 研究生院，天津300070； 2. 天津渤海職業(yè)技術(shù)學(xué)院 生物與環(huán)境工程系，天津300408；

3. 天津法莫西醫(yī)藥科技有限公司，天津300384； 4. 天津藥物研究院有限公司，天津300193)

摘要：以2-丙硫基-4,6-二氯-5-氨基嘧啶為原料，與伯胺類化合物(1)經(jīng)取代反應(yīng)制得氨基嘧啶類化合物(2)； 2經(jīng)重氮化反應(yīng)制得三氮唑類化合物(3)； 3與胺類化合物經(jīng)親核取代反應(yīng)和水解反應(yīng)合成了26個(gè)新型的三唑并[4,5-d]嘧啶類化合物(6a～6z)，其結(jié)構(gòu)經(jīng)1H NMR和ESI-MS表征。大鼠體內(nèi)抗血小板聚集模型測(cè)試結(jié)果表明：26個(gè)化合物均具有一定的抗血小板聚集活性，其中，6d, 6i和6l的抗血小板聚集活性較強(qiáng)，抑制率分別為61.9%, 69.3%和71.2%。

關(guān)鍵詞：三唑并[4,5-d]嘧啶； 合成； 抗血小板聚集活性

通信聯(lián)系人： 王平保，研究員，碩士生導(dǎo)師， E-mail: wangpb@tjipr.com

血栓可導(dǎo)致急性心肌梗死、中風(fēng)、肺栓塞等心腦血管疾病，嚴(yán)重威脅著人類的健康和生命[1]。P2Y12二磷酸腺苷(ADP)受體抑制劑通過(guò)選擇性的抑制ADP達(dá)到抗凝血作用而得到廣泛應(yīng)用[2]。

Scheme 1

ADP受體拮抗劑分不可逆性和可逆性兩類，三唑并[4,5-d]嘧啶類藥物，如替格瑞洛【{1S-[1α，2α，3β(1S*,2R*)，5β]}-3-{7-[2-(3，4-二氟苯基)環(huán)丙基氨基]-5-(丙硫基)-3H-[1,2,3]三唑并[4,5-d]嘧啶-3-基}-5-(2-羥基乙氧基)環(huán)戊烷-1,2二醇】(Ticagrelor, Chart 1)[3-4]為新型的可逆性ADP受體拮抗劑，由美國(guó)阿斯利康公司研發(fā)，于2010年12月首次在英國(guó)上市，臨床上用于減少急性冠脈綜合癥，包括不穩(wěn)定心絞痛，ST段抬高心肌梗死和非ST段抬高心肌梗死，以及經(jīng)皮冠狀動(dòng)脈介入治療后和冠狀動(dòng)脈旁路移植術(shù)后患者的心血管死亡和心臟病發(fā)作。Ticagrelor的代謝產(chǎn)物為AR-C124910XX(Chart 1),也具有抗血小板聚集活性[5]。替格瑞洛具有作用強(qiáng)、起效快、停藥后恢復(fù)迅速、患者個(gè)體間差異小等一系列優(yōu)點(diǎn)，但存在出血、產(chǎn)生呼吸困難等不良反應(yīng)缺陷[6]。因此尋找更加安全有效的該類抗血栓藥物具有一定的價(jià)值。

本研究在文獻(xiàn)[7-11]方法的基礎(chǔ)上，以替格瑞洛和AR-C124910XX為先導(dǎo)化合物，保留其藥效基團(tuán)三唑并[4,5-d]嘧啶母核，對(duì)嘧啶環(huán)進(jìn)行結(jié)構(gòu)修飾,通過(guò)生物電子等排和藥物代謝原理,設(shè)計(jì)并合成了2個(gè)系列共計(jì)26個(gè)新型的三唑并[4,5-d]嘧啶類化合物(6a～6z)。以2-丙硫基-4,6-二氯-5-氨基嘧啶為原料，與伯胺(1a, 1n)經(jīng)取代反應(yīng)制得氨基嘧啶類化合物(2a, 2n)； 2經(jīng)重氮化反應(yīng)制得三氮唑類化合物(3a, 3n)； 3與胺類化合物經(jīng)親核取代反應(yīng)和水解反應(yīng)合成了6a～6z(Scheme 1)，其結(jié)構(gòu)經(jīng)1H NMR和ESI-MS表征。并測(cè)定了6a～6z的抗血小板聚集活性。

1實(shí)驗(yàn)部分

1.1儀器與試劑

YRT-3型熔點(diǎn)儀(溫度未校正)；BRUKER AV400型核磁共振儀(DMSO-d6為溶劑，TMS為內(nèi)標(biāo))；VG ZAB-HS型質(zhì)譜儀；CHRONO-LOG型血小板聚集儀。

