清腸栓對葡聚糖硫酸鈉誘導(dǎo)潰瘍性結(jié)腸炎大鼠Toll樣受體表達(dá)的影響

高春利

(蘭州市第一人民醫(yī)院消化科，甘肅　蘭州　730050)

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清腸栓對葡聚糖硫酸鈉誘導(dǎo)潰瘍性結(jié)腸炎大鼠Toll樣受體表達(dá)的影響

高春利

(蘭州市第一人民醫(yī)院消化科，甘肅蘭州730050)

〔摘要〕目的探討清腸栓對葡聚糖硫酸鈉誘導(dǎo)潰瘍性結(jié)腸炎大鼠Toll樣受體(TLRs)表達(dá)的影響。方法選取大鼠60只，根據(jù)隨機(jī)數(shù)字表法分為對照組、模型組、清腸栓組，每組20只，然后對大鼠進(jìn)行模型建造，造模時對照組給予蒸餾水，其余組均給予5%的葡聚糖硫酸鈉。模型建立后清腸栓組給予清腸栓灌腸，比較大鼠疾病活動指數(shù)(DAI)、結(jié)腸指數(shù)以及TLR1、TLR2、TLR3以及TLR4表達(dá)。結(jié)果模型組DAI評分顯著高于對照組，清腸栓組顯著低于模型組(P<0.05)；清腸栓組結(jié)腸指數(shù)顯著低于模型組(P<0.05)，與對照組比較無統(tǒng)計學(xué)意義(P>0.05)；模型組TLR2和TLR4表達(dá)顯著高于對照組，清腸栓組TLR2和TLR4表達(dá)顯著低于模型組(P<0.05)，各組TLR1和TLR3比較無統(tǒng)計學(xué)意義(P>0.05)。結(jié)論清腸栓對葡聚糖硫酸鈉誘導(dǎo)潰瘍性結(jié)腸炎療效顯著，能顯著降低大鼠TLR2和TLR4表達(dá)水平。

〔關(guān)鍵詞〕清腸栓；潰瘍性結(jié)腸炎；Toll樣受體

潰瘍性結(jié)腸炎黏的發(fā)病機(jī)制尚不清楚，可能與環(huán)境、免疫以及腸道菌群等多種因素有關(guān)〔1〕。Toll樣受體(TLRs)與免疫功能存在較大關(guān)系，是一種跨膜和模式識別受體，能夠識別跨膜相關(guān)病原體。清腸栓是臨床上治療潰瘍性結(jié)腸炎的重要藥物，可以局部應(yīng)用來起到抗感染作用。但是清腸栓對TLRs表達(dá)具有何種影響受到較大關(guān)注〔2〕。本研究旨在分析清腸栓對葡聚糖硫酸鈉誘導(dǎo)潰瘍性結(jié)腸炎大鼠TLRs表達(dá)的影響。

1資料與方法

1.1一般資料選取大鼠60只，均由上海斯萊克實(shí)驗(yàn)動物有限公司提供，均由SPF級動物房進(jìn)行飼養(yǎng)。根據(jù)隨機(jī)數(shù)字表法分為對照組、模型組、清腸栓組，其中對照組20只，鼠齡均為7 w，均為雄性，體質(zhì)量為189~210 g，平均(200.4±1.5)g，模型組20只，鼠齡均為7 w，均雄性，體質(zhì)量為190~210 g，平均為(200.3±1.6)g，清腸栓組20只，鼠齡均為7 w，均為雄性，體質(zhì)量為190~210 g，平均(200.2±1.4)g，三組周齡、性別以及體質(zhì)量均無顯著差異(P>0.05)，具有可比性。

1.2方法所有大鼠均進(jìn)行適應(yīng)性喂養(yǎng)1 w，然后對照組給予蒸餾水，模型組和清腸栓組給予5%葡聚糖硫酸鈉溶液進(jìn)行潰瘍性結(jié)腸炎造模。造模7 d后，清腸栓組每月給予清腸栓(由上海中醫(yī)藥大學(xué)附屬龍華醫(yī)藥提供)140 mg/kg，模型組給予等量的生理鹽水灌腸，對照組不給予處理。禁食12 h后進(jìn)行灌腸，應(yīng)用頭皮針從肛門輕輕插入約8 cm，將灌腸液推入，然后提起尾巴倒立約15 min后放到籠中進(jìn)行常規(guī)喂養(yǎng)。

1.3檢測方法疾病活動指數(shù)(DAI)從造模開始記錄皮毛、體質(zhì)量、精神、飲食、大便及隱血情況來評價疾病活動情況，評分越高表示疾病活動程度越強(qiáng)〔3〕；灌腸14 d后稱重，然后應(yīng)用戊巴比妥鈉進(jìn)行腹腔麻醉，將腹部剝開使腸腔暴露，將結(jié)腸截取出來，然后應(yīng)用生理鹽水沖洗2次，濾紙吸干，稱結(jié)腸的濕重。結(jié)腸指數(shù)〔4〕表示結(jié)腸濕重與體質(zhì)量的比值。應(yīng)用Western 印跡法檢測結(jié)腸組織的中TLR1、TLR2、TLR3及TLR4表達(dá)。

