傳統(tǒng)推拿“束悗療法”防治糖尿病周圍神經(jīng)病變的實(shí)驗(yàn)研究

尚坤　劉明軍　陳飛騰　李波　王蕾　陳林青　李躍宗　張欣

【摘 要】 目的：觀察傳統(tǒng)推拿“束悗療法”防治糖尿病大鼠周圍神經(jīng)病變的效果。方法：將80只大鼠隨機(jī)平均分為對(duì)照組、模型組、推拿組和藥物組，采用腹腔注射鏈脈佐菌素的方法造模，觀察各組動(dòng)物坐骨神經(jīng)傳導(dǎo)速度（SNVC）和坐骨神經(jīng)中血管內(nèi)皮細(xì)胞生長(zhǎng)因子（VEGF）的變化情況。結(jié)果：對(duì)各組動(dòng)物坐骨神經(jīng)SNVC檢測(cè)發(fā)現(xiàn)，模型組與對(duì)照組比較，SNVC差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.01），推拿組與模型組比較，SNVC差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.01），藥物組與模型組比較，SNVC差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.01），推拿組與藥物組比較，SNVC差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P>0.05）；對(duì)各組動(dòng)物坐骨神經(jīng)VEGF檢測(cè)發(fā)現(xiàn)，模型組與對(duì)照組比較，VEGF表達(dá)差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.01），推拿組與模型組比較VEGF表達(dá)差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.01），藥物組與模型組比較，VEGF表達(dá)差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.01），推拿組與藥物組比較，VEGF表達(dá)差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P>0.05）。結(jié)論：傳統(tǒng)推拿“束悗療法”能夠有效改善DPN實(shí)驗(yàn)大鼠下肢坐骨神經(jīng)SNVC，提高坐骨神經(jīng)VEGF含量，從而對(duì)DPN大鼠的周圍神經(jīng)功能恢復(fù)起到有效的治療作用且療效與注射藥物彌可保相持平?！笆鴲幆煼ā本哂胁僮骱?jiǎn)便、安全、無毒副作用等其他任何藥物無法具備的臨床優(yōu)勢(shì)，值得臨床推廣和普及。

【關(guān)鍵詞】 推拿；束悗；糖尿病周圍神經(jīng)病變

【中圖分類號(hào)】R244.1 【文獻(xiàn)標(biāo)志碼】 A 【文章編號(hào)】1007-8517（2016）06-0037-03

束悗療法是中醫(yī)的傳統(tǒng)推拿操作手法[1]，施術(shù)部位常選擇四肢大血管或大神經(jīng)干走行線路，操作時(shí)以手指或手掌采用“緩按快放”或“快按緩放”的手法，按壓局部并停留一定時(shí)間，然后突然放開以推動(dòng)局部氣血運(yùn)行，達(dá)到疏通經(jīng)絡(luò)、活血止痛的治療目的。糖尿病性周圍神經(jīng)病變（DPN）是糖尿病的主要并發(fā)癥和致殘的主要因素之一，主要臨床表現(xiàn)是周圍神經(jīng)的功能出現(xiàn)障礙。研究傳統(tǒng)推拿“束悗療法”干預(yù)糖尿病大鼠周圍神經(jīng)病變的治療，獲得比較滿意的效果，現(xiàn)報(bào)道如下。

1 儀器與材料

1.1 動(dòng)物與分組 選取雄性清潔級(jí)wistar大鼠80只，鼠齡8周，由吉林大學(xué)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心提供，許可證號(hào)：SCXK-（吉）2014-0003。分籠飼養(yǎng)，每籠10只，食用標(biāo)準(zhǔn)顆粒鼠糧。隨機(jī)將大鼠分為空白對(duì)照組（簡(jiǎn)稱對(duì)照組）、模型組、模型+推拿干預(yù)組（簡(jiǎn)稱推拿組）、模型+藥物干預(yù)組（簡(jiǎn)稱藥物組），每組動(dòng)物20只。

1.2 藥品與試劑 鏈脈佐菌素（美國(guó)sigma公司，1g/瓶）；彌可保（甲鈷胺注射液，衛(wèi)材中國(guó)藥業(yè)有限公司，500μg/支）；考馬司亮蘭測(cè)試盒（南京建成生物工程研究所）。

1.3 儀器 TAP-Ⅱ型推拿手法測(cè)定儀（上海益聯(lián)醫(yī)學(xué)發(fā)展有限公司）；Medlab-u/4cs生物信號(hào)采集處理系統(tǒng)（南京美易科技有限公司）；光學(xué)顯微鏡及圖像分析系統(tǒng)（德國(guó)Leica公司）；自動(dòng)電泳凝膠成像分析儀（Chemi Imager 5500，美國(guó)）。