4a～4m,阿拉丁試劑公司；其余所用試劑均為分析純。

1.2合成

(1) 2a和2n的合成(以2a為例)

在反應(yīng)瓶中加入2-丙硫基-4,6-二氯-5-氨基嘧啶10 g(40 mmol)和乙二醇30 mL，攪拌使其溶解；于室溫(25 ℃)分批次加入2-{[(3aR,4S,6R,6aS)-6-氨基-2,2-二甲基四氫-4H-環(huán)戊二烯并[d][1,3]二氧雜環(huán)戊-4-基]氧基}乙基-1-醇的酒石酸鹽(1a)16 g(44 mmol),加畢，滴加三乙胺14.5 g，滴畢(約15 min)， N2保護(hù)下于100 ℃反應(yīng)18 h。冷卻至室溫，加水30 mL，用乙酸乙酯(3×30 mL)萃取，合并有機(jī)相，用飽和食鹽水(2×30 mL)洗滌，無(wú)水硫酸鈉干燥，減壓蒸除溶劑得褐色油狀物，用混合溶劑[V(乙酸乙酯) ∶V(石油醚)=1 ∶5]重結(jié)晶得淡棕色粉末2-【【(3aR,4S,6R,6aS)-6-{[5-氨基-6-氯-2-(丙硫基)嘧啶-4-基]氨基}-2,2-二甲基四氫-4H-環(huán)戊二烯并[d][1,3]二氧雜環(huán)戊-4-基】氧基】乙基-1-醇(2a)15 g,收率85%，純度97%；1H NMRδ： 0.95(t,J=3.6 Hz, 3H), 1.18(t,J=9.0 Hz, 3H), 1.14(s, 3H), 1.63(q,J=7.2 Hz, 2H), 1.86(d,J=13.6 Hz, 1H), 2.19～2.49(m, 1H), 2.95～2.99(m, 2H), 3.45～3.56(m, 4H), 3.87(s, 1H), 4.31(s, 1H), 4.47(d,J=6.0 Hz, 1H), 4.53(d,J=6.0 Hz, 1H), 4.70(s, 2H), 4.96(s, 1H), 6.55(d,J=7.2 Hz, 1H)。

用(3aR,4S,6R,6aS)-6-氨基-2,2-二甲基四氫-4H-環(huán)戊二烯并[d][1,3]二氧雜環(huán)戊-4-醇(1n)代替1a，用類似方法合成紅褐色油狀物(3aR,4S,6R,6aS)-6-{[ 5-氨基-6-氯-2-(丙硫基)嘧啶-4-基]氨基}-2,2-二甲基四氫-4H-環(huán)戊二烯并[d][1,3]二氧雜環(huán)戊-4-醇(2n)，收率80%。

(2) 3a和3n的合成(以3a為例)

在反應(yīng)瓶中加入2a 15 g(36 mmol)，乙酸45 mL，于30 ℃攪拌使其完全溶解；滴加亞硝酸鈉2.7 g(0.04 mol)溶液15 mL，滴畢，反應(yīng)1 h；加入蒸餾水50 mL，用二氯甲烷(3×30 mL)萃取，合并有機(jī)相，依次用飽和Na2CO3溶液和飽和食鹽水洗滌，無(wú)水硫酸鈉干燥，減壓蒸除溶劑后得淡褐色油狀物2-【{(3aR,4S,6R,6aS)-6-[7-氯-5-(丙硫基)-3H-[1,2,3]三唑并[4,5-d]嘧啶-3-基]-2,2-二甲基四氫-4H-環(huán)戊二烯并[d][1,3]二氧雜環(huán)戊-4-基}氧】乙基-1-醇(3a)15 g，收率97%；1H NMRδ： 1.02(t,J=7.2 Hz, 3H), 1.27(s, 3H), 1.49(s, 3H), 1.71～1.80(m, 2H), 2.56～2.64(m, 1H), 2.69～2.75(m, 1H), 3.15～3.23(m, 2H), 3.37(s, 3H), 3.39～3.48(m, 1H), 4.02(d,J=6.8 Hz, 1H), 4.19(s, 1H), 4.70(q,J=3.2 Hz, 1H), 5.15～5.19(m, 1H), 5.32(q,J=2.4 Hz, 1H)。

用2n代替2a，用類似方法合成淡黃色固體(3aR,4S,6R,6aS)-6-[7-氯-5-(丙硫基)-3H-[1,2,3]三唑并[4,5-d]嘧啶-3-基]-2,2-二甲基四氫-4H-環(huán)戊二烯并[d][1,3]二氧雜環(huán)戊-4-醇(3n)，收率80%，純度95%。