1.4統(tǒng)計學(xué)方法應(yīng)用SPSS17.0軟件進(jìn)行t檢驗(yàn)、χ2檢驗(yàn)。

2結(jié)果

2.1各組DAI評分比較模型組DAI評分〔(3.92±0.52)分〕顯著高于對照組〔(0.98±0.04)分〕，清腸栓組DAI評分〔(2.53±0.05)分〕顯著低于模型組，清腸栓組DAI評分顯著高于對照組(P<0.05)。

2.2各組結(jié)腸指數(shù)比較清腸栓組結(jié)腸指數(shù)(0.51±0.03)顯著低于模型組(0.65±0.71)(P<0.05)，與對照組(0.45±0.01)比較無統(tǒng)計學(xué)意義(P>0.05)。

2.3各組TLRs比較模型組TLR2和TLR4表達(dá)顯著高于對照組，清腸栓組顯著低于模型組(P<0.05)，各組TLR1和TLR3比較無統(tǒng)計學(xué)意義(P>0.05)。見表1。

表1　各組TLR1、TLR2、TLR3和TLR4

與模型組比較：1)P<0.05

3討論

免疫異常是引起潰瘍性結(jié)腸炎的重要原因〔5〕。許多研究顯示，TLRs/核轉(zhuǎn)錄因子(NF)-κB是導(dǎo)致潰瘍性結(jié)腸炎的重要信號通路，可以使TLRs表達(dá)被啟動，進(jìn)而引起炎癥反應(yīng)。TLRs類型較多，且不同類型的TLR具有不同的功能作用〔6〕。研究顯示，TLR4可以用來識別內(nèi)毒素，TLR2可以識別肽聚糖，TLR3則可以識別雙鏈的RNA。其中TLR1可以于單核細(xì)胞、T淋巴細(xì)胞、自然殺傷(NK)細(xì)胞及B淋巴細(xì)胞等多種細(xì)胞中表達(dá)，TLR2和TLR4只表達(dá)于髓源性細(xì)胞中，TLR3只能特異性地于樹突細(xì)胞上表達(dá)〔7〕。有研究證實(shí)，TLR4可以識別革蘭陰性桿菌的細(xì)胞壁成分，并且被激活，于多種信號的作用下引起NF-κB被激活，進(jìn)而使細(xì)胞內(nèi)的信號傳遞得以完成，使相應(yīng)的效應(yīng)細(xì)胞分泌細(xì)胞因子，進(jìn)而導(dǎo)致腸道免疫功能被破壞〔8〕。

清腸栓是一種中藥復(fù)方，主要藥物組成有：青黛、馬齒莧、參三七等，其中青黛具備清熱解毒、涼血消癰的作用，參三七具有去腐生肌和止血化瘀的作用，馬齒莧則具有涼血、清熱解毒的作用〔9〕?，F(xiàn)代研究顯示，青黛可以降低血管的通透性，對機(jī)體免疫能力具有調(diào)節(jié)作用，還具備較強(qiáng)殺菌和抗病毒作用。參三七主要成分有黃酮類和皂苷類，可以調(diào)節(jié)免疫功能、抗腫瘤、調(diào)節(jié)平滑肌運(yùn)動以及抗病毒等作用。三藥配合能發(fā)貨清熱解毒利濕、活血祛瘀、促進(jìn)創(chuàng)傷愈合的作用，進(jìn)而起到止痛、止血以及止瀉的作用〔10，11〕。

4參考文獻(xiàn)

1嚴(yán)妍,王易.中藥對感染、自身免疫性疾病中Toll樣受體表達(dá)影響的實(shí)驗(yàn)研究進(jìn)展〔J〕.現(xiàn)代免疫學(xué),2014；34(1):73-6.

2周婷婷,仝巧云.柳氮磺胺吡啶對潰瘍性結(jié)腸炎大鼠結(jié)腸Toll樣受體4表達(dá)的影響〔J〕.廣東醫(yī)學(xué),2014；52(22):3474-6.

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9張燕翔,魯兵,張恒文,等.四君子湯抗大鼠潰瘍性結(jié)腸炎及對結(jié)腸組織GABA受體表達(dá)的影響〔J〕.世界華人消化雜志,2014；22(34):5258-65.

10王立娟,劉旭,唐志鵬,等.清腸栓對DSS誘導(dǎo)結(jié)腸炎小鼠脾CD4~+T細(xì)胞CD44、CD62L表達(dá)的影響〔J〕.上海中醫(yī)藥雜志,2014；48(5):104-8.

11曹麗靜,郝微微,溫紅珠,等.清腸栓對潰瘍性結(jié)腸炎大鼠Toll樣受體表達(dá)的影響〔J〕.中國中西醫(yī)結(jié)合消化雜志,2015；23(4):225-30.

〔2015-10-27修回〕

(編輯袁左鳴/滕欣航)

〔中圖分類號〕R57

〔文獻(xiàn)標(biāo)識碼〕A

〔文章編號〕1005-9202(2016)05-1066-02；

doi：10.3969/j.issn.1005-9202.2016.05.019

第一作者：高春利(1974-)，女，副主任醫(yī)師，主要從事消化內(nèi)科及消化內(nèi)鏡方面的研究。