2 實(shí)驗(yàn)方法

2.1 動(dòng)物模型的制備 取實(shí)驗(yàn)大鼠60只，將鏈脈佐菌素臨用前用pH值4.2～4.5的0.lmol/l檸檬酸鈉—檸檬酸緩沖液避光條件下配成1%濃度溶液，按劑量50mg/kg于實(shí)驗(yàn)大鼠左下腹腔內(nèi)單次注射，72h后取尾血測(cè)血糖，血糖>16.7mmol/l作為糖尿病大鼠。血糖未達(dá)標(biāo)的造模大鼠，補(bǔ)打30mg/kg 0.1%鏈脲佐菌素，72h后測(cè)血糖，不足要求則棄去。如此在1周后血糖仍>16.7mmol/l，且從形態(tài)上有周圍神經(jīng)病變出現(xiàn)，坐骨神經(jīng)傳導(dǎo)速度（SNCV）明顯降低時(shí)，即制成周圍神經(jīng)病變模型大鼠。另取實(shí)驗(yàn)大鼠20只，用0.1mol/l檸檬酸鈉—檸檬酸緩沖液（pH4.2，4℃）按同體積左下腹腔內(nèi)單次注射，72h后取尾血測(cè)血糖，作為正常對(duì)照組。

2.2 干預(yù)方法

2.2.1 推拿組 將實(shí)驗(yàn)大鼠仰臥，固定其頭部與上肢。施術(shù)者以左手牽拉大鼠一側(cè)下肢，使下肢伸直呈水平位，以右手拇指指腹緩慢按壓于大鼠腹股溝處，力量經(jīng)推拿手法測(cè)試儀測(cè)定約為1kg，持續(xù)30s左右，然后突然抬手，停止按壓，即“緩按快放”；間隔60s左右，再次以右手拇指指腹快速按壓于大鼠腹股溝處，力量經(jīng)推拿手法測(cè)試儀測(cè)定約為1kg，持續(xù)30s左右，然后緩慢抬手，停止按壓，即“快按緩放”。如此操作3次。以上治療方法每日早晚操作2次，共治療8周。

2.2.2 藥物組 將實(shí)驗(yàn)大鼠仰臥，捆綁固定，每日1次，每次10min。根據(jù)人與動(dòng)物體表面積計(jì)算法換算注射彌可保，大鼠用藥量為50μg/kg，隔日注射于下肢肌肉，左右腿交替注射，以利于吸收，共治療8周。

2.2.3 對(duì)照組和模型組 將實(shí)驗(yàn)大鼠仰臥，捆綁固定，每日1次，每次10min，共8周。

2.3 檢測(cè)指標(biāo)及方法 將實(shí)驗(yàn)大鼠治療8周后尾靜脈取血以檢測(cè)血糖。以電子秤稱取每只大鼠體重后，腹腔注射10%水合氯醛（350mg/kg）進(jìn)行麻醉，將大鼠俯臥固定于固定架上，暴露出坐骨神經(jīng)，用無菌玻璃剝離器輕輕剝離坐骨神經(jīng)并游離下來，應(yīng)用生物信號(hào)采集處理系統(tǒng)，測(cè)得坐骨神經(jīng)傳導(dǎo)速度，然后迅速將坐骨神經(jīng)放入液氮中，放入-70℃冰箱中存放，以備勻漿使用。

2.4 數(shù)據(jù)整理分析 數(shù)據(jù)采用SPSS17.0軟件包統(tǒng)計(jì)，計(jì)量資料用均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差表示，多組均數(shù)之間的比較應(yīng)用方差分析，等級(jí)資料組間比較應(yīng)用秩和檢驗(yàn)，P<0.05表示差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

3 結(jié)果

3.1 大鼠坐骨神經(jīng)傳導(dǎo)速度（SNCV） 由表1可知，模型組與對(duì)照組比較，坐骨神經(jīng)傳導(dǎo)速度差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.01），證明實(shí)驗(yàn)造模成功。推拿組與模型組比較，坐骨神經(jīng)傳導(dǎo)速度差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.01），藥物組與模型組比較，坐骨神經(jīng)傳導(dǎo)速度差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.01），提示推拿“束悗療法”和藥物療法能夠有效改善DPN大鼠的坐骨神經(jīng)傳導(dǎo)速度；推拿組與藥物組比較，坐骨神經(jīng)傳導(dǎo)速度差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P>0.05）。