(3) 5a～5z的合成(以5a為例)

在反應(yīng)瓶中加入3a 4.3 g(10 mmol)，甲苯13 mL，于室溫?cái)嚢枋蛊渫耆芙?；加入碳酸?.76 g和3-氟苯乙胺(4a)1.53 g(11 mmol)，于30 ℃反應(yīng)3 h(TLC跟蹤)。加水13 mL，靜置分層，甲苯層用飽和食鹽水(2×15 mL)洗滌，無(wú)水硫酸鈉干燥，減壓蒸除溶劑后經(jīng)硅膠色譜柱層析[洗脫劑：V(石油醚) ∶V(乙酸乙酯)=1 ∶1]純化得淡黃色固體2-【{(3aR, 4S, 6R, 6aS)-6-{7-[(3-氟苯乙基)氨基]-5-(丙硫基)-3H-[1,2,3]三唑并[4,5-d]嘧啶-3-基}-2,2-二甲基四氫-4H-環(huán)戊二烯并[d][1,3]二氧雜環(huán)戊-4-基}氧】乙基-1-醇(5a)3.87 g，收率72.6%。

用類似的方法合成5b～5m；用3n代替3a，用類似方法合成5n～5z。

(4) 6a～6z的合成(以6a為例)

在反應(yīng)瓶中加入5a 5.3 g(10 mmol)和無(wú)水甲醇16 mL，于30 ℃攪拌使其完全溶解；滴加38%HCl 5 mL，于35 ℃反應(yīng)10 h(TLC跟蹤)。加水稀釋至pH 3～4，析出白色固體，于室溫?cái)嚢?0 min。抽濾，濾餅用水洗滌兩次，干燥得白色固體(1S, 2S, 3R, 5S)-3-{7-[(3-氟苯乙基)氨基]-5-(丙硫基)-3H-[1,2,3]三唑并[4,5-d]嘧啶-3-基}-5-(2-羥基乙氧基)環(huán)戊烷-1,2二醇(6a)4.2 g，純度99%。

用類似方法合成6b～6z。

6a: 白色固體，收率86.5%, m.p.129.1～130.9 ℃；1H NMRδ： 0.95(t,J=7.2 Hz, 3H), 1.68(q,J=9.3 Hz, 2H), 1.86(d,J=6.8 Hz, 1H), 2.54～2.62(m, 1H), 2.94(t,J=6.8 Hz, 2H), 3.05(t,J=6.8 Hz, 2H), 3.47(t,J=4.0 Hz, 4H), 3.72(d,J=5.6 Hz, 3H), 3.9(s, 1H), 4.50～4.56(m, 2H), 4.89～4.99(m, 1H), 5.01(d,J=4.0 Hz, 1H), 5.07(d,J=8.0 Hz, 1H), 6.96～7.13(m, 3H), 7.28(q,J=6.7 Hz, 1H), 9.01(d,J=4.0 Hz, 1H)； ESI-MSm/z： 515.2{[M+Na]+}。

6b： 深黃色固體，收率95%， m.p.146.5～146.5 ℃；1H NMRδ： 0.95(t,J=7.2 Hz, 3H), 1.7(q,J=6.5 Hz, 2H), 1.98～2.13(m, 1H),2.58～2.65(m, 1H), 2.93(t,J=8.0 Hz, 2H), 3.06～3.09(m, 2H), 3.44～3.49(m, 4H), 3.73～3.76(m, 3H), 4.00(s, 1H), 4.52～4.59(m, 2H), 4.93～4.98(m, 1H), 5.01(t,J=2.0 Hz, 1H), 5.08(t,J=4.0 Hz, 1H), 7.11～7.15(m, 2H), 7.25～7.28(m, 2H), 9.02(t,J=6.0 Hz, 1H)； ESI-MSm/z： 515.2{[M+Na]+}。

6c： 淡黃色固體，收率95%， m.p.138.5～140.5 ℃；1H NMRδ： 0.95(t,J=7.2 Hz, 3H), 1.69(q,J=8.0 Hz, 2H), 1.98～2.09(m, 1H), 2.63(q,J=5.3 Hz, 1H), 2.95(t,J=4.0 Hz, 2H), 3.03～3.11(m, 2H), 3.41～3.52(m, 4H), 3.70～3.78(m, 3H), 3.94(s, 1H), 4.52～4.58(m, 2H), 4.90～4.98(m, 1H), 5.01(t,J=4.0 Hz, 1H), 5.08(t,J=4.0 Hz, 1H), 7.11～7.23(m, 1H), 7.30～7.32(m, 4H), 9.03(t,J=4.0 Hz, 1H)； ESI-MSm/z： 497.2{[M+Na]+}。

