彝藥勞傷藥抗炎鎮(zhèn)痛作用的實驗研究

童妍 　羅倫才 　季小平 　李列平 　王利平

【摘 要】 目的：觀察勞傷藥的抗炎鎮(zhèn)痛作用。方法：采用二甲苯致小鼠耳腫脹法、棉球肉芽腫法，醋酸致小鼠腹腔毛細血管通透性增加法觀察勞傷藥的抗炎作用，采用小鼠扭體法觀察勞傷藥的鎮(zhèn)痛作用，采用大鼠佐劑性關(guān)節(jié)炎（AA）模型觀察勞傷藥對足腫脹的影響。結(jié)果：與模型組比較，勞傷藥（5g/kg）能抑制二甲苯致小鼠耳腫脹，抑制棉球致小鼠肉芽腫，抑制醋酸引起的毛細血管通透性增加，抑制冰醋酸引起的小鼠扭體反應(yīng)，能明顯減輕AA大鼠原發(fā)性和繼發(fā)性關(guān)節(jié)腫脹。結(jié)論：勞傷藥乙醇提取物有明顯的抗炎鎮(zhèn)痛作用。

【關(guān)鍵詞】 彝藥；醇提物； 抗炎；鎮(zhèn)痛

【中圖分類號】R29 【文獻標志碼】 A 【文章編號】1007-8517（2016）06-0001-03

類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎的治療目的以鎮(zhèn)痛，消炎，防止或減緩關(guān)節(jié)變形及損傷，及增加關(guān)節(jié)活動度為主。到目前為止，西醫(yī)藥治療本病仍無較為理想的方法。醫(yī)藥界一直致力于研究開發(fā)毒副作用小、療效顯著的抗類風(fēng)濕藥物及療法。勞傷藥，即彝藥汝無糯雞，為金粟蘭科植物海南草珊瑚的全草[1]。Sarcandra hainanensis （Pei）Swamy et Bailey。《彝藥志》：“性平，味苦微麻。清熱解毒，活血祛瘀，舒筋止痛，通利關(guān)節(jié)，治療流感、乙型腦炎、麻疹、肺炎、風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎、勞傷腰痛。”《中華本草》[2]：“苦，辛，平，活血散瘀，祛風(fēng)止痛。主跌打損傷，骨折，瘀阻腫痛，風(fēng)濕痹痛，肢體麻木等癥。”目前，關(guān)于勞傷藥的藥理作用研究較少，尚未見抗炎鎮(zhèn)痛的文獻報道，本文首次研究勞傷藥的抗炎鎮(zhèn)痛活性，為臨床應(yīng)用提供實驗依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 藥物與試劑 勞傷藥采于涼山，經(jīng)四川省食品藥品學(xué)校閔伯清老師鑒定為金粟蘭科植物海南草珊瑚Sarcandra hainanensis （Pei）Swamy et Bailey的全草。取藥材粉末3kg，95%乙醇滲濾提取，合并提取液，減壓濃縮并回收乙醇得總浸膏123.4g，得率4.11%。吲哚美辛，廣東華南藥業(yè)集團有限公司，國藥準字H44020701，尼美舒利膠囊，遠大醫(yī)藥（中國）有限公司，國藥準字H20010751。試驗藥物臨用前用蒸餾水配成相應(yīng)濃度。依文思藍，國藥集團化學(xué)試劑有限公司，批號：20130621，冰醋酸，成都市科龍化工試劑廠，批號： 20140218，，二甲苯，成都市科龍化工試劑廠，批號：20130821，弗氏完全佐劑，美國Sigma公司生產(chǎn)，批號，Lot SLBM2183V。