3.2 大鼠坐骨神經(jīng)中血管內(nèi)皮細(xì)胞生長(zhǎng)因子（VEGF）表達(dá) 由表2可知，模型組與對(duì)照組比較，坐骨神經(jīng)中血管內(nèi)皮細(xì)胞生長(zhǎng)因子（VEGF）表達(dá)差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.01），證明實(shí)驗(yàn)造模成功。推拿組與模型組比較，坐骨神經(jīng)中血管內(nèi)皮細(xì)胞生長(zhǎng)因子（VEGF）表達(dá)差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.01），藥物組與模型組比較，坐骨神經(jīng)中血管內(nèi)皮細(xì)胞生長(zhǎng)因子（VEGF）表達(dá)差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.01），提示推拿療法和藥物療法能夠有效提高坐骨神經(jīng)中血管內(nèi)皮細(xì)胞生長(zhǎng)因子（VEGF）表達(dá)；推拿組與藥物組比較，坐骨神經(jīng)中血管內(nèi)皮細(xì)胞生長(zhǎng)因子（VEGF）表達(dá)差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P>0.05）。

4 討論

束悗療法是傳統(tǒng)的推拿操作手法[1]，其最早記載見于《內(nèi)經(jīng)》，在《靈樞·雜病篇》中記載：“痿厥為四末束悗，乃疾解之，日二，不仁者，十日而知，無休，病已止”。主要的意思是在治療痿厥癥病人時(shí)，將患者四肢捆綁起來，待其產(chǎn)生憋悶脹痛感覺后，迅速解開，每天治療兩次，原本四肢沒有知覺的患者在治療十天之后就會(huì)產(chǎn)生知覺，這種治療方法不要停止，直到患者痊愈為止。可見，束悗療法中的“束”，意為約束，束縛；“悗”，《辭海》解釋為“煩悶”，《靈樞·五亂》中記載有“清濁相干，亂于胸中，是謂大悗”。由此引申束悗具有約束阻滯之意?！鹅`樞集注》中曾批注“夫按之束之，皆導(dǎo)引之法，猶尺蠖之欲伸而先屈也”?？梢?，在治療氣機(jī)不暢、麻痹不仁的病癥時(shí)，可以在四肢脈位運(yùn)用束悗按抑的手法，達(dá)到通郁開閉、導(dǎo)氣通達(dá)的治療目的。然而，現(xiàn)代推拿臨床中，源于中醫(yī)傳統(tǒng)古籍的束悗療法卻鮮有應(yīng)用，僅散見于個(gè)別理論性的文獻(xiàn)探討中[2]。

現(xiàn)代醫(yī)學(xué)認(rèn)為，糖尿病性周圍神經(jīng)病變（DPN）的病理表現(xiàn)一是營(yíng)養(yǎng)神經(jīng)的血管出現(xiàn)病變，表現(xiàn)為毛細(xì)血管的內(nèi)皮細(xì)胞增生或基底膜增厚；二是神經(jīng)本身出現(xiàn)病變，主要表現(xiàn)為神經(jīng)纖維軸索的損傷或構(gòu)成髓鞘或神經(jīng)內(nèi)膜的施萬細(xì)胞的變性壞死[3-4]。中醫(yī)則認(rèn)為，DPN屬于“痹證”、“痿證”之范疇，多由于氣虛失運(yùn)、血虛不榮、痰瘀阻滯或風(fēng)濕痹阻等原因?qū)е戮植垦骶徛鲎杳}道，皮肉經(jīng)脈失去氣血濡養(yǎng)而痿廢不用[5-6]。這與糖尿病性周圍神經(jīng)病變（DPN）所表現(xiàn)出來的臨床癥狀是相吻合的。課題組曾在臨床上以“束悗療法”輔助治療糖尿病性周圍神經(jīng)病變并取得滿意療效[1]。

鏈脲佐菌素（STZ）是一種廣譜抗菌素，具有抗菌、抗腫瘤的功效，還對(duì)胰島β細(xì)胞高度選擇性的毒性而具有致糖尿病的副作用[7-9]。同時(shí)，由于STZ對(duì)組織毒性相對(duì)較小，動(dòng)物存活率高，是國(guó)內(nèi)外經(jīng)常使用的制備糖尿病動(dòng)物模型的成熟方法。神經(jīng)電生理檢查是早期診斷糖尿病并發(fā)周圍神經(jīng)病變的敏感指標(biāo)，神經(jīng)傳導(dǎo)速度減慢是糖尿病出現(xiàn)神經(jīng)病變的一個(gè)先兆，常常用于評(píng)價(jià)臨床療效與預(yù)后情況。運(yùn)動(dòng)神經(jīng)傳導(dǎo)速度（SNVC）反映坐骨神經(jīng)運(yùn)動(dòng)的功能狀態(tài)，是DPN最常用的觀察指標(biāo)。血管內(nèi)皮細(xì)胞生長(zhǎng)因子（VEGF）是本來血管新生的主要調(diào)控因子，并具有神經(jīng)方面的作用[10-11]，主要表現(xiàn)為延伸軸突、增加神經(jīng)元、促進(jìn)神經(jīng)再生、促進(jìn)神經(jīng)內(nèi)血管形成、提高衛(wèi)星細(xì)胞及雪旺氏細(xì)胞的存活率等[12-14]。因此，神經(jīng)組織內(nèi)VEGF含量的多少能夠直接反應(yīng)神經(jīng)組織的微循環(huán)與損傷修復(fù)狀態(tài)?；诖?，課題組采用腹腔注射STZ的方法制備DPN大鼠模型并觀測(cè)坐骨神經(jīng)SNVC和VEGF作為療效判定指標(biāo)。