6d： 黃色固體，收率92%， m.p.157.2～159.5 ℃；1H NMRδ： 0.92(t,J=7.2 Hz, 3H), 1.60～1.68(m, 3H), 1.99～2.06(m, 1H), 2.57～2.64(m, 1H), 2.97～3.08(m, 2H), 3.44～3.49(m, 4H), 3.73～3.76(m, 1H), 3.92(t,J=2.0 Hz, 1H), 4.52～4.58(m, 2H), 4.68(s, 2H), 4.95(q,J=9.3 Hz, 1H), 5.13(s, 1H), 5.26(s, 1H), 7.10～7.16(m, 2H), 7.35～7.43(m, 2H), 9.50(s, 1H)； ESI-MSm/z： 501.2{[M+Na]+}。

6e： 淡黃色固體，收率85.2%， m.p.126.8～128.3 ℃；1H NMRδ： 0.90(t,J=6.8 Hz, 3H), 1.56～1.65(m, 2H), 1.97～2.04(m, 1H), 2.46～2.62(m, 1H), 2.92～3.05(m, 2H), 3.35～3.47(m, 4H), 3.74(t,J=8.0 Hz, 1H), 3.90(d,J=2.0 Hz, 1H), 4.50～4.53(m, 1H), 4.67(d,J=4.0 Hz, 2H), 4.80(s, 3H), 4.91(q,J=7.2 Hz, 1H), 7.19(s, 1H), 7.27(t,J=4.0 Hz, 4H), 9.46(t,J=6.0 Hz, 1H)； ESI-MSm/z： 483.2{[M+Na]+}。

6f： 黃色固體，收率89.7%， m.p.96.2～98.1 ℃；1H NMRδ： 0.92(t,J=6.8 Hz, 3H), 1.65～1.75(m, 2H), 2.28(s, 3H), 2.50～2.59(m, 1H), 2.69～2.72(m, 1H), 3.04～3.12(m, 2H), 3.40～3.46(m, 3H), 3.48～3.51(m, 1H), 3.99～4.04(m, 2H), 4.52～4.55(m, 1H), 4.67～4.69(m, 1H), 4.82(d,J=4.0 Hz, 1H), 4.95(q,J=6.8 Hz, 1H), 5.22～5.25(m, 1H), 7.18(d,J=4.0 Hz, 2H), 7.72(d,J=4.0 Hz, 2H), 9.10(d,J=4.0 Hz, 1H) ； ESI- MSm/z: 483.2{[M+Na]+}。

6g： 棕色固體，收率77.5%， m.p.99.8～101.5 ℃；1H NMRδ： 0.91(t,J=7.3 Hz, 3H), 1.61～1.70(m, 2H), 2.46～2.57(m, 1H), 2.63～2.69(m, 1H), 2.98～3.01(m, 2H), 3.38～3.42(m, 3H), 3.46(d,J=8.0 Hz, 1H), 3.73(s, 3H), 3.96～4.00(m, 1H), 4.51(t,J=6.0 Hz, 1H), 4.64～4.66(m, 2H), 4.81～4.87(m, 1H), 5.01～5.04(m, 1H), 5.10～5.19(m, 1H), 7.17(d,J=9.0 Hz, 2H), 7.98(d,J=8.0 Hz, 2H), 9.12(d,J=8.0 Hz, 1H)； ESI-MSm/z： 499.2{[M+Na]+}。

6h： 白色固體，收率82.2%， m.p.150.5～152.3 ℃；1H NMRδ： 0.91(t,J=6.0 Hz, 3H), 0.96(t,J=9.0 Hz, 3H), 1.63～1.74(m, 4H), 1.99～2.06(m, 1H), 2.58～2.65(m, 1H), 3.02～3.12(m, 2H), 3.42～3.49(m, 3H), 3.51～3.53(m, 3H), 3.75(t,J=6．0 Hz, 1H), 3.93(s, 1H), 4.52～4.59(m, 2H), 4.95(q,J=7.3 Hz, 1H), 5.00(d,J=4.0 Hz, 1H), 5.08(d,J=6.4 Hz, 1H), 8.95(t,J=4.0 Hz, 1H)； ESI- MSm/z： 435.2{[M+Na]+}。