1.2 動物 昆明種小鼠，體重18g～22g，SD大鼠，體重180g～220g，購于簡陽達碩動物科技有限公司，合格證號：SCXK（川）2013-24。

1.3 儀器 TU-1901雙光束紫外可見分光光度計，北京普析通用儀器有限責任公司。

1.4 方法

1.4.1 對二甲苯致小鼠耳腫脹的影響[3]將50只雄性KM小鼠隨機分成5組：模型組，吲哚美辛組，勞傷藥組（5g/kg，2.5g/kg，1.25g/kg），每組10只。勞傷藥各劑量組和吲哚美辛組每日灌胃給藥1次，連續(xù)7d，模型組灌胃同體積蒸餾水。末次給藥后1h，在每只小鼠右耳前后兩面分別涂抹二甲苯0.02ml，1h后將小鼠處死，沿耳廓剪下兩耳，在相同部位用直徑為9mm的打孔器，分別鑿下相等面積的耳片稱重，以左右耳片重量差值為腫脹度，表示藥物的抗炎效應(yīng)，并計算腫脹抑制率，抑制率=（模型組腫脹度-給藥組腫脹度）/模型組腫脹度×100%。

1.4.2 對棉球致小鼠肉芽腫的影響[3]分組方法同1.5.1，各組小鼠在乙醚淺麻醉下，將已高溫滅菌棉球約5.0mg植入小鼠右側(cè)腋窩下，縫合，第二天開始連續(xù)灌胃給藥7d，末次給藥1h后處死小鼠，取出棉球，在烘箱中干燥后，稱質(zhì)量，減去原棉球質(zhì)量即為肉芽腫脹質(zhì)量，計算小鼠肉芽腫脹抑制率。

1.4.3 對醋酸致小鼠腹腔毛細血管通透性增加的影響[4]分組及給藥方法同1.5.1，末次給藥后lh，按0.1ml/10g（體重）小鼠尾靜脈注射5%依文思藍溶液，立即腹腔注射0.6%醋酸溶液0.2ml/只；20min后處死小鼠，用5ml生理鹽水沖洗小鼠腹腔，收集沖洗液，3000rpm離心15min，取上清液于分光光度計59Onm處比色，測定吸光度值（A）。

1.4.4 對醋酸致小鼠扭體反應(yīng)的影響[4]分組及給藥方法同1.5.1，末次給藥后lh，小鼠腹腔注射0.7%醋酸溶液0.1ml/10g，觀察小鼠出現(xiàn)扭體反應(yīng)的潛伏期及15min內(nèi)扭體反應(yīng)的次數(shù)，以小鼠腹部凹陷、雙后肢伸展為扭體反應(yīng)指標。

1.4.5 對AA大鼠關(guān)節(jié)腫脹的影響將50只SD雄性大鼠隨機分成5組：模型組，尼美舒利組，勞傷藥組高、中、低劑量組，每組10只。于每只大鼠右后足趾皮內(nèi)注射0.lml弗氏完全佐劑（每毫升佐劑含l0mg滅活結(jié)核桿菌），建立佐劑性關(guān)節(jié)炎大鼠模型。致炎后，各組大鼠按照設(shè)定劑量連續(xù)給藥30d，模型組大鼠給予等體積蒸餾水。于致炎后6、12、24、36、48、72h測量致炎足周長，以致炎前后差值表示其腫脹度，觀察勞傷藥對AA大鼠急性原發(fā)性炎癥的影響。于致炎后第12、18、24、30天測定非致炎足（左足）的足周長變化，以觀察勞傷藥對AA大鼠繼發(fā)性關(guān)節(jié)腫脹的影響。

1.4.6 統(tǒng)計學(xué)方法 實驗結(jié)果均以x±s表示，采用SPSS13.0統(tǒng)計軟件進行處理，用One-Way ANOVA進行分析，P<0.05有統(tǒng)計學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 勞傷藥對二甲苯致小鼠耳腫脹的影響