研究結(jié)果表明，傳統(tǒng)推拿“束悗療法”能夠有效改善DPN實(shí)驗(yàn)大鼠下肢坐骨神經(jīng)的神經(jīng)傳導(dǎo)速度（SNVC），提高坐骨神經(jīng)中血管內(nèi)皮細(xì)胞生長(zhǎng)因子（VEGF）的含量，從而對(duì)DPN大鼠的周圍神經(jīng)功能恢復(fù)起到有效的治療作用且療效與注射藥物彌可保相持平。然而“束悗療法”具有操作簡(jiǎn)便、安全、無毒副作用等其他任何藥物無法具備的臨床優(yōu)勢(shì)，為傳統(tǒng)推拿“束悗療法”的推廣普及奠定實(shí)驗(yàn)室基礎(chǔ)。

參考文獻(xiàn)

[1] 劉鵬，張燕，李躍宗. “束悗療法”治療糖尿病性周圍神經(jīng)病變[J].長(zhǎng)春中醫(yī)藥大學(xué)學(xué)報(bào)，2013，29（5）：880-881.

[2] 曠時(shí)恩，曠晉.束悗療法在傷病治療的臨床應(yīng)用[J].中華推拿療法雜志，2004，2（4）：15-16.

[3]沈薇，董繼宏，汪聽.糖尿病周圍神經(jīng)病的發(fā)病機(jī)制及治療展望[J].中國(guó)臨床神經(jīng)科學(xué)，2008，16（2）：204-207.

[4]L aybutt DR， Kaneto H， HasenkamP W， et al.Inereased expression of antioxidant and antiapoptotic genes in islets that may contribute top-cell survival during chronic hyperglycemia[J]. Diabetes，2002，51（2）：413-423.

[5 ] 逄紫千，謝占峰，閻慧.針刺對(duì)糖尿病周圍神經(jīng)病變大鼠尾神經(jīng)超微結(jié)構(gòu)的影響[J].長(zhǎng)春中醫(yī)藥大學(xué)學(xué)報(bào)，2011，27（4）：523-525.

[6]逄紫千，閻慧，解占峰.針刺對(duì)糖尿病周圍神經(jīng)病變大鼠坐骨神經(jīng)組織病理學(xué)的影響[J].長(zhǎng)春中醫(yī)藥大學(xué)學(xué)報(bào)，2012，28（4）：594-596.

[7] Raekietan N， Raekietan ML， Nadkarni MR. Studies on diabetogenic action of Stre-Ptozotoein（NSC-37917）[J].Caneer ChemotheraPy RePorts，1963， 29：91-98.

[8] 于德民，吳銳，尹雑，等.實(shí)驗(yàn)性鏈脲佐菌素糖尿病動(dòng)物模型的研究[J].中國(guó)糖尿病雜志，1995，3（ 2 ）：105-109.

[9] 黃繼漢，黃曉陣，陳志揚(yáng)，等.藥理試驗(yàn)中動(dòng)物間和動(dòng)物與人體間的等效劑量換算[J].中國(guó)臨床藥理學(xué)與治療學(xué)，2004，9（9）：1069-1072.

[10] Meirer R， Gonluoglu R， Siemionow M.Neurogenic perspective on vaseular endothelial growth factor：review of the literature[J].J Reconstruetive Mierosurgery，2001，17（8）：625-629.

[11] Sondell M， Lundborg G， Kanje M. Vaseula rendothelial growth factor（VEGF） has neurotrophic activity and stimulates axonal outgrowth， enhancing cell survival and Schwann cell proliferation in the peripheral nervous system[J].J Neurosci，1999，19：5731-5740.

[12] Sondell M， Sundler F， Kanjie M.Vasclar endothelial growth factor is a neurotrophic factor which stimulates axonal outgrowth through the flk-1 receptor[J]. Eur J Neurosci 2000，12（12）：4243-4254.

[13] JinK L， Mao XO， Greenberg DA. Vascular endothelial growth factor： Direct neuroprotective effect in in vitro isehemia[J]. Proe. Natl. Aead. Sei.，2000，97（18）：10242-10247.

[14] Hobson Ml， Green CJ， Terenghi G. VEGF enhances intraneural angiogenesis and improves nerve regeneration after axotomy[J].J Anat，2000，197（4）：591-605.

（收稿日期：2016.01.09）