6i： 白色固體，收率79.3%， m.p.150.5～152.4 ℃；1H NMRδ： 0.89(t,J=6.0 Hz, 3H), 0.98(t,J=9.0 Hz, 3H), 1.31～1.39(m, 2H), 1.56～1.62(m, 2H), 1.64～1.71(m, 2H), 2.01～2.09(m, 1H), 2.57～2.65(m, 1H), 3.01～3.12(m, 2H), 3.37～3.55(m, 6H), 3.61～3.65(m, 1H), 3.89～3.93(m, 1H), 4.52～4.58(m, 2H), 4.95(q,J=7.3 Hz, 1H), 5.00(d,J=1.2 Hz, 1H), 5.08(d,J=6.4 Hz, 1H), 8.94(t,J=4.0 Hz, 1H)； ESI- MSm/z：449.3{[M+Na]+}。

6j： 淡黃色固體，收率76.4%， m.p.68.1～69.7 ℃；1H NMRδ： 0.90(t,J=7.3 Hz, 6H), 0.98(t,J=6.8 Hz, 3H), 1.66～1.73(m, 6H), 1.97～2.05(m, 1H), 2.49～2.64(m, 1H), 3.02～3.09(m, 2H), 3.44～3.53(m, 4H), 3.64(t,J=4.0 Hz, 2H), 3.74～3.77(m, 1H), 3.94～3.98(m, 1H), 4.10～4.13(m, 2H), 4.53～4.56(m, 2H), 4.92～5.02(m, 3H)； ESI-MSm/z： 477.3{[M+Na]+}。

6k： 黃綠色油狀液體，收率87%；1H NMRδ： 0.90(t,J=6.8 Hz, 6H), 0.95(t,J=7.3 Hz, 3H), 1.24～1.46(m, 4H), 1.60～1.70(m, 6H), 1.96～2.03(m, 1H), 2.55～2.62(m, 1H), 3.05～3.08(m, 2H), 3.42～3.50(m, 4H), 3.68(t,J=5.3 Hz, 2H), 3.74(d,J=4.0 Hz, 1H), 3.93(s, 1H), 4.13(d,J=5.6 Hz, 2H), 4.51～4.56(m, 1H), 4.62(d,J=4.4 Hz, 1H), 4.94(q,J=8.9 Hz, 1H), 5.09～5.14(m, 2H)； ESI-MSm/z： 505.3{[M+Na]+}。

6l： 黃色固體，收率95%， m.p.94.2～96.2 ℃；1H NMRδ： 0.97(t,J=8 Hz, 3H), 1.68(q,J=8.3 Hz, 2H), 2.01～2.07(m, 1H), 2.58～2.69(m, 1H), 3.05～3.11(m, 2H), 3.26(s, 3H), 3.45～3.58(m, 6H), 3.65(q,J=5.3 Hz, 2H), 3.75(t,J=6.0 Hz, 1H), 3.93(s, 1H), 4.52～4.60(m, 2H), 4.95(q,J=10.2 Hz, 1H), 5.01(d,J=4.0 Hz, 1H), 5.08(d,J=6.4 Hz, 1H), 8.90(t,J=6.0 Hz, 1H)； ESI-MSm/z： 451.2{[M+Na]+}。

6m： 黃色油狀液體，收率90%；1H NMRδ： 0.97(t,J=8.3 Hz, 3H), 1.68(q,J=9.2 Hz, 2H), 1.99～2.06(m, 1H), 2.57～2.64(m, 1H), 3.03～3.09(m, 2H), 3.26(d,J=3.6 Hz, 6H), 3.30(s, 1H), 3.42～3.53(m, 4H), 3.59(t,J=5.8 Hz, 2H), 3.65(t,J=5.4 Hz, 2H), 3.73～3.77(m, 1H), 3.94(t,J=5.6 Hz, 2H), 4.41(d,J=2.4 Hz, 2H), 4.53～4.58(m, 2H), 4.95(t,J=9 Hz, 1H), 5.00(d,J=4.4 Hz, 1H), 5.07(d,J=6.4 Hz, 1H)； ESI-MSm/z： 509.2{[M+Na]+}。

6n： 淡黃色固體，收率95%， m.p.152.8～154.5 ℃；1H NMRδ： 0.95(t,J=8.3 Hz, 3H), 1.65～1.74(m, 2H), 1.87～1.94(m, 1H), 2.53～2.61(m, 1H), 2.96(t,J=8.0 Hz, 2H), 3.01～3.14(m, 2H), 3.72～3.77(m, 2H), 3.92(d,J=4.0 Hz, 1H), 4.13(t,J=5.2 Hz, 1H), 4.61～4.73(m, 1H), 4.81(d,J=4.0 Hz, 1H), 4.86～4.89(m, 1H), 4.92～4.99(m, 1H), 5.07(d,J=4.0 Hz, 1H), 6.89～7.22(m, 3H), 7.33(q,J=8.0 Hz， 1H), 9.04(t,J=5.6 Hz, 1H)； ESI-MSm/z： 471.2{[M+Na]+}。