與模型組比較，勞傷藥組的耳腫脹度均明顯減輕（P<0.05）。

2.2 勞傷藥對棉球致小鼠肉芽腫的影響 與模型組比較，勞傷藥組的棉球肉芽腫降低（P<0.01）。

2.3 勞傷藥對醋酸致小鼠腹腔毛細血管通透性增加的影響

與模型組比較，勞傷藥組能抑制醋酸致小鼠腹腔毛細血管通透性增加（P<0.01）。

2.4 勞傷藥對醋酸致小鼠扭體反應(yīng)的影響

與模型組比較，勞傷藥組扭體反應(yīng)潛伏期均有一定的延長，且扭體次數(shù)有明顯減少（P<0.05或P<0.01）。

2.5 勞傷藥對佐劑性關(guān)節(jié)炎所致大鼠原發(fā)性足腫脹的影響

模型組大鼠右后足明顯腫脹，在致炎后12～36h腫脹度達到峰值；與模型組比較，勞傷藥能明顯減輕AA大鼠原發(fā)性關(guān)節(jié)腫脹（P<0.05）。

2.6 勞傷藥對佐劑性關(guān)節(jié)炎所致大鼠繼發(fā)性足腫脹的影響

模型組大鼠發(fā)生繼發(fā)性足腫脹，且隨著致炎時間延長繼發(fā)性足腫脹越明顯。與模型組比較，勞傷藥能明顯抑制佐劑性關(guān)節(jié)炎大鼠繼發(fā)性足腫脹（P<0.05）。

3 討論

彝藥勞傷藥，彝族民間臨床主要用于治療風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎。炎癥是機體對各種損傷所發(fā)生的以防御為主的反應(yīng)，是最基本的病理過程。通常藥理學(xué)研究中所采用的炎癥模型就是根據(jù)炎癥發(fā)生、發(fā)展過程中這 3 個不同時相的性質(zhì)而設(shè)計的，所以炎癥模型可歸納為 3 種類型：滲出和腫脹模型，白細胞游走模型，肉芽腫增生模型[5]。二甲苯致小鼠耳腫脹模型是急性炎癥模型，棉球肉芽腫模型是亞急性（慢性）炎癥模型，非特異性炎癥反應(yīng)的急性時相反應(yīng)以局部血管擴張和毛細血管通透性增高為特征[6]，實驗結(jié)果表明勞傷藥乙醇提取物高劑量組小鼠的耳廓腫脹度較模型組顯著降低，棉球肉芽重降低，醋酸致小鼠腹腔毛細血管通透性降低；醋酸扭體法比較適合外周鎮(zhèn)痛作用機制藥物的篩選，本實驗結(jié)果表明勞傷藥明顯減少小鼠扭體次數(shù)，說明勞傷藥對腹腔注射化學(xué)刺激物質(zhì)引發(fā)的小鼠痛疼具有鎮(zhèn)痛作用。佐劑性關(guān)節(jié)炎（AA）是目前廣泛應(yīng)用的類風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎（RA）模型之一，AA大鼠與人類RA在發(fā)病機制、臨床表現(xiàn)等方面有著十分相似的特點，較好地再現(xiàn)了RA的發(fā)病及早期病變。完全弗氏佐劑作為一種免疫激發(fā)劑，可促使大鼠產(chǎn)生免疫性炎癥反應(yīng)，釋放大量致炎致痛物質(zhì)，使大鼠產(chǎn)生長期穩(wěn)定且敏感的關(guān)節(jié)疼痛，致炎后大鼠一般呈現(xiàn)出原發(fā)性炎癥反應(yīng)相和繼發(fā)性炎癥反應(yīng)相兩個反應(yīng)時相，表現(xiàn)出典型早期及慢性炎癥反應(yīng)。勞傷藥能明顯減輕AA大鼠原發(fā)性和繼發(fā)性關(guān)節(jié)腫脹，減輕或減緩AA大鼠炎癥反應(yīng)，減輕關(guān)節(jié)腫脹作用，有效緩解RA早期及慢性癥狀。關(guān)于勞傷藥抗炎鎮(zhèn)痛作用機制還有待進一步研究。

參考文獻

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（收稿日期：2016.01.06）