指紋脫落細(xì)胞的STR檢驗(yàn)

鄭和成，劉程靜，胡利平，張秀峰（.楚雄州公安局，云南楚雄675000；.昆明醫(yī)科大學(xué)法醫(yī)學(xué)院，云南昆明650500）

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指紋脫落細(xì)胞的STR檢驗(yàn)

鄭和成1，劉程靜1，胡利平2，張秀峰2
（1.楚雄州公安局，云南楚雄675000；2.昆明醫(yī)科大學(xué)法醫(yī)學(xué)院，云南昆明650500）

關(guān)鍵詞：法醫(yī)遺傳學(xué)；DNA指紋法；短串聯(lián)重復(fù)序列；指紋；脫落細(xì)胞

現(xiàn)場(chǎng)遺留的帽子、口罩、衣服、手套等生物學(xué)檢材，一般含有較多脫落細(xì)胞，DNA檢驗(yàn)比較容易，然而對(duì)于指、掌紋短時(shí)間接觸部位，由于所含脫落細(xì)胞少，且部分細(xì)胞核DNA容易降解，STR分型成功率較低。本研究對(duì)指紋脫落細(xì)胞分別應(yīng)用Chelex－100、QIAamp DNA Investigator Kit、MagAttract M48 DNA Manual Kit磁珠及直接擴(kuò)增法進(jìn)行STR檢驗(yàn)，并比較分析。

1　材料與方法

1.1樣本來源

取100片潔凈載玻片，25名志愿者每人分別在4塊載玻片上按1枚清晰指紋樣本，提取志愿者口腔拭子作為對(duì)照。將指紋脫落細(xì)胞檢材分為Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ、Ⅳ四組，每組25份，涵蓋所有志愿者的指紋脫落細(xì)胞。

1.2DNA提取

Ⅰ組：剪取0.2 cm×0.2 cm紗布2塊，采用兩步擦拭法進(jìn)行提取，置于1.5mL離心管中，加入20μL 5% Chelex－100、2μL 10mg/mL蛋白酶K，56℃消化過夜，100℃加熱8min，離心后取上清液。

Ⅱ組：剪取0.5 cm×0.5 cm紗布2塊，采用兩步擦拭法進(jìn)行提取，置于1.5mL離心管中，按照QIAamp DNA Investigator Kit說明書提取DNA模板，洗脫體積為20μL。

Ⅲ組：剪取0.5 cm×0.5 cm紗布2塊，采用兩步擦拭法進(jìn)行提取，置于1.5mL離心管中，按照MagAttract M48 DNA Manual Kit磁珠法提取DNA模板，洗脫體積為20μL。

Ⅳ組：剪取0.5 cm長(zhǎng)紗布絲一根，用蒸餾水浸濕后擦拭指紋部位，置于200μL擴(kuò)增管中。

1.3擴(kuò)增和檢測(cè)

擴(kuò)增采用Identifiler?Plus試劑盒（美國(guó)AB公司），使用10μL體系，按照說明書中的試劑配比，Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ組每管試劑混合物均為9μL，模板均為1μL，Ⅳ組每管試劑混合物均為9μL，四組均用28個(gè)循環(huán)進(jìn)行擴(kuò)增。使用3130型遺傳分析儀（美國(guó)AB公司）進(jìn)行檢測(cè)，GeneMapper?ID 3.2軟件進(jìn)行STR分析。

2　結(jié)果與討論

檢驗(yàn)結(jié)果表明，Ⅰ組檢出7例可供比對(duì)的STR分型，檢出率為28%；Ⅱ組檢出6例，檢出率為24%；Ⅲ組檢出7例，檢出率為28%；Ⅳ組檢出19例，檢出率為76%。

通過對(duì)指紋脫落細(xì)胞DNA進(jìn)行四種方法的STR檢驗(yàn)，結(jié)果顯示，直接擴(kuò)增法的檢出率明顯高于其他三種。利用Chelex－100法提取指紋脫落細(xì)胞DNA，雖然操作方法相對(duì)便捷，且沒有造成DNA的損失，但加入22μL液體后就稀釋了DNA的濃度，使得進(jìn)入擴(kuò)增體系的DNA模板含量減少，從而檢出率也就降低。利用QIAamp DNA Investigator Kit法、MagAttract M48 DNA Manual Kit磁珠法檢驗(yàn)，優(yōu)點(diǎn)是可以清除較多雜質(zhì)，提取到較純的DNA模板，但在提取過程中還存在DNA的損失和稀釋，造成指紋脫落細(xì)胞STR分型檢出率低。利用直接擴(kuò)增法檢驗(yàn)指紋脫落細(xì)胞DNA，可以最大程度地保留核DNA的含有量，提高指紋脫落細(xì)胞STR分型的檢出率，同時(shí)檢驗(yàn)方法更加簡(jiǎn)單快捷。

直接擴(kuò)增法檢驗(yàn)指紋脫落細(xì)胞DNA在檢出率和快捷程度上都具有較強(qiáng)的優(yōu)勢(shì)，然而本研究針對(duì)的是沒有污染和雜質(zhì)的理想指紋檢材，因此在實(shí)際檢案中遇到可能留有嫌疑人指、掌紋的部位和工具等，且污染程度低、雜質(zhì)少時(shí)，可采用直接擴(kuò)增法檢驗(yàn)脫落細(xì)胞的STR基因型。對(duì)于雜質(zhì)較多的指、掌紋脫落細(xì)胞的DNA檢驗(yàn)，最好采用另三種方法，這些方法能夠去除一定的雜質(zhì)，特別是QIAamp DNA Investigator Kit法、MagAttract M48 DNA Manual Kit磁珠法，不但能夠去除雜質(zhì)，還可得到相對(duì)較純、濃度較高的DNA模板，有利于含雜質(zhì)較多的指、掌紋脫落細(xì)胞DNA的檢驗(yàn)。

（本文編輯：李成濤）

·教育與管理·

收稿日期：（2015－04－07）

通信作者：張秀峰，男，博士，講師，主要從事法醫(yī)物證學(xué)教學(xué)、科研和鑒定；E－mail：191797683＠qq.com

作者簡(jiǎn)介：鄭和成（1982—），男，主檢法醫(yī)師，主要從事法醫(yī)DNA檢驗(yàn)研究；E－mail：769398851＠qq.com

基金項(xiàng)目：云南省教育廳科學(xué)研究基金項(xiàng)目（2014Y180）；云南省科技廳－昆明醫(yī)科大學(xué)應(yīng)用基礎(chǔ)研究聯(lián)合專項(xiàng)基金（2014FZ005）

文章編號(hào)：1004－5619（2016）02－0136－01

中圖分類號(hào)：DF795.2

文獻(xiàn)標(biāo)志碼：B

doi：10.3969/j.issn.1004－5619.2016.02.015