6o： 淡灰色固體，收率90%， m.p.158.4～160.2 ℃；1H NMRδ： 0.97(t,J=3.6 Hz, 3H), 1.66～1.73(m, 2H), 1.88～1.94(m, 1H), 2.49～2.61(m, 1H), 2.93(t,J=6.8 Hz, 2H), 3.03～3.14(m, 2H), 3.21～3.33(m, 2H), 3.68～3.73(m, 1H), 3.78(s, 1H), 3.63(s, 1H), 4.63～4.67(m, 1H), 4.90～5.03(m, 3H), 7.03～7.12(m, 2H), 7.26(t,J=6.8 Hz， 2H), 9.02(t,J=5.2 Hz，1H)； ESI-MSm/z： 471.2{[M+Na]+}。

6p： 白色固體，收率90%， m.p.164.3～165.2 ℃；1H NMRδ： 0.98(t,J=3.2 Hz, 3H), 1.65～1.74(m, 2H), 1.87～1.94(m, 1H), 2.53～2.61(m, 1H), 2.94(t,J=7.4 Hz, 2H), 3.04～3.13(m, 2H), 3.70～3.78(m, 3H), 3.92(s, 2H), 4.10(q,J=7.3 Hz, 2H), 4.62～4.70(m, 1H), 4.90～4.98(m, 1H), 7.19(t,J=6.8 Hz, 1H), 7.24～7.31(m, 4H), 9.04(t,J=5.6 Hz， 1H)； ESI-MSm/z： 453.2{[M+Na]+}。

6q： 淡黃色固體，收率95%， m.p.164.5～165.8 ℃；1H NMRδ： 0.95(t,J=6.8 Hz, 3H), 1.56～1.70(m, 2H), 1.89～1.97(m, 1H), 2.54～2.61(m, 1H), 2.96～3.11(m, 2H), 3.78(t,J=4.0 Hz, 1H), 3.93(s, 1H), 4.63～4.69(m, 6H), 5.14(d,J=6.4 Hz, 1H), 7.13(t,J=8.8 Hz, 2H), 7.35～7.43(m, 2H), 9.50(t,J=4.0 Hz, 1H)； ESI-MSm/z： 457.2{[M+Na]+}。

6r： 黃色固體，收率90%， m.p.132.3～133.5 ℃；1H NMRδ： 0.95(t,J=6.8 Hz, 3H), 1.59～1.68(m, 2H), 1.88～1.95(m, 1H), 2.54～2.61(m, 1H), 2.96～3.30(m, 2H), 3.77(s, 1H), 3.91(d,J=4.0 Hz, 1H), 4.61～4.66(m, 1H), 4.71(d,J=6．0 Hz, 2H), 4.87(d,J=4.0 Hz, 1H), 4.92(d,J=8.8 Hz, 1H), 4.98(t,J=7.2 Hz, 1H), 5.08(d,J=2.0 Hz, 1H), 7.22(t,J=6.6 Hz, , 1H), 7.28～7.38(m, 4H), 9.50(t,J=6.2 Hz, 1H)； ESI-MSm/z： 439.2{[M+Na]+}。

6s： 紅褐色固體，收率80%， m.p.65.6～67.7 ℃；1H NMRδ： 0.97(t,J=7.4 Hz, 3H), 1.65～1.74(m, 2H), 2.29(s, 3H), 2.44～2.51(m, 1H), 2.54～2.61(m, 1H), 3.08(m,J=7.2 Hz, 2H), 3.79(s, 1H), 3.94(s, 1H), 4.45～4.50(m, 2H), 4.83～4.90(m, 1H), 4.96～5.01(m, 1H), 5.03～5.09(m, 1H), 7.18(d,J=4.2 Hz, 2H), 7.71(d,J=4.0 Hz, 2H), 9.10(d,J=3.6 Hz, 1H)； ESI-MSm/z： 439.2{[M+Na]+}。

6t： 紅褐色固體，收率82%， m.p.101.1～103.6 ℃；1H NMRδ： 0.97(t,J=7.4 Hz, 3H), 1.65～1.72(m, 2H), 2.44～2.49(m, 1H), 2.54～2.61(m, 1H), 3.07(t,J=7.2 Hz, 2H), 3.76(s, 3H), 3.93(s, 1H), 4.09～4.18(m, 2H), 4.43～4.57(m, 1H), 4.70～4.83(m, 1H), 4.87～4.98(m, 1H), 5.01～5.08(m, 1H), 6.95(d,J=4.0 Hz, 1H), 7.17(d,J=4.4 Hz, 1H), 7.71(s, 1H), 8.80(d,J=4.4 Hz， 1H), 9.09(d,J=4.0 Hz, 1H)； ESI-MSm/z： 455.2{[M+Na]+}。

6u： 白色固體，收率89%， m.p.164.9～165.9 ℃；1H NMRδ： 0.89(t,J=6.8 Hz, 3H), 0.96(t,J=7.3 Hz, 3H), 1.60～1.74(m, 4H), 1.88～1.94(m, 1H), 2.54～2.61(m, 1H), 3.02～3.11(m, 2H), 3.45(q,J=6.5 Hz, 2H), 3.77(s, 1H), 3.92(s, 1H), 4.64(q,J=6.5 Hz, 1H), 4.87(d,J=4.0 Hz, 1H), 4.92(t,J=8.8 Hz, 1H), 4.98(d,J=7.3 Hz, 1H), 5.08(d,J=4.0 Hz, 1H), 8.95(t,J=5.4 Hz, 1H)； ESI-MSm/z： 391.2{[M+Na]+}。

6v： 淡橙色固體，收率92%， m.p.191.5～192.6 ℃；1H NMRδ： 0.87(t,J=6.8 Hz, 3H), 0.97(t,J=4.2 Hz, 3H), 1.31～1.39(m, 2H), 1.55～1.64(m, 2H), 1.65～1.73(m, 2H), 1.87～1.94(m, 1H), 2.53～2.61(m, 1H), 3.02～3.13(m, 2H), 3.50(q,J=6.7 Hz, 2H), 3.77(s, 1H), 3.86～3.93(m, 1H), 4.61～4.70(m, 1H), 4.87(d,J=3.6 Hz, 1H), 4.89～4.99(m, 2H), 5.07(t,J=4.2 Hz, 1H), 8.94(t,J=3.8 Hz, 1H)； ESI-MSm/z： 405.2{[M+Na]+}。

6w： 黃色固體，收率85%， m.p.101.5～102.6 ℃；1H NMRδ： 0.85～0.92(m, 6H), 0.98(t,J=4.2 Hz, 3H), 1.67～1.74(m, 6H), 1.86～1.92(m, 1H), 2.53～2.60(m, 1H), 3.03～3.10(m, 2H), 3.66(t,J=7.4 Hz, 2H), 3.78(s, 1H), 3.93(d,J=3.6 Hz, 1H), 4.08～4.14(m, 2H), 4.61～4.66(m, 1H), 4.87(d,J=3.2 Hz, 1H), 4.90～4.98(m, 2H), 5.08(d,J=4.0 Hz, 1H)； ESI-MSm/z： 433.3{[M+Na]+}。

6x： 黃色油狀液體，收率87%；1H NMRδ： 0.88(t,J=4.2 Hz, 6H), 0.97(t,J=5.3 Hz, 3H), 1.28～1.39(m, 4H), 1.63～1.72(m, 6H), 1.86～1.97(m, 1H), 2.53～2.60(m, 1H), 3.02～3.10(m, 2H), 3.68(t,J=7.6 Hz, 2H), 3.79(s, 1H), 3.93(d,J=8.4 Hz, 1H), 4.09～4.17(m, 2H), 4.62～4.67(m, 1H), 4.87(d,J=4.0 Hz, 1H), 4.91～4.98(m, 2H), 5.08(d,J=4.0 Hz, 1H)； ESI-MSm/z： 461.3{[M+Na]+}。

6y： 淡黃色固體，收率90%， m.p.146.5～148.2 ℃；1H NMRδ： 0.98(t,J=7.4 Hz, 3H), 1.65～1.74(m, 2H), 1.88～1.95(m, 1H), 2.54～2.61(m, 1H), 3.02～3.14(m, 2H), 3.28(d,J=12 Hz, 3H), 3.52～ 3.58(m, 2H), 3.63～3.68(m, 2H), 3.77(s, 1H), 3.92(s, 1H), 4.64(q,J=6.8 Hz, 1H), 4.87(d,J=4.0 Hz, 1H), 4.90～ 4.99(m, 2H), 5.07(d,J=4.0 Hz, 1H), 8.91(t,J=5.6 Hz, 1H)； ESI-MSm/z： 407.2{[M+Na]+}。

6z： 淡黃色固體，收率85%， m.p.116.5～118.5 ℃；1H NMRδ： 0.98(t,J=7.4 Hz, 3H), 1.64～1.73(m, 2H), 1.87～1.94(m, 1H), 2.50～2.60(m, 1H), 3.03～3.11(m, 2H), 3.26(d,J=3.2 Hz, 3H), 3.30(s, 3H), 3.59(t,J=5.6 Hz, 2H), 3.66(t,J=6.4 Hz, 2H), 3.77(s, 1H), 3.94(t,J=5.8 Hz, 3H), 4.42(t,J=1.6 Hz, 2H), 4.63～4.67(m, 1H), 4.88(d,J=4.0 Hz, 1H), 4.92～4.99(m, 2H), 5.08(d,J=4.0 Hz, 1H)； ESI-MSm/z： 465.3{[M+Na]+}。

1.3抗血小板聚集活性

選用200～250 g的健康雄性SD大鼠(SPF級(jí))隨機(jī)分組，實(shí)驗(yàn)設(shè)空白和替格瑞洛對(duì)照組，每組6只，灌胃給藥，劑量30 mg·kg-1，給藥溶劑均為10 mL·(kg·bw)-1。正常對(duì)照組給予等計(jì)量的0.5% CMC-Na，給藥兩小時(shí)后腹腔注射40 mg·kg-1戊巴比妥鈉(1 ml·kg-1)麻醉，腹主動(dòng)脈采血，用3.8%枸櫞酸鈉抗凝，分別制備富血小板血漿(PRP)和貧血小板血漿(PPP)，測(cè)定ADP(終濃度：1.25 μmol·L-1)誘導(dǎo)的血小板最大聚集百分率[12],計(jì)算抑制率。

2結(jié)果與討論

2.1合成

5的合成為親核取代反應(yīng)，空間位阻越大越不利于反應(yīng)的進(jìn)行。由于4j， 4k和4m為仲胺，加大了親核取代反應(yīng)的空間位阻，因此在合成5j, 5k和5m及5w， 5x和5z時(shí)，反應(yīng)溫度需升至100 ℃，反應(yīng)時(shí)間也需要延長(zhǎng)至6～7 h，反應(yīng)才完全。

2.2抗血小板聚集活性

6a～6z的抗血小板聚集活性見(jiàn)表1。由表1可見(jiàn)，6a～6z均具有一定的抗血小板聚集活性；含有羥乙基的化合物(6a～6m)的抗血小板聚集活性強(qiáng)于其它化合物(6n～6z)； 6d, 6i 和6l的活性較強(qiáng)，抑制率分別為61.9%, 69.3%和 71.2%。

表1　6的抗血小板聚集活性

3結(jié)論

設(shè)計(jì)并合成了26個(gè)新型三唑并[4,5-d]嘧啶類化合物。其抗血小板聚集活性測(cè)定結(jié)果表明：含有羥乙基的化合物(6a～6m)的抗血小板聚集活性強(qiáng)于其它化合物(6n～6z)。這為尋找更加安全有效的抗血栓藥物提供了一定的參考價(jià)值。

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Synthesis and Anti-platelet Aggregation Activities of Novel Triazolo[4,5-d]pyrimidin Compounds

WANG Bing1,4,YANG Jing2,JIANG Xi-ming3,LIU Ying4,LIU Deng-ke4,WANG Ping-bao4*

(1. Graduate School, Tianjin Medical University, Tianjin 300070, China; 2. Department of Biology and Environmental Engineering, Tianjin Bohai Vocational and Technical College, Tianjin 300408, China; 3. Tianjin Pharmacn Medical Technology Co., Ltd., Tianjin 300384, China; 4. Tianjin Institute of Pharmaceutical Research, Tianjin 300193, China)

Abstract：The aminopyrimidines(2) were obtained via the substitution reaction of 4,6-dichloro-2-(propylthio)pyrimidin-5-amine with primary amines. Diazotization and coupling reaction of 2 provided thiazoles(3). Twenty-six novel triazolo[4,5-d]pyrimidin compounds(6a～6z) were synthesized by the nucleophilic subsititution reaction of 3 with substituted amines and hydrolysis orderly. The structures were characterized by1H NMR and ESI-MS. The anti-platelet aggregation activities were evaluated by platelet aggregation inhibition tests in rats. The results showed that 6a～6z exhibited certain anti-platelet aggregation activities. The inhibition rates of 6d, 6i and 6l were 61.9%, 69.3% and 71.2%, respectively.

Keywords：triazolo[4,5-d]pyrimidin; synthesis; anti-platelet aggregation activity

中圖分類號(hào)：626.26; O626.41

文獻(xiàn)標(biāo)志碼：A

DOI：10.15952/j.cnki.cjsc.1005-1511.2016.03.15379

作者簡(jiǎn)介：王兵(1989-)，男，山東濰坊人，碩士研究生，主要從事藥物合成的研究。E-mail: wangbing2310@sina.com

基金項(xiàng)目：國(guó)家科技重大專項(xiàng)“重大新藥創(chuàng)制”課題(2013ZX09102014)

收稿日期：2015-